專利名稱：通過使用非綴合抗體和綴合的抗體、抗體組合及融合蛋白的b細(xì)胞惡性瘤和自身免疫病的 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療B細(xì)胞相關(guān)的惡性瘤、尤其是漸進性非霍奇金氏淋巴瘤的免疫治療方法。具體地，本發(fā)明涉及用于治療和診斷哺乳動物B細(xì)胞相關(guān)病、T細(xì)胞相關(guān)病或自身免疫病的方法，所述方法是通過向所述哺乳動物給藥治療組合物實現(xiàn)的，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體的預(yù)先投藥。
背景技術(shù)：
B細(xì)胞淋巴瘤表達這樣的表面抗原，它們業(yè)已證明是用單克隆抗體(Mab)治療的良好靶標(biāo)。無論是單獨使用(裸抗體)或與化療聯(lián)合，抗體都可與毒素或與放射性核素綴合用于放射性免疫治療(RAIT)。放射性標(biāo)記的抗體在非標(biāo)記抗體之后(Kaminski，M.S.等，J Clin.Oncol.193918-3928，2001)或與之一起(Press，O.W.等，New Engl.J.Med.3291219-24，1993)給藥以改善劑量分布。多數(shù)研究者使用與非標(biāo)記的鼠源或嵌合抗體相組合的放射性標(biāo)記的小鼠抗體。從毒理學(xué)角度的觀點看，認(rèn)為放射性標(biāo)記小鼠抗體是有利的，這是因為與嵌合抗體相比其半衰期更短。具有更長半衰期的Mab提供放射性免疫綴合物在血液和骨髓中更長的滯留時間，并且可能因此誘發(fā)更大的毒性。由于抗體本身幾乎不誘發(fā)毒性，小鼠和嵌合標(biāo)記抗體都被用來通過據(jù)稱是飽和機體內(nèi)正常細(xì)胞和組織上的抗原而改善劑量分布(參見Kaminski，美國專利No.5,595,721；Wiseman等，Crit.Rev.Oncol.Hemato.39181-194，2001)。
單克隆抗體在癌癥靶向放射性治療(放射性免疫治療；RAIT)中的用途已在血液病如非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)中產(chǎn)生了令人矚目的臨床效應(yīng)。目前正研究新策略，以致力于最小化循環(huán)放射性核素的系統(tǒng)毒性以及輻照對腫瘤的致敏。前者是通過預(yù)靶向進行的，而后者是通過與放射性致敏藥的聯(lián)合治療進行的。見Govindan，S.V等，Current Trends，Pharmaceutical Science and Technology Today390-98，2000。
RAIT的抗腫瘤活性主要地是由于與抗體相連的放射性標(biāo)記的相關(guān)放射能，其發(fā)射持續(xù)呈指數(shù)規(guī)律漸減的低劑量等級的射線，表現(xiàn)出異質(zhì)的劑量沉積。有四種放射性標(biāo)記的抗體產(chǎn)品正朝商業(yè)化發(fā)展，以用于非霍奇金氏淋巴瘤的放射性免疫治療。它們包括131I-tositumomab(BexxarTM)、90Y-ibritumomab tiuxetan(ZevalinTM)、90Y-epratuzumab(hLL2)和131I-Lym-1。有關(guān)這些產(chǎn)品更詳細(xì)的綜述，見Goldenberg，D.M.，Critical Reviews in Oncology/Hematology39195-201，2001，和Goldenberg，D.M.，J.Nucl.Med.43693-713，2002。
Bexxar(Corixa Corp.，Seattle，WA)和Zevalin(IDEC-Y2B8；IDEC Pharmaceuticals，San Diego，CA)都是針對表達在正常和惡性B淋巴細(xì)胞表面上的CD20抗原的鼠源單克隆抗體(Mab)。Bexxar用作為IgG2a鼠源Mab，添有冷性鼠源抗體，而Zevalin的鼠源抗體被標(biāo)記，且產(chǎn)品中添加了人鼠嵌合的利妥希瑪(RituxanTM，IDEC-Genentech)。兩種產(chǎn)品都提供了治療前的冷性抗體投藥，以改善腫瘤靶向，這涉及輸注1小時450mg非標(biāo)記的Bexxar抗體，和輸注4-6小時450mg的利妥?，斶B同Zevalin。兩種產(chǎn)品都表現(xiàn)出比裸抗體更高和更持久的效應(yīng)，然而，它們也具有劑量限制的毒性，突出地是骨髓中毒性。Zevalin經(jīng)食品和藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)性低級別或轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞非霍奇金氏淋巴瘤。在這些放射性標(biāo)記抗-CD-20Mab之前必需投藥冷性抗體，以使得良好的腫瘤定位成為可能。事實上，當(dāng)牽涉到預(yù)先投藥時，特定腫瘤部位上111銦-Zevalin的特異性定位數(shù)從78％跌至15％腫瘤攝入(Wiseman等，同前)。
Epratuzumab(90Y-epratuzurnab)是針對抗-CD22抗原的人源化IgG1抗體。該抗原經(jīng)抗體結(jié)合后快速內(nèi)在化。業(yè)已報道裸抗體在濾泡以及彌漫性的大B細(xì)胞淋巴瘤中表現(xiàn)出功效(Leonard，J.P.等，Epratuzumab(hLL2，抗-CD22humanized monoclonal antibody)isan active and well-tolerated therapy for refractory/relapseddiffuse large B-cell non-Hodgkin′s lymphoma(NHL).Blood(Suppl)96578a[abstr.2482]，2000；Press，O.W.等，Immunotherapy of Non-Hodgkin′s Lymphomas.Hematology(Am.Soc.Hemato.Educ.Program)，p.221-40，2001)。預(yù)期Epratuzumab不會引起人抗-人抗體(HAHA)，這使得它適合于反復(fù)投藥。小鼠親代抗體mLL2由131I標(biāo)記，且已在多種亞型的B細(xì)胞淋巴瘤中表現(xiàn)出功效(Linden，O.等Clin.Cancer Res.53287s-3291s，1999)。內(nèi)在化后，131I標(biāo)記的抗體被脫鹵化，且放射性核素由細(xì)胞中釋放出來。放射性金屬如釔經(jīng)內(nèi)在化后保留在細(xì)胞內(nèi)(Sharkey，R.M.，等Cancer Immnunol.Immunother.44179-88，1997)。90Y較短的物理半衰期在某些程度上補償了epratuzumab較長的半衰期，并提供了其組合的合理性。
RAIT通常作為單次輸注給予。不過，分級途徑存在理論上的優(yōu)勢，因為分級將會更好地處理吸收劑量的異質(zhì)性問題，如在O′Donoghue，J.A.，Dosimetric Principles of TargetedRadiotherapy，in Radioimmunotlerapy of Cancer，A.R.Fritzberg(編)，Marcel Dekker，Inc.，p.1-20，New York，Basel，2000中所概述的那樣。也有實驗數(shù)據(jù)支持治療效應(yīng)可通過將放射性標(biāo)記抗體大的單次給藥分割成許多更小的給藥得以提高(Schlom，J.等J.Natl.Cancer Inst.82763-71，1990)。臨床上業(yè)已利用小鼠抗體研究了兩次輸注以及多次輸注的途徑(DeNardo，G.L.，等CancerBiother.Radiopharm.13239-54，1998；Vose，J.M.，等J Clin.Oncol.181316-23，2000)。
業(yè)已報道了有關(guān)CD22抗原表達的腫瘤內(nèi)可變性。在來自五個患者的新鮮腫瘤樣品中，發(fā)現(xiàn)52-89％的淋巴瘤細(xì)胞具有抗-CD22 MAbHD6的抗原(Press，O.W.等Cancer Res.494906-12，1989)。使用遠程β-輻射源的RAIT的一個所謂的優(yōu)勢在于其在靶細(xì)胞附近殺傷抗原陰性腫瘤細(xì)胞的能力。通過在治療前評估腫瘤細(xì)胞的抗原表達，人們能夠研究此概念在使用抗-CD2290Y-標(biāo)記的epratuzumab的RAIT設(shè)置下的臨床相關(guān)性。
采取研究以驗證劑量分級的理論優(yōu)勢以及所發(fā)表的支持它的實驗數(shù)據(jù)。所述研究旨在利用放射性標(biāo)記的人源化抗體調(diào)查分級RAIT的可行性。發(fā)現(xiàn)在為放射劑量測定之目的用100mg人源化CD22Mab，即由111In標(biāo)記的epratuzumab預(yù)先投藥之后，隨后長達2-3周每周一次高達7.5mCi/m2劑量的90Y標(biāo)記的epratuzumab的分級劑量，產(chǎn)生了可耐受且有效的放射性免疫治療(Linden等，Cancer BiotherRadiopharm 2002；17490[abstract 47]。盡管這些臨床研究提示放射性免疫綴合物的分級療法是可行的，尚未與給藥的單次高劑量放射性免疫綴合物就安全性和有效性進行過比較。由于用111In的首次“放射劑量測定”劑量含有100mg抗體，且每次相繼注射也含有此裸抗體劑量，也不可能確定總計至少300mg epratuzumab的這些劑量是否如引述的涉及CD20抗體的其它研究中所提示的那樣，也作預(yù)先投藥功效之用。因此，由這些研究不可判斷此類放射性免疫治療是否必需任何預(yù)先投藥，特別是用CD22抗體的放射性免疫治療。
我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明中并不象現(xiàn)有技術(shù)中所實施的那樣，使用預(yù)先投藥以飽和正常組織和脾中的抗原性位點，這與其它發(fā)表的研究和Kaminski的美國專利No.5,595,721相反。無疑，此處公開的本發(fā)明證明無需象現(xiàn)有技術(shù)中所實施的那樣高抗體預(yù)先投藥。
發(fā)明概述因此，本發(fā)明的目的是提供用于治療哺乳動物疾病的方法，所述方法是通過給藥治療組合物實現(xiàn)的，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體、片斷或融合蛋白的預(yù)先投藥。
本發(fā)明的目的也是不僅使上述方法給藥簡單易行，而且使藥物組合物本身保持治療活性并具有相似的效應(yīng)等級，而不會令較高劑量的裸抗體影響腫瘤。
本發(fā)明的目的還是提供在治療攻擊形式的非霍奇金氏淋巴瘤中表現(xiàn)出更為有效的效應(yīng)的方法，這不同于現(xiàn)有技術(shù)所證明的僅在不活躍形式的淋巴瘤中表現(xiàn)出功效的方法。
根據(jù)本發(fā)明的實施方案，這些及其它目的是通過提供用于治療哺乳動物疾病的這樣的方法實現(xiàn)的，所述方法包括同時或相繼地向所述哺乳動物給藥這樣的治療組合物，所述治療組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和至少一種綴合的抗體或其片斷，或者綴合的抗體融合蛋白或其片斷，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體、片斷或融合蛋白的預(yù)先投藥。任選地與所述綴合的抗體、片斷或融合蛋白一起添加非綴合的抗體、片斷或融合蛋白，作為維持治療以防腫瘤細(xì)胞靶逃逸。
