專利名稱：右旋西布曲明及其相應(yīng)的鹽在制備減肥藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬化學(xué)藥物領(lǐng)域，涉及西布曲明及其在制藥中的用途，具體涉及右旋鹽酸西布曲明及其相應(yīng)的鹽在制備減肥藥物中的用途。
背景技術(shù)：
肥胖是一種發(fā)病率逐年增加的常見慢性疾病，該病會增II型糖尿病、高血壓、高脂血癥、冠心病等疾病的發(fā)病危險(xiǎn)，是人類健康的潛在威脅，自1972年以來，美國FDA批準(zhǔn)了2個(gè)減肥藥上市。其一是1996年批準(zhǔn)的芬氟拉明，該藥由于嚴(yán)重的不良反應(yīng)已從市場撤消。另一個(gè)就是1997年12月上市的西布曲明(sibutramine，Sib)。文獻(xiàn)報(bào)道，Sib其作用機(jī)制為抑制中樞神經(jīng)細(xì)胞對5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取，降低食欲；同時(shí)，可通過增加機(jī)體產(chǎn)熱，促進(jìn)脂肪組織消耗，從而降低體重(Yoshida T，NishiokoH，Nakamura Y et al.Reduced norepinephrine turnover in brown adipose tissue of pre-obesemice treated with monosodium L-glutamate.Life Sciences，1985；36(10)931-938.Glick SD，Haskew RE，Maisonneuve IM，et al.Enantioselective behavioral effects of sibutraminemetabolites.Europen Journal of Pharmacology.2000；397(1)93-102.Terutake NAKAGAWA，Kiyoharu UKAI，Tadashi OHYAMA，et al.Effects of chronic Administration of Sibutramine onbody weight，food intake and motor activity in neonatally monosodium glutamate-treatedobese female ratsrelationship of antiobesity effect with monoamines.Exp.Anim.2000；49(4)239-249.Carol N.Boozer，Rudolph L.Leibel，Robert J，et al.Synergy of sibutramine andlow-dose leptin in treatment of diet-induced obesity in rats.Metabolism.2001；50(8)889-893.)。
目前，市場銷售的減肥藥成分多為鹽酸Sib的消旋體，有關(guān)專利(US 6,552,087)用右旋西布曲明于治療抑郁癥、肥胖和帕金森氏病，該專利涉及到右旋西布曲明對5-羥色胺和去甲腎上腺素的再攝取的抑制作用，以及產(chǎn)生生理性的飽食感、減少食物的攝取量以達(dá)到減肥的作用。該藥最初是作為第二代抗抑郁藥而進(jìn)行臨床試驗(yàn)的，臨床實(shí)驗(yàn)中最常見的不良反應(yīng)為頭痛、口干、厭食、失眠等、高血壓、心悸、心動(dòng)過速，具統(tǒng)計(jì)，不良反應(yīng)發(fā)生率為安慰劑組的2.4～4倍。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供右旋鹽酸西布曲明及其相應(yīng)的鹽在制藥中的用途，具體是提供右旋鹽酸西布曲明及其相應(yīng)的鹽在制備減肥藥物中的用途。
本發(fā)明對西布曲明進(jìn)行了拆分，得到Sib的R和S型光學(xué)異構(gòu)體，制備右旋西布曲明鹽及其相應(yīng)的鹽，并經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，藥物的光學(xué)異構(gòu)體可在保證藥效的同時(shí)，減少藥物的用量和副作用。鑒于R-西布曲明是目前使用的西布曲明消旋體的主要活性成分，本發(fā)明用R-西布曲明作為藥物給藥，能減少用藥劑量，降低藥物的副作用，也同時(shí)消除了S-西布曲明可能引起的副作用。
