專利名稱：4－(苯基－(哌啶－4－基)－氨基)－苯甲酰胺衍生物及其在治療疼痛、焦慮癥或胃腸道 ...的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新化合物、其制備方法、用途以及包含新化合物的藥用組合物。此新化合物用于治療目的，尤其用于治療疼痛、焦慮癥和功能性胃腸道疾病。
背景技術：
δ受體被確認在許多身體機能如循環(huán)系統(tǒng)和疼痛系統(tǒng)中起作用。因而δ受體配體可能具有止痛藥物和/或抗高血壓藥物的潛在用途。還證實δ受體配體有免疫調節(jié)活性。
目前充分鑒定了至少三種不同的阿片受體(μ、δ和κ)，顯然三種阿片受體存在于包括人類在內的許多物種的中樞系統(tǒng)和外周神經系統(tǒng)。當在各種動物模型中激活一種或多種上述受體時，可觀察到痛覺缺失。
目前可應用的選擇性阿片樣物質δ配體本質上幾乎無一例外地是肽，不適于經全身途徑給藥。一個非肽類δ激動劑的例子是SNC80(Bilsky E.J.等，Joumal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics，273(1)，pp.359-366(1995))。但是仍然需要選擇性提高而副作用減少的選擇性δ-激動劑。
因此，本發(fā)明要解決的問題是尋找與目前的μ激動劑相比，不僅止痛效果增強而且副作用減少以及提高全身性作用的新止痛藥物。
已經鑒定和現(xiàn)有技術領域已有的止痛藥物存在許多缺點，它們的藥代動力學差，當全身途徑給藥時沒有止痛作用。同時，有資料證明，現(xiàn)有技術中的優(yōu)選δ激動劑化合物全身給藥時表現(xiàn)出明顯的驚厥作用。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)某些化合物在多種特性上表現(xiàn)出驚人改善，即在δ-激動劑效力、體內效力、藥代動力學、生物利用度、體外穩(wěn)定性方面增強和/或毒性降低。
發(fā)明概述本發(fā)明的新化合物用以下結構式I定義 其中R1選自以下任意一個基團(i)苯基； (ii)吡啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基
(v)咪唑基 (vi)三唑基 (vii)吡咯基 (viii)噻唑基 (ix)吡啶基-N-氧化物 其中各R1苯環(huán)和R1雜芳族環(huán)可任選并獨立地被選自以下的1、2或3個取代基進一步取代直鏈和支鏈C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。苯環(huán)和雜芳族環(huán)上的取代可發(fā)生在所述環(huán)系的任何位置。
當R1苯環(huán)和R1雜芳族環(huán)被取代時，優(yōu)選的取代基選自CF3、甲基、碘、溴、氟和氯中任何一個基團。
本發(fā)明的另一個實施方案是這樣的式I化合物，其中R1同上定義，各個R1苯環(huán)和R1雜芳族環(huán)可以獨立被甲基進一步取代。
本發(fā)明的又一個實施方案是這樣的式I化合物，其中R1為苯基、吡咯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基，R1苯環(huán)或R1雜芳族環(huán)上任選含有1個或2個優(yōu)選取代基。
本發(fā)明的再一個實施方案是這樣的式I化合物，其中R1為苯基、吡咯基或吡啶基，R1苯環(huán)或R1雜芳族環(huán)上任選含有1個或2個優(yōu)選取代基。
本發(fā)明的又一個實施方案是這樣的式I化合物，其中R1為噻吩基或呋喃基，R1雜芳族環(huán)上任選含有1個或2個優(yōu)選取代基。
式I化合物的鹽和對映異構體，包括對映異構體的鹽也屬于本發(fā)明范圍。
流程1的反應步驟b(見下頁)如下進行用鈀催化劑如三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)(Pd2(dba)3)，在堿(例如叔丁醇鈉)和膦配體(例如雙-二苯基膦烷基-二甲基-9H-氧雜蒽(xantphos)存在下，使通式II中間體化合物 其中PG為氨基甲酸乙酯保護基團(例如Boc和CBZ)，或為芐基或取代的芐基保護基團(例如2，4-二甲氧基芐基)；與3-溴苯甲腈反應得到通式III化合物，
然后在標準條件下脫去保護，在堿性條件下水解，并用以下任意一組化合物烷基化獲得通式I化合物i)通式為R1-CH2-X的化合物[其中R1同上定義，X為鹵素，優(yōu)選溴或氯]以及合適的堿，或者ii)通式為R1-CHO的化合物[其中R1同上定義]以及合適的還原劑。
用于標準烷基化步驟i)的合適堿包括但不限于三乙胺和碳酸鉀。
用于標準還原步驟ii)的合適還原劑包括但不限于氰基硼氫化鈉和三乙酰氧基硼氫化鈉。
反應步驟b也可按照流程2(見下頁)進行用鈀催化劑如Pd2(dba)3，在堿(例如叔丁醇鈉)和膦配體(例如xantphos)存在下，使通式IV中間體化合物 其中PG為氨基甲酸乙酯保護基團(例如Boc和CBZ)，或為芐基或取代的芐基保護基團(例如2，4-二甲氧基芐基)；與N，N-二乙基-4-溴苯甲酰胺反應得到以上通式III化合物。
本發(fā)明新化合物可用于治療目的，尤其是用于治療各種疼痛，例如慢性疼痛、神經性疼痛、急性疼痛、癌痛、類風濕性關節(jié)炎性疼痛、偏頭痛、內臟痛等。但上列類型疼痛不應解釋為對疼痛的完全列舉。
本發(fā)明化合物可用作免疫調節(jié)劑，尤其可用于自身免疫疾病(如關節(jié)炎)；皮膚移植、器官移植及類似的外科需要；膠原性疾病；各種變態(tài)反應；用作抗腫瘤藥和抗病毒藥。
本發(fā)明化合物可用于所述范例中存在或涉及阿片受體退變或功能障礙的疾病。包括在診斷技術和成像如正電子發(fā)射斷層成像(PET)中應用同位素標記形式的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物可用于治療腹瀉、抑郁癥、焦慮癥和壓力性疾病(例如創(chuàng)傷后壓力癥、恐慌癥、廣泛性焦慮癥、社交恐懼癥和強迫癥)、尿失禁、各種精神疾病、咳嗽、肺水腫、各種胃腸道疾病(例如便秘、功能性胃腸道疾病如腸易激綜合征和功能性消化不良)、帕金森氏病和其它運動障礙、創(chuàng)傷性腦損傷、中風、心肌梗塞后心臟保護、脊柱損傷和藥物成癮(包括酒精、尼古丁、阿片樣物質和其它藥物濫用)以及交感神經系統(tǒng)疾病如高血壓。