在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及用于治療疾病如B細(xì)胞相關(guān)的惡性瘤的方法。另外，它也可用于治療自身免疫病，以及T細(xì)胞相關(guān)的惡性瘤。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明綴合和非綴合的抗體、片斷和融合蛋白可靶向于選自下組的抗原CD3、CD4、CD5、CD8、CD11c、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、Ia、HMI.24、HLA-DR、腱生蛋白、MUC1以及B細(xì)胞腫瘤相關(guān)抗原，包括血管內(nèi)皮抗原，如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和胎盤生長因子(P1GF)。在相關(guān)的支脈中，本發(fā)明綴合和/或非綴合的抗體、片斷或融合蛋白可以是相同或不同的。另外，這些抗體可以是人源、鼠源、嵌合、類人靈長化或人源化的。此外，這些抗體、片斷或融合蛋白可選自下組完整IgG、F(ab′)2、F(ab)2、Fab′、Fab、scFvs、雙鏈抗體、三鏈抗體或四鏈抗體，并且可綴合于至少一種治療劑。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了如上文所述的方法，其中用一種或多種這樣的抗體治療哺乳動物受試者例如人和家畜或?qū)櫸?，所述抗體綴合于選自下組的一種或多種治療劑藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光敏劑和放射性核素。
又在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述治療組合物包括所述抗體或抗體與免疫調(diào)節(jié)劑組合的融合蛋白。所述融合抗體可包括針對不同抗原的抗體，以及針對同一抗原不同表位的抗體。
本發(fā)明如此設(shè)想上述方法，其中綴合和非綴合的抗體是抗-CD22單克隆抗體，它以每劑20-600毫克蛋白的劑量腸胃外給藥，更優(yōu)選每劑20-150毫克蛋白，并且最優(yōu)選每劑20-100毫克蛋白。另外，所述哺乳動物可按受作為優(yōu)選每劑20-150毫克蛋白的重復(fù)腸胃外劑量的所述抗-CD22抗體，并且更優(yōu)選每劑20-100毫克蛋白。重要的是意識到這樣的劑量是作為實際治療劑量給予的，無論是用于改善靶向或是用于劑量測定之目的，都無需如以前Juweid等，Clin.Cancer Res.53292s-3303s，1999(其中50mg與111In或另一診斷同位素綴合的CD22 Mab的預(yù)先投藥是必需的)所實施的那樣需要任何預(yù)先投藥。這類研究中尚未進行過嘗試來評估沒有預(yù)先投藥的方案下，所述具有不同蛋白劑量抗體的治療性放射免疫綴合物直接見效的能力。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，用于治療哺乳動物疾病的方法包括向所述哺乳動物給藥這樣的治療組合物，其包括藥學(xué)上可接受的載體和與至少一種靶抗原和治療劑相結(jié)合的多特異性多價抗體、片斷或融合蛋白綴合物，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體的預(yù)先投藥。
又在另一個優(yōu)選的實施方案中，用于治療哺乳動物疾病的方法包括(a)向所述哺乳動物給藥這樣的治療組合物，其包括與至少一種靶抗原相結(jié)合的多特異性多價抗體、片斷或融合蛋白；(b)任選地包括清除劑，以允許所述組合物清除來自循環(huán)的非局限抗體；和(c)向所述哺乳動物給藥藥學(xué)有效量的與所述多特異性多價抗體、片斷或融合蛋白結(jié)合的治療綴合物，且其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體的預(yù)先投藥。
本發(fā)明的其它目的、特點和優(yōu)勢將會因下列詳述的說明和所附的權(quán)利要求而變得顯而易見。
優(yōu)選實施方案的詳細(xì)說明除非另行指定，“一”或“一種”意味著“一種或多種”。
1.定義在以下的說明中，使用了許多術(shù)語，并提供以下定義以促進對本發(fā)明的理解。
非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)是指涉及淋巴結(jié)、脾、其它器官并且通常是骨髓的淋巴瘤病家族。有至少30種不同類型的NHL。兩種常見類型為濾泡性(輕度或不活躍)和攻擊性彌漫性大細(xì)胞(中度或高度)淋巴瘤。
如本文所述，抗體是指全長(即天然存在或通過正常的免疫球蛋白基因片斷重組過程形成的)免疫球蛋白分子(如IgG抗體)或免疫球蛋白分子的免疫學(xué)活性(即特異性結(jié)合)部分，象抗體片斷。
抗體片段是抗體的一部分，如F(ab′)2、F(ab)2、Fab′、Fab、Fv、sFv等。無論結(jié)構(gòu)如何，抗體片斷與被完整抗體所識別的同一抗原相結(jié)合。例如，抗-CD22單克隆抗體片斷與CD22表位相結(jié)合。術(shù)語”抗體片斷”也包括任何合成或遺傳改造的蛋白，它們通過結(jié)合特異性抗原形成復(fù)合物而象抗體那樣起作用。例如，抗體片斷包括分離的由可變區(qū)組成的片斷，如由重鏈和輕鏈可變區(qū)組成的″Fv″片斷，其中輕鏈和重鏈可變區(qū)通過肽接頭相連的重組單鏈多肽分子(“scFv蛋白”)，以及由模擬高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識別單元。
裸或冷性抗體一般是未與治療劑綴合(非綴合)的整個抗體。之所以這樣，是因為抗體分子的Fc部分提供了效應(yīng)器功能，如補體固定和ADCC(抗體依賴性細(xì)胞細(xì)胞毒)，該功能使得可能導(dǎo)致細(xì)胞裂解的機制運轉(zhuǎn)起來。不過，有可能Fc部分并非是治療功能所必需的，而其它機制如細(xì)胞凋亡開始運行。裸抗體也是非放射性標(biāo)記的抗體，其包括多克隆和單克隆抗體，以及某些重組抗體，如靈長化類人、嵌合、人源化或人抗體。
嵌合抗體是這樣的重組蛋白，其含有包括互補決定區(qū)(CDRs)在內(nèi)的源于一個物種抗體(優(yōu)選為嚙齒動物抗體)的可變結(jié)構(gòu)域，而該抗體分子的恒定結(jié)構(gòu)域源于人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域。對于獸醫(yī)應(yīng)用，嵌合抗體的恒定結(jié)構(gòu)域可源于其它物種的恒定結(jié)構(gòu)域，如貓或狗。
人源化抗體是這樣的重組蛋白，其中將來白于一個物種抗體如嚙齒動物抗體的CDRs從嚙齒動物抗體的重鏈和輕鏈可變鏈上轉(zhuǎn)移到人重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域之中。該抗體分子的恒定結(jié)構(gòu)域源于人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域。
人抗體是由轉(zhuǎn)基因小鼠獲得的抗體，該小鼠業(yè)已被”改造”以響應(yīng)抗原刺激生產(chǎn)特異性人抗體。在這種技術(shù)中，將人重鏈和輕鏈基因座的元件引入到衍生自這樣的胚胎干細(xì)胞系的小鼠株系中，其含有內(nèi)源重鏈和輕鏈基因座的靶向破壞。該轉(zhuǎn)基因小鼠能夠合成特異于人抗原的人抗體，并且該小鼠可用于生產(chǎn)分泌人抗體的雜交瘤。用于獲得來自轉(zhuǎn)基因小鼠的人抗體的方法由Green等，Nature Genet.713(1994)、Lonberg等，Nature 368856(1994)以及Taylor等，Int.Immun.6579(1994)描述。也可通過基因或染色體轉(zhuǎn)染法、以及噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建全人抗體，所有這些方法都是本領(lǐng)域公知的。例如參見McCafferty等，Nature 348552-553(1990)關(guān)于由來自未免疫供體的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域基因庫在體外生產(chǎn)人抗體及其片斷。在這種技術(shù)中，將抗體可變結(jié)構(gòu)域基因框內(nèi)克隆到絲狀噬菌體的主要或次要外殼蛋白基因中，并作為功能性抗體片斷展示在噬菌體顆粒的表面。由于該絲狀顆粒含有所述噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，基于所述抗體功能性質(zhì)的選擇也導(dǎo)致編碼表現(xiàn)出那些性質(zhì)的抗體的基因的選擇。以這種方式，所述噬菌體模擬B細(xì)胞的一些性質(zhì)。噬菌體展示能夠以多種形式進行，有關(guān)綜述，參見如Johnson和Chiswell，Current Opinifozlin Structural Biology35564-571(1993)。
人抗體也可由在體外激活的B細(xì)胞產(chǎn)生。見美國專利No.5,567,610和5,229,275，特此將其全文并入作為參考。
治療劑是與抗體成分分別、同時或相繼地給藥、或綴合于抗體成分(即抗體或抗體片斷、或亞片斷)的分子或原子，并且可用于疾病的治療。治療劑的實例包括抗體、抗體片斷、藥物、毒素、核酸酶、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光敏劑或染料以及放射性同位素。
免疫調(diào)節(jié)劑是如在本發(fā)明中所定義的治療劑，當(dāng)其存在時，其改變、抑制或刺激機體的免疫系統(tǒng)。典型地，可用于本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑刺激免疫細(xì)胞增殖或在免疫應(yīng)答級聯(lián)中變得激活，例如巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞和/或T細(xì)胞。
免疫綴合物是抗體組分與治療劑或診斷劑的綴合物。所述診斷劑可包括放射性或非放射性標(biāo)記、造影劑(例如用于磁共振成象、計算斷層分析或超聲)，且所述放射性標(biāo)記可以是發(fā)射γ、β、α、俄歇電子或正電子的同位素。
表達載體是包含在宿主細(xì)胞中表達的基因的DNA分子。典型地，基因表達處于某些調(diào)控元件的控制之下，包括組成型或誘導(dǎo)型啟動子、組織特異性調(diào)控元件和增強子。此種基因被表述為是“可操作地連接于”所述調(diào)控元件。
重組宿主可以是含有克隆載體或表達載體的任何原核或真核細(xì)胞。該術(shù)語也包括這樣的原核或真核細(xì)胞以及轉(zhuǎn)基因動物，它們業(yè)已被遺傳改造，從而在所述宿主細(xì)胞的染色體或基因組中或者宿主細(xì)胞的細(xì)胞中含有所克隆的基因。合適的哺乳動物宿主細(xì)胞包括骨髓瘤細(xì)胞，如SP2/0細(xì)胞和NSO細(xì)胞，以及中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞系以及可用于表達抗體的其它哺乳動物宿主細(xì)胞。同樣尤其可用于表達mAb及其它融合蛋白的是在WO 0063403 A2中公開的人細(xì)胞系PER.C6，與常規(guī)的哺乳動物細(xì)胞系如CHO、COS、Vero、Hela、BHK和SP2細(xì)胞系相比，其生產(chǎn)2到200倍更多的重組蛋白。具有修飾的免疫系統(tǒng)的特定轉(zhuǎn)基因動物尤其可用于制備全人抗體。
如本文所用，術(shù)語抗體融合蛋白是重組生產(chǎn)的抗原結(jié)合分子，其中兩個或多個相同或不同的單鏈抗體或者具有相同或不同特異性的抗體片斷區(qū)段被連接在一起。融合蛋白的結(jié)合價預(yù)示著該融合蛋白對單鏈抗原或表位具有多少結(jié)合臂或位點，即單價、二價、三價或多價。抗體融合蛋白的多結(jié)合價意味著它能夠在與抗原的結(jié)合中利用多重相互作用，從而增強對抗原結(jié)合的親抗原性。特異性預(yù)示著抗體融合蛋白能夠結(jié)合多少抗原或表位；即單特異性、雙特異性、三特異性、多特異性。運用這些定義，天然抗體如IgG是雙價的，因為它有兩個結(jié)合臂，但它是單特異性的，因為它結(jié)合一個表位。單特異性多價融合蛋白對表位具有不止一個結(jié)合位點，但僅與一個表位結(jié)合，例如具有與同一抗原反應(yīng)的兩個結(jié)合位點的雙鏈抗體。所述融合蛋白可包括單個抗體組分，不同抗體組分的多價或多特異性組合，或者同一抗體組分的多個拷貝。所述融合蛋白可額外包括抗體或抗體片斷和治療劑。適用于此類融合蛋白的治療劑的實例包括免疫調(diào)節(jié)劑(“抗體-免疫調(diào)節(jié)劑融合蛋白”)和毒素(“抗體-毒素融合蛋白“)。一種優(yōu)選的毒素包括核糖核酸酶(RNase)，優(yōu)選為重組RNase。
