專(zhuān)利名稱(chēng)：：螺環(huán)取代的吡咯并嘧啶化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及半胱氨酸蛋白酶抑制劑，具體而言，本發(fā)明涉及吡咯并嘧啶類(lèi)組織蛋白酶K抑制劑或組織蛋白酶S抑制劑或具有混合活性的抑制劑，以及它們用于治療或預(yù)防與組織蛋白K或組織蛋白S之一或兩者都有關(guān)的疾病或病癥的藥物用途。組織蛋白酶K和組織蛋白酶S是溶酶體半胱氨酸組織蛋白酶家族的成員，該家族包含例如組織蛋白酶B、K、L和S，它們與各種病癥有關(guān)，包括神經(jīng)病性疼痛、炎癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、腫瘤(特別是瘤侵襲和瘤轉(zhuǎn)移)、肥胖癥、冠脈疾病、動(dòng)脈粥樣硬化(包括動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂和不穩(wěn)定化)、自身免疫疾病、多發(fā)性硬化癥、呼吸系統(tǒng)疾病、感染性疾病和免疫性疾病(包括移植排斥)。因此，本發(fā)明的組織蛋白酶K和組織蛋白酶S的雙重抑制劑或組織蛋白酶S或組織蛋白酶K的特異性抑制劑可以用于本文提及的疾病中。因此，本發(fā)明提供式I化合物或其可藥用鹽或酯式I其中E是式a或式b的基團(tuán)式a式b其中A是CH2、CH2-CH2或C＝O；B是CH2、C＝O或D是CH2或C＝O；G是CH2、CH2C＝O或CH2-CH2；J是CH2、C＝O或CH2-CH2；L是H、OCH3、鹵素或低級(jí)烷氧基；M是CH2或NH；Q是H、低級(jí)烷基、羥基取代的低級(jí)烷基、可選取代的芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺?；⑻辑h(huán)芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、鹵素取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基、氨基羰基、環(huán)烷基氨基羰基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基羰基、鹵素取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基羰基或低級(jí)烷基羰基；并且R是低級(jí)烷基、對(duì)-氯苯基乙基、環(huán)己基乙基、二甲基丁基、二氟環(huán)己基乙基、環(huán)戊基乙基或環(huán)庚基乙基。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I-(i)的化合物或其可藥用鹽或酯式I-(i)其中Q-i是H、低級(jí)烷基、羥基取代的低級(jí)烷基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基、單或二取代的芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基；并且R具有上述的定義。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I-(ii)的化合物或其可藥用鹽或酯式I-(ii)其中Q-ii是H、低級(jí)烷基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基、鹵素取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷基羰基；并且L和R具有上述的定義。本發(fā)明的再一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I-(iii)的化合物或其可藥用鹽或酯式I-(iii)其中B-iii是CH2；G-iii是CH2CH2；J-iii是CH2CH2；Q-iii是H、環(huán)烷基氨基羰基、氨基羰基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基、低級(jí)烷基羰基、碳環(huán)芳基低級(jí)烷基或N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基羰基；并且R具有上述的定義。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I、式I-(i)、式I-(ii)或式I-(iii)的化合物，其中R是R1＝低級(jí)烷基。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I、式I-(i)、式I-(ii)或式I-(iii)的化合物，其中R是R5＝2，2-二甲基-丙基。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I、式I-(i)、式I-(ii)或式I-(iii)的化合物，其中R是R6＝3，3-二甲基-丁基。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I、式I-(i)、式I-(ii)或式I-(iii)的化合物，其中R是R2＝對(duì)-氯苯基乙基、環(huán)己基乙基、二甲基丁基、二氟環(huán)己基乙基、環(huán)戊基乙基或環(huán)庚基乙基。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案提供式I-(iv)的化合物或其可藥用鹽或酯式I-(iv)其中R3是(8-低級(jí)烷基-羰基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基、(8-低級(jí)烷基-磺酰基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基、(8-芳基-低級(jí)烷基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基、或R4是對(duì)-氯苯基甲基、環(huán)己基甲基、二甲基丙基、二氟環(huán)己基甲基、環(huán)戊基甲基或環(huán)庚基甲基；并且Q具有上述的定義。本發(fā)明還提供式I化合物及其鹽和酯的制備方法，其包括使式II化合物式II其中，Q、G、J、M、A、B、D具有上述的定義，與式III化合物偶聯(lián)，式III其中，X是鹵素，R具有上述的定義，和回收所形成的游離堿、可藥用鹽或酯形式的式I化合物的步驟。上述偶聯(lián)方法可在例如DMF溶液中、在K2CO3存在下進(jìn)行，例如在室溫下攪拌約12小時(shí)。適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)可在偶聯(lián)過(guò)程中用來(lái)保護(hù)反應(yīng)性官能團(tuán)，偶聯(lián)完成后再將其除去，例如如下文實(shí)施例中所述?？筛鶕?jù)已知方法或根據(jù)實(shí)施例對(duì)反應(yīng)混合物進(jìn)行處理和對(duì)這樣獲得的化合物進(jìn)行純化。在本發(fā)明以上或別處的描述中，下列術(shù)語(yǔ)具有以下的意義。鹵素表示I、Br、Cl或F。以上或下文中提及的分別與有機(jī)基團(tuán)或化合物相關(guān)聯(lián)的術(shù)語(yǔ)“低級(jí)”定義為含有不多于6個(gè)、包括6個(gè)碳原子的支鏈或直鏈。“低級(jí)烷基”基團(tuán)是支鏈或直鏈，含有1至6個(gè)碳原子的基團(tuán)。低級(jí)烷基代表例如甲基、乙基、丙基、丁基、異丙基、異丁基、叔丁基或新戊基(2，2-二甲基丙基)。“鹵代低級(jí)烷基”是由不多于6個(gè)鹵素原子取代的C1-C7低級(jí)烷基，優(yōu)選單、二或三取代的低級(jí)烷基?！暗图?jí)烷氧基”基團(tuán)是支鏈或直鏈，含有1至6個(gè)、優(yōu)選1至4個(gè)碳原子的基團(tuán)。低級(jí)烷氧基代表例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、異丙氧基、異丁氧基或叔丁氧基。“芳基”代表苯基或萘基。優(yōu)選只含有碳和氫原子的“碳環(huán)芳基”，其可選由一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自于低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、羥基、鹵素的取代基單、二或三取代。碳環(huán)芳基優(yōu)選苯基或可選取代的苯基，例如如實(shí)施例中所描述的由鹵素、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基單、二或三取代的苯基。“環(huán)烷基”代表可選由低級(jí)烷基取代的、含有3至10個(gè)環(huán)碳原子的飽和環(huán)烴，優(yōu)選環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基或可選由低級(jí)烷基取代?！癗-雜環(huán)基”代表飽和、部分不飽和或芳香的、通過(guò)氮原子連接的含有3至8個(gè)環(huán)原子的含氮雜環(huán)部分，可選另含一個(gè)O雜原子，可選由低級(jí)烷基或低級(jí)烷基羰基取代。“低級(jí)烷基羰基”是指式-C(O)Ra的基團(tuán)，其中Ra是以上定義的低級(jí)烷基，例如乙酰基、乙基羰基或正丙基羰基。本發(fā)明化合物可以以游離形式獲得，或者若存在成鹽基團(tuán)則以其鹽形式獲得。含有堿性基團(tuán)的本發(fā)明化合物可轉(zhuǎn)化為酸加成鹽，特別是可藥用鹽。這些鹽可與例如礦酸如硫酸、磷酸或氫鹵酸等無(wú)機(jī)酸或有機(jī)羧酸例如未取代的或鹵代(C1-C4)鏈烷羧酸如乙酸、例如飽和或不飽和二元羧酸如草酸、琥珀酸、馬來(lái)酸或富馬酸、例如羥基羧酸如羥乙酸、乳酸、蘋(píng)果酸、酒石酸或檸檬酸、例如氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸、或有機(jī)磺酸如(C1-C4)-烷基磺酸(例如甲磺酸)或未取代的或取代的(如鹵代)芳基磺酸等形成。優(yōu)選與鹽酸、甲磺酸和馬來(lái)酸形成的鹽?？紤]到游離化合物與化合物的鹽形式之間關(guān)系緊密，如果條件可能或合適，則凡是本文上下文中提及某個(gè)化合物時(shí)，也意指相應(yīng)的鹽?；衔?、包括它們的鹽也可以以它們的水合物的形式獲得，或含有重結(jié)晶時(shí)所用的其它溶劑。如果式I化合物中存在一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)如羧基、羥基、氨基或巰基處于被保護(hù)狀態(tài)或需要被保護(hù)(因?yàn)樗鼈儾粦?yīng)該參與反應(yīng))，則這些基團(tuán)通常是用于合成肽類(lèi)化合物與頭孢菌素類(lèi)和青霉素類(lèi)，以及核酸衍生物和糖類(lèi)化合物的基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)可能已經(jīng)存在于前體化合物中，并且應(yīng)該保護(hù)所涉及的基團(tuán)使之不發(fā)生不希望的副反應(yīng)，例如?