本發(fā)明化合物可用作在全身麻醉和監(jiān)控麻醉護理時使用的止痛藥物。常常聯(lián)合使用不同特性的藥物，以達到維持麻醉狀態(tài)(例如記憶缺失、痛覺缺失、肌肉松弛和鎮(zhèn)靜)所需的平衡作用。聯(lián)合用藥包括吸入麻醉劑、安眠藥、抗焦慮藥、神經肌肉阻滯劑和阿片樣物質。
應用任何上式I化合物生產用于治療上述任何疾病的藥物也屬于本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明再一方面是治療患有任何上述疾病的患者的治療方法，其中對需要這種治療的患者給予有效量的上式I化合物。
本發(fā)明另一方面是通式II、III和IV的中間體，
其中PG為氨基甲酸乙酯保護基團如Boc和CBZ，或為芐基或取代的芐基保護基團如2，4-二甲氧基芐基。
本發(fā)明的再一方面是式X中間體， 其中R1同上式I中的定義。
在以下流程4描述的另一種合成途徑中，以下流程1的步驟a和b，或流程2的步驟a和b用“一罐法”完成，其中不分離出通式II或IV中間體。采用此方案，最初的鈀催化偶合反應按照流程1和2中步驟a的反應的相同方式進行。但是，反應完成后，并不分離出式II或IV中間體，而是加入第二種芳基溴和額外的堿(叔丁醇鈉)，使用步驟b(流程1&2)中的溫度條件，獲得以上通式III的產物。
在另一種替代合成途徑中，流程5中反應步驟b(見下文)如下進行用鈀催化劑如三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)[Pd2(dba)3]，在堿(例如叔丁醇鈉)和膦配體(例如雙-二苯基膦烷基-二甲基-9H-氧雜蒽(xantphos)存在下，使通式V中間體化合物
其中PG為氨基甲酸乙酯或芐基樣保護基團如Boc，與N，N-二乙基-4-溴苯甲酰胺反應得到通式VI化合物， 然后脫去保護并通過上述方法烷基化(用通式R1-CHO化合物還原，或者直接使用通式R1-CH2-X化合物)，接著在標準條件下通過以下方式將酮縮醇官能團轉化為伯酰胺i)將酮縮醇水解為醛(式VII)，ii)接著將醛氧化為相應的羧酸(式VIII)，iii)然后用氯化銨將其酰胺化為伯酰胺得到式I化合物。
可用于標準水解步驟i)的合適水解條件包括但不限于含鹽酸水溶液的四氫呋喃。
氧化步驟ii)的合適條件包括但不限于在過量2-甲基-2-丁烯存在下，在磷酸二氫鈉水溶液和亞氯酸鈉中于0℃下攪拌。
酰胺化步驟iii)的合適條件包括但不限于在偶合劑如苯并三唑-1-基氧基-三磷鎓六氟磷酸鹽(下文稱為Py-BOP)存在下，用過量氯化銨處理。
制備方法實施例現(xiàn)在通過以下流程和實施例更詳細地描述本發(fā)明，但不應理解為對本發(fā)明的限制。
流程1合成中間體1(方法1)流程1
方法1a(化合物3)4-(4-二乙基氨基甲?；?苯基氨基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯包含N，N-二乙基-4-溴苯甲酰胺(5.33g；1.0eq)和2(5.0g；1.2eq)的無水甲苯(80mL)溶液的干燥燒瓶中加入BINAP(390mg；0.03eq)、醋酸鈀(94mg；0.02eq)和叔丁醇鈉(2.80g；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至80℃。在2小時后將溶液冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌一次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含65％-70％乙酸乙酯的己烷洗脫。使所得殘余物在乙酸乙酯/己烷中成漿狀，過濾收集。獲得黃色固體(5.169g；66％收率)。
方法1b(化合物4)[(3-氰基-苯基)-(4-二乙基氨基甲酰基-苯基)-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯包含胺3(5.10g)的無水甲苯(80mL)溶液的干燥燒瓶中加入3-溴苯甲腈(3.47g；1.4eq)、xantphos(472mg；0.06eq)、Pd2(dba)3(374mg；0.03eq)和叔丁醇鈉(1.83g；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至110℃。在21小時后將溶液冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌一次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含50％乙酸乙酯的己烷洗脫。獲得淺黃色泡沫狀產物(5.60g；86％收率)。
方法1c(化合物1)[(3-氰基-苯基)-哌啶-4-基-氨基]-N，N-二乙基-苯甲酰胺4(5.43g)的無水二氯甲烷(70mL)溶液中加入三氟乙酸(8.8mL；10.0eq)。將反應物在氮氣氛下攪拌過夜。溶液用2N氫氧化鈉洗滌，水溶液用二氯甲烷萃取兩次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物通過二氧化硅小墊提純，用含50％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得無色泡沫狀產物(3.159g；74％收率)。