多特異性抗體是能夠同時與具有不同結(jié)構(gòu)的至少兩個靶標(biāo)結(jié)合的抗體，如結(jié)合兩個不同抗原、同一抗原上的兩個不同表位、或者半抗原和/或抗原或表位。一種特異性將是針對B細(xì)胞、T細(xì)胞、髓細(xì)胞、血漿細(xì)胞和肥大細(xì)胞抗原或表位的。另一種特異性可以是針對同一細(xì)胞類型上的不同抗原的，如CD3、CD4、CD5、CD8、CDllc、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD 33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、Ia、HMI.24、HLA-DR、腱生蛋白、MUC1以及B細(xì)胞腫瘤相關(guān)抗原，包括血管內(nèi)皮抗原，如VEGF和P1GF。多特異性多價抗體是具有不止一個結(jié)合位點的構(gòu)建體，且所述結(jié)合位點具有不同的特異性。例如雙鏈抗體，其中一個結(jié)合位點與一種抗原反應(yīng)，而另一個則與另一種抗原反應(yīng)。
雙特異性抗體是能夠同時與具有不同結(jié)構(gòu)的兩個靶標(biāo)結(jié)合的抗體。雙特異性抗體(bsAb)和雙特異性抗體片斷(bsFab)具有至少一個與例如B細(xì)胞、T細(xì)胞、髓細(xì)胞、血漿細(xì)胞和肥大細(xì)胞抗原或表位特異性結(jié)合的臂，以及至少一個與帶有治療劑或診斷劑的可靶向綴合物特異性結(jié)合的其它臂。許多雙特異性融合蛋白可利用分子改造生產(chǎn)。在一種形式中，雙特異性融合蛋白是單價的，例如，由具有針對一種抗原的單個結(jié)合位點的scFv和具有針對第二抗原的單個結(jié)合位點的Fab片斷組成。在另一種形式中，雙特異性融合蛋白是二價的，例如，由具有針對一種抗原的結(jié)合位點的IgG和具有針對第二抗原的兩個結(jié)合位點的兩個scFv組成。
犬源化或貓源化抗體是這樣的重組蛋白，其中業(yè)已將嚙齒動物(或另一物種)單克隆抗體的互補決定區(qū)從嚙齒動物(或另一物種)免疫球蛋白的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域分別轉(zhuǎn)移到狗或貓免疫球蛋白的可變結(jié)構(gòu)域中。
類人靈長化抗體是這樣的重組蛋白，其中業(yè)已將類人靈長動物(如猴子)單克隆抗體的互補決定區(qū)從嚙齒動物(或另一物種)免疫球蛋白的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)移到類人靈長動物免疫球蛋白的可變結(jié)構(gòu)域中。
家畜動物包括大動物如馬、牛、綿羊、山羊、美洲駝、羊駝和豬，以及寵物。在優(yōu)選的實施方案中，家畜動物為馬。
寵物包括作為寵物飼養(yǎng)的動物。這些主要地是狗和貓，盡管小嚙齒動物如豚鼠、倉鼠、大鼠和雪貂也包括在內(nèi)，正象類人靈長動物如猴子那樣。在優(yōu)選的實施方案中，寵物是狗或貓。
術(shù)語“清除劑“是指結(jié)合靶向成分的結(jié)合位點的抗體，其中所述靶向成分可以是抗體、抗原結(jié)合抗體片斷或非抗體靶向成分。在更為優(yōu)選的方法中，清除劑是單克隆抗體，為第一步中所用綴合物的單克隆抗體的抗獨特型，如美國申請流水號No.08/486,166中所述的那樣。在另一個優(yōu)選的實施方案中，清除劑被多個糖殘基如半乳糖取代，這允許所述清除劑能夠通過肝中的脫唾液酸糖蛋白受體很快地從循環(huán)中清除。
2.包括嵌合、人源化和人抗體在內(nèi)的單克隆抗體的制備單克隆抗體(MAbs)是針對特定抗原的同種抗體群，且所述抗體僅包括一種類型的抗原結(jié)合位點，并僅與抗原決定簇上的一個表位結(jié)合。
針對特定抗原的嚙齒動物單克隆抗體可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法獲得。例如，參見Kohler和Milstein，Nature 256495(1975)，以及Coligan等(編)，CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY，VOL.1，第2.5.1-2.6.7頁(John Wiley & Sons 1991)[以下稱作″Coligan″]。簡要地，單克隆抗體可這樣獲得，即用包括抗原的組合物注射小鼠，通過移取血清樣品驗證抗體生產(chǎn)的存在，取出脾臟以獲得B淋巴細(xì)胞，使所述B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤，克隆所述雜交瘤，選擇產(chǎn)生針對所述抗原的抗體的陽性克隆，培養(yǎng)產(chǎn)生針對所述抗原的抗體的所述克隆，并從所述雜交瘤培養(yǎng)物中分離所述抗體。
MAbs可通過許多充分建立的技術(shù)從雜交瘤培養(yǎng)物中分離和純化。此類分離技術(shù)包括蛋白A瓊脂糖親和層析，大小排阻層析，以及離子交換層析。例如，參見Coligan第2.7.1-2.7.12頁及第2.9.1-2.9.3.頁。也參見Baines等，″Purification ofImmunoglobulin G(IgG)，″in METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，VOL.10，pages 79-104(The Humana Press，Inc.1992)。
在初次引起針對免疫原的抗體后，可對抗體進行測序并隨后通過重組技術(shù)制備。鼠源抗體和抗體片斷的人源化和嵌合是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。例如，人源化單克隆抗體是這樣產(chǎn)生的，即將小鼠互補決定區(qū)從小鼠免疫球蛋白重鏈和輕鏈可變鏈上轉(zhuǎn)移到人可變結(jié)構(gòu)域中，然后取代鼠源對應(yīng)物框架區(qū)中的人殘基。使用衍生自人源化單克隆抗體的抗體組分避免了與鼠源恒定區(qū)免疫原性相關(guān)的潛在問題。
例如，用于克隆鼠源免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的一般技術(shù)由Orlandi等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 863833(1989)的出版予以描述，特此將其全文并入作為參考。用于構(gòu)建嵌合抗體的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。作為舉例，Leung等，Hybridoma13469(1994)描述了他們是如何通過將編碼抗-CD22抗體LL2單克隆抗體Vκ和VH結(jié)構(gòu)域的DNA序列與相應(yīng)的人κ和IgG1恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域組合生產(chǎn)LL2嵌合體的。該出版物也分別提供了LL2輕鏈和重鏈可變區(qū)Vκ和VH的核苷酸序列。例如，用于生產(chǎn)人源化MAbs的技術(shù)由Jones等，Nature 321522(1986)，Riechmann等，Nature 332323(1988)，Verhoeyen等，Science 2391534(1988)，Carter等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 894285(1992)，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12437(1992)以及Singer等，J.Immun.1502844(1993)描述，特此將其中每一篇都并入作為參考。
嵌合抗體是這樣的重組蛋白，其含有包括源于一個物種動物如嚙齒動物抗體CDRs在內(nèi)的可變結(jié)構(gòu)域，而該抗體分子的其余部分即恒定結(jié)構(gòu)域源于人抗體。因此，嵌合單克隆抗體也可以通過用一個或多個不同的人FR替換嵌合mAb可變結(jié)構(gòu)域中鼠源FR序列而人源化。具體地，將小鼠CDRs從小鼠免疫球蛋白重鏈和輕鏈可變鏈轉(zhuǎn)移到人抗體相應(yīng)的可變結(jié)構(gòu)域之中。由于簡單地將小鼠CDRs轉(zhuǎn)移到人FRs中通常導(dǎo)致抗體親和力的下降或者甚至喪失，可能需要附加的修飾以恢復(fù)鼠源抗體的原始親和力。這可通過用其鼠源對應(yīng)物替換FR區(qū)中的一個或多個某些人殘基實現(xiàn)，以獲得對其表位持有良好結(jié)合親和力的抗體。例如，參見Tempest等，Biotechnology 9266(1991)和Verhoeyen等，Science 2391534(1988)。此外，可通過CDRs的誘變提高人源化、嵌合及人MAbs對特定表位的親和力，從而更低劑量的抗體可能象誘變前更高劑量的較低親和力MAb一樣有效。例如參見WO0029584A1。
用于生產(chǎn)本發(fā)明抗體的另一種方法是通過在轉(zhuǎn)基因家畜的乳汁中生產(chǎn)。參見如Colman，A.，Biochem.Soc.Symp.，63141-147，1998；美國專利5,827,690，特此將兩篇都全文并入作為參考。制備兩個DNA構(gòu)建體，它們分別含有編碼成對免疫球蛋白重鏈和輕鏈的DNA區(qū)段。將DNA區(qū)段克隆到含優(yōu)選在哺乳動物上皮細(xì)胞中表達的啟動子序列的表達載體中。實例包括但不限于來自兔、奶牛和綿羊酪蛋白基因、奶牛α-乳球蛋白基因、綿羊β-乳球蛋白基因以及小鼠乳清酸性蛋白基因的啟動子。優(yōu)選地，插入片斷在其3′側(cè)側(cè)接來自乳腺特異性基因的同源基因組序列。這提供了多聚腺苷?；稽c和轉(zhuǎn)錄本穩(wěn)定序列。將所述表達盒共注射到受精的哺乳動物卵的前核中，然后將其植入到受體雌獸的子宮之中，并使之受孕。生產(chǎn)后，通過Southern分析篩選子代中兩種轉(zhuǎn)基因的存在。為使抗體存在，重鏈和輕鏈基因都必需在同一細(xì)胞中同時表達。利用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)免疫學(xué)方法分析來自轉(zhuǎn)基因雌獸的乳汁中抗體或抗體片斷的存在及功能。抗體可利用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法從乳汁中純化。
本發(fā)明的全人抗體，即人抗-CD20 MAbs或者其它用于與人源化、嵌合或人抗-CD20抗體聯(lián)合治療的人抗體如抗-CD19、抗-CD22、抗-CD21或抗-CD23 MAbs可由轉(zhuǎn)基因非人動物獲得。參見如Mendez等，Nature Genetics 15146-156(1997)；美國專利No.5,633,425,特此將這兩篇都全文并入作為參考。例如，可從持有人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因小鼠中回收人抗體。所述小鼠的體液免疫系統(tǒng)是通過失活內(nèi)源免疫球蛋白基因并引入人免疫球蛋白基因座而被人源化的。人免疫球蛋白基因座極為復(fù)雜，且包括大量不連續(xù)的區(qū)段，總計占據(jù)人基因組的幾乎0.2％。為確保該轉(zhuǎn)基因小鼠能夠生產(chǎn)足夠的抗體庫，必需將大部分人重鏈和輕鏈基因座引入到小鼠基因組中。這是以始于在種系構(gòu)型中含有人重鏈或輕鏈免疫球蛋白基因座的酵母人工染色體(YACs)的形成的逐步過程實現(xiàn)的。由于每一個插入物大小約為1Mb，YAC的構(gòu)建需要免疫球蛋白基因座重疊片斷的同源重組。介由含YAC的酵母球芽與小鼠胚胎干細(xì)胞的融合，將一個含重鏈基因座，而一個含輕鏈基因座的兩個YACs單獨地引入到小鼠中。然后將胚胎干細(xì)胞克隆微注射到小鼠胚泡中。篩選所得的嵌合雄獸通過其種系傳遞YAC的能力，并與鼠源抗體生產(chǎn)缺陷的小鼠進行育種。一種含有人重鏈基因座而另一種含有人輕鏈基因座的兩種轉(zhuǎn)基因株系的育種，創(chuàng)建了響應(yīng)免疫生產(chǎn)人抗體的子代。