；磻?yīng)、醚化反應(yīng)、酯化反應(yīng)、氧化反應(yīng)、溶劑分解作用以及類(lèi)似的反應(yīng)。保護(hù)基團(tuán)的特性是它們通常易于通過(guò)溶劑分解作用、還原作用、光解作用或者在例如與生理?xiàng)l件類(lèi)似的條件下經(jīng)酶的作用除去而不發(fā)生不希望的副反應(yīng)，并且它們不存在于終產(chǎn)物中。專(zhuān)業(yè)人員知道或能夠容易地確定哪些保護(hù)基團(tuán)適合于上文及下文中提及的反應(yīng)。式II和式III的原料化合物可以通過(guò)如實(shí)施例中所述的方法制備。本發(fā)明化合物在哺乳動(dòng)物中表現(xiàn)了頗具價(jià)值的藥理學(xué)特性，因此可用作藥物。具體而言，它們可用作抑制組織蛋白酶K或抑制組織蛋白酶S或同時(shí)抑制兩者的抑制劑。本發(fā)明化合物的組織蛋白酶K抑制作用可通過(guò)在體外測(cè)量例如重組人組織蛋白酶K的抑制來(lái)證明。該體外分析法按下述方法進(jìn)行該測(cè)定使用重組人組織蛋白酶K，在室溫下，在96孔微量測(cè)定板中進(jìn)行。組織蛋白酶K的抑制在pH7.0、含有2mM二硫蘇糖醇、20mM吐溫80和1mMEDTA的100mM磷酸鈉緩沖液中、在恒定的酶(0.16nM)和底物濃度(54mMZ-Phe-Arg-AMCA-PeptideInstituteInc.大阪，日本)下測(cè)定。將組織蛋白酶K與抑制劑預(yù)培養(yǎng)30分鐘，加入底物使反應(yīng)開(kāi)始。培養(yǎng)30分鐘后加入E-64(2mM)停止反應(yīng)，在多孔板讀數(shù)器中讀取熒光強(qiáng)度，激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別是360和460nm。本發(fā)明化合物抑制人組織蛋白酶K的IC50值通常低于約100nM下至約1nM或更低，優(yōu)選約5nM或更低，例如約0.2nM。實(shí)施例3-0在上述分析法中的IC50是約0.16nM。優(yōu)選上述的R＝R1的化合物，例如實(shí)施例1至4中R＝R1的化合物，它們具有組織蛋白酶K抑制作用。更優(yōu)選上述R＝R5的化合物，最優(yōu)選實(shí)施例3-0。本發(fā)明化合物的組織蛋白酶S抑制作用可通過(guò)體外測(cè)定例如人組織蛋白酶S的抑制來(lái)證明。該測(cè)定使用重組人組織蛋白酶S，在室溫下，在透明平底96孔微量測(cè)定板(GreinerGmbH，德國(guó))中進(jìn)行。組織蛋白酶S抑制在pH7.0、含2mMEDTA、2份1％TritonX-100、10份20mM二硫蘇糖醇(DTT)和58份蒸餾水的100份0.2M磷酸鈉中、在恒定的酶和不同底物濃度(底物是Z-Leu-Leu-4-甲基香豆素基-7-酰胺(Bachem(瑞士))下測(cè)定。向含有不同濃度相應(yīng)底物和化合物的反應(yīng)混合物中加入酶溶液(濃度比重組人組織蛋白酶S的終濃度高13倍)使反應(yīng)開(kāi)始。使用的底物濃度在3.4和17μM之間。使用的重組人組織蛋白酶S的終濃度為0.04nM。受試化合物濃度在該化合物對(duì)該酶IC50測(cè)定值的0.4和2倍之間。連續(xù)測(cè)定30分鐘相對(duì)熒光強(qiáng)度，初速度從每個(gè)發(fā)展曲線獲得。用迪克遜作圖分析法確定抑制模式和Ki值。本發(fā)明化合物抑制人組織蛋白酶S的IC50值通常低于約100nM下至約1nM或更低，優(yōu)選約5nM或更低。優(yōu)選上述R＝R2的化合物。例如實(shí)施例4-8在上述分析法中的IC50約為9nM。具有雙重抑制作用也就是在上述組織蛋白酶K和組織蛋白酶S分析法中具有抑制作用的本發(fā)明化合物抑制人組織蛋白酶K和人組織蛋白酶S的IC50通常在兩個(gè)分析中均低于約100nM，下至1nM或更低，優(yōu)選約5nM或更低。優(yōu)選的具有雙重抑制作用的化合物是如上所述的R＝R6的化合物。例如實(shí)施例4-3對(duì)人組織蛋白酶K的IC50為8nM，對(duì)人組織蛋白酶S為6nM?；蛘呃鐚?shí)施例4-9對(duì)人組織蛋白酶K的IC50為16nM，對(duì)人組織蛋白酶S為10nM。考慮到本發(fā)明化合物作為組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S抑制劑的活性，它們特別可作為在哺乳動(dòng)物中治療和預(yù)防與組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S水平升高有關(guān)的疾病或病癥。這種疾病包括與卡氏肺囊蟲(chóng)、克氏錐蟲(chóng)、布氏錐蟲(chóng)、crithidiafusiculata等引起的感染有關(guān)的疾病、血吸蟲(chóng)病和瘧疾等寄生蟲(chóng)病、腫瘤(瘤侵襲和瘤轉(zhuǎn)移)以及其它疾病例如異染腦性白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、肌肉萎縮癥、肌營(yíng)養(yǎng)不良、神經(jīng)病性疼痛如慢性神經(jīng)病性疼痛，其病癥的實(shí)例有例如糖尿病性神經(jīng)病變、帶狀皰疹后神經(jīng)疼痛、三叉神經(jīng)痛、糖尿病多發(fā)神經(jīng)病變性疼痛、中風(fēng)后疼痛(中樞性痛)、切斷術(shù)后疼痛、脊髓病性疼痛或神經(jīng)根病疼痛(例如錐管狹窄、蛛網(wǎng)膜炎、神經(jīng)根袖套樣纖維變性)、不典型面痛和灼痛樣綜合癥(復(fù)雜性區(qū)域性疼痛綜合癥)、自身免疫性病癥，包括但不限于青少年型糖尿病、多發(fā)性硬化癥，過(guò)敏性病癥，包括但不限于哮喘，以及同種型免疫反應(yīng)，包括但不限于器官移植排斥。特別地，由于組織蛋白酶K與過(guò)度骨丟失病有關(guān)，因此本發(fā)明化合物可用于治療或預(yù)防包括骨質(zhì)疏松癥、各種起源的骨質(zhì)疏松癥(例如青少年、絕經(jīng)、絕經(jīng)后、創(chuàng)傷后、年齡老化或皮質(zhì)類(lèi)固醇療法或不活動(dòng)引起的)、齦疾病如齦炎和牙周炎、佩吉特病、惡性高鈣血癥如腫瘤誘發(fā)的高鈣血癥和代謝性骨病。本發(fā)明化合物還可以用于治療或預(yù)防軟骨增生性或基質(zhì)退化性疾病包括骨關(guān)節(jié)炎和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及與蛋白質(zhì)水解酶高水平表達(dá)或基質(zhì)退化有關(guān)的腫瘤性疾病。組織蛋白酶K抑制劑優(yōu)選用于治療骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎。特別地，組織蛋白酶S與治療和預(yù)防神經(jīng)病性疼痛例如慢性神經(jīng)病性疼痛有關(guān)，其病癥的實(shí)例有例如糖尿病性神經(jīng)病變、帶狀皰疹后神經(jīng)疼痛、三叉神經(jīng)痛、糖尿病多發(fā)神經(jīng)病變性疼痛、中風(fēng)后疼痛(中樞性痛)、切斷術(shù)后疼痛、脊髓病性疼痛或神經(jīng)根病疼痛(例如錐管狹窄、蛛網(wǎng)膜炎、神經(jīng)根袖套樣纖維變性)、不典型面痛和灼痛樣綜合癥(復(fù)雜性區(qū)域性疼痛綜合癥)、骨關(guān)節(jié)炎和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性病癥，包括但不限于青少年型糖尿病、多發(fā)性硬化癥，過(guò)敏性病癥，包括但不限于哮喘，以及同種型免疫反應(yīng)，包括但不限于器官移植排斥。組織蛋白酶S抑制劑優(yōu)選用于治療神經(jīng)病性疼痛、多發(fā)性硬化癥、骨關(guān)節(jié)炎和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。因此雙重抑制劑可以用于兩種組織蛋白酶都起作用的疾病，例如神經(jīng)病性疼痛、炎癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、腫瘤(特別是瘤侵襲和瘤轉(zhuǎn)移)、肥胖癥、冠脈疾病、動(dòng)脈粥樣硬化(包括動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂和不穩(wěn)定化)、自身免疫性疾病、多發(fā)性硬化癥、呼吸系統(tǒng)疾病、感染性疾病和免疫性疾病(包括移植排斥)，優(yōu)選神經(jīng)病性疼痛、骨質(zhì)疏松癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。有益的功效可通過(guò)本領(lǐng)域公知的或本文舉例說(shuō)明的體外和體內(nèi)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。上述性質(zhì)優(yōu)選通過(guò)哺乳動(dòng)物如大鼠、小鼠、狗、兔、猴、或離體器官和組織以及天然或通過(guò)例如重組技術(shù)制備的哺乳動(dòng)物酶制備物的體外和體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)證明。本發(fā)明化合物在體外可以通過(guò)溶液例如優(yōu)選水溶液或混懸液的形式施用，在體內(nèi)可以通過(guò)胃腸途徑或非胃腸途徑(優(yōu)選口服)例如以混懸液或水溶液、或以固體膠囊或片劑制劑的形式施用。體外的劑量可以在約10-5摩爾濃度和10-9摩爾濃度之間的范圍內(nèi)。體內(nèi)的劑量根據(jù)施用途徑的不同可在0.1與100mg/kg之間的范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物治療骨質(zhì)疏松癥的功效可使用體內(nèi)動(dòng)物模型“OVX短尾猴”來(lái)測(cè)定。該模型是本領(lǐng)域熟知的模型，也是驗(yàn)證骨質(zhì)疏松癥化合物的常見(jiàn)模型(參見(jiàn)例如JeromeCP，PetersonPE(2001)Bone；29(1)1-6)。本發(fā)明化合物治療慢性炎癥或神經(jīng)病性疼痛的功效可通過(guò)以下體內(nèi)動(dòng)物模型來(lái)測(cè)定慢性炎性疼痛模型完全弗氏佐劑誘發(fā)的機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏可用作慢性炎性疼痛模型(Stein，C.等，Pharmacol.Biochem.Behav.(1988)31445-451)。在這個(gè)模型中，通常向雄性Sprague-Dawley大鼠或Wistar大鼠(200-250g)一只后足跖肌內(nèi)注射25μl完全弗氏佐劑。該后足會(huì)發(fā)生明顯的炎癥。