本發(fā)明以動(dòng)物模型為基礎(chǔ)，證實(shí)右旋西布曲明能減少大鼠的攝食量、體重、腎周脂肪和甘油三脂，并不減少膽固醇，主要是通過減少甘油三脂，來抑制其脂肪組織增長，從而減輕其體重。
本發(fā)明采用大鼠營養(yǎng)性肥胖模型和下丘腦性肥胖模型，以消旋鹽酸Sib為陽性對照藥，采用Lee’s指數(shù)、進(jìn)食量與體重變化、腎周脂肪重量與病理切片觀察、血脂變化、空腸絨毛掃描電鏡觀察及血壓變化的指標(biāo)，檢驗(yàn)鹽酸Sib消旋體與其R、S型拆分體的減肥作用。結(jié)果證實(shí)Sib消旋體及其R型光學(xué)異構(gòu)體能通過減少甘油三脂，抑制其脂肪組織增長，從而減輕其體重。其中R-西布曲明的減肥作用更強(qiáng)。
本發(fā)明通過下述方法和步驟實(shí)現(xiàn)，1，拆分西布曲明手性異構(gòu)體，制備右旋西布曲明鹽采用相應(yīng)的手性酸試劑對含氮化合物西布曲明進(jìn)行拆分，所述試劑可以選擇酒石酸及其衍生物，包括D-(+)-酒石酸、L-(-)-酒石酸、D-(+)-二苯甲酰酒石酸、L-(-)-二苯甲酰酒石酸、D-(+)-二對甲基苯甲酰酒石酸和L-(-)-二對甲基苯甲酰酒石酸，其中D-(+)-二苯甲酰酒石酸和L-(-)-二苯甲酰酒石酸為優(yōu)選。制備的右旋西布曲明鹽酸鹽包括鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、馬來酸鹽、(+)/(-)酒石酸鹽、(+)/(-)酒石酸衍生物的鹽。
2，建立肥胖大鼠模型按已知方法建立肥胖大鼠模型(中國藥理學(xué)通報(bào)。1993；9(1)75-769；中藥藥理與臨床。1988；4(2)9-13)模型1——營養(yǎng)性肥胖模型3周齡SD大鼠50g±5g，，隨機(jī)分為正常飼料組和營養(yǎng)飼料組；營養(yǎng)飼料組第1、2周每天每只給13g營養(yǎng)飼料，以后每周增加2g，連續(xù)飼養(yǎng)8周，然后隨機(jī)分為NS組、RS組、R組、S組，每組12只，雌雄各半。
模型2——下丘腦性肥胖模型SD大鼠出生一天，背部皮下注射15％谷氨酸鈉生理溶液，3mg/g體重/d，連續(xù)5天。3周后斷乳、分罐，用營養(yǎng)飼料飼養(yǎng)，不限量，自由飲水，連續(xù)8周，然后隨機(jī)分為NS組、RS組、R組、S組，每組12只，雌雄各半。
營養(yǎng)飼料配方86％基礎(chǔ)飼料、5％奶粉、7％豬油、1.5％蛋黃粉、0.5％魚肝油(上海海軍醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部飼料廠)。
3，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)Sib 24h攝食抑制ED50為5～8mg/kg，最大抑制量為10mg/kg。本實(shí)驗(yàn)采用8mg/kg的劑量，其光學(xué)異構(gòu)體采用半量，為4mg/kg，每日上午給藥，連續(xù)2周，觀察其生物等效性。
給藥過程中，觀察各組大鼠進(jìn)食量與體重變化。2周后，測定Lee’s指數(shù)、血壓、和血脂包括總膽固醇、甘油三脂，及腎周脂肪。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明西布曲明的有效部分為R-西布曲明；RS與R表現(xiàn)出明顯的降低其腎周脂肪和甘油三脂的作用。
本發(fā)明所述鹽酸西布曲明消旋體表示為RS，右旋鹽酸西布曲明表示為R，左旋鹽酸西布曲明表示為S，用前用生理鹽水(NS)溶解，RS80mg/dl；R40mg/dl；S40mg/dl，谷氨酸鈉生理鹽水溶解，濃度為15mg/dl。
所述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，由上海復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供，動(dòng)物合格證號醫(yī)動(dòng)字第02-22號。
所用實(shí)驗(yàn)器材FA2104電子天平(上海天平儀器廠)，BPM-1插入式血壓儀(寶雞市無線電二廠)，電子掃描電鏡(日立公司)、光學(xué)顯微鏡(Nikon)。