此外，最近用于生產(chǎn)雙特異性mAbs的方法包括改造的具有額外的半胱氨酸殘基的重組mAbs，從而它們比更為常見的免疫球蛋白同種型更加強烈地交聯(lián)。參見如FitzGerald等，Protein Eng.10(10)1221-1225，1997。另一種途徑是改造連接了兩個或多個不同單鏈抗體或具有所選的雙重特異性抗體片斷區(qū)段的融合蛋白。參見如Coloma等，Nature Biotech.15159-163，1997。許多雙特異性融合蛋白可利用分子工程產(chǎn)生。在一種形式中，所述雙特異性融合蛋白是單價的，例如，由具有針對一種抗原的單個結(jié)合位點的scFv和具有針對第二抗原的單個結(jié)合位點的Fab片斷組成。在另一種形式中，所述雙特異性融合蛋白是二價的，例如，由具有針對一種抗原的結(jié)合兩個位點的IgG和具有針對第二抗原的兩個結(jié)合位點的兩個scFv組成。
連接了兩個或多個不同單鏈抗體或抗體片斷的雙特異性融合蛋白是以類似的方式生產(chǎn)的?？衫弥亟M法生產(chǎn)融合蛋白。例如，可生產(chǎn)包含源于人源化單克隆抗-CD20抗體的Fab片斷和源于鼠源抗-diDTPA的scFv的融合蛋白。柔性接頭如GGGS將所述scFv連接于抗-CD20抗體重鏈的恒定區(qū)上。備選地，所述scFv可連接于另一人源化抗體輕鏈的恒定區(qū)上。通過PCR反應(yīng)將對于重鏈Fd與所述scFv框內(nèi)連接所必需的合適的接頭序列引入到VL和VK結(jié)構(gòu)域中。然后將編碼所述scFv的DNA片斷連到含編碼CH1結(jié)構(gòu)域的DNA序列的階段載體中。切下所得的scFv-CH1構(gòu)建體，并連到含編碼抗-CD20抗體VH區(qū)的DNA序列的載體中。所得的載體可用于轉(zhuǎn)染合適的宿主細(xì)胞，如哺乳動物細(xì)胞用于表達所述雙特異性融合蛋白。
此類雙價和雙特異性抗體的實例見于2002年8月1日遞交的美國專利申請60/399,707、2002年3月1日遞交的60/360,229、2002年6月14日遞交的60/388,314以及2002年4月5日遞交的10/116,116，特此將它們?nèi)疾⑷胱鳛閰⒖肌?br> 3.抗體片斷的生產(chǎn)識別特定表位的抗體片斷可通過已知的技術(shù)產(chǎn)生。所述抗體片斷是抗體的抗原結(jié)合部分，如如F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv、sFv等。其它抗體片斷包括但不限于F(ab)′2片斷，其可通過胃蛋白酶消化抗體分子生產(chǎn)，以及Fab′片斷，其可通過還原F(ab)′2片斷的二硫橋產(chǎn)生。備選地，可構(gòu)建Fab′表達文庫(Huse等，1989，Science 2461274-1281)以允許快速且容易地鑒定具有期望特異性的單克隆Fab′片斷。本發(fā)明涵蓋抗體和抗體片斷。
單鏈Fv分子(scFv)包含VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域。所述VL和VH結(jié)構(gòu)域結(jié)合以形成靶結(jié)合位點。這兩個結(jié)構(gòu)域進一步通過肽接頭(L)共價連接。scFv分子或者被表示為VL-L-VH，如果VL結(jié)構(gòu)域是所述scFv分子的N-端部分的話，或者被表示為VH-L-VL，如果VH結(jié)構(gòu)域是所述scFv分子的N-端部分的話。用于制備scFv分子和設(shè)計合適的肽接頭的方法描述在美國專利No.4,704,692、美國專利No.4,946,778、R.Raag和M.Whitlow，″Single Chain Fvs.″FASEB 973-80(1995)以及R.E.Bird和B.W.Walker，Single ChainAntibody Variable Regions，TIBTECH 9132-137(1991)中。特此將這些參考文獻并入作為參考。
抗體片斷可通過全長抗體的蛋白水解或通過在大腸桿菌(E.coli)或另一宿主中表達編碼該片斷的DNA制備?？贵w片斷可通過常規(guī)方法通過全長抗體的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化獲得。例如，抗體片斷可通過用胃蛋白酶酶切抗體生產(chǎn)，以提供表示為F(ab′)2的5S片斷。該片斷可進一步使用硫醇還原劑切割，并且任選地使用因二硫鍵切割產(chǎn)生的巰基的封閉基團，以生產(chǎn)3.5S的Fab′單價片斷。備選地，利用木瓜蛋白酶酶切直接產(chǎn)生兩個單價Fab片斷和一Fc片斷。例如，這些方法由Goldenberg美國專利No.4,036,945和4,331,647及其中所含的參考文獻描述，特此將所述專利全文并入作為參考。同研，參見Nisonoff等，Arch Biochem.Biophys.89230(1960)；Porter，Biochem.J 73119(1959)，Edelman等，inMETHODS IN ENZYMOLOGY，Volume 1，p.422(Academic Press1967)以及Coligan第2.8.1-2.8.10頁和第2.10.-2.10.4頁。
另一種形式的抗體片斷是編碼單鏈互補決定區(qū)(CDR)的肽。CDR是抗體可變區(qū)中在結(jié)構(gòu)上與抗體與之結(jié)合的表位互補的區(qū)段，并且比可變區(qū)的其余部分更為可變。因此，CDR有時被稱之為高變區(qū)。一個可變區(qū)包含三個CDRs。CDR肽可通過構(gòu)建編碼目的抗體CDR的基因獲得。例如，此類基因通過利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由抗體生產(chǎn)細(xì)胞的RNA合成可變區(qū)來制備。例如，參見Larrick等，MethodsACompanion to Methods in Enzymology 2106(1991)；Courtenay-Luck，″Genetic Manipulation of MonoclonalAntibodies，″in MONOCLONAL ANTIBODIESPRODUCTION，ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION，Ritter等(編)，第166-179頁(Cambridge University Press 1995)以及Ward等，″Genetic Manipulation and Expression of Antibodies，″inMONOCLONAL ANTIBODIESPRINCIPLES AND APPLICATIONS，Birch等(編)，第137-185頁(Wiley-Liss，Inc.1995)。
也可以使用其它切割抗體的方法，例如分離重鏈以形成單價輕鏈-重鏈片斷，進一步切割片斷，或者其它酶促、化學(xué)或基因技術(shù)，只要所述片斷結(jié)合被完整抗體所識別的抗原即可。
4.多特異性和多價抗體本文所述的具有相同特異性的抗體以及用于聯(lián)合治療的具有不同特異性的其它那些抗體，也可制備為多特異性抗體(包括至少一個針對CD20表位或抗原的結(jié)合位點和至少一個針對CD20上另一表位或另一抗原的結(jié)合位點)和多價抗體(包括多個針對同一表位或抗原的結(jié)合位點)。
本發(fā)明提供了雙特異性抗體或抗體片斷，其具有至少一個特異性結(jié)合靶向的細(xì)胞標(biāo)志的結(jié)合區(qū)，和至少另一個特異性結(jié)合可靶向綴合物的結(jié)合區(qū)?？砂邢蚓Y合物包括載體部分，其包含或帶有至少一個被所述雙特異性抗體或抗體片斷的至少一個結(jié)合區(qū)所識別的表位。
許多重組方法可用于生產(chǎn)如上文所述的雙特異性抗體和抗體片斷。
本發(fā)明也設(shè)想多價抗體。該多價靶結(jié)合蛋白是通過第一和第二多肽的結(jié)合構(gòu)建的。所述第一多肽包括第一單鏈Fv分子，共價連接于第一免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，其優(yōu)選是免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域。所述第二多肽包括包括第二單鏈Fv分子，共價連接于第二免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，其優(yōu)選是免疫球蛋白重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域。每一個所述第一和第二單鏈Fv分子都形成了靶結(jié)合位點，且所述第一和第二免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合起來以形成第三靶結(jié)合位點。
具有VL-L-VH構(gòu)型(其中L為接頭)的單鏈Fv分子可與具有VH-L-VL構(gòu)型的另一單鏈Fv分子結(jié)合以形成二價二聚體。在這種情況下，第一Fv分子的VL結(jié)構(gòu)域和第二Fv分子的VH結(jié)構(gòu)域結(jié)合以形成一個靶結(jié)合位點，而第一Fv分子的VH結(jié)構(gòu)域和第二Fv分子的VL結(jié)構(gòu)域結(jié)合以形成另一個靶結(jié)合位點。
本發(fā)明的另一個實施方案是雙特異性三價靶向蛋白，其包括非共價結(jié)合的兩個異源多肽鏈以形成三個結(jié)合位點，其中兩個對一個靶標(biāo)具有親和力，而第三個對半抗原具有親和力，所述半抗原可制備并連接于載體上用作為診斷和/或治療劑。優(yōu)選地，所述結(jié)合蛋白具有兩個相似的抗原結(jié)合位點和一個不同的抗原結(jié)合位點。所述雙特異性三價靶向劑具有兩個不同的scFvs，一個scFv含有來自一個抗體的兩個VH結(jié)構(gòu)域，通過短接頭連接于另一抗體的VL結(jié)構(gòu)域，而第二個scFv含有來自第一抗體的兩個VL結(jié)構(gòu)域，通過短接頭連接于另一抗體的VH結(jié)構(gòu)域。用于產(chǎn)生來自VH和VL結(jié)構(gòu)域的多價多特異性試劑的方法條件是由宿主生物體中的DNA質(zhì)粒合成的個體鏈完全是由VH結(jié)構(gòu)域(VH鏈)或完全是由VL結(jié)構(gòu)域(VL鏈)以這種方式構(gòu)成的，從而可通過一個VH鏈與一個VL鏈的非共價結(jié)合生產(chǎn)任何多價和多特異性的試劑。例如，為形成三價三特異性試劑，所述VH鏈將包括三個VH結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，每一個都來自具有不同特異性的抗體，通過具有可變長度的肽接頭接合起來，而VL鏈將包括互補的VL結(jié)構(gòu)域，通過類似于VH鏈所用的肽接頭接合起來。由于抗體的VH和VL結(jié)構(gòu)域以反平行方式結(jié)合，本發(fā)明優(yōu)選的方法以VH鏈的VH結(jié)構(gòu)域相反的次序安置VL鏈的VL結(jié)構(gòu)域。
5.雙鏈抗體、三鏈抗體和四鏈抗體本發(fā)明的抗體也可用于制備功能性雙特異性單鏈抗體(bscAb)，也稱之為雙鏈抗體，并且可利用重組方法在哺乳動物細(xì)胞中生產(chǎn)。參見如Mack等，Proc.Natl.Acad.Sci.，927021-7025，1995，特此并入。例如，bscAb是利用重組方法介由甘氨酸-絲氨酸接頭接合兩個單鏈Fv片斷生產(chǎn)的。兩目的抗體的V輕鏈(VL)和V重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域是利用標(biāo)準(zhǔn)PCR方法分離的。然后將由各雜交瘤獲得的VL和VHcDNA接合起來以在兩步融合PCR中形成單鏈片斷。第一PCR步驟引入(Gly4-Ser1)3接頭，而第二步驟將VL和VH擴增子接合起來。然后將各單鏈分子克隆到細(xì)菌表達載體中。繼擴增后，切下單鏈分子中的一個，并亞克隆到含第二單鏈目的分子的另一載體中。將所得的bscAb片斷亞克隆到真核表達載體中。功能性蛋白的表達可通過將載體轉(zhuǎn)染到中國倉鼠卵巢細(xì)胞中獲得。以類似的方式制備雙特異性融合蛋白。雙特異性單鏈抗體和雙特異性融合蛋白包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