通常在出現(xiàn)炎癥結(jié)果24小時(shí)后，當(dāng)認(rèn)為機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏完全建立起來(lái)時(shí)，施用藥物以評(píng)價(jià)其功效。慢性神經(jīng)病性疼痛模型可以使用兩種涉及某種形式外周神經(jīng)損傷的慢性神經(jīng)病性疼痛模型。在Seltzer模型(Seltzer等，(1990)Pain43205-218)中，將大鼠麻醉后，在一側(cè)(通常在左側(cè))中股上部處切一小口以暴露坐骨神經(jīng)。小心清除轉(zhuǎn)節(jié)旁、恰好在后二頭肌半腱神經(jīng)從總坐骨神經(jīng)分叉點(diǎn)遠(yuǎn)端處的神經(jīng)周?chē)慕Y(jié)締組織。用3/8反向切割微型彎針將7-0絲縫線穿入神經(jīng)中緊緊結(jié)扎以使神經(jīng)厚度背側(cè)的1/3至1/2保持在結(jié)扎線內(nèi)。將肌肉和皮膚用縫線和夾子縫合后向傷口上撒些抗生素粉末。在對(duì)照動(dòng)物中也暴露坐骨神經(jīng)但不結(jié)扎，傷口以與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相同的方法縫合。在慢性縮窄性損傷(CCI)模型(Bennett，G.J.和Xie，Y.K.Pain(1988)3387-107)中，將大鼠麻醉后，在一側(cè)(通常在左側(cè))中股上部處切一小口以暴露坐骨神經(jīng)。清除神經(jīng)周?chē)慕Y(jié)締組織，將四根4/0含鉻的結(jié)扎線繞著神經(jīng)各打個(gè)松弛的結(jié)以使結(jié)扎線僅僅束住神經(jīng)表面，每根線之間間隔約1毫米。以如上所述的方法用縫線和夾子縫合傷口。在對(duì)照動(dòng)物中也暴露坐骨神經(jīng)但不結(jié)扎，傷口以與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相同的方法縫合。與Seltzer和CCI模型不同的是，Chung模型涉及脊神經(jīng)的結(jié)扎(Kim，S.O.和Chung，J.M.Pain(1992)50355-363)。在該模型中，將大鼠麻醉后放置為俯臥位，在脊柱L4-S2水平的左側(cè)切一口。深度剖開(kāi)脊柱旁肌肉并將肌肉與L4-S2水平的棘突分離以暴露剛好開(kāi)始分支形成L4、L5和L6脊神經(jīng)的坐骨神經(jīng)。用小咬骨鉗小心移去L6橫突以便可以看見(jiàn)這些脊神經(jīng)。分離L5脊神經(jīng)，并用7-0絲縫線緊緊結(jié)扎。肌肉縫一針(6-0絲線)再用一或兩個(gè)皮膚閉合夾縫合傷口，撒些抗生素粉末。在對(duì)照動(dòng)物中也暴露L5神經(jīng)但不結(jié)扎，傷口以前述方法縫合。行為指數(shù)在慢性疼痛模型(炎性和神經(jīng)病性)中，通過(guò)測(cè)量在痛覺(jué)測(cè)量?jī)x(Analgesymeter)(Ugo-Basile，米蘭)施加的漸增壓力刺激下兩只后足的縮足閾值對(duì)機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)測(cè)量在向兩足跖面用vonFreyhairs施加的無(wú)害機(jī)械刺激下兩足的縮足閾值對(duì)機(jī)械異常性疼痛進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)測(cè)量在向每只后足底側(cè)施加的有害熱刺激下的縮足潛伏期對(duì)熱痛覺(jué)過(guò)敏進(jìn)行測(cè)定。在全部模型中，機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏、異常性疼痛和熱痛覺(jué)過(guò)敏均在手術(shù)后1-3天內(nèi)形成并可持續(xù)50天。對(duì)于本文描述的測(cè)定法，為測(cè)定藥物對(duì)痛覺(jué)過(guò)敏形成的影響，可于術(shù)前或術(shù)后施用藥物，特別在術(shù)后約14天施用藥物以測(cè)定藥物對(duì)已經(jīng)建立的痛覺(jué)過(guò)敏的逆轉(zhuǎn)能力。痛覺(jué)過(guò)敏逆轉(zhuǎn)百分比的計(jì)算方法如下在本文公開(kāi)的實(shí)驗(yàn)中，上述疼痛模型中使用的是Wistar大鼠(雄性)。手術(shù)時(shí)大鼠重約120-140克。全部手術(shù)均在安氟醚/O2吸入劑的麻醉下進(jìn)行。所有的情況下都是手術(shù)后縫合傷口，然后允許動(dòng)物恢復(fù)。在所使用的全部模型中，除了假性手術(shù)的動(dòng)物之外，幾天后全部動(dòng)物都出現(xiàn)了明顯的機(jī)械和熱痛覺(jué)過(guò)敏和異常性疼痛以及疼痛閾值下降、后足對(duì)碰觸、壓力或熱刺激的反射性縮足反應(yīng)增強(qiáng)。手術(shù)后動(dòng)物還表現(xiàn)出受累足的特征性的變化。大多數(shù)動(dòng)物受累后足的腳趾緊蜷在一起并且整個(gè)足輕微地轉(zhuǎn)向一側(cè)。有些大鼠的腳趾還卷曲在下面。已結(jié)扎大鼠的步態(tài)各不相同，但跛行并不常見(jiàn)。還觀察到一些大鼠從籠底部抬起受累足，而且被抓起時(shí)后肢呈現(xiàn)異常僵直狀伸展。這些大鼠對(duì)觸碰非常敏感而且可能發(fā)出聲音。除此之外，大鼠的一般健康狀況良好。本發(fā)明化合物還可以適用于預(yù)防或治療冠脈疾病、動(dòng)脈粥樣硬化(包括動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂或不穩(wěn)定化)(參見(jiàn)例如Lindstedt等的“組織蛋白酶F和S阻斷HDL3-誘導(dǎo)的巨嗜細(xì)胞膽固醇外溢”，2003，BiochemicalandBiophysicalresearchcommunications3121019-1024)、自身免疫性疾病、呼吸系統(tǒng)疾病和免疫性疾病(包括移植排斥)。本發(fā)明化合物在治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的抗關(guān)節(jié)炎功效可通過(guò)與佐劑誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎大鼠模型相似的模型測(cè)定，如文獻(xiàn)中所述(R.E.Esser等，J.Rheumatology，1993，20，1176)。本發(fā)明化合物治療骨關(guān)節(jié)炎的功效可通過(guò)使用家兔外側(cè)半月板部分切除模型或與之相似的模型來(lái)測(cè)定，如前所述(Colombo等，Arth.Rheum.199326，875-886)。在該模型中化合物的功效可使用組織學(xué)計(jì)分法定量，如文獻(xiàn)中所述(O’Byrne等，InflammRes1995，44，S117-S118)。本發(fā)明化合物治療骨質(zhì)疏松癥的功效可使用動(dòng)物模型例如切除卵巢的大鼠或其它相似物種如家兔或猴來(lái)測(cè)定，在該模型中，向動(dòng)物施用測(cè)試化合物后，測(cè)量尿液或血清中骨再吸收作用的指標(biāo)是否存在(例如OsteoporosInt(1997)7539-543中所述)。相應(yīng)地，本發(fā)明的其它方面提供用作藥物的本發(fā)明化合物；含有本發(fā)明化合物作為活性成分的藥物組合物；治療患有或易患與組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S有關(guān)的疾病或病癥的患者的方法，該方法包括向患者施用有效量的本發(fā)明化合物；以及本發(fā)明化合物用于制備治療或預(yù)防與組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S有關(guān)的疾病或病癥的藥物的用途。本發(fā)明涉及使用本發(fā)明化合物及其可藥用鹽或藥物組合物在哺乳動(dòng)物中抑制組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S，治療組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S依賴(lài)性病癥，例如本文所述的組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S依賴(lài)性病癥如炎癥、神經(jīng)病性疼痛、骨質(zhì)疏松癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎的方法。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物中選擇性抑制組織蛋白酶K活性的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用抑制組織蛋白酶K有效量的本發(fā)明化合物。更具體而言，這涉及治療哺乳動(dòng)物的骨質(zhì)疏松癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和炎癥(以及其它如上所述的疾病)的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用相應(yīng)的有效量的本發(fā)明化合物。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物中選擇性抑制組織蛋白酶S活性的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用抑制組織蛋白酶S有效量的本發(fā)明化合物。更具體而言，這涉及治療哺乳動(dòng)物的神經(jīng)病性疼痛(以及其它如上所述的疾病)的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用相應(yīng)的有效量的本發(fā)明化合物。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動(dòng)物中選擇性抑制織蛋白酶K和組織蛋白酶S活性的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用抑制織蛋白酶K和組織蛋白酶S有效量的本發(fā)明化合物。更具體而言，這涉及治療哺乳動(dòng)物的神經(jīng)病性疼痛、骨質(zhì)疏松癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和炎癥(以及其它如上所述的疾病)的方法，該方法包括向有需要的哺乳動(dòng)物施用相應(yīng)的有效量的本發(fā)明化合物。以下的實(shí)施例意為舉例說(shuō)明本發(fā)明而不應(yīng)該被理解為限制本發(fā)明。溫度均以攝氏度給出。若非另外提起，所有的蒸發(fā)均在減壓優(yōu)選15至100mmHg(＝20-133mbar)下進(jìn)行。