專(zhuān)利名稱(chēng)：中藥寄生藤的醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于中藥寄生藤的制藥用途，具體地說(shuō)是寄生藤在制備治療過(guò)敏性皮炎、蕁麻疹藥物中的應(yīng)用，在制備治療骨結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核、慢性骨髓炎、松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞、股骨頭壞死、骨質(zhì)增生、非化膿性軟骨膜炎、扁平疣、傳染性軟疣和痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
寄生藤，又名藤香、入地寄生、熊膽藤、左扭香、列子、藤酸公、青藤公，英文名稱(chēng)為Henslowia Frutescens Cnamp，屬檀香科植物。它生于灌木叢中，常寄生在其它植物的地下莖或根上。寄生藤產(chǎn)在我國(guó)華南各省，藥源十分豐富。
寄生藤在許多中草藥書(shū)籍中尚未有記載，《中藥大辭典》中雖有記載，但僅提到主治散血、消腫、止痛，治刀傷、跌打且只作為外用藥，沒(méi)有涉及治療過(guò)敏性皮炎、蕁麻疹、骨結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核、慢性骨髓炎、松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞、股骨頭壞死、骨質(zhì)增生、非化膿性軟骨膜炎、扁平疣、傳染性軟疣和痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，其他醫(yī)藥文獻(xiàn)資料亦無(wú)這一方面的報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
在多年的臨床實(shí)踐中，發(fā)明人用中草藥寄生藤制劑治療過(guò)敏性皮炎、蕁麻疹、骨結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核、慢性骨髓炎、松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞、股骨頭壞死、骨質(zhì)增生、非化膿性軟骨膜炎、扁平疣、傳染性軟疣和痛風(fēng)等病癥，收到了滿(mǎn)意的效果，發(fā)現(xiàn)了寄生藤一些可靠的新用途。
因此，本發(fā)明的目的之一就是克服以前應(yīng)用抗組胺藥物或皮質(zhì)類(lèi)固醇藥物在治療過(guò)敏性皮炎、蕁麻疹時(shí)的副作用，而提供寄生藤在制備治療過(guò)敏性皮炎、蕁麻疹藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供寄生藤在制備治療骨結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供寄生藤在制備治療慢性骨髓炎、松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞、股骨頭壞死藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供寄生藤在制備治療骨質(zhì)增生、非化膿性軟骨膜炎藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供寄生藤在制備治療扁平疣、傳染性軟疣藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供寄生藤在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的內(nèi)容就是寄生藤在制備治療過(guò)敏性皮炎藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療蕁麻疹藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療骨結(jié)核藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療淋巴結(jié)核藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療皮膚結(jié)核藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療慢性骨髓炎藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療股骨頭壞死藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療骨質(zhì)增生藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療非化膿性軟骨膜炎藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療扁平疣藥物中的應(yīng)用；寄生藤在制備治療傳染性軟疣藥物中的應(yīng)用和寄生藤在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
寄生藤在制備上述治療各種疾病的藥物時(shí)，可以是以單獨(dú)的寄生藤為原料制備成藥劑，也可以將寄生藤與其他藥物配合制成復(fù)方制劑。