流程2合成中間體1(方法2) 方法2a(化合物5)4-(3-氰基-苯基氨基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯包含胺2(5.0g；1.2eq)和3-溴苯甲腈(3.79g；1.0eq)的無水甲苯(80mL)溶液的干燥燒瓶中加入BINAP(390mg；0.03eq)、醋酸鈀(94mg；0.02eq)和叔丁醇鈉(2.8g；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至80℃，攪拌24h。將溶液冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌兩次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用100％己烷至含30％乙酸乙酯的己烷洗脫。獲得無色油狀物(5.12g；82％收率)。
方法2b(化合物4)4-[(3-氰基-苯基)-(4-二乙基氨基甲酰基-苯基)-氨基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯含胺5(5.12g)的無水甲苯(80mL)溶液的燒瓶中加入N，N-二乙基-4-溴苯甲酰胺(6.10g；1.4eq)、xantphos(590mg；0.06eq)、Pd2(dba)3(467mg；0.03eq)和叔丁醇鈉(2.29g；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至110℃，攪拌過夜。在20h后，反應物用乙酸乙酯/水稀釋，通過硅藻土過濾。分離出有機物，然后用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。殘余物裝填于二氯甲烷中的色譜柱，用100％己烷至含60％乙酸乙酯的己烷洗脫。獲得橙色泡沫狀產物(6.67g；82％收率)。
方法2c(化合物1)[(3-氰基-苯基)-哌啶-4-基-氨基]-N，N-二乙基-苯甲酰胺4(5.43g)的無水二氯甲烷(70mL)溶液中加入三氟乙酸(8.8mL；10.0eq)。將反應物在氮氣氛下攪拌過夜。溶液用2N氫氧化鈉洗滌，水溶液用二氯甲烷萃取兩次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物通過二氧化硅小墊提純，用含50％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得無色泡沫狀產物(3.159g；74％收率)。
流程3合成實施例1 中間體74-(1-芐基-哌啶-4-基氨基)-N，N-二乙基-苯甲酰胺含1-芐基-哌啶-4-基胺6(5.0mL；1.2eq)的無水甲苯(75mL)溶液的干燥燒瓶中加入N，N-二乙基-4-溴苯甲酰胺(5.24g；1.0eq)、BINAP(383mg，0.03eq)、醋酸鈀(92mg；0.02eq)和叔丁醇鈉(2.75g；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至80℃。在2h后，將反應物冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌兩次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含5％至10％甲醇的二氯甲烷洗脫。所得殘余物在乙酸乙酯中煮沸，冷卻，過濾收集產物。獲得淺黃色固體(5.724g；77％收率)。
中間體8[(1-芐基-哌啶-4-基)3-氰基-苯基]-氨基]-N，N-二乙基-苯甲酰胺包含胺7(1.767g；1.0eq)的無水甲苯(30mL)的干燥燒瓶中加入3-溴苯甲腈(1.234g；1.4eq)、xantphos(224mg；0.08eq)、Pd2(dba)3(177mg；0.04eq)和叔丁醇鈉(650mg；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至110℃過夜。在16h后，將溶液冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌一次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物首先用快速色譜法提純，用100％乙酸乙酯洗脫。將其再次提純，用含2.5％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得黃色泡沫狀產物(1.665g；73％)。
實施例13-[(1-芐基-哌啶-4-基)-(4-二乙基氨基甲酰基-苯基)-氨基]-苯甲酰胺8(1.58g)的叔丁醇(50mL)溶液中加入氫氧化鉀(475mg；2.5eq)。將反應物加熱至回流2h，然后冷卻。溶液用二氯甲烷稀釋，用水洗滌一次。然后中和水溶液，用二氯甲烷萃取兩次。合并的有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含5％至10％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得淺黃色泡沫狀產物(1.556g；95％收率；純度＞99％)。將殘余物懸浮于乙醚(15ml)，加入足量的二氯甲烷獲得均勻溶液。加入1N HCl/乙醚(4.9mL；～1.5eq)，在30min后，濃縮懸浮液，高真空干燥固體過夜。
中間體8的另一種合成法N，N-二乙基-4-[[(3-氰基苯基)[1-(苯基甲基)-4-哌啶基]氨基]苯甲酰胺流程4用“一罐法”進行兩個連續(xù)鈀催化的偶合反應 1.07g 3-溴苯甲腈(5.88mmol)的15ml無水甲苯溶液中加入1.2mL 4-氨基-N-芐基哌啶、6(5.89mmol)、293mg外消旋BINAP(0.47mmol)、215mg三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)(0.23mmol)和790mg叔丁醇鈉(8.23mmol)。反應物在氮氣氛下于80℃加熱4h。將反應物冷卻至室溫，加入2.26g N，N-二乙基-4-溴苯甲酰胺(8.83mmol)和790mg叔丁醇鈉(8.23mmol)，將反應物加熱至回流。在20h后將溶液冷卻至室溫，將反應物用乙酸乙酯(50ml)稀釋，加入水(30ml)?；旌衔锿ㄟ^硅藻土過濾，然后分離出有機層，用硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含2％二氯甲烷的甲醇洗脫獲得橙色油狀物(2.54g，5.45mmol；93％)。