終產(chǎn)物、中間產(chǎn)物和起始原料的結(jié)構(gòu)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)分析方法例如微量分析和光譜特征(例如MS、IR、NMR)證實(shí)。所使用的縮略語(yǔ)均為本領(lǐng)域常規(guī)用法。實(shí)施例實(shí)施例1實(shí)施例1-07-(2，2-二甲基-丙基)-6-[2-(2-羥基-乙基)-1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基甲基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈的制備A.8-芐基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮的制備在室溫下，向1-芐基-哌啶-4-酮(75.1g，0.40mol)的甲苯(400ml)溶液中加入氰基乙酸乙酯(50.6ml，0.48mol)和乙酸(18.2ml，0.32mol)。將反應(yīng)混合物回流4小時(shí)，加冰水終止反應(yīng)，用二乙醚萃取。合并萃取液，用H2O、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后得到(1-芐基-哌啶-4-亞基)-氰基-乙酸乙酯，定量收率。Rf＝0.53(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.30-1.37(m，3H)，2.58(dd，2H)，2.64(dd，2H)，2.79(dd，2H)，3.15(dd，2H)，3.55(s，2H)，4.23-4.32(m，2H)，7.21-7.36(m，5H)。在室溫下，向(1-芐基-哌啶-4-亞基)-氰基-乙酸乙酯(112.9g，0.40mol)在EtOH(500ml)和H2O(100ml)中的溶液中加入氰化鉀(64.6g，0.99mol)。將反應(yīng)混合物在65℃下攪拌24小時(shí)。除去EtOH、向殘余物中加入H2O。用二乙醚萃取水相。合并萃取液，用H2O和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干得到77.7g1-芐基-4-氰基甲基-哌啶-4-甲腈。Rf＝0.38(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76-1.81(m，2H)，2.10-2.05(m，2H)，2.23-2.39(m，2H)，2.69(s，2H)，2.90-2.94(m，2H)，3.56(s，2H)，7.21-7.38(m，5H)。在室溫下，將乙酸(56.8ml)和硫酸(11.8ml)加至1-芐基-4-氰基甲基-哌啶-4-甲腈(27.2g，0.114mmol)中。將反應(yīng)混合物在125℃下攪拌1小時(shí)，冷卻至室溫，加入飽和NaOH水溶液將pH調(diào)至6.0。用二氯甲烷萃取混合物。合并萃取液，用H2O和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干得到8-芐基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮(三步收率81.8％)。Rf＝0.40(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.52-1.57(m，2H)，2.02-2.17(m，4H)，2.59(s，2H)，2.86-2.90(m，2H)，3.52(s，2H)，7.21-7.28(m，2H)，7.30-7.37(m，3H)，7.92(brs，1H)。B.1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯的制備在室溫下，向2l燒瓶中的8-芐基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮(28.3g，0.11mol)和Pd(OH)2(8.5g)中加入EtOH(438ml)和乙酸(5.5ml)。將反應(yīng)混合物在H2氣氛、室溫下攪拌15小時(shí)。過(guò)濾除去催化劑，將EtOH蒸干得到2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮，定量收率。在室溫下，向2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮(4.2g，25.2mmol)在二氯甲烷(60ml)中的懸浮液中加入1NNaOH(26ml，26mmol)和二碳酸二叔丁酯(6.1g，27.7mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌15小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入10％檸檬酸調(diào)節(jié)至pH5。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥后真空濃縮得到固體產(chǎn)物，使之與二乙醚一起過(guò)濾。收率51％Rf＝0.25(正己烷∶乙酰乙酯＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.47(s，9H)，1.55-1.70(m，2H)，1.95-2.05(m，2H)，2.62(s，2H)，2.96-3.02(m，2H)，4.02-4.04(m，2H)，8.14(brs，1H)。1，3-二氧代-2-[2-(四氫-吡喃-2-基氧基)-乙基]-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯的制備在室溫下，向1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(1.0g，3.7mmol)在DMF(12ml)中的懸浮液中加入2-(2-溴乙氧基)-四氫-2H-吡喃(0.62ml，4.1mmol)和碳酸鉀(O.62g，4.5mmol)，并將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。向反應(yīng)混合物中加入水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后過(guò)濾。蒸干溶劑得到1.6g粗品1，3-二氧代-2-[2-(四氫-吡喃-2-基氧基)-乙基]-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯。2-(2-羥基-乙基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮鹽酸鹽的制備在室溫下，向粗品1，3-二氧代-2-[2-(四氫-吡喃-2-基氧基)-乙基]-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(1.6g)在乙酸乙酯(1ml)中的溶液中加入EtOH(1.0ml)和4NHCl/乙酸乙酯(4ml)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)除去溶劑得到1.06g粗品2-(2-羥基-乙基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮鹽酸鹽。7-(2，2-二甲基-丙基)-6-[2-(2-羥基-乙基)-1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基甲基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈的制備將6-溴甲基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈(1.3g，4.25mmol)和粗品2-(2-羥基-乙基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮鹽酸鹽(1.1g，4.25mmol)溶于DMF(14ml)中并向溶液中加入碳酸鉀(1.8g，12.8mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，加水終止反應(yīng)后，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥后蒸干。粗產(chǎn)物經(jīng)反相HPLC純化，收集級(jí)份并蒸干。加入飽和碳酸氫鈉溶液中和，用乙酸乙酯萃取水相。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥后蒸干得到0.5g所需產(chǎn)物，收率為27％。Rf＝0.10(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.01(s，9H)，1.52-1.60(m，2H)，2.08-2.14(m，4H)，2.60(s，2H)，2.84-2.88(m，2H)，3.71-3.78(m，4H)，3.81(s，2H)，4.34(s，2H)，6.58(s，1H)，8.89(s，1H)。使用合適的起始原料和條件，通過(guò)重復(fù)上述方法可獲得下面表1中列出的式I-(i)化合物。式I-(i)表1<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="820">實(shí)施例Rx產(chǎn)量(％)Rf(溶劑)NMR(400MHz，δ)1-1H430.48(EtOAc)(CDCl3)1.03(s，9H)，1.50-1.57(m，2H)，2.10-2.25(m，4H)，2.62(s，2H)，2.84-2.95(m，2H)，3.83(s，2H)，4.36(s，2H)，6.60(s，1H)，7.74(brs，1H)，8.91(s，1H)</table></tables>實(shí)施例2實(shí)施例2-07-(2，2-二甲基-丙基)-6-(5-甲氧基-2-氧代-1，2-二氫-1’H-螺[吲哚-3，4’-哌啶]-1-基甲基)-7-吡咯并[2，3d]嘧啶-2-甲腈的制備A.2-氟-4-甲氧基-1-硝基-苯的制備在室溫下，向3-氟-4-硝基-苯酚(25.3g，0.16mol)在丙酮(160ml)中的溶液中加入碳酸鉀(41.7g，0.30mol)和碘甲烷(20.0ml，0.32mol)。將反應(yīng)混合物在40℃下攪拌3小時(shí)。冷卻至室溫后，加入二氯甲烷，過(guò)濾反應(yīng)混合物并蒸發(fā)。向殘余物中加入二氯甲烷后，將有機(jī)相用H2O和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干得到2-氟-4-甲氧基-1-硝基-苯，收率為98％。Rf＝0.5(正己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.90(s，3H)，6.72-6.79(m，2H)，8.06-8.13(m，1H)。B.5-甲氧基-1，3-二氫-吲哚-2-酮的制備標(biāo)題化合物根據(jù)專(zhuān)利(WO0206228)中報(bào)道的方法制備。