一般將寄生藤制備成上述用途的藥物時(shí)，先對(duì)寄生藤進(jìn)行提取，然后將寄生藤提取物單獨(dú)地或者加入復(fù)方中以常規(guī)的制劑工藝制備成藥劑。
這里所說(shuō)的對(duì)寄生藤的提取，可以是用寄生藤的水提物，如水煎劑，水煎劑的濃縮液，或寄生藤水提液醇沉后經(jīng)噴霧干燥得到的粉劑；也可以是以乙醇或其他有機(jī)溶劑對(duì)寄生藤進(jìn)行提取。
當(dāng)然也可以將寄生藤原藥直接制備成單方或復(fù)方的制劑。
這里所說(shuō)的用寄生藤制成的藥劑可以是臨床上能夠使用的各種不同劑型，如片劑、口服液、粉劑、丸劑、膠囊、注射劑(包括靜脈輸液劑)、膏劑、酊劑、散劑和沖劑等。
寄生藤用于制備上述藥物的特點(diǎn)是該藥物僅對(duì)單核巨噬細(xì)胞有強(qiáng)烈的抑制作用，對(duì)金葡菌、桿菌有抑制作用，而對(duì)免疫系統(tǒng)無(wú)影響，因此對(duì)治療上述疾病有抗炎抑菌的特殊療效。并且，該藥物的毒性極小，避免抗生素的副作用。
具體的實(shí)施方式上述治療慢性骨髓炎、松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞、股骨頭壞死、骨質(zhì)增生的藥物采用內(nèi)服的方法使用；治療上列其余疾病的藥物采用內(nèi)服和外用相配合的方法使用。內(nèi)服的具體方法可采用下列方法之一1.將寄生藤洗凈、涼干、切片，再用水煎服，成人劑量為每日含15-20克寄生藤的湯藥，一日分兩次服用；2.將寄生藤用酒浸泡，制成藥酒，每天服含10克寄生藤的藥酒，分兩次服用；3.將寄生藤洗凈、曬干、粉碎、過(guò)120目篩，制成干粉散劑或裝入膠囊，每天服含5克寄生藤的藥粉，分兩次服用；當(dāng)然也可以制成注射劑，進(jìn)行肌肉注射或靜脈注射。外用的具體方法可以制成軟膏外敷，也可以制成洗劑外洗濕敷。
在臨床治療中，對(duì)過(guò)敏性皮炎、蕁麻疹一般采用藥物抗組胺或類(lèi)固醇，但是，抗組胺對(duì)患者有嗜睡的副作用；類(lèi)固醇屬于一種皮質(zhì)激素類(lèi)藥，它會(huì)影響患者的腸胃、血壓，甚至引起胃出血。并且，對(duì)患有結(jié)核、糖尿病的患者禁止使用類(lèi)固醇。對(duì)骨結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核病的患者，一般采用異煙肼或利福平或乙胺丁醇，但是這些藥物對(duì)病人的肝臟有損害，且抑制骨髓的造血功能。治療慢性骨髓炎一般采用青霉素或克霖霉素，但是，由于長(zhǎng)期使用青霉素或克霖霉素，患者已有抗藥性，并且使用上述藥物不夠安全，時(shí)有發(fā)生過(guò)敏性休克的病例。對(duì)于松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞、股骨頭壞死、骨質(zhì)增生、非化膿性軟骨膜炎和痛風(fēng)病，一般采用皮質(zhì)激素類(lèi)藥治療，但隨之帶來(lái)的是上述皮質(zhì)激素類(lèi)藥的副作用。對(duì)于扁平疣和傳染性軟疣病，一般采用抗病毒類(lèi)藥物，如阿昔洛韋，其缺點(diǎn)是療程比較長(zhǎng)，治療費(fèi)用高。另外，中草藥雷公藤在臨床中時(shí)有替代抗菌素或抗病毒類(lèi)藥治療上列疾病中一些疾病的情況，但是，雷公藤有影響人體免疫功能的副作用。
在長(zhǎng)期的臨床實(shí)驗(yàn)中證明，使用中草藥寄生藤的制劑治療上述疾病，不但可以達(dá)到上面常用藥物的效果，甚至超過(guò)其效果。并且，沒(méi)有任何副作用，其治療費(fèi)用又低廉的多。
下面通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)證實(shí)本發(fā)明所說(shuō)的寄生藤的新用途。
實(shí)驗(yàn)(一)寄生藤抗過(guò)敏、抗炎和急性毒性實(shí)驗(yàn)。
一.實(shí)驗(yàn)材料寄生藤藥液，濃度為1∶1(1g生藥/ml)及1∶6.67(6.67g生藥/ml)。
地塞米松片，山東省濟(jì)寧市第三制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)9901133伊文思藍(lán)，中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司(進(jìn)口分裝)，批號(hào)23860。
卵蛋白，Sigma生產(chǎn)。
百日咳疫苗，山東省衛(wèi)生防疫站提供。
其他試劑皆為分析純。
小鼠、大鼠均由山東中醫(yī)藥大學(xué)提供。
二.實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果1.寄生藤藥液對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓炎癥作用的影響。取健康小鼠50只，雌雄各半，體重18-22g，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別口服不同濃度的寄生藤藥液、地塞米松和等同劑量的生理鹽水，劑量0.2ml/10g，連續(xù)三天，于末次給藥1小時(shí)后，每只小鼠右耳涂50ul二甲苯，1.5小時(shí)后，處死小鼠并剪下兩耳，用直徑7.5毫米打孔器在相同的位置打下耳片，電子天平稱(chēng)重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表一
表一 寄生藤藥液對(duì)二甲苯致炎作用的影響(X±SD).