例如，人源化、嵌合或人抗-CD22單克隆抗體可用于生產(chǎn)抗原特異性雙鏈抗體、三鏈抗體和四鏈抗體。單特異性雙鏈抗體、三鏈抗體和四鏈抗體選擇性地結(jié)合靶向的抗原，并且隨著分子上結(jié)合位點數(shù)目的增加，對靶細(xì)胞的親和力增大，并在期望位置上觀察到更長的滯留時間。對于雙鏈抗體，利用了包括通過五氨基酸殘基接頭連接于人源化CD22Mab的Vκ多肽的人源化CD22MAb的VH多肽的兩條鏈。每條鏈形成人源化CD22雙鏈抗體的一半。在三鏈抗體的情況下，利用了包括不通過接頭連接于人源化CD22Mab的Vκ多肽的人源化CD22MAb的VH多肽的三條鏈。每條鏈形成hCD22三鏈抗體的三分之一。
本文所述雙特異性雙鏈抗體優(yōu)選的用途是用于預(yù)靶向CD22陽性腫瘤，用于隨后特異性遞送診斷或治療劑。這些雙鏈抗體選擇性地結(jié)合靶向的抗原，允許增大的親和力和期望位置上更長的滯留時間。而且，非抗原結(jié)合的雙鏈抗體被很快地從機體中清除，并且正常組織的暴露被最小化。所述診斷和治療劑可包括同位素、藥物、毒素、細(xì)胞因子、激素、生長因子、綴合物、放射性核素和金屬。例如，釓金屬被用于磁共振成像(MRI)。放射性核素的實例有225AC、18F、68Ga、67Ga、90Y、86Y、111In、131I、125I、123I、99mTc、94mTc、186Re、188Re、177Lu、62Cu、64Cu、67Cu、212Bi、213Bi、32p、11C、13N、15O、76Br和211At。其它放射性核素作為診斷和治療劑也是可獲得的，特別是處于60到4,000keV能量區(qū)的那些。
更為最近地，也業(yè)已報道過具有雙重特異性的四價串連雙鏈抗體(稱作tandab)(Cochlovius等，Cancer Research(2000)604336-4341)。所述雙特異性tandab是兩個完全相同的多肽的二聚體，各自含有兩不同抗體的四個可變結(jié)構(gòu)域(VH1、VL1、VH2、VL2)，它們在自結(jié)合時以促進形成針對兩不同特異性中每一個的兩個潛在的結(jié)合位點的取向連接。
6.綴合的多價和多特異性抗體在本發(fā)明的另一個實施方案中，是綴合的多價抗體?？蓪⒏郊拥陌被釟埢碇恋谝换虻诙嚯牡腘-或C-端。所述附加的氨基酸殘基可包括肽標(biāo)簽、信號肽、細(xì)胞因子、酶(例如前藥激活酶)、激素、肽毒素如假單胞菌外毒素、肽藥物、細(xì)胞毒性蛋白或其它功能蛋白。如本文所用，功能蛋白是具有生物學(xué)功能的蛋白。
在一個實施方案中，藥物、毒素、放射性化合物、酶、激素、細(xì)胞毒性蛋白、螯合劑、細(xì)胞因子及其它功能性試劑可綴合于多價靶結(jié)合蛋白，優(yōu)選是通過共價連接到所述多價靶結(jié)合蛋白氨基酸殘基的側(cè)鏈上，例如胺、羧基、苯基、硫醇或羥基基團。多種常規(guī)的接頭可用于此目的，例如，二異氰酸酯、二異硫氰酸酯、二(羥基琥珀酰亞胺)酯、碳化二亞胺、馬來酰亞胺-羥基琥珀酰亞胺酯、戊二醛等。試劑與所述多價蛋白的綴合優(yōu)選并不顯著影響蛋白對其靶標(biāo)的結(jié)合特異性或親和力。如本文所用，功能性試劑是具有生物學(xué)功能的試劑。優(yōu)選的功能性試劑是細(xì)胞毒性劑。
又在其它實施方案中，雙特異性抗體指導(dǎo)的治療劑或前藥向體內(nèi)靶標(biāo)的遞送可與放射性核素的雙特異性抗體遞送聯(lián)合，從而實現(xiàn)化學(xué)治療和放射性免疫治療的聯(lián)合。每一種治療都可綴合于可靶向的綴合物并同時給藥，或者所述核素可作為第一可靶向綴合物的一部分給予，而藥物在稍后的步驟中作為第二可靶向綴合物的一部分給予。
在另一個實施方案中，細(xì)胞毒性劑可綴合于聚合物載體，且所述聚合物載體可隨后綴合于所述多價靶結(jié)合蛋白。有關(guān)此法，參見Ryser等，Proc.Natl.Acad Sci.USA，753867-3870(1978)，美國專利No.4,699,784和美國專利No.4,046,722，特此將其并入作為參考。綴合優(yōu)選并不顯著影響所述多價結(jié)合單比的結(jié)合特異性或親和力。
7.類人靈長化、人源化、嵌合及人抗體用于治療和診斷的用途根據(jù)本發(fā)明，類人靈長化、人源化、嵌合及人單克隆抗體即本文所述的抗-CD20MAbs及其它MAbs，適合用于治療方法和診斷方法中。因此，本發(fā)明設(shè)想單獨作為裸抗體給藥本發(fā)明的類人靈長化、人源化、嵌合及人抗體，或者作為多模式治療根據(jù)投藥方案臨時性地給藥，但并不與治療劑綴合。裸抗-CD20MAbs的功效可通過用一種或多種其它裸抗體補充裸抗體得以增強，即針對特定抗原的MAbs，如CD4、CD5、CD8、CD14、CD15、CD19、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、B7、Ia、HM1.24、腱生蛋白、MUC1或HLA-DR，以及用抗血管生成抗體(如VEGF和P1GF抗體)連同一種或多種抗-CD20免疫綴合物，或者用與包括藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、激素、治療性放射性核素等在內(nèi)的治療劑綴合的針對所述這些抗原的抗體，連同一種或多種包括藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、激素、治療性放射性核素等在內(nèi)的治療劑，同時地或相繼地或根據(jù)處方的投藥方案與所述MAbs一起給藥。優(yōu)選的B細(xì)胞抗原包括等同于人CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD46、CD52、CD74、CD80和CD5抗原的那些。優(yōu)選的T細(xì)胞抗原包括等同于人CD4、CD8和CD25(IL-2受體)抗原的那些。HLA-DR抗原的等同物可用于治療B細(xì)胞和T細(xì)胞兩種紊亂。特別優(yōu)選的B細(xì)胞抗原是等同于人CD19、CD22、CD21、CD23、CD74、CD80和HLA-DR抗原的那些。特別優(yōu)選的T細(xì)胞抗原是等同于人CD4、CD8和CD25抗原的那些。CD46是癌細(xì)胞表面上阻斷補體依賴性溶解(CDC)的抗原。
此外，本發(fā)明設(shè)想給藥免疫綴合物用于B細(xì)胞淋巴瘤及其它疾病或紊亂的治療用途。如本文所述的免疫綴合物是包含抗體組分和治療劑的分子，包括可能帶有所述治療劑的肽。免疫綴合物保留了抗體組分的免疫反應(yīng)性，也就是說，所述抗體成分在綴合后具有如綴合前大約相同或稍微下降的結(jié)合同源抗原的能力。
同樣，本發(fā)明設(shè)想給藥免疫綴合物用于髓樣白血病的治療用途，其中靶向的是CD33、CD45、CD66及其它粒細(xì)胞相關(guān)抗原。
廣泛多樣的治療試劑可有利地綴合于本發(fā)明的抗體。此處所述的治療劑是那些也可用于與上文所述裸抗體分別地給藥的試劑。例如，治療劑包括化療藥物如長春花生物堿類、蒽環(huán)類抗生素、表鬼臼毒素類、紫杉醇類、抗代謝物、烷化劑、抗生素、Cox-2抑制劑、抗有絲分裂劑、抗血管生成劑和細(xì)胞調(diào)亡劑，特別是阿霉素、氨甲喋呤、紫杉酚、CPT-11、喜樹堿類、以及其它形式的這樣那樣的抗癌劑等。其它可用的用于制備免疫綴合物和抗體融合蛋白的癌癥化療藥物包括氮芥類、烷基磺酸酯類、亞硝基脲類、三氮烯類、葉酸類似物、COX-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、鉑配位復(fù)合物，包括奧沙利鉑、激素等。合適的化療劑描述在REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第19版(Mack Publishing Co.，1995)和GOODMAN AND GILMAN′S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OFTHERAPEUTICS，第7版(MacMillan Publishing Co.，1985)以及這些出版物的修訂版中。其它合適的化療劑如實驗性藥物是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
另外，有螯合劑如DTPA、DOTA、TETA或NOTA或合適的肽，其上可綴合可檢測標(biāo)記物如熒光分子，或者細(xì)胞毒性劑如重金屬或放射性核素。例如，治療上可用的免疫綴合物可通過將光敏劑或染料綴合于抗體組分上獲得。熒光組合物如熒光色素及其它發(fā)色團，或者染料如對可見光敏感的卟啉，業(yè)已通過將合適的光線引導(dǎo)到病變處而用于檢測和治療病變。在治療中，這已被稱為光輻射、光線療法或光動力學(xué)療法(Jori等(編)，PHOTODYNAMIC THERAPY OF TUMORSAND OTHER DISEASES(Libreria Progetto 1985)；van den Bergh，Chem.Britain 22430(1986))。而且，單克隆抗體業(yè)已與光活化染料偶聯(lián)用于實現(xiàn)光線療法。Mew等，J.Immunol1301473(1983)；同作者，Cancer Res.454380(1985)；Oseroff等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 838744(1986)；同作者，Photochem.Photobiol.4683(1987)；Hasan等，Prog Clin.Biol.Res.288471(1989)；Tatsuta等，Lasers Surg Med.9422(1989)；Pelegrin等，Cancer672529(1991)。然而，這些早期的研究并未包括內(nèi)窺鏡治療應(yīng)用的用途，特別是抗體片斷或亞片斷的使用。從而，本發(fā)明設(shè)想了包含光敏劑或染料的免疫綴合物的治療用途。
毒素如假單胞菌外毒素也可絡(luò)合于或構(gòu)成本發(fā)明抗-CD20抗體抗體融合蛋白的治療劑部分。在此類綴合物或其它融合蛋白的制備中適合采用的其它毒素包括篦麻毒素、相思豆毒素、核糖核酸酶(RNase)、DNase I、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、多花白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內(nèi)毒素。例如，參見Pastan等，Cell 47641(1986)和Goldenberg，CA-A CancerJournalfor Clinicians 4443(1994)。適合用于本發(fā)明的另外的毒素是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并在美國專利6,077,499中公開，特此將其全文并入作為參考。
免疫調(diào)節(jié)劑如細(xì)胞因子也可綴合于或構(gòu)成抗體融合蛋白的治療劑部分，或者與本發(fā)明的人源化抗-CD20或其它淋巴瘤抗體一起給藥。用于本發(fā)明的合適的細(xì)胞因子包括但不限于干擾素和白介素，如下文所述。
8.免疫綴合物的制備本發(fā)明的任何抗體或抗體融合蛋白可與一種或多種治療劑綴合。一般地，是一種治療劑連接于各抗體或抗體片斷，但不止一種治療劑可連接于同一抗體或抗體片斷上。本發(fā)明的抗體融合蛋白包括兩個或多個抗體或其片斷，且構(gòu)成該融合蛋白的每個抗體可含有一治療劑。另外，抗體融合蛋白的一個或多個抗體可連接有不止一種治療劑。此外，所述治療劑無需相同，但是可以是不同的治療劑。例如，人們可將藥物和放射性同位素連接于同一融合蛋白。尤其是，IgG可用131I放射性標(biāo)記，并連接到藥物上?？蓪⑺?31I摻入到所述IgG的酪氨酸中，并將藥物連接于IgG賴氨酸的ε氨基上。也可將所述治療劑連接于還原的SH基團，以及糖側(cè)鏈。
本發(fā)明的雙特異性抗體可用于預(yù)靶向方法，并提供了向受試者遞送兩種治療劑的優(yōu)選方式。美國流水號No.09/382,186公開了利用雙特異性抗體預(yù)靶向的方法，其中所述雙特異性抗體由125I標(biāo)記，并遞送給受試者，接著是由99mTc標(biāo)記的二價肽。所述遞送導(dǎo)致出色的有關(guān)125I和99mTc的腫瘤/正常組織比，從而證明了兩種診斷性放射性同位素的實用性。可利用已知治療劑的任意組合標(biāo)記所述抗體和抗體融合蛋白。所述mAb綴合物抗體組分的結(jié)合特異性、所述治療劑或診斷劑的功效、以及所述抗體Fc部分的效應(yīng)器活性，可通過所述綴合物的標(biāo)準(zhǔn)試驗確定。