在室溫下，向2-氟-4-甲氧基-1-硝基-苯(84.1g，0.49mol)和丙二酸二甲酯(129.9g，0.98mol)在DMF(490ml)中的溶液中加入碳酸鉀(135.9g，0.98mol)。將反應(yīng)混合物在70℃下攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物加至甲苯(393ml)和12NHCl(123ml)中，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用H2O和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干得到2-(5-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙二酸二甲酯。Rf＝0.8(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.80(s，6H)，3.89(s，3H)，5.45(s，1H)，6.94-6.96(m，2H)，8.15-8.20(m，1H)。在室溫下，向1l燒瓶中的2-(5-甲氧基-2-硝基-苯基)-丙二酸二甲酯和5％Pd-C(7.0g)中加入MeOH(490ml)。將反應(yīng)混合物在H2氣氛、室溫下攪拌15小時(shí)。過(guò)濾除去催化劑，蒸干甲醇得到粗品5-甲氧基-2-氧代-2，3-二氫-1H-吲哚-3-甲酸甲酯。Rf＝0.10(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)。在室溫下，向粗品5-甲氧基-2-氧代-2，3-二氫-1H-吲哚-3-甲酸甲酯在MeOH(320ml)中的溶液中加入6NHCl(255ml，1.92mol)。將反應(yīng)混合物在70℃下攪拌3小時(shí)。冷卻至室溫后，向反應(yīng)混合物中加入8NKOH(269ml，1.82mol)。將反應(yīng)混合物在40℃下攪拌30分鐘后加入12NHCl(41ml)。蒸干MeOH，濾出白色粉末。收率59％(三步)。Rf＝0.25(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.51(s，2H)，3.78(s，3H)，6.72-6.85(m，3H)，7.60(brs，1H)。C.1′-芐基-5-甲氧基螺[吲哚-3，4′-哌啶]-2(1H)-酮的制備在-78℃下，向NaHMDS溶液(1MTHF溶液)(800ml，0.8mol)中加入5-甲氧基-1，3-二氫-吲哚-2-酮(26.1g，0.16mol)在THF(160ml)中的溶液和芐基-二-(2-氯-乙基)-胺(47.3g，0.18mol)在THF(176ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌15分鐘，加入飽和氯化銨溶液和冰水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干。殘余物中加入乙醚得到粉末狀物，濾出。收率39％Rf＝0.25(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.81-1.99(m，2H)，2.00-2.04(m，2H)，2.66-2.72(m，2H)，2.90-2.96(m，2H)，3.67(s，2H)，3.77(s，3H)，6.71-6.81(m，2H)，7.00(s，1H)，7.25-7.40(m，5H)，8.32(brs，1H)。D.5-甲氧基-2-氧代-1，2-二氫-1′H-螺[吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯的制備在室溫下，向500ml燒瓶中的1′-芐基-5-甲氧基螺[吲哚-3，4′-哌啶]-2(1H)-酮(20.0g，62mmol)和Pd/C(2.0g)中加入EtOH(120ml)和乙酸(5.5ml)。將反應(yīng)混合物在H2氣氛、室溫下攪拌15小時(shí)。過(guò)濾除去催化劑，蒸干EtOH。Rf＝0.20(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。在室溫下，向5-甲氧基螺[吲哚-3，4′-哌啶]-2(1H)-酮(9.9g，45.2mmol)在二氯甲烷(50ml)中的懸浮液中，加入1NNaOH(45.2ml，45.2mmol)和二碳酸二叔丁酯(9.3g，45.2mmol)在二氯甲烷(50ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)后，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥后真空濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(洗脫劑正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1和1∶1)純化后得到10.6g所需產(chǎn)物。收率68％(兩步)Rf＝0.50(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.51(s，9H)，1.76-1.89(m，4H)，3.70-3.90(m，7H)，6.74-6.76(m，1H)，6.83-6.88(m，2H)，8.83(brs，1H)。E.1-[2-氰基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-5-甲氧基-2-氧代-1，2-二氫-1’H-螺[吲哚-3，4’-哌啶]-1’-甲酸叔丁酯在室溫下，向5-甲氧基-2-氧代-1，2-二氫-1′H-螺[吲哚-3，4′-哌啶]-1′-甲酸叔丁酯(10.6g，31.9mmol)在DMF(70ml)中的溶液中，加入NaH(1.4g，35.1mmol)，并將混合物在室溫下攪拌30分鐘。在0℃下加入6-溴甲基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7.H.-吡咯并[2，3-.d.]嘧啶-2-甲腈(9.5g，31.9mmol)，在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)。用冰水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。經(jīng)硅膠色譜法(洗脫劑正己烷∶乙酸乙酯＝10∶1和1∶1)純化后得到12.1g標(biāo)題產(chǎn)物。收率68％Rf＝0.60(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.09(s，9H)，1.50(s，9H)，1.83-1.86(m，4H)，3.78-3.84(m，7H)，4.22(s，2H)，5.13(s，2H)，6.37(s，1H)，6.62-6.65(m，1H)，6.72-6.75(m，1H)，7.26(s，1H)，8.84(s，1H)。F.7-(2，2-二甲基-丙基)-6-(5-甲氧基-2-氧代-1，2-二氫-1’H-螺[吲哚-3，4’-哌啶]-1-基甲基)-7-吡咯并[2，3d]嘧啶-2-甲腈的制備在0℃下，向1-[2-氰基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-5-甲氧基-2-氧代-1，2-二氫-1’H-螺[吲哚-3，4’-哌啶]-1’-甲酸叔丁酯(12.1g，21.6mmol)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中，加入TFA(5ml)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，除去溶劑后，向殘余物中加入飽和碳酸氫鈉溶液，用乙酸乙酯萃取混合物。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥后真空濃縮。向殘余物中加入乙醚，過(guò)濾后得到淡黃色產(chǎn)物7-(2，2-二甲基-丙基)-6-(5-甲氧基-2-氧代-1，2-二氫-1’H-螺[吲哚-3，4’-哌啶]-1-基甲基)-7-吡咯并[2，3d]嘧啶-2-甲腈。收率91％。Rf＝0.15(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.09(s，9H)，1.90-1.94(m，2H)，2.52-2.61(m，2H)，3.44-3.50(m，2H)，3.80(s，3H)，3.87-3.94(m，2H)，4.24(s，2H)，5.12(s，2H)，6.37(s，1H)，6.67(d，1H)6.77-6.80(m，1H)，7.03(s，1H)，8.86(s，1H)。使用合適的起始原料和條件，通過(guò)重復(fù)上述方法可獲得下面表2中列出的式I-(ii)化合物。式I-(ii)表2<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="837">實(shí)施例R1R2收率(％)Rf(溶劑)1H-NMR(400MHz，δ)2-1HH800.25(MeOH∶CH2Cl2＝1∶4)(CDCl3)1.10(s，9H)，1.84-1.89(m，4H)，3.07-3.13(m，2H)，3.38-3.44(m，2H)，4.24(s，2H)，5.15(s，2H)，6.36(s，1H)，6.73(d，1H)，7.10(t，1H)，7.22(t，1H)，7.47(d，1H)，8.84(s，1H)</table></tables>實(shí)施例3實(shí)施例3-07-(2，2-二甲基-丙基)-6-(1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈的制備A.8-芐基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮的制備在室溫下，向1-芐基-哌啶-4-酮(75.1g，0.40mol)在甲苯(400ml)中的溶液中加入氰基-乙酸乙酯(50.6ml，0.48mol)和乙酸(18.2ml，0.32mol)。將反應(yīng)混合物回流4小時(shí)，用冰水終止反應(yīng)，用二乙醚萃取。合并萃取液，用H2O洗滌，用硫酸鈉干燥后得到(1-芐基-哌啶-4-亞基)-氰基-乙酸乙酯，定量收率。Rf＝0.53(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.30-1.37(m，3H)，2.58(dd，2H)，2.64(dd，2H)，2.79(dd，2H)，3.15(dd，2H)，3.55(s，2H)，4.23-4.32(m，2H)，7.21-7.36(m，5H)。在室溫下，向(1-芐基-哌啶-4-亞基)-氰基-乙酸乙酯(112.9g，0.40mol)在EtOH(500ml)和H2O(100ml)中的溶液中加入氰化鉀(64.6g，0.99mol)。將反應(yīng)混合物在65℃下攪拌24小時(shí)。除去EtOH后，將H2O加至殘余物中。用二乙醚萃取水相。合并萃取液，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干得到77.7g1-芐基-4-氰基甲基-哌啶-4-甲腈。