與生理鹽水組比較*P＜0.012.寄生藤藥液對(duì)伊文思藍(lán)滲出的影響取健康小鼠50只，雌雄各半，體重18-22克，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別口服不同濃度的寄生藤藥液及地塞米松和等同劑量的生理鹽水，每次0.2ml/10g，連續(xù)5天，于末次給藥1小時(shí)后，每只小鼠均靜脈注射0.5％伊文思藍(lán)0.1ml/10g，隨即腹腔注射1％醋酸0.2ml/只，20分鐘脫頸椎處死，自腹白線(xiàn)剪開(kāi)皮膚肌肉，用6ml生理鹽水分兩次洗滌腹腔，吸管吸取洗滌液，用轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心旋轉(zhuǎn)15分鐘，取上面的清液；再用721分光光度計(jì)于590nm測(cè)定光密度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算腹腔內(nèi)滲入的伊文思藍(lán)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表二表二 寄生藤藥液對(duì)滲出的影響(X±SD)

與生理鹽水組比較*P＜0.013.寄生藤藥液抗過(guò)敏作用觀察取大鼠5只，體重100-200克，以1％卵蛋白0.5ml肌注，隔日一次，共3次，同時(shí)腹腔注射百日咳核疫苗2×10，14天后，乙醚淺麻，自腹主靜脈取血，分離血清，得致敏抗血清，-20C保存?zhèn)溆谩?br> 另取大鼠20只，雌雄各半，體重150-200克，連續(xù)給藥15天，于第14天用8％的硫化鈉脫毛，脫毛后第二天在乙醚淺麻的情況下，在大鼠的背部脊柱兩側(cè)注射致敏抗血清，每側(cè)2-3點(diǎn)，每點(diǎn)間隔1.5-2.0厘米，致敏抗血清以1∶10梯度稀釋?zhuān)奎c(diǎn)注射致敏抗血清0.1ml，48小時(shí)后進(jìn)行抗原攻擊，靜脈注射0.5％伊文思藍(lán)0.5ml和1％卵蛋白生理鹽水溶液0.5ml，經(jīng)30分鐘后，斷頸處死動(dòng)物，剪下背部皮膚，檢查測(cè)量注射各點(diǎn)的藍(lán)色反應(yīng)斑點(diǎn)直徑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表三。
表三 寄生藤藥液對(duì)皮膚過(guò)敏的影響(X±SD)

與生理鹽水組比較*p＜0.014.寄生藤藥液急性毒性實(shí)驗(yàn)經(jīng)預(yù)試未測(cè)到藥物的半數(shù)致死量，故測(cè)其最大給藥量。取小鼠20只，雌雄各半，以濃度1∶6.67(6.67g生藥/ml)藥液灌胃，0.3ml/10g，3次/天，然后連續(xù)觀察7天，結(jié)果給藥后小鼠未見(jiàn)明顯的毒性反應(yīng)，小鼠飲食、行為、背毛、糞便等未見(jiàn)異常，未見(jiàn)動(dòng)物有死亡，7天后處死動(dòng)物，活檢動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎等重要器官未發(fā)現(xiàn)有明顯改變，故寄生藤藥液最大給藥量至少為0.3ml/10g×6.67g/ml×3＝600.3g/kg，臨床用量為20克生藥/日，動(dòng)物用量折合為人用量的1800倍，證明此藥臨床應(yīng)用比較安全。
實(shí)驗(yàn)(二)中藥寄生藤的抗炎作用實(shí)驗(yàn)一.材料與方法6-8周BALB/c純系小鼠(上海必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供)；藥物配置，用0.5克寄生藤干藥/ml的水溶液，經(jīng)0.2nm孔徑的濾器過(guò)濾后作為原藥液備用；RPMI1640培養(yǎng)基(Hyclone)，胎牛血清(Hyclone)。