(400MHz，CDCl3)δH 1.36(br s，6H，CH3)；1.44-1.54(m，2H，CH2)；1.91(d，J＝12.5Hz，2H，CH2)；2.12(t，J＝12Hz，2H，NCH2)；2.97(d，J＝12Hz，2H，NCH2)；3.26-3.60(m，4H，NCH)；3.51(s，2H，NCH2Ar)；3.79-3.86(m，1H，NCH)；6.86-6.89(m，1H，Ar-H)；6.92-6.97(m，2H，Ar-H)；7.12-7.15(m，1H，Ar-H)；7.23-7.32(m，6H，Ar-H)；7.37-7.41(m，3H，Ar-H)。
流程5經由中間體12的另一種合成法 中間體9(1-芐基-哌啶-4-基)-(3-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基-苯基)-胺含2-(3-溴苯基)-1，3-二氧戊環(huán)(1.0mL；1.0eq)和胺6(1.6mL；1.2eq)的無水甲苯(20mL)溶液的干燥燒瓶中加入BINAP(124mg；0.03eq)、醋酸鈀(30mg；0.02eq)和叔丁醇鈉(0.89g；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至80℃。在2h后將溶液冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌一次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得橙色油狀物(2.035g；91％收率)。
中間體10[(1-芐基-哌啶-4-基)-(3-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基-苯基)-氨基]-N，N二乙基-苯甲酰胺包含胺9(7.61g)的無水甲苯(140mL)溶液的干燥燒瓶中加入芳基溴(8.07g；1.4eq)、xantphos(780mg；0.06eq)、Pd2(dba)3(619mg；0.03eq)和叔丁醇鈉(3.03g；1.4eq)。將反應物在氮氣氛下加熱至110℃。在23h后將溶液冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌一次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含3％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得橙色油狀物(10.16g；88％收率).
中間體11[(1-芐基-哌啶-4-基)-(3-甲?；?苯基)-氨基]-N，N-二乙基-苯甲酰胺縮醛10(10.16g)的四氫呋喃(270mL)溶液中加入2N HCl溶液(110mL)。在室溫下16h后，加入二氯甲烷(200mL)，水溶液層用飽和碳酸氫鈉溶液中和。移出有機層，水層用二氯甲烷(2×200mL)萃取。合并的有機萃取液用硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮，殘余物用快速色譜法提純，用乙酸乙酯洗脫。獲得橙色油狀物(8.31g；89％收率)。
中間體123-[(1-芐基-哌啶-4-基)-(4-二乙基氨基甲酰基-苯基)-氨基]-苯甲酸醛11(490mg；1.0eq)的叔丁醇(25mL)溶液中加入2-甲基-2-丁烯(1.1mL；10.0eq)，將溶液冷卻至0℃。加入磷酸二氫鈉(1.30g；9eq)和亞氯酸鈉(1.06g；9eq)的水(8mL)溶液，將反應物在0℃攪拌30min。除去叔丁醇，水溶液用二氯甲烷(5×15mL)萃取。合并的有機萃取液用硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮，殘余物用快速色譜法提純，用含15％至30％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得粉紅色泡沫狀產物(340.5mg；67％收率)。
實施例13-[(1-芐基-哌啶-4-基)-(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-氨基]-苯甲酰胺(替代合成法)。
酸12(420mg；1.0eq)的DMF(8mL)溶液中加入pyBOP(675mg；1.5eq)、HOBt(175mg；1.5eq)、二異丙基乙胺(0.6mL；4.0eq)和氯化銨(93mg；2eq)。在20h后，在室溫下濃縮反應物。將殘余物溶于乙酸乙酯(30mL)，用水(2×20mL)和飽和碳酸氫鈉(20mL)洗滌。有機層用硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮，殘余物用快速色譜法提純，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得淺粉紅色油狀物(271.8mg；65％收率)。
另外的實施例經由下述常規(guī)步驟合成。
A.還原性胺化中間體1 胺1的無水四氫呋喃(THF)或1，2-二氯乙烷溶液中加入醛(1-1.5eq.)，然后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1-1.6eq.)。將反應物在室溫、氮氣氛下長時間(6-48h)攪拌以保證反應完全。然后將反應混合物用標準后續(xù)步驟以及標準提純法處理。THF或1，2-二氯乙烷用量并非決定性的。優(yōu)選相當于約1mL/30mg的用量。
以下合成實施例2的步驟2A為典型的例子。
B.水解中間體氰基化合物 氰基中間體的叔丁醇溶液中加入經研磨的氫氧化鉀(KOH)(2.5eq.)，將所得混合物加熱至回流約2h。然后冷卻混合物至室溫，將其用標準后續(xù)步驟和標準提純法處理。叔丁醇用量并非決定性的。優(yōu)選相當于約1mL/30mg的用量。