治療劑可介由二硫鍵的形成連接在還原抗體組分的鉸鏈區(qū)。作為備選方案，可利用雜雙功能交聯(lián)接頭將此類肽連接于所述抗體組分，如N-琥珀酰3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)。Yu等，Int.J.Cancer 56244(1994)。用于此類綴合的一般技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的。參見如Wong，CHEMISTRY OF PROTEIN CONJUGATION ANDCROSS-LINKING(CRC Press，1991)；Upeslacis等，″Modification ofAntibodies by Chemical Methods，″in MONOCLONAL ANTIBODIESPRINCIPLES AND APPLICATIONS，Birch等(編)，第187-230頁(Wiley-Liss，Inc.，1995)；Price，″Production andCharacterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies，″inMONOCLONAL ANTIBODIESPRODUCTION，ENGINEERING AND CLINICALAPPLICATION，Ritter等(編)，第60-84頁(Cambridge UniversityPress，1995)。備選地，所述治療劑可介由糖成分追合作抗體的Fc區(qū)之中。所述糖基團可用于增大結(jié)合于硫醇基團的同一肽的荷載，或者所述糖成分可用于結(jié)合不同的肽。
介由抗體糖成分將肽綴合于抗體組分的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。例如，參見Shih等，Int.J Cancer 41832(1988)；Shih等，Int.J.Cancer 461101(1990)；以及Shih等，美國專利No.5,057,313，特此將它們?nèi)咳牟⑷胱鳛閰⒖肌Ｒ话惴椒ㄉ婕笆咕哂醒趸遣糠值目贵w組分與具有至少一個游離胺官能團且荷載了多個肽的載體聚合物反應(yīng)。所述反應(yīng)產(chǎn)生了最初的希夫堿(亞胺)鏈鍵，這可通過還原為仲胺穩(wěn)定化，以形成終綴合物。
如果用作為免疫綴合物抗體組分的抗體是抗體片斷，則Fc區(qū)消失。不過，有可能向全長抗體或抗體片斷的輕鏈可變區(qū)中引入糖成分。例如，參見Leung等，J.Immunol.1545919(1995)；Hansen等，美國專利No.5,443,953(1995)，Leung等，美國專利No.6,254,868，特此將它們?nèi)咳牟⑷胱鳛閰⒖?。利用所述改造的糖成分連接所述治療或診斷劑。
9.藥學(xué)上可接受的載體所述待遞送給受試者的類人靈長化、人源化、嵌合或人放射性標(biāo)記抗體可僅由mAb、免疫綴合物、融合蛋白組成，或者可包括一種或多種藥學(xué)上合適的載體、一種或多種附加成分、或者這些物質(zhì)的某些組合。
本發(fā)明的免疫綴合物抗體可根據(jù)制備藥學(xué)上可用組合物的已知方法配制，由此所述免疫綴合物或裸抗體在混合物與藥學(xué)上合適的載體混合。無菌磷酸緩沖鹽溶液是藥學(xué)上合適載體的一個實例。其它合適的載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。例如，參見Ansel等，PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，第5版(Lea & Febiger 1990)，和Gennaro(編)，REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版(Mack Publishing Company1990)，以及它們的修訂版。
可配制本發(fā)明的免疫綴合物和裸抗體用于腸胃外應(yīng)用，如靜脈內(nèi)給藥，例如介由丸劑注射和連續(xù)輸注。注射用制劑可提供為單位劑量的形式，例如，在安瓿瓶中，和在多劑量容器中，添有防腐劑。所述組合物可采取諸如懸液、溶液或處于油或水性載體中的乳劑形式，并且可含有配制劑如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。備選地，所述活性成分可以是散劑形式，以在用前與合適的載體如無菌無熱原的水重構(gòu)。
可采用另外的制藥方法以控制治療性綴合物或裸抗體的作用持續(xù)時間。緩釋劑可通過使用聚合物絡(luò)合或吸收所述免疫綴合物或裸抗體制備。例如，生物可相容的聚合物包括聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)基質(zhì)以及硬脂酸二聚體和癸二酸的聚酸酐共聚物基質(zhì)。Sherwood等，Bio/Technology 101446(1992)。免疫綴合物或抗體由此基質(zhì)的釋放速率取決于所述免疫綴合物或抗體的分子量、基質(zhì)內(nèi)免疫綴合物、抗體的量、以及分散顆粒的大小。Salizman等，Biophys.J.55163(1989)；Sherwood等，同上。其它固體劑量形式在描述在Ansel等，PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，第5版(Lea & Febiger 1990)，和Gennaro(編)，REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版(Mack Publishing Company1990)以及它們的修訂版中。
所述免疫綴合物、抗體融合蛋白或裸抗體也可皮下或者甚至通過其它腸胃外路徑向哺乳動物給藥。而且，所述給藥可以是通過連續(xù)輸注或者通過單次或多個丸劑。一般而言，人用給藥的免疫綴合物、融合蛋白或裸抗體的劑量將根據(jù)諸如患者的年齡、體重、身高、性別、一般醫(yī)學(xué)狀況和以前的病史的因素而變。典型地，期望為受體提供劑量在從大約1mg/kg到20mg/kg范圍內(nèi)的免疫綴合物、抗體融合蛋白或裸抗體作為單次靜脈內(nèi)輸注，盡管視情形而定，也可給藥更低或更高的劑量。該劑量可視需要而重復(fù)，例如，每周一次共4-10周，優(yōu)選每周一次共8周，并且更優(yōu)選每周一次共4周。也可以不太頻繁地給予，例如每隔一周持續(xù)數(shù)月。所述劑量可通過多種腸胃外路徑給予，并適當(dāng)?shù)卣{(diào)整劑量和回程。
出于治療目的，向哺乳動物給藥治療有效量的免疫綴合物、融合蛋白或裸抗體。本發(fā)明合適的受試者通常是人，盡管也考慮非人動物受試者。如果所給藥的量具有生理學(xué)顯著意義的，則抗體制劑被表述為是以“治療有效量”給藥的。如果其存在導(dǎo)致受體哺乳動物生理學(xué)上可檢測的變化，則該制劑具有生理學(xué)顯著意義。尤其是，如果其存在激發(fā)了抗腫瘤應(yīng)答或緩和了自身免疫病狀態(tài)的體征和癥狀，則本發(fā)明的抗體制劑具有生理學(xué)顯著意義。生理學(xué)顯著意義的功效也可以是在受體哺乳動物中激發(fā)體液和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答。
10.治療方法本發(fā)明設(shè)想使用本發(fā)明的抗體作為用于治療疾病如B細(xì)胞相關(guān)惡性病、T細(xì)胞惡性病或另一淋巴瘤類型的主要組合物。另外，它也可用于治療自身免疫病。尤其是，本文所述的組合物尤其可用于治療多種自身免疫病以及不活躍形式的B細(xì)胞淋巴瘤、攻擊形式的B細(xì)胞淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、以及瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥、多發(fā)性骨髓瘤。同樣，可治療T細(xì)胞病如T細(xì)胞白血病或蕈樣肉芽腫病。例如，人源化抗-CD22抗體組分和免疫綴合物可用于治療不活躍和攻擊形式的兩種非霍奇金氏淋巴瘤。自身免疫病選自下組急性特發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、風(fēng)濕熱、多腺綜合癥、大皰類天皰瘡、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、鏈球菌感染后的腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、Takayasu′s動脈炎、愛迪生氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、結(jié)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多發(fā)動脈炎、強直性脊柱炎、古德帕斯徹氏綜合征、血栓閉塞性脈管炎、干燥綜合癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮病、慢性活動性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、尋常性天皰瘡、眶壞死性肉芽腫病、膜性腎病、肌萎縮性側(cè)索硬化、脊髓癆、巨細(xì)胞性動脈炎/多肌痛、惡性貧血、快速漸進性血管球性腎炎、牛皮癬和纖維性肺泡炎。
用于治療的組合物含有至少一種單獨的或與其它抗體聯(lián)合的人源化、嵌合或人單克隆抗體，如其它人源化、嵌合或人抗體、治療劑或免疫調(diào)節(jié)劑。尤其是，也設(shè)想與全人抗體的聯(lián)合治療，且是通過如上文所述的方法生產(chǎn)的。
綴合于相同或不同表位或抗原的抗體也可與一個或多個本發(fā)明的抗體混合。例如，人源化、嵌合或人綴合抗-CD22抗體可與另一類人靈長化、人源化、嵌合或人綴合抗-CD22混合，而類人靈長化、人源化、嵌合或人綴合抗-CD22抗體可與抗-CD22免疫綴合物混合。備選地，可與不同的淋巴瘤相關(guān)抗體進行各種這樣的混合，如上文所述的那樣。類人靈長化、人源化、嵌合或人CD22抗體與毒素或免疫調(diào)節(jié)劑的融合蛋白，或者至少兩個不同B細(xì)胞抗體的融合蛋白(如CD20和CD22 mAb)也可用于本發(fā)明之中。許多不同的抗體混合物，靶向與B細(xì)胞或其它淋巴瘤或自身免疫病相關(guān)的至少兩個不同的抗原，如上文早已列舉的那樣，可構(gòu)建為與治療劑或免疫調(diào)節(jié)劑部分綴合，或者僅僅是與另一治療劑如細(xì)胞毒性藥物混合，或者具有射線。
如本文所用，術(shù)語“免疫調(diào)節(jié)劑”包括細(xì)胞因子，干細(xì)胞生長因子，淋巴毒素，如腫瘤壞死因子(TNF)，和造血生長因子，例如白介素(如白介素-1(IL-1)、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12和IL-18)，集落刺激因子(如粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF))，干擾素(如干擾素α、β和γ)，命名為“S1因子”的干細(xì)胞生長因子，促紅細(xì)胞生成素以及促血小板生成素。合適的免疫調(diào)節(jié)劑成分的實例包括IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、干擾素-γ、TNF-α等。備選地，受試者可接受綴合的抗-CD20抗體和單獨給藥的細(xì)胞因子，其可在裸或綴合的抗-CD20抗體給藥之前、同時或之后給藥。如前文所討論的那樣，所述抗-CD22抗體也可綴合于免疫調(diào)節(jié)劑。所述免疫調(diào)節(jié)劑也可綴合于雜交抗體或雜交抗體片斷或亞片斷(單鏈結(jié)合蛋白或sFv′s)，它們包括與不同抗原結(jié)合的一個或多個抗體或亞片斷。
本發(fā)明的多模式治療還包括用綴合的抗-CD22抗體免疫治療，補充給藥融合蛋白形式的或作為免疫綴合物的抗-CD20、抗-CD19、抗-CD21、抗-CD74、抗-CD80、抗-CD23、抗-CD46或HLA-DR(包括不變鏈)抗體。這些抗體包括多克隆、單克隆、靈長化類人、嵌合、人或人源化抗體，其識別這些抗原決定簇上的至少一個表位?？?CD19和抗-CD22抗體是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。例如，參見Ghetie等，Cancer Res.482610(1988)；Helcman等，Cancer Immunol.hnynunother.32364(1991)；Longo，Curr.Opin.Oncol.8353(1996)以及美國專利No.5,798,554和6,187,287，特此全文并入作為參考。