NO的測(cè)定，采用Griess法，反應(yīng)后570nm測(cè)定OD值；小鼠TNFα，IL-1β，IL-2，IFNγ的檢測(cè)均采用ELISA法(R&D公司)，450nm測(cè)定OD值；二.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離取8周齡BALB/c小鼠4只，引頸處死，用無(wú)菌注射器吸取5ml冷的培養(yǎng)基進(jìn)行腹腔無(wú)菌灌洗，將所有灌洗液混勻，并記數(shù)細(xì)胞濃度；1000rpm離心10分鐘，去除上清，用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基配成1*10/ml的細(xì)胞懸液，并接種致24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，置37C，5％CO2的孵箱中孵育，2小時(shí)后將培養(yǎng)板輕輕振蕩并去除上清和懸浮細(xì)胞，重新往孔內(nèi)添加新鮮完全培養(yǎng)基后備用。
三.小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的分離取8周齡BALB/c小鼠1只，引頸處死，無(wú)菌分離脾臟并將其研磨，經(jīng)400目鋼網(wǎng)過(guò)濾后，再用Tris-NH4Cl裂解紅細(xì)胞，PBS洗二遍后用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基配成1*10/ml的細(xì)胞懸液備用。
四.藥物對(duì)巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的活化抑制作用將分離的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞鋪24孔培養(yǎng)板，每孔1ml，將預(yù)制的藥物以1％為起始濃度，依次倍比稀釋后加入，共作4個(gè)濃度，每個(gè)濃度置3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。培養(yǎng)8小時(shí)后，巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組中以1ug/ml的濃度加入LPS，淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組以5ug/ml的濃度加入ConA，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后吸取上清，巨噬細(xì)胞測(cè)定NO，TNFα，IL-1β，淋巴細(xì)胞測(cè)定IL-2IFN-γ。
五.藥物對(duì)細(xì)菌的直接抑制作用實(shí)驗(yàn)用LB培養(yǎng)基配制2％的營(yíng)養(yǎng)瓊脂，高壓滅菌后加入不同濃度的藥物(1％，5％，10％)，每個(gè)濃度鋪3塊10厘米平皿，20ml/皿，冷卻后開(kāi)蓋置于室內(nèi)臺(tái)面靜置30分鐘；再置入37度恒溫孵箱中培養(yǎng)48小時(shí)觀察并記數(shù)菌落數(shù)目。結(jié)果如下表四所示。

*與1號(hào)組相比P＜0.05上面的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，寄生藤藥液對(duì)金葡菌的抑制作用較弱，對(duì)桿菌的抑制作用較強(qiáng)，對(duì)霉菌無(wú)抑制作用。
六. 藥物對(duì)巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響從顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，(參看圖6、圖7)藥物對(duì)巨噬細(xì)胞有強(qiáng)且迅速的毒性作用，在0.25％的藥物濃度以上，8小時(shí)內(nèi)胞漿出現(xiàn)即可出現(xiàn)空胞，隨后發(fā)生固縮性死亡，但胞核相對(duì)完整，說(shuō)明藥物直接作用于胞漿成分使細(xì)胞出現(xiàn)死亡；同濃度的藥物對(duì)淋巴細(xì)胞沒(méi)有顯著的形態(tài)學(xué)變化，說(shuō)明藥物對(duì)免疫系統(tǒng)的損傷極小。