營養(yǎng)飼料組第1、2周每天每只給予13g營養(yǎng)飼料，以后每周增加2g，連續(xù)飼養(yǎng)8周，然后隨機(jī)分為NS組、RS組、R組、S組，每組12只，雌雄各半。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 拆分西布曲明手性異構(gòu)體選擇手性酸試劑D-(+)-二苯甲酰酒石酸和L-(-)-二苯甲酰酒石酸按本發(fā)明所述方法對含氮化合物西布曲明進(jìn)行拆分后，確定西布曲明光學(xué)異構(gòu)體平面結(jié)構(gòu)，通過對元素分析、核磁共振譜的分析，證實(shí)得到的2個(gè)西布曲明光學(xué)異構(gòu)體與西布曲明消旋體完全一致，說明它們的分子平面結(jié)構(gòu)是完全相同的，拆分前后未發(fā)生變化。西布曲明光學(xué)異構(gòu)體絕對構(gòu)型的判斷，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道用手性分離柱，使用同樣的色譜柱，確定了所拆分到的化合物的絕對構(gòu)型及其光學(xué)純度，用HPLC法對得到的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行了定量分析，色譜條件如下色譜柱Daicel公司OD-H手性色譜柱流動(dòng)相正己烷∶乙醇∶三氟乙酸(930∶70∶0.5)流速0.5ml/min檢測波長225nm檢測結(jié)果R-西布曲明99.6％，S-西布曲明99.8％實(shí)施例2 制備右旋西布曲明鹽30克西布曲明鹽酸鹽(消旋體)中加入NaOH溶液至pH＝8.5～9.0，用氯仿萃取3次共300ml，回收氯仿，游離的西布曲明用150ml乙酸乙酯溶解，加入含35.6克L-(-)-二苯甲酰酒石酸的乙酸乙酯溶液150ml，攪拌回流30分鐘，冷卻至室溫，析出固體，過濾。母液減壓蒸去乙酸乙酯，滴加NaOH溶液至pH＝8.5～9.0用氯仿萃取3次，回收氯仿，殘留物用乙酸乙酯溶解，加入D-(+)-二苯甲酰酒石酸的乙酸乙酯溶液，攪拌回流30分鐘，冷卻至室溫，析出固體，為R-(+)-西布曲明-D-(+)-二苯甲酰酒石酸鹽粗品，過濾后，用異丙醇重結(jié)晶，得R-(+)-西布曲明-D-(+)-二苯甲酰酒石酸鹽純品18.5克(光學(xué)純度＞99.5％，HPLC。用NaOH水溶液處理R-(+)-西布曲明-D-(+)-二苯甲酰酒石酸鹽，并用萃取，回收氯仿，得R-(+)-西布曲明游離堿，用乙醚/HCl處理，得右旋西布曲明鹽酸鹽。
元素分析C17H26ClN·HCI理論值C＝64.55；H＝8.60；N＝4.43；CI＝22.45％，實(shí)驗(yàn)值C＝64.49；H＝8.78；N＝4.55；Cl＝22.68％旋光度[α]D＝+4.47(c＝2.44，乙醇)。
實(shí)施例3 肥胖模型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)Sib 24h攝食抑制ED50為5～8mg/kg，最大抑制量為10mg/kg。本實(shí)驗(yàn)采用8mg/kg的劑量，其光學(xué)異構(gòu)體采用半量，為4mg/kg，每日上午給藥，連續(xù)2周，觀察其生物等效性。
給藥過程中，觀察各組大鼠進(jìn)食量與體重變化。2周后，測定Lee’s指數(shù)、血壓、和血脂(包括總膽固醇、甘油三脂等)、及腎周脂肪。
結(jié)果表明，給藥前，各組的體重?zé)o顯著性差異。給藥2周后，在營養(yǎng)性肥胖大鼠模型中，與NS組相比較，RS組和R組體重均有明顯下降，R與RS具有生物等效性，R組體重下降較RS組更為明顯，而S組與R組相比，存在顯著性差異，證明S無減肥作用。在下丘腦性肥胖模型上，雌性RS與R組體重較NS組有所降低，S組體重有所增加，各組雄性大鼠無明顯差異。各給藥組攝食量與NS組比較均有明顯下降，其中以R組最為明顯，其次為RS組。兩模型比較，營養(yǎng)性肥胖模型S組攝食量的減少較下丘腦性肥胖模型小。各組動(dòng)物L(fēng)ee’s指數(shù)均無明顯差異。