以下合成實施例2的步驟2B為典型的例子。
實施例23-[[(2，4-二氯-芐基)-哌啶-4-基]-(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-氨基]-苯甲酰胺 2A{(3-氰基-苯基)-[1-(2，4-二氯-芐基)-哌啶-4-基]-氨基}-N，N-二乙基-苯甲酰胺胺1(556mg)的無水四氫呋喃(15mL)溶液中加入2，4二氯苯甲醛(285mg；1.1eq)。在室溫下15min后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(407.5mg；1.3eq)，在室溫、氮氣氛下繼續(xù)攪拌。在23h后，反應物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用二氯甲烷萃取三次。有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮(LC/MS顯示剩下8％初始原料)。殘余物用快速色譜法提純，用含2％至4％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得無色泡沫狀產物(644mg；81％收率)。
2B3-[[1-(2，4-二氯-芐基)-哌啶-4-基]-(4-二乙基氨基甲酰基-苯基)-氨基]-苯甲酰胺13(644mg)的叔丁醇(20mL)溶液中加入經研磨的氫氧化鉀(169mg；2.5eq)，將反應物加熱至回流90min，然后冷卻，用二氯甲烷稀釋。溶液用水洗滌一次，分離出有機物。水層用2N HCl中和，用二氯甲烷萃取兩次。合并的有機物用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。殘余物用快速色譜法提純，用含5％甲醇的二氯甲烷洗脫。獲得無色泡沫狀產物(610mg；92％收率；純度＞99％)。將產物懸浮于乙醚(12mL)，加入足量的二氯甲烷獲得均勻溶液。加入1N HCl/乙醚(1.7mL；～1.5eq)，在2h后，濃縮懸浮液，高真空干燥固體。
其它實施例按類似方法制備。合成的實施例的分析數(shù)據(jù)在隨后幾頁的表1中列出。
表1各合成的實施例的分析數(shù)據(jù)
表1(續(xù))各合成的實施例的分析數(shù)據(jù)
表1(續(xù))各合成的實施例的分析數(shù)據(jù)
表1(續(xù))各合成的實施例的分析數(shù)據(jù)
表1(續(xù))各合成的實施例的分析數(shù)據(jù)
藥用組合物本發(fā)明的新化合物可口服、舌下、肌內、皮下、局部、鼻內、腹膜內、胸腔內、靜脈內、硬膜外、鞘內、腦室內給藥及注射入關節(jié)給藥。
優(yōu)選給藥途徑為口服、靜脈內或肌內給藥。
為具體患者確定最佳個體給藥方案和劑量水平時，其劑量取決于給藥途徑、疾病嚴重性、患者的年齡和體重以及主治醫(yī)師通?？紤]的其它因素。
為了用本發(fā)明化合物制備藥用組合物，藥學上可接受的惰性載體既可為固體也可為液體。固體制劑包括粉劑、片劑、可分散顆粒劑、膠囊劑、扁囊劑和栓劑。
固體載體可以為能起稀釋劑、調味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑或片劑崩解劑作用的一種或多種物質；也可為包襄材料。
為粉劑時，載體為磨成細粉的固體，它可與磨成細粉的活性成分混合。為片劑時，活性成分與具有必要粘合性的載體按適當比例混合，并壓制成需要的形狀和規(guī)格。
為了制備栓劑組合物，首先熔解低熔點蠟如脂肪酸甘油酯和可可脂的混合物，并通過例如攪拌將活性成分分散于其中。然后將熔融的均勻混合物傾入常用規(guī)格模型中，使其冷卻固化。
合適的載體有碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、乳糖、糖、果膠、糊精、淀粉、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等。
鹽包括但不限于藥學上可接受的鹽。本發(fā)明范圍的藥學上可接受的鹽的實例包括乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、glucaptate、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰阿散酸鹽、己基間苯二酚鹽、哈胺(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、溴代甲烷、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽(撲酸鹽)、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、8-氯茶堿鹽、三乙基碘和苯乍生。
本發(fā)明范圍中藥學上不可接受的鹽的實例包括氫碘酸鹽、高氯酸鹽、四氟硼酸鹽。由于在物理和/或化學特性方面的優(yōu)點(例如結晶性)，藥學上不可接受的鹽也可能是有用的。
藥學上可接受的鹽優(yōu)選為鹽酸鹽、硫酸鹽和酒石酸氫鹽。特別優(yōu)選鹽酸鹽和硫酸鹽。
術語組合物包括所述活性成分與作為載體的包囊材料的制劑，在包囊材料提供的膠囊中活性成分(與或不與其它載體一起)被所述載體所包圍，由此使載體與活性成分結合。同樣，扁囊劑也包括在術語組合物內。
片劑、粉劑、扁囊劑和膠囊劑可用作適于口服給藥的固體劑型。
液體組合物包括溶液、懸浮液和乳液。適于胃腸外給藥的液體制劑實例有所述活性化合物的無菌水溶液或水-丙二醇溶液。也可將液體組合物制成聚乙二醇水溶液。
通過將活性組分溶解于水中并根據(jù)需要加入適當?shù)闹珓?、調味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑，可制備口服給藥的水溶液劑。通過將微細活性組分和粘性原料如天然合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和藥用制劑領域已知的其它懸浮劑分散于水中，可制備口服用藥的水性懸浮液。