Rf＝0.38(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76-1.81(m，2H)，2.10-2.05(m，2H)，2.23-2.39(m，2H)，2.69(s，2H)，2.90-2.94(m，2H)，3.56(s，2H)，7.21-7.38(m，5H)。在室溫下，將乙酸(56.8ml)和硫酸(11.8ml)加至1-芐基-4-氰基甲基-哌啶-4-甲腈(27.2g，0.114mmol)中。將反應(yīng)混合物在125℃下攪拌1小時(shí)。冷卻至室溫后加入飽和NaOH水溶液將pH調(diào)至6.0。用二氯甲烷萃取混合物。合并萃取液，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干得到8-芐基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮(三步收率81.8％)。Rf＝0.40(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.52-1.57(m，2H)，2.02-2.17(m，4H)，2.59(s，2H)，2.86-2.90(m，2H)，3.52(s，2H)，7.21-7.28(m，2H)，7.30-7.37(m，3H)，7.92(brs，1H)。B.1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯的制備在室溫下，向2l燒瓶中的8-芐基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮(28.3g，0.11mol)和Pd(OH)2(8.5g)中加入EtOH(438ml)和乙酸(5.5ml)。將反應(yīng)混合物在H2氣氛、室溫下攪拌15小時(shí)。過(guò)濾除去催化劑，蒸干EtOH得到2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮，定量收率。在室溫下，向2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-1，3-二酮(4.2g，25.2mmol)在二氯甲烷(60ml)的懸浮液中加入1NNaOH(26ml，26mmol)和二碳酸二叔丁酯(6.1g，27.7mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌15小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入10％檸檬酸將混合物的pH調(diào)至5。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥后真空濃縮得到固體產(chǎn)物，使之與二乙醚一起過(guò)濾。收率51％Rf＝0.25(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.47(s，9H)，1.55-1.70(m，2H)，1.95-2.05(m，2H)，2.62(s，2H)，2.96-3.02(m，2H)，4.02-4.04(m，2H)，8.14(brs，1H)。C.2-[2-氰基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯的制備將6-溴甲基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈(1.0g，3.25mmol)和1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(0.82g，3.42mmol)溶于DMF(15ml)中并向該溶液中加入碳酸鉀(0.58g，4.23mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌15小時(shí)，用飽和氯化銨溶液終止反應(yīng)后，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用水、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。經(jīng)硅膠色譜法(洗脫劑正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化后得到1.56g所需的2-[2-氰基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯，收率97％。Rf＝0.30(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ0.99(s，9H)，1.40(s，9H)，1.66-1.68(m，4H)，2.89-2.93(m，2H)，3.85-3.88(m，2H)，4.25(s，2H)，4.90(s，2H)，6.62(s，1H)，9.06(s，1H)。D.7-(2，2-二甲基-丙基)-6-(1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈的制備在0℃下，向2-[2-氰基-7-(2，2-二甲基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(1.5g，3.1mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中加入TFA(5ml)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。除去溶劑后，向殘余物中加入飽和碳酸氫鈉溶液并用二氯甲烷萃取混合物。合并萃取液，用水、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥后真空濃縮得到所需產(chǎn)物7-(2，2-二甲基-丙基)-6-(1，3-二氧代-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈。收率91％。Rf＝0.15(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.03(s，9H)，1.44-1.51(m，2H)，1.69(brs，1H)，1.95-2.02(m，2H)，2.66(s，2H)，2.69-2.72(m，2H)，3.11-3.17(m，2H)，4.34(s，2H)，4.91(s，2H)，6.59(s，1H)，8.90(s，1H)。使用合適的起始原料和條件，通過(guò)重復(fù)上述方法可獲得下面表3中列出的式I-(iii)化合物。式I-(iii)表3實(shí)施例4實(shí)施例4-06-(8-乙?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基)-7-(3，3-二甲基-丁基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈的制備8-甲磺?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷鹽酸鹽在0℃下，向2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(1.12g，4.66mol)在CH2Cl2(10ml)中的溶液中，加入三乙胺(3.88ml)和甲磺酰氯(1.08ml，14mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，用冰水終止反應(yīng)，用二氯甲烷萃取。合并萃取液，用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后得到粗品8-甲磺?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(1.32g)。Rf＝0.7(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.46(s，9H)，1.66-1.76(m，6H)，2.76-2.80(m，2H)，3.00(s，3H)，3.15-3.25(m，2H)，3.36-3.45(m，4H)。向8-甲磺?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(1.32g)在乙酸乙酯(10ml)中的溶液中加入1MHCl的乙酸乙酯溶液(20ml)。在室溫下攪拌2小時(shí)后，蒸干溶劑得到8-甲磺酰基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷鹽酸鹽，為固體。Rf＝0.05(乙酸乙酯)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.62-1.68(m，4H)，1.78-1.82(m，2H)，2.87(s，3H)，2.98-3.12(m，6H)，3.20-3.23(m，2H)，9.49(brs，1H)，9.59(brs，1H)。1-(2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基)-乙酮鹽酸鹽在0℃下，向2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(1.12g，4.66mol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液中加入三乙胺(3.88ml)和乙酸酐(1.32ml，14mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，用冰水終止反應(yīng)，用二氯甲烷萃取。合并萃取液，用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后得到粗品8-乙?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(1.34g)。Rf＝0.6(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.46(s，9H)，1.50-1.56(m，4H)，1.72-1.76(m，2H)，2.03(s，2H)，2.22(s，3H)，3.16-3.49(m，6H)。向8-乙?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(1.34g)在乙酸乙酯(10ml)中的溶液中加入1MHCl的乙酸乙酯溶液(20ml)。在室溫下攪拌2小時(shí)后，蒸干反應(yīng)混合物得到1-(2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基)-乙酮鹽酸鹽，為固體。Rf＝0.05(乙酸乙酯)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.44-1.59(m，4H)，1.76-1.83(m，2H)，2.07(s，3H)，2.96-3.06(m，2H)，3.16-3.24(m，4H)，3.38-3.56(m，2H)，9.55(brs，1H)，9.67(brs，1H)。中間產(chǎn)物I在-78℃下，向5-甲氧基-1，3-二氫-吲哚-2-酮(1.5g，10mmol)在THF(160ml)中的溶液中加入NaHMDS(1MTHF溶液)(50ml，50mmol)。