七.藥物對(duì)巨噬細(xì)胞活化的抑制作用在先與藥物作用2小時(shí)后，再用強(qiáng)的巨噬細(xì)胞刺激劑LPS刺激，發(fā)現(xiàn)上清中NO和IL-1β，TNFα的含量明顯降低，但沒(méi)有明顯的藥物濃度相關(guān)性。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可參看以下的附圖，進(jìn)行說(shuō)明。
從實(shí)驗(yàn)(二)可以證明，寄生藤藥液的抗炎作用其一是因?yàn)樵撍帉?duì)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)具有強(qiáng)烈的抑制作用，抑制巨噬細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)，即抑制炎癥反應(yīng)；其二是該藥有較強(qiáng)的抑菌作用，特別對(duì)桿菌及金葡菌有較強(qiáng)的抑菌作用，故對(duì)炎癥的致病細(xì)菌有直接的抗菌作用。


圖1為巨噬細(xì)胞上清中NO的含量。圖中，標(biāo)有*的組值與陽(yáng)性對(duì)照比P＜0.01。
圖2為巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1的含量。圖中，標(biāo)有*的組值與陽(yáng)性對(duì)照比P＜0.01，標(biāo)有#的組值與陽(yáng)性對(duì)照比P＜0.01。
圖3為巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α的含量。圖中，標(biāo)有#的組值與陽(yáng)性對(duì)照比P＜0.01。
圖4為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2的濃度。圖中，標(biāo)有*的組值與陽(yáng)性對(duì)照比P＜0.01。
圖5為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ的含量。圖中，標(biāo)有#的組值與陽(yáng)性對(duì)照比P＞0.05。
圖6為在顯微鏡觀察的陰性對(duì)照照片。
圖7為在顯微鏡觀察的藥物作用8小時(shí)的照片。
權(quán)利要求
1.寄生藤在制備治療過(guò)敏性皮炎藥物中的應(yīng)用。
2.寄生藤在制備治療蕁麻疹藥物中的應(yīng)用。
3.寄生藤在制備治療骨結(jié)核藥物中的應(yīng)用。
4.寄生藤在制備治療淋巴結(jié)核藥物中的應(yīng)用。
5.寄生藤在制備治療皮膚結(jié)核藥物中的應(yīng)用。
6.寄生藤在制備治療慢性骨髓炎藥物中的應(yīng)用。
7.寄生藤在制備治療松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞藥物中的應(yīng)用。
8.寄生藤在制備治療股骨頭壞死藥物中的應(yīng)用。
9.寄生藤在制備治療骨質(zhì)增生藥物中的應(yīng)用。
10.寄生藤在制備治療非化膿性軟骨膜炎藥物中的應(yīng)用。
11.寄生藤在制備治療扁平疣藥物中的應(yīng)用。
12.寄生藤在制備治療傳染性軟疣藥物中的應(yīng)用。
13.寄生藤在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了寄生藤的新的藥物用途，用寄生藤可以制備成治療過(guò)敏性皮炎、蕁麻疹、骨結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核、慢性骨髓炎、松毛蟲(chóng)病骨質(zhì)破壞、股骨頭壞死、骨質(zhì)增生、扁非化膿性軟骨膜炎、扁平疣、傳染性軟疣和痛風(fēng)等疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61P31/06GK1562283SQ20041002688
公開(kāi)日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月14日
發(fā)明者陳積正 申請(qǐng)人:陳積正