優(yōu)選的藥用組合物是單位劑型。為單位劑型時，所述組合物分成含適量活性組分的單位劑量。所述單位劑型可為有包裝的制劑，包裝中包含離散量的單位制劑，例如有包裝的片劑、膠囊劑以及用小瓶或安瓿包裝的粉劑。單位劑型也可為膠囊劑、扁囊劑或片劑本身，或者它可為適當數(shù)量的任何上述包裝形式。
生物學評價體外模型細胞培養(yǎng)A.在37℃、5％CO2下，在含有無鈣DMEM、10％FBS、5％BCS、0.1％Pluronic F-68和600μg/ml遺傳霉素的振搖瓶中，懸浮培養(yǎng)表達克隆的人μ、δ和κ受體和新霉素抗性的人293S細胞。
B.稱量小鼠和大鼠的大腦重量，用冰冷的PBS(含有2.5mMEDTA，pH7.4)清洗。在冰冷的裂解緩沖液中(50mM Tris，pH7.0，2.5mMEDTA，臨用前用0.5M苯甲磺酰氟的DMSO乙醇母液加入至0.5mM)用polytron對大腦勻化15秒(小鼠)或30秒(大鼠)。
膜制備沉淀細胞，將其重新懸浮于裂解緩沖液中(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，臨用前用0.1M PMSF的乙醇母液加入至0.1mM)，在冰上溫育15分鐘，然后用polytron勻化30秒。在4℃下以1000g(最大)離心該懸浮液10分鐘。將其上清液收集于冰上，重新懸浮沉淀后如上離心。將兩次離心所得的上清液混合，以46,000g(最大)離心30分鐘。將沉淀物重新懸浮于冷Tris緩沖液(50mM Tris/Cl，pH7.0)中，再離心。將最終的沉淀物重新懸浮于膜緩沖液(50mM Tris、0.32M蔗糖、pH7.0)中。聚丙烯管中的等份物(1ml)用干冰/乙醇冷凍并在-70℃貯存待用。用SDS通過改良的Lowry測定法檢測蛋白濃度。
結合測定于37℃解凍膜，并用冰冷卻，通過25-號針頭三次，稀釋入結合緩沖液(50mM Tris、3mM MgCl2、1mg/ml BSA(Sigma A-7888)，pH7.4，稀釋液經0.22m濾紙過濾，并向其中加入5μg/ml抑肽酶、10μM苯丁抑制素、10μM diprotin A(無DTT)后在4℃貯存)。將100μl等份液加入冰凍的裝有100μl適當放射性配體和100μl各種濃度的受試化合物的12×75mm聚丙烯管中。分別測定包含和不含10μM納洛酮的總的結合(TB)和非特異性(NS)結合。將所述試管渦旋并于25℃溫育60-75分鐘，之后，快速真空-過濾內容物，以約12ml/管的冰冷洗滌緩沖液(50mMTris、pH7.0、3mMMgCl2)通過GF/B濾紙(Whatman)(在0.1％聚環(huán)乙亞胺中預浸漬至少2小時)洗滌。將濾紙在包含6-7ml閃爍液的微管中浸漬至少12小時后，用β計數(shù)器測量保留在濾紙上的放射性(dpm)。如果所述測定在96-位深孔板中進行，用96位PEI-浸漬的單濾紙(96-place PEI-soaked unifilters)過濾，將所述單濾紙用3×1ml洗滌緩沖液洗滌并于55℃烤箱中干燥2小時。加入50μl MS-20閃爍液/孔后，濾板用TopCount(Packard)計數(shù)。
功能分析通過檢測化合物受體復合物刺激GTP與偶合受體的G-蛋白結合的程度來測量本化合物的激動劑活性。在GTP結合分析中，GTP[γ]35S與受試化合物以及來自表達克隆的人阿片受體的HEK-293S細胞的細胞膜或來自于勻化的大鼠和小鼠大腦的細胞膜相混合。激動劑刺激GTP[γ]35S結合在這些膜上。各化合物的EC50值和Emax值根據(jù)劑量-反應曲線確定。δ拮抗劑納屈吲哚引起的劑量反應曲線右移用來驗證激動劑活性是通過δ受體介導的。
將所述板渦旋并在室溫下溫育60min，用配置Tomtec或Packard收獲器的Unifilters GF/B(在水中預浸漬)過濾，使用4ml洗滌緩沖液(50mM Tris，5mM MgCl2，50mM NaCl，pH7.0)。將濾紙在55℃干燥1h。在加入65μl/孔MS-20閃爍液后，放射性(cpm)用TopCount(Packard)計數(shù)。存在配體的刺激作用(SB)表達為對照激動劑的Emax百分數(shù)。在刺激性放射配體結合中配體的EC50值用ActivityBase計算。報告受試配體的至少三個劑量-反應曲線的EC50和％Emax的平均值±S.E.M.。
用于大鼠大腦GTP的方法于37℃解凍大鼠大腦細胞膜，通過25-號鈍針頭三次，稀釋入GTPγS結合液(50mM Hepes，20mM NaOH，100mM NaCl，1mMEDTA，5mM MgCl2，pH7.4，加入新的1mM DTT，0.1％BSA)。將120μM GDP最后加入膜稀釋液。各化合物的EC50和Emax用10點劑量-反應曲線評價，10點劑量-反應曲線是用每孔300μL含有適當量的膜蛋白(20μg/孔)以及100000-130000dpm GTPγ35S(0.11-0.14nM)獲得的。檢測不存在以及存在3μM SNC-80時的基礎和最大刺激結合作用。
數(shù)據(jù)分析特異性結合(SB)計算為TB-NS，存在各種受試化合物時的SB表示為對照SB的百分比。用分對數(shù)圖或曲線擬合程序例如Ligand、GraphPad Prism、SigmaPlot或ReceptorFit計算在置換特異性結合放射性配體中各配體的IC50值和Hill系數(shù)(nH)。用Cheng-Prussoff方程計算Ki值。用至少三個置換曲線報告受試配體的IC50、Ki和nH的平均值±S.E.M。本發(fā)明化合物的生物學活性數(shù)據(jù)列于下表2中。
表2生物學數(shù)據(jù)
受體飽和實驗用濃度為0.2-5倍于估計Kδ的適當放射性配體(如果所需放射配體量適宜的話，可高達10倍)對細胞膜進行結合試驗，從而測定放射性配體Kδ值。特異性放射性配體結合表示為pmole/mg膜蛋白。由各個試驗的特異性結合(B)的放射性配體對nM游離(F)的放射性配體的單位點非線性擬合獲得各實驗的Kδ值和Bmax值。