在-78℃下攪拌30分鐘后，加入乙基-二-(2-氯-乙基)-胺(47.3g，0.18mol)在THF(176ml)中的溶液，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌15小時(shí)，用飽和NH4Cl水溶液和冰水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干。向殘余物中加入乙醚，過(guò)濾得到粉末狀物。Rf＝0.10(CH2Cl2∶MeOH＝30∶1)1H-NMR400MHz，CDCl3)δ1.17(t，3H)，1.87-2.02(m，4H)，2.60(q，2H)，2.69-2.74(m，2H)，2.90-2.96(m，2H)，6.78-6.82(m，1H)，6.88-6.93(m，1H)，7.08-7.11(m，1H)，8.04(brs，1H)。中間產(chǎn)物L(fēng)在-78℃下，向5-甲氧基-1，3-二氫-吲哚-2-酮(1.06g，6.49mmol)在THF(13ml)中的溶液中加入NaHMDS(1MTHF溶液)(32.5ml，32.5mmol)。在-78℃下攪拌30分鐘后，加入甲基-二-(2-氯-乙基)-胺鹽酸鹽(1.37g，7.14mol)，在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌13.5小時(shí)后，用飽和NH4Cl水溶液和冰水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干。向殘余物中加入乙醚，過(guò)濾后得到粉末狀物。Rf＝0.10(CH2Cl2∶MeOH＝30∶1)1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.66-1.78(m，4H)，2.28(s，3H)，2.44-2.47(m，2H)，2.71-2.77(m，2H)，3.70(s，3H)，6.74(s，2H)，7.01(s，1H)，10.15(brs，1H)。中間產(chǎn)物在0℃下，向中間產(chǎn)物(422mg，1.76mol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入三乙胺(1.2ml)和乙酸酐(0.33ml，3.53mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，用冰水終止反應(yīng)，用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)層，用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥后真空濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜法(正己烷∶AcOEt＝5∶1)純化后得到產(chǎn)物。Rf＝0.6(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.79-1.95(m，4H)，2.20(s，3H)，3.68-3.74(m，1H)，3.80-3.87(m，1H)，3.98-4.22(m，2H)，6.90-6.92(m，1H)，7.03-7.07(m，1H)，7.22-7.26(m，2H)，8.06(brs，1H)。6-(8-乙?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基)-7-(3，3-二甲基-丁基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈向6-溴甲基-7-(3，3-二甲基-丁基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈(440mg，1.37mmol)在DMF(5ml)中的溶液中加入1-(2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基)-乙酮鹽酸鹽(300mg，1.37mmol)和K2CO3(568mg，4.11mmol)及三乙胺(5ml)。將混合物在氮?dú)鈿夥?、室溫下攪?1小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)混合物，用AcOEt萃取(兩次)。合并有機(jī)層，用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥后真空濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜法(正己烷∶AcOEt＝1∶1)純化后得到產(chǎn)物。Rf＝0.30(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(s，9H)，1.53-1.72(m，8H)，2.07(s，3H)，2.40-2.48(m，2H)，2.60-2.69(m，2H)，3.35-3.45(m，2H)，3.60-3.67(m，1H)，3.74-3.82(m，2H)，4.40-4.44(m，2H)，6.49(s，1H)，8.87(s，1H)。使用合適的起始原料和條件，通過(guò)重復(fù)上述方法可獲得下面表4中列出的式I-iv化合物。式I-iv表4實(shí)施例4-133-[2-氰基-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯的制備4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯在室溫下，向1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸烷-4-酮(1.0g，4.32mmol)在二氯甲烷(10ml)中的懸浮液中加入飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)和二碳酸二叔丁酯(1.04g，4.76mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，用水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥后蒸干得到4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯。收率100％Rf＝0.90(CH2Cl2∶MeOH＝20∶1)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.51(s，9H)，1.63-1.71(m，2H)，2.50-2.65(m，2H)，3.50-3.65(m，2H)，3.97-4.10(m，2H)，4.75(s，2H)，6.74-6.76(m，2H)，6.84-6.88(m，1H)，7.01(brs，1H)，7.23-7.27(m，2H)。3-[2-氰基-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯向6-氯甲基-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈(600mg，1.98mmol)在DMF(7ml)中的溶液中加入4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(657mg，1.98mmol)和氫化鈉(101mg，2.53mmol)。將混合物在氮?dú)鈿夥?、室溫下攪?4小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)混合物，用AcOEt萃取(兩次)。合并有機(jī)層，用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥后真空濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜法(正己烷∶AcOEt＝1∶1)純化后得到產(chǎn)物，收率為29％。Rf＝0.25(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ0.97-1.49(m，7H)，1.50(s，9H)，1.56-1.82(m，8H)，2.45-2.60(m，2H)，3.50-3.65(m，2H)，4.09-4.14(m，2H)，4.33-4.36(m，2H)，4.64(s，2H)，4.87(s，2H)，6.72-6.74(m，2H)，6.86-6.90(m，1H)，7.20-7.24(m，2H)，8.94(s，1H)。實(shí)施例4-147-(2-環(huán)己基-乙基)-6-(4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸-3-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈三氟乙酸鹽向3-[2-氰基-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(340mg，0.56mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入三氟乙酸(5ml)。在室溫下攪拌1小時(shí)后，蒸干溶劑得到7-(2-環(huán)己基-乙基)-6-(4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸-3-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈三氟乙酸鹽，定量收率。Rf＝0.10(CH2Cl2∶MeOH＝20∶1)1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ0.98-1.38(m，5H)，1.65-1.83(m，8H)，1.98-2.09(m，2H)，2.71-2.80(m，2H)，3.53-3.56(m，2H)，3.94-4.02(m，2H)，4.38-4.42(m，2H)，4.73(s，2H)，4.91(s，2H)，6.71(s，1H)，6.88-6.90(m，2H)，7.01-7.04(m，1H)，7.28-7.32(m，2H)，7.85(brs，1H)，8.25(brs，1H)，9.08(s，1H)。實(shí)施例4-156-(8-乙酰基-4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸-3-基甲基)-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈在0℃下，向7-(2-環(huán)己基-乙基)-6-(4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸-3-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈三氟乙酸鹽(142mg，0.28mol)在二氯甲烷(2ml)中的溶液中加入三乙基胺(395μl)和乙酸酐(54μl，0.57mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，用冰水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。