在另一種形式的多模式治療中，受試者接受綴合的抗體和/或免疫綴合物，聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)的癌癥化療。例如，″CVB″(1.5g/m2環(huán)磷酰胺、200-400mg/m2依托泊甙和150-200mg/m2亞硝脲氮芥)是用于治療非霍奇金氏淋巴瘤的方案。Patti等，Eur.J.Haematol.5118(1993)。其它合適的化療方案組合是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。例如，參見Freedman等，″Non-Hodgkin′s Lymphomas，″in CANCERMEDICINE，第2卷，第3版，Holland等(編)，第2028-2068頁(Lea& Febiger 1993)。作為舉例說明，用于治療中度非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的第一代化療方案包括C-MOPP(環(huán)磷酰胺、長春新堿、甲基芐肼和脫氫可的松)以及CHOP(環(huán)磷酰胺、阿霉素、長春新堿和脫氫可的松)?？捎玫牡诙煼桨甘莔-BACOD(氨甲喋呤、博萊霉素、阿霉素、環(huán)磷酰胺、長春新堿、地塞米松和甲酰四氫葉酸)，而合適的第三代方案是MACOP-B(氨甲喋呤、阿霉素、環(huán)磷酰胺、長春新堿、脫氫可的松、博萊霉素和甲酰四氫葉酸)。另外可用的藥物包括丁酸苯酯和薯司他丁-1。在優(yōu)選的多模式治療中，化療藥物和細(xì)胞因子都與根據(jù)本發(fā)明的抗體、免疫綴合物或融合蛋白共給藥。所述細(xì)胞因子、化療藥物以及抗體或免疫綴合物可以任何次序或一起給藥。
可用作為治療劑、基本上由于β-粒子發(fā)射而衰減的放射性核素包括但不限于Ac-225、P-32、P-33、Sc-47、Fe-59、Cu-64、Cu-67、Se-75、As-77、Sr-89、Y-90、Mo-99、Rh-105、Pd-109、Ag-111、I-125、I-131、Pr-142、Pr-143、Pm-149、Sm-153、Tb-161、Ho-166、Er-169、Lu-177、Re-186、Re-188、Re-189、Ir-194、Au-198、Au-199、Pb-211、Pb-212和Bi-213?？捎玫摩?粒子發(fā)射核素的最大衰減能優(yōu)選為20-5,000keV，更優(yōu)選為100-4,000keV，并且最優(yōu)選為500-2,500keV。
可用作為治療劑、基本上由于俄歇發(fā)射粒子而衰減的放射性核素包括但不限于Co-58、Ga-67、Br-80m、Tc-99m、Rh-103m、Pt-109、In-111、Sb-119、I-125、Ho-161、Os-189m和Ir-192。這些放射性核素的最大衰減能優(yōu)選小于1,000keV，更優(yōu)選小于100keV，并且最優(yōu)選小于70keV。
可用作為治療劑、基本上由于α-粒子的產(chǎn)生而衰減的放射性核素包括但不限于Dy-152、At-211、Bi-212、Ra-223、Rn-219、Po-215、Bi-211、Ac-225、Fr-221、At-217、Bi-213和Fm-255。可用的α-粒子發(fā)射放射性核素的衰減能優(yōu)選為2,000-9,000keV，更優(yōu)選為3,000-8,000keV，并且最優(yōu)選為4,000-7,000keV。
可用于基于種子俘獲操作的療法的放射性核素包括但不限于B-10、Gd-157和U-235。
本發(fā)明的實施方案可進一步通過詳細(xì)顯示本發(fā)明方方面面的實施例舉例說明。這些實施例舉例說明了本發(fā)明的具體要素，而不應(yīng)當(dāng)闡釋為限制其范圍。
實施例抗體Epratuzumab為人源化的LL2抗體，并由Immunomedics Inc.，Morris Plains，NJ研發(fā)。人源化過程用人IgG1序列替換了約95％的鼠源Ig序列。Epratuzumab一經(jīng)結(jié)合于CD22抗原的B表位就被內(nèi)在化(Stein，R.等，Cancer Immunol.Imnaunother.37(5)293-8，1993)，該表位對應(yīng)于第三Ig結(jié)構(gòu)域(Kehrl，J.H.B6 CD22Workshop Panel Report，in Leubocyte Typing V.White CellDifferentiation Antigens.，S.F.Schlossman(編)，OxfordUniversity Press，p.523-5，1995)。在5分鐘之后觀察到體外內(nèi)在化，并報道在5小時后發(fā)生多達50％抗原的再表達(Shih，L.B.等Int J Cancer 56(4)538-45，1994)。
人源化抗-CD20抗體hA20業(yè)已由Immunomedics，Inc.，MorrisPlains，NJ研發(fā)。該Mab結(jié)合CD20，并與嵌合抗-CD20MAb利妥希瑪相反，它是比嵌合形式具有更少鼠源蛋白的CDR移植MAb。所述hA20 MAb具有IgG1(κ)恒定區(qū)和與epratuzumab CD22人源化MAb相同的人V框架區(qū)。將hA20的CDR移植VH和Vk鏈的基因插入到基于DHFR擴增表達系統(tǒng)的pdHL2質(zhì)粒載體中，并轉(zhuǎn)染到Sp2/0鼠骨髓瘤細(xì)胞系中以產(chǎn)生hA20生產(chǎn)克隆。分子表征證明hA20在其CDRs中類似于利妥?，敚嗽赩H區(qū)中有一個氨基酸的差異以外。然而，由于包含更多的人構(gòu)建體，hA20的VH和Vk框架區(qū)中存在著差異。該hA20抗體似乎競爭利妥?，攲Χ喾N淋巴瘤細(xì)胞的結(jié)合，并且具有與利妥?，斚嗨频慕怆x常數(shù)，以及相似的體外和體內(nèi)抗表達CD20的人淋巴瘤細(xì)胞系的效應(yīng)。
非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的治療呈IV期彌漫性大細(xì)胞NHL的66歲老人，在前兩年給予的3療程化療之后復(fù)發(fā)。向他給予兩次90Y-DOTA-epratuzumab(依照Govinden標(biāo)記，同前)注射的劑量，相隔一周，每次通過靜脈內(nèi)輸注給藥7.5mCi/m290Y連同總劑量30mg的抗體蛋白。六周后，他的頸淋巴結(jié)和他的脾腫大似乎已顯著減小，且患者癥狀上得到改善，并返回專職工作。由于他并未完全緩解，制定了涉及epratuzumab(360mg/m2)和hA20(250mg/m2)聯(lián)合的繼續(xù)治療，隔周給予，總計4次輸注，然后12周之后重復(fù)所述聯(lián)合抗體治療療程。在結(jié)束裸CD22和CD20抗體聯(lián)合的第二治療療程后三個月，通過放射線掃描或骨髓生檢，患者無疾病跡象，因而認(rèn)為是完全應(yīng)答。在3個月后的下一個評價中，他仍處于疾病的完全緩解之中。
T細(xì)胞白血病的治療向?qū)υ谇暗幕燁B固且具有晚期T細(xì)胞白血病的患者給予與20mCi90Y-DOTA綴合的50mg抗-CD25人源化Mab的輸注，一周后接著給予劑量為200mg/m2的CD25Mab(抗-TAC人源化抗體)輸注。四周后，他的血液計數(shù)和骨髓生檢顯示了疾病的部分緩解。
頑固性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療患者呈嚴(yán)重晚期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，影響了許多關(guān)節(jié)，但尤其是他的膝蓋，現(xiàn)對化療頑固，用劑量為10mCi/m2由90Y標(biāo)記的總計50mg的CD4和CD20人源化Mabs混合物單次輸注治療。兩周后，向他給予由100mg CD4和250mg CD20抗體組成的裸人源化抗體劑量，并在兩周后再這樣重復(fù)一次。緩和感覺到其關(guān)節(jié)炎的緩解，特別是膝蓋，并且4周后，能夠更好地步行甚至是爬樓梯，其醫(yī)師幾乎沒記錄關(guān)節(jié)炎癥。三個月后，重復(fù)該治療療程，涉及一次放射性標(biāo)記抗體混合物的輸注，接著是兩次裸CD4和CD20抗體的輸注，并在6周后重新評價患者。醫(yī)師注意到顯著的改善，從而患者見證了僅最小的疼痛和其肢體頗為更佳的運動性。
盡管前述內(nèi)容涉及特定的優(yōu)選實施方案，人們將會理解本發(fā)明并不局限于此。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會想到可對所公開的實施方案進行各種改進，并且此類改進旨在落入本發(fā)明由如下實施方案所定義的范圍之內(nèi)。
特此將本說明書中所引述的所有出版物和專利申請及專利全文并入作為參考。
權(quán)利要求
1.一種治療組合物在制造用于治療哺乳動物疾病的藥物中的用途，所述治療組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和至少一種綴合抗體或其片斷，或綴合抗體融合蛋白或其片斷，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體的預(yù)先投藥，且其中向所述哺乳動物同時地和相繼地給藥所述治療組合物。
2.權(quán)利要求1的用途，其中任選地與所述綴合抗體或其所述片斷或者所述綴合抗體融合蛋白或其所述片斷一起添加非綴合抗體或片斷或者非綴合抗體融合蛋白或其片斷，作為維持治療以防增生的腫瘤或患自身免疫病的細(xì)胞靶逃逸。
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體、抗體融合蛋白或其片斷靶向于選自下組的抗原CD3、CD4、CD5、CD8、CD11c、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、MUC1、腱生蛋白、Ia、HMI.24、HLA-DR以及腫瘤相關(guān)抗原。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述腫瘤相關(guān)抗原是血管內(nèi)皮抗原。
5.權(quán)利要求3的用途，其中所述哺乳動物選自人和家畜或?qū)櫸铩?br> 6.權(quán)利要求3的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體、抗體融合蛋白或其片斷是人源、鼠源、嵌合、靈長化或人源化的。
7.權(quán)利要求3的用途，其中所述抗體、抗體融合蛋白或其片斷綴合于選自下組的治療劑藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光敏劑和放射性核素。
8.權(quán)利要求3的用途，進一步包括向所述哺乳動物同時或相繼給藥這樣的治療組合物，所述治療組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和至少一種抗體、抗體融合蛋白或其片斷，其中所述抗體、所述抗體融合蛋白或其所述片斷綴合于至少一種治療劑。
9.權(quán)利要求8的用途，其中任選地與所述綴合抗體、綴合抗體融合蛋白或其所述片斷一起添加非綴合抗體、抗體融合蛋白或其片斷，作為維持治療以防增生的腫瘤或其它患病細(xì)胞靶逃逸。
10.權(quán)利要求8或9的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體、抗體融合蛋白或其片斷靶向于選自下組的抗原CD3、CD4、CD5、CD8、CD11c、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、MUC1、腱生蛋白、Ia、HMI.24、HLA-DR以及腫瘤相關(guān)抗原。
11.權(quán)利要求10的用途，其中所述腫瘤相關(guān)抗原是血管內(nèi)皮抗原。
12.權(quán)利要求10的用途，其中所述哺乳動物選自人和家畜或?qū)櫸铩?br> 13.權(quán)利要求10的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體、抗體融合蛋白或其片斷是人源、鼠源、嵌合、靈長化或人源化的。