試驗(yàn)證實(shí)，兩種模型比較，下丘腦模型各組腎周脂肪明顯高于營養(yǎng)性肥胖大鼠模型。與NS組比較，營養(yǎng)性肥胖模型和下丘腦性肥胖模型RS、R組腎周脂肪均明顯減少，R組腎周脂肪減少較RS組更為明顯。各組給藥后甘油三脂均有下降，以R組最為明顯。給藥后各組間的總膽固醇的含量未顯示明顯差異。模型組脂肪細(xì)胞體積增大，單位視野下脂肪細(xì)胞數(shù)減少，RS組、R組脂肪細(xì)胞體積縮小，單位視野下細(xì)胞數(shù)增多，R組更為明顯，而S組脂肪細(xì)胞體積未見明顯縮小，細(xì)胞數(shù)相對較少。兩模型組相比，Sib對實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠模型的作用更為明顯。掃描電鏡結(jié)果，各組大鼠微絨毛數(shù)量及直徑均未顯示明顯差異。結(jié)果說明Sib主要作用于脂肪組織，通過減少甘油三脂的含量來減輕體重。2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體的活性不同，其中R-西布曲明具有減肥作用，而S-西布曲明幾乎沒有。
表.1 實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠模型給藥后各組體重(x±s，n＝6)組別 營養(yǎng)性肥胖模型 下丘腦性肥胖模型♀ ♂ ♀ ♂NS276.50±13.18453.80±38.10219.25±25.89364.70±53.69RS254.75±12.55408.75±31.20210.17±5.20 385.50±77.60(*p＝0.020) (*p＝0.049) (*p＝0.292) (*p＝0.318)R 236.50±15.75386.75±43.99203.00±18.68353.80±73.42(*p＝0.002) (*p＝0.022) (*p＝0.174) (*p＝0.398)(#p＝0.060) (#p＝0.222) (#p＝0.277) (#p＝0.263)S 263.17±11.09468.33±22.23239.67±28.10333.00±48.09(*p＝0.098) (*p＝0.288) (*p＝0.182) (*p＝0.194)(#p＝0.028) (#p＝0.017) (#p＝0.045) (#p＝0.321)(△p＝0.028)(△p＝0.017)(△p＝0.045)(△p＝0.321)*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表2.實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠模型給藥2周的飼料總消耗量(n＝6)組別 營養(yǎng)性肥胖模型(g)下丘腦性肥胖模型(g)♀ ♂ ♀ ♂NS228.14 322.67 181.16 281.08RS192.5 270.61 130.07 225.6(*p＝0.025)(*p＝0.028)(*p＝0.003)(*p＝0.128)R 186.93 231.28 129.02 207.38(*p＝0.065)(*p＝0.001)(*p＝0.013)(*p＝0.001)(#p＝0.335)(#p＝0.019)(#p＝0.312)(#p＝0.007)S 205.38 311.45 145.7 232.7(*p＝0.036)(*p＝0.148)(*p＝0.022)(*p＝0.003)(#p＝0.217)(#p＝0.127)(#p＝0.183)(#p＝0.059)(△p＝0.400) (△p＝0.001) (△p＝0.355) (△p＝0.118)*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.3 實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠模型給藥后各組腎周脂肪重量(x±s，n＝6)組別營養(yǎng)性肥胖模型下丘腦性肥胖模型♀ ♂ ♀ ♂NS2.97±1.33 3.61±0.82 4.34±3.28 5.16±0.96RS1.06±0.24 2.07±0.47 2.38±1.20 3.64±0.95(*p＝0.007)(*p＝0.185)(*p＝0.012)(*p＝0.033)R 0.97±0.49 1.84±0.62 1.74±0.87 2.91±0.93(*p＝0.013)(*p＝0.085)(*p＝0.020)(*p＝0.013)(#p＝0.367)(#p＝0.220)(#p＝0.301)(#p＝0.179)S 1.72±0.46 2.79±0.36 3.14±1.07 3.76±0.61(*p＝0.088)(*p＝0.254)(*p＝0.064)(*p＝0.039)(#p＝0.017)(#p＝0.210)(#p＝0.025)(#p＝0.428)(△p＝0.048) (△p＝0.044) (△p＝0.024) (△p＝0.128)*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.4.1營養(yǎng)性肥胖大鼠模型給藥前后血脂變化