經(jīng)硅膠色譜法純化后得到90mg6-(8-乙?；?4-氧代-1-苯基-1，3，8-三氮雜-螺[4.5]癸-3-基甲基)-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈，收率為58％。Rf＝0.30(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ0.97-1.40(m，6H)，1.64-1.82(m，9H)，2.14(s，3H)，2.37-2.44(m，2H)，3.40-3.48(m，1H)，3.74-3.79(m，1H)，3.93-4.01(m，1H)，4.34-4.38(m，2H)，4.56-4.66(m，3H)，4.87(s，2H)，6.61(s，1H)，6.74-6.76(m，2H)，6.91-6.95(m，1H)，7.23-7.25(m，2H)，8.94(s，1H)。實(shí)施例4-166-(2-乙?；?2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基甲基)-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈向6-溴甲基-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈(290mg，0.84mmol)在DMF(1.7ml)中的溶液中加入2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(201mg，0.84mmol)和碳酸鉀(138mg，1.0mmol)。將混合物在氮?dú)鈿夥?、室溫下攪?4小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)混合物，用AcOEt萃取(兩次)。合并有機(jī)層，用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥后真空蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜法(正己烷∶AcOEt＝1∶1)純化后得到8-[2-氰基-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯，收率為71％。Rf＝0.45(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。向8-[2-氰基-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲基]-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(300mg，0.59mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入三氟乙酸(3ml)。在室溫下攪拌1.5小時(shí)后，蒸干溶劑得到7-(2-環(huán)己基-乙基)-6-(2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈三氟乙酸鹽，定量收率。Rf＝0.10(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)在0C下，向7-(2-環(huán)己基-乙基)-6-(2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-甲腈三氟乙酸鹽在吡啶(5ml)中的溶液中，加入乙酸酐(0.28ml，2.90mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，用冰水終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。經(jīng)硅膠色譜法純化后得到79mg6-(2-乙酰基-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-8-基甲基)-7-(2-環(huán)己基-乙基)-7H-吡咯并[2，3]嘧啶-2-甲腈，收率為30％(3步)。Rf＝0.30(正己烷∶AcOEt＝1∶1)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.00-1.84(m，17H)，2.04(s，3H)，2.33-2.56(m，4H)，3.25-3.35(m，2H)，3.47-3.53(m，2H)，3.66-3.69(m，2H)，4.38-4.43(m，2H)，6.49(s，1H)，8.87(s，1H)。權(quán)利要求1.式I化合物或其可藥用鹽或酯式I其中E是式a或式b的基團(tuán)式a式b其中A是CH2、CH2-CH2或C＝O；B是CH2、C＝O或D是CH2或C＝O；G是CH2、CH2C＝O或CH2-CH2；J是CH2、C＝O或CH2-CH2；L是H、OCH3、鹵素或低級(jí)烷氧基；M是CH2或NH；Q是H、低級(jí)烷基、羥基取代的低級(jí)烷基、可選取代的芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷基磺?；?、碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、鹵素取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基、氨基羰基、環(huán)烷基氨基羰基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基羰基、鹵素取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基羰基或低級(jí)烷基羰基；并且R是低級(jí)烷基、對(duì)-氯苯基乙基、環(huán)己基乙基、二甲基丁基、二氟環(huán)己基乙基、環(huán)戊基乙基或環(huán)庚基乙基。2.式I-(i)化合物或其可藥用鹽或酯式I-(i)其中Q-i是H、低級(jí)烷基、羥基取代的低級(jí)烷基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基、單或二取代的芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基；并且R如權(quán)利要求1所定義。3.式I-(ii)化合物或其可藥用鹽或酯式I-(ii)其中Q-ii是H、低級(jí)烷基、N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基、鹵素取代的碳環(huán)芳基低級(jí)烷基、低級(jí)烷基羰基；并且L和R如權(quán)利要求1所定義。4.式I-(iii)化合物或其可藥用鹽或酯式I-(iii)其中B-iii是CH2；G-iii是CH2CH2；J-iii是CH2CH2；Q-iii是H、環(huán)烷基氨基羰基、氨基羰基、低級(jí)烷氧基取代的碳環(huán)芳基、低級(jí)烷基羰基、碳環(huán)芳基低級(jí)烷基或N-雜環(huán)基取代的低級(jí)烷基羰基；并且R如權(quán)利要求1所定義。5.權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R是R1＝低級(jí)烷基。6.權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R是R2＝對(duì)-氯苯基乙基、環(huán)己基乙基、二甲基丁基、二氟環(huán)己基乙基、環(huán)戊基乙基或環(huán)庚基乙基。7.權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R是R5＝2，2-二甲基-丙基。8.權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中R是R6＝3，3-二甲基-丁基。9.式I-(iv)化合物或其可藥用鹽或酯式I-(iv)其中R3是(8-低級(jí)烷基-羰基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基、(8-低級(jí)烷基-磺?；?-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基、(8-芳基-低級(jí)烷基)-2，8-二氮雜-螺[4.5]癸-2-基甲基、或R4是對(duì)-氯苯基甲基、環(huán)己基甲基、二甲基丙基、二氟環(huán)己基甲基、環(huán)戊基甲基或環(huán)庚基甲基；并且Q如權(quán)利要求1所定義。10.選自于實(shí)施例1至4的任一個(gè)的化合物或其可藥用鹽或酯。11.用作藥物的權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的化合物。12.含有權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的化合物作為活性成分的藥物組合物。13.治療患有或易患與組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S有關(guān)的疾病或病癥的患者的方法，該方法包括向患者施用有效量的權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的化合物。14.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的化合物用于制備治療或預(yù)防與組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S有關(guān)的疾病或病癥的藥物的用途。15.權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其包括使式II化合物式II其中，Q具有權(quán)利要求1中的定義，與式III化合物偶聯(lián)，式III其中，X是鹵素，R具有權(quán)利要求1中的定義，并回收所形成的游離堿、可藥用鹽或酯形式的化合物。全文摘要本發(fā)明提供式(I)化合物或其可藥用鹽或酯，其中的符號(hào)具有說(shuō)明書(shū)中所定義的含義。所述化合物是組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S的抑制劑，可用于治療與組織蛋白酶K和/或組織蛋白酶S有關(guān)的疾病或病癥，例如包括神經(jīng)病性疼痛、炎癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、多發(fā)性硬化癥和腫瘤等的各種病癥。文檔編號(hào)A61K31/00GK1753895SQ200480005471公開(kāi)日2006年3月29日申請(qǐng)日期2004年2月27日優(yōu)先權(quán)日2003年2月28日發(fā)明者入江統(tǒng),巖崎源司,升谷敬一,高廣三宅,手納直規(guī)申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司