14.權(quán)利要求10的用途，其中所述抗體、抗體融合蛋白或其片斷綴合于選自下組的治療劑藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光敏劑和放射性核素。
15.權(quán)利要求1的用途，進一步包括向所述哺乳動物同時或相繼給藥這樣的治療組合物，所述治療組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和包含至少兩個抗體或其片斷的抗體融合蛋白或其片斷。
16.權(quán)利要求15的用途，其中任選地與所述抗體融合蛋白或其片斷一起添加非綴合抗體，作為維持治療以防增生的腫瘤或其它患病細(xì)胞靶逃逸。
17.權(quán)利要求15或16的方法，其中所述綴合和非綴合抗體靶向于選自下組的抗原CD3、CD4、CD5、CD8、CD11c、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、MUC1、腱生蛋白、Ia、HMI.24、HLA-DR以及腫瘤相關(guān)抗原。
18.權(quán)利要求17的用途，其中所述腫瘤相關(guān)抗原是血管內(nèi)皮抗原。
19.權(quán)利要求17的用途，其中所述哺乳動物選自人和家畜或?qū)櫸铩?br> 20.權(quán)利要求17的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體是人源、鼠源、嵌合、靈長化或人源化的。
21.權(quán)利要求17的用途，其中所述抗體綴合于選自下組的治療劑藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光敏劑和放射性核素。
22.權(quán)利要求7的用途，其中所述藥物擁有選自下組的藥學(xué)性質(zhì)抗有絲分裂、烷化、抗代謝物、抗血管生成、細(xì)胞凋亡、生物堿和抗生素劑以及它們的組合。
23.權(quán)利要求7的用途，其中所述藥物選自下組氮芥類、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯類、亞硝基脲類、三氮烯類、葉酸類似物、蒽環(huán)類抗生素、紫杉醇類、COX-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗生素、酶、表鬼臼毒素類、鉑配位復(fù)合物、長春花生物堿類、取代的脲、甲肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)阻遏劑、拮抗劑、內(nèi)皮抑素、紫杉酚、喜樹堿類、阿霉素類及其類似物以及它們的組合。
24.權(quán)利要求7的用途，其中所述藥物選自下組環(huán)磷酰胺、表鬼臼毒吡喃葡糖苷、長春新堿、普魯芐肼、脫氫可的松、亞硝脲氮芥、阿霉素、氨甲喋呤、博來霉素、地塞米松、丁酸苯酯、薯司他丁-1、和甲酰四氫葉酸。
25.權(quán)利要求7的用途，其中所述毒素選自下組篦麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草素、核糖核酸酶(RNase)、Dnase I、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、多花白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內(nèi)毒素。
26.權(quán)利要求7的用途，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑選自下組細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、造血生長因子、集落刺激因子(CSF)、干擾素(IFN)、促紅細(xì)胞生成素、促血小板生成素和它們的組合。
27.權(quán)利要求7的用途，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑基本上由IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、G-CSF、GM-CSF、干擾素-γ、α、β、或-γ、TNF-α、和“S1因子”組成。
28.權(quán)利要求7的用途，其中所述螯合劑選自下組DTPA、DOTA、TETA、NOTA以及合適的其上可綴合可檢測標(biāo)記物或細(xì)胞毒性劑的肽。
29.權(quán)利要求28的用途，其中所示可檢測標(biāo)記物是熒光分子，且所述細(xì)胞毒性劑是重金屬或放射性核素。
30.權(quán)利要求26的用途，其中所述淋巴毒素選自下組腫瘤壞死因子、造血生長因子、集落刺激因子、干擾素、干細(xì)胞生長因子。
31.權(quán)利要求7的用途，其中所述光敏劑是發(fā)色團或染料。
32.權(quán)利要求7的用途，其中(A)所述放射性核素基本上由于β-粒子發(fā)射而衰減，并且選自下組P-32、P-33、Sc-47、Fe-59、Cu-64、Cu-67、Se-75、As-77、Sr-89、Y-90、Mo-99、Rh-105、Pd-109、Ag-111、I-125、I-131、Pr-142、Pr-143、Pm-149、Sm-153、Tb-161、Ho-166、Er-169、Lu-177、Re-186、Re-188、Re-189、Ir-194、Au-198、Au-199、Pb-211、Pb-212和Bi-213；(B)其中所述放射性核素基本上由于俄歇粒子發(fā)射而衰減，并且選自下組Co-58、Ga-67、Br-80m、Tc-99m、Rh-103m、Pt-109、In-111、Sb-119、I-125、Ho-161、Os-189m和Ir-192；或(C)所述放射性核素基本上由于α-粒子發(fā)射而衰減，并且選自下組Ac-225、Dy-152、At-211、Bi-212、Ra-223、Rn-219、Po-215、Bi-211、Ac-225、Fr-221、At-217、Bi-213和Fm-255。
33.權(quán)利要求7的用途，其中所述治療劑用于光動力學(xué)治療和中子俘獲操作。
34.權(quán)利要求33的用途，其中所述光動力學(xué)治療使用金屬復(fù)合物，且所述金屬復(fù)合物選自下組鋅、鋁、鎵、镥和鈀。
35.權(quán)利要求33的用途，其中所述中子俘獲操作使用選自B-10、Gd-157和U-235的放射性核素。
36.權(quán)利要求1的用途，其中所述疾病是B細(xì)胞相關(guān)病、T細(xì)胞相關(guān)病或自身免疫病。
37.權(quán)利要求37的用途，其中所述B細(xì)胞相關(guān)病是不活躍形式的B細(xì)胞淋巴瘤、攻擊形式的B細(xì)胞淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥或多發(fā)性骨髓瘤。
38.權(quán)利要求37的用途，其中所述B細(xì)胞相關(guān)病是人或獸醫(yī)疾病。
39.權(quán)利要求37的用途，其中所述B細(xì)胞相關(guān)病是非霍奇金氏淋巴瘤。
40.權(quán)利要求37的用途，其中所述T細(xì)胞相關(guān)病是人或獸醫(yī)T細(xì)胞白血病或蕈樣肉芽腫病。
41.權(quán)利要求37的用途，其中所述自身免疫病選自下組急性特發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、風(fēng)濕熱、多腺綜合癥、大皰類天皰瘡、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、鏈球菌感染后的腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、Takayasu′s動脈炎、愛迪生氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、結(jié)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多發(fā)動脈炎、強直性脊柱炎、古德帕斯徹氏綜合征、血栓閉塞性脈管炎、干燥綜合癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮病、慢性活動性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、尋常性天皰瘡、眶壞死性肉芽腫病、膜性腎病、肌萎縮性側(cè)索硬化、脊髓癆、巨細(xì)胞性動脈炎/多肌痛、惡性貧血、快速漸進性血管球性腎炎、牛皮癬和纖維性肺泡炎。
42.權(quán)利要求1的用途，其中患病組織上靶向抗原的比例超過正常組織，兩者之比大于1.6∶1。
43.權(quán)利要求1的用途，其中患病組織上靶向抗原的比例超過正常組織，兩者之比為5∶1。
44.權(quán)利要求1的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體、抗體融合蛋白或其片斷定向于相同或不同的靶標(biāo)。
45.權(quán)利要求1的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體、抗體融合蛋白、或其片斷選自下組完整IgG、F(ab′)2、F(ab)2、Fab′、Fab、scFvs、雙鏈抗體、三鏈抗體或四鏈抗體。
46.權(quán)利要求1的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體是抗-CD22單克隆抗體。
47.權(quán)利要求1的用途，其中所述綴合和非綴合的抗體是人源化LL2單克隆抗體。
48.權(quán)利要求47的用途，其中所述人源化LL2抗體由釔-90放射性標(biāo)記。
49.權(quán)利要求46的用途，其中所述抗-CD22單克隆抗體是人的。
50.權(quán)利要求44的用途，其中所述綴合抗體是以每劑20-600毫克蛋白的劑量腸胃外給藥的。
51.權(quán)利要求44的用途，其中所述綴合抗體是以每劑20-150毫克蛋白的劑量腸胃外給藥的。
52.權(quán)利要求44的用途，其中所述綴合抗體是以每劑20-100毫克蛋白的劑量腸胃外給藥的。
53.權(quán)利要求46的用途，其中所述哺乳動物接受作為每劑20-150毫克蛋白的重復(fù)腸胃外劑量的所述抗-CD22單克隆抗體。
54.權(quán)利要求46的用途，其中所述哺乳動物接受作為每劑20-100毫克蛋白的重復(fù)腸胃外劑量的所述抗-CD22單克隆抗體。
55.一種治療組合物在制造用于治療哺乳動物疾病的藥物中的用途，所述治療組合物包括藥學(xué)上可接受的載體和與至少一種靶抗原和治療劑相結(jié)合的多特異性多價抗體、片斷或融合蛋白綴合物，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體的預(yù)先投藥，且其中向所述哺乳動物同時和相繼地給藥所述治療組合物。
56.一種治療組合物在制造用于治療哺乳動物疾病的藥物中的用途，所述治療組合物包括(A)與至少一種靶抗原相結(jié)合的多特異性多價抗體、片斷或融合蛋白；(B)任選地包括清除劑，以允許所述組合物清除來自循環(huán)的非局限抗體；和(C)藥學(xué)有效量的與所述多特異性多價抗體、片斷或融合蛋白結(jié)合的治療綴合物，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體的預(yù)先投藥，且其中向所述哺乳動物同時和相繼地給藥所述治療組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療和診斷哺乳動物B細(xì)胞相關(guān)病、T細(xì)胞相關(guān)病或自身免疫病的方法，所述方法是通過向所述哺乳動物同時或相繼給藥包括藥學(xué)上可接受的載體和至少一種綴合抗體的治療組合物進行的，其中并不進行非放射性標(biāo)記抗體的預(yù)先投藥。
文檔編號A61K51/10GK1756561SQ200380110054
公開日2006年4月5日 申請日期2003年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月31日
發(fā)明者D·M·戈登伯格, H·漢森 申請人:免疫醫(yī)療公司