□vs給藥前；*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.4.2 下丘腦性肥胖大鼠模型給藥前后血脂變化

□vs給藥前；*vs NS組；#vs RS組；△vs R組表.5實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠模型給藥后各組單位視野下脂肪細(xì)胞數(shù)變化(×400)組別 營養(yǎng)性肥胖模型下丘腦性肥胖模型♀ ♂ ♀ ♂NS25.33±1.2531.00±2.1617.67±1.2525.33±2.87RS36.00±2.4541.33±2.1523.00±2.1635.33±3.86R 40.33±1.2545.67±3.3023.33±2.8745.33±3.40S 27.67±2.0526.67±2.8718.33±1.2527.00±2.4權(quán)利要求
1.右旋鹽酸西布曲明及其相應(yīng)的鹽，在制備減肥藥物中的用途。
2.權(quán)利要求1所述的右旋鹽酸西布曲明及其相應(yīng)的鹽，其特征是所述(+)-西布曲明的鹽包括鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、馬來酸鹽、(+)/(-)酒石酸鹽、(+)/(-)酒石酸衍生物的鹽。
3.權(quán)利要求1所述的右旋鹽酸西布曲明及其相應(yīng)的鹽，其特征是所述鹽是(+)-西布曲明鹽酸鹽。
4.(+)-西布曲明鹽酸鹽在制備減肥藥物中的用途。
5.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是減少甘油三脂。
6.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是減少腎周脂肪。
7.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是減少脂肪和脂肪組織引起體重減輕產(chǎn)生減肥。
8.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是減少攝食量引起體重減輕。
9.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是用于所述用途的劑量為1～30mg/天。
10.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是用于所述用途的劑量為2～15mg/天。
11.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是用于所述用途的劑量為3～10mg/天。
12.權(quán)利要求4所述的用途，其特征是用于所述用途的劑量為4～8mg/天。
全文摘要
本發(fā)明屬化學(xué)藥物領(lǐng)域，涉及右旋鹽酸西布曲明及其相應(yīng)的鹽在制備減肥藥物中的用途。本發(fā)明拆分西布曲明得Sib的R和S型光學(xué)異構(gòu)體，并制備右旋西布曲明鹽及其相應(yīng)的鹽。經(jīng)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)證實(shí)，用R－西布曲明作為藥物給藥，能減少用藥劑量，降低藥物的副作用，同時(shí)消除S－西布曲明引起的副作用。本發(fā)明右旋西布曲明能減少大鼠的攝食量、體重、腎周脂肪和甘油三脂，并不減少膽固醇，可用于制備減少甘油三脂、腎周脂肪，抑制脂肪組織增長及減少攝食量減輕體重的減肥藥物。
文檔編號A61P3/00GK1554333SQ20031012286
公開日2004年12月15日 申請日期2003年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月26日
發(fā)明者俞培忠, 王偉芳, 潘家祜 申請人:復(fù)旦大學(xué)