用Von Frey試驗測定機械性異常性疼痛用Chaplan等(1994)介紹的方法在08:00至16:00進行試驗。將大鼠置于Plexiglas籠的金屬絲網底(可通過網底接觸到大鼠爪)上，讓其適應10-15分鐘。試驗區(qū)域為左后爪的足底中部，避開較不敏感的足墊部分。用一系列剛度呈對數(shù)遞增(0.41、0.69、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51和15.14克；Stoelting，Ill，USA)的8 Von Frey細絲接觸其爪。從網狀底板的下面，垂直于足底表面使用Von Frey細絲，對爪用足夠的力使Von Frey細絲產生輕微彎曲并保持約6-8秒。如爪急劇縮回則為陽性反應。細絲一移開立即退縮也認為是陽性反應。走開是不明確的反應，需要重復刺激。
試驗方案FCA處理組在手術后第一天對大鼠進行試驗。用Dixon(1980)的增減法確定50％縮回閾值。用2.04g(中等大小的細絲)細絲開始試驗。無論刺激強度是增強或減弱，采用連續(xù)刺激方式。爪對最初選定的細絲刺激無回縮反應時，就選用更強的刺激；若爪回縮，則選擇更弱的刺激。應用這種方法計算最優(yōu)閾值需要6個接近50％閾值的反應，當反應發(fā)生第一個變化時，例如首次超過閾值時，才開始計數(shù)這6個反應。如果閾值落在刺激范圍之外，閥值分別指定為15.14(正常敏感度)或0.41(最大異常性疼痛)。按照常規(guī)(X＝未縮回；O＝縮回)對所得陽性和陰性反應特征模式制表，用以下公式內推出50％收縮閥值50％閾值(g)＝10(Xf+kδ)/10,000
其中Xf＝最后使用的Von Frey細絲值(對數(shù)單位)；k＝陽性/陰性反應特征的表格數(shù)值(Chaplan等(1994)；而δ＝刺激的平均差值(對數(shù)單位)。此處δ＝0.224。
根據(jù)Chaplan等(1994)，將Von Frey閾值轉化為最大可能作用的百分比(％MPE)。下列方程用于計算％MPE 受試化合物的給藥在Von Frey試驗前將受試物質注射(皮下、腹膜內、靜脈內或口服)給予大鼠，受試化合物給藥與Von Frey試驗時間間隔取決于受試化合物的性質。
扭體試驗小鼠腹膜內給予后，乙酸會引起腹部收縮。然后呈現(xiàn)典型的機體伸展。用了止痛藥后，較少觀察到所述運動，則該藥選作潛在的良好侯選物。
只有出現(xiàn)下列情況才認為是完全典型的扭體反射所述動物未運動；后背略微降低；雙爪足底表面可觀察到。在該測定時，口服給予1-100μmol/kg本發(fā)明化合物后，證實其明顯抑制扭體反應。
(i)溶液制備乙酸(AcOH)將120μl乙酸加入19.88ml的蒸餾水中以得到最終體積為20ml、最終濃度為0.6％的AcOH。再將該溶液混合(渦旋)以備注射用。
化合物(藥物)根據(jù)標準方法制備各化合物并溶解于最適當?shù)娜苊街小?br> (ii)溶液劑的給藥在試驗前20、30或40分鐘(根據(jù)化合物的種類及其特性)，以10ml/kg(考慮小鼠平均體重)將所述化合物經口、腹膜內(i.p.)、皮下(s.c.)或靜脈內(i.v.)給藥。當所述化合物中樞性給藥時腦室內(i.c.v.)或鞘內(i.t.)給藥，給藥量為5μl。
臨試驗前以10ml/kg(考慮小鼠平均體重)AcOH在兩側腹膜內(i.p.)給藥。
(iii)試驗觀察所述動物(小鼠)20分鐘，記錄(扭體反射)發(fā)生次數(shù)，實驗結束時進行數(shù)據(jù)整理。將小鼠放置在帶接觸襯墊的單個“鞋盒”狀籠中。通常同時觀察4只小鼠一只為對照，三只分別給予三種劑量的藥物。
關于焦慮癥和焦慮癥樣的適應癥，化合物效能已經在大鼠的geller-seifter沖突試驗中證實。
關于功能性胃腸道疾病適應癥，化合物效能可以按照CoutinhoSV等[American Journal of Physiology-Gastrointestinal & LiverPhysiology。282(2)G307-16，2002年2月]介紹的評價方法用大鼠證實。
權利要求
1.一種式I化合物及其鹽， 其中R1選自以下任意一個基團(i)苯基； (ii)吡啶基 (iii)噻吩基 (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 (vii)吡咯基 (viii)噻唑基 (ix)吡啶基-N-氧化物 其中各R1苯環(huán)和R1雜芳族環(huán)可獨立被選自以下的1、2或3個取代基進一步取代直鏈和支鏈C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘。
2.權利要求1的化合物，其中各R1苯環(huán)和R1雜芳族環(huán)可獨立被選自以下的1、2或3個取代基進一步取代甲基、CF3、氯、氟、溴和碘。
3.權利要求1的化合物，其中各R1苯環(huán)和R1雜芳族環(huán)可獨立被甲基進一步取代。
4.權利要求1的化合物，其中R1是苯基、吡咯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基。
5.權利要求1的化合物，它選自以下任何一種化合物1 3-[(1-芐基-哌啶-4-基)-(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-氨基]-苯甲酰胺，2 3-[[1-(2，4-二氯-芐基)-哌啶-4-基]-(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-氨基]-苯甲酰胺，3 3-[(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-(1-吡啶-4-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，4 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(1-甲基-1H-咪唑-2-基甲基)-哌啶-4-基]-氫基}-苯甲酰胺，5 3-[(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-(1-呋喃-2-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，6 3-[[1-(4-溴-芐基)-哌啶-4-基]-(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-氨基]-苯甲酰胺，7 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(4-甲基-芐基)-哌啶-4-基]-氨基}-苯甲酰胺，8 3-[(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-(1-呋喃-3-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，9 3-[(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-(1-噻吩-3-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，10 3-[(4-二乙基氨基甲酰基-苯基)-(1-吡啶-2-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，11 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(3H-咪唑-4-基甲基)-哌啶-4-基]-氨基}-苯甲酰胺，12 3-[(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-(1-噻唑-2-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，13 3-[(4-二基氨基甲?；?苯基)-(1-噻吩-2-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，14 3-[(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-(1-吡啶-3-基甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯甲酰胺，15 3-[[1-(4-氯-芐基)-哌啶-4-基]-(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-氨基]-苯甲酰胺，16 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(1H-咪唑-2-基甲基)-哌啶-4-基]-氨基}-苯甲酰胺，17 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(4-甲氧基-芐基)-哌啶-4-基]-氨基}-苯甲酰胺，18 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(4-氟-芐基)-哌啶-4-基]-氨基}-苯甲酰胺，19 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(1H-吡咯-2-基甲基)-哌啶-4-基]-氨基}-苯甲酰胺，20 3-{(4-二乙基氨基甲?；?苯基)-[1-(1-甲基-1H-吡咯-2-基甲基)-哌啶-4-基]-氨基}-苯甲酰胺。
6.任一項前述權利要求的化合物，它為其鹽酸鹽、二鹽酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、二三氟乙酸鹽或檸檬酸鹽的形式。
7.一種制備式I化合物的方法，該方法包括用鈀催化劑如Pd2(dba)3，在堿例如叔丁醇鈉存在下，使通式II化合物 其中PG為氨基甲酸乙酯保護基團如Boc和CBZ，或為芐基或取代的芐基保護基團如2，4-二甲氧基芐基；與3-溴苯甲腈反應得到通式III化合物， 然后在標準條件下脫去保護，在還原條件下用通式為R1-CHO的化合物烷基化得到通式I化合物。
8.一種制備式I化合物的方法，該方法包括用鈀催化劑如Pd2(dba)3，在堿如叔丁醇鈉存在下，使通式IV化合物 其中PG為氨基甲酸乙酯保護基團如Boc和CBZ，或為芐基或取代的芐基保護基團如2，4-二甲氧基芐基；與N，N-二乙基-4-溴苯甲酰胺反應得到通式III化合物， 然后在標準條件下脫去保護，在還原條件下用通式為R1-CHO的化合物烷基化得到通式I化合物。
9.用于治療目的的權利要求1的化合物。
10.權利要求1的式I化合物在制備用于治療疼痛、焦慮癥或功能性胃腸道疾病的藥物中的應用。
11.一種藥用組合物，該組合物包含作為活性成分的權利要求1的式I化合物以及藥學上可接受的載體。
12.一種治療疼痛的方法，該方法將有效量的權利要求1的式I化合物給予需要治療疼痛的患者。
13.一種治療功能性胃腸道疾病的方法，該方法將有效量的權利要求1的式I化合物給予患有所述功能性胃腸道疾病的患者。
14.一種治療焦慮癥的方法，該方法將有效量的權利要求1的式I化合物給予患有所述焦慮癥的患者。
15.一種式III化合物， 其中PG為氨基甲酸乙酯保護基團如Boc和CBZ，或為芐基或取代的芐基保護基團如2，4-二甲氧基芐基。
16.一種式X化合物， 其中R1選自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、三唑基、吡咯基、噻唑基或吡啶基-N-氧化物中任意一個基團。
全文摘要
本申請公開并要求保護以下通式(I)化合物，R
文檔編號A61K31/4525GK1639123SQ02814160
公開日2005年7月13日 申請日期2002年5月16日 優(yōu)先權日2001年5月18日
發(fā)明者W·布朗, A·格里芬, C·瓦爾波爾 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司