專利名稱：用于粘膜再生的方法和膜的制作方法
背景技術：
盡管這類移植程序已熟知，但是開發(fā)有效的異質(zhì)(alloplastic)或異種(xenogeniec)替代移植材料用于正常粘膜的重建和再生將會使前庭成形術有更廣泛的應用。
現(xiàn)有技術中仍需要促進粘膜再生的改進方法，特別是前庭成形術的改進。
圖2是顯示根據(jù)本發(fā)明使用的膜的側視圖。
圖3是顯示根據(jù)本發(fā)明使用的另一種膜的側視圖。優(yōu)選實施方案的詳細描述本發(fā)明提供了一種促進粘膜再生的方法。雖然本發(fā)明方法通過在具體類型口腔手術后促進口腔中粘膜再生而舉例描述，但是應理解的是本發(fā)明方法可用于促進具有受損粘膜組織的身體的任何一部分的粘膜的再生。
在優(yōu)選的實施方案中，促進粘膜再生的方法包括如下步驟用一片膠原膜材料修補片覆蓋待處理的區(qū)域，其中所述膠原膜材料由具有一平滑面和與平滑面相對的纖維面的至少一個層組成，所述纖維面使得細胞可在其上生長，其中所述膠原膜優(yōu)選地進一步包括一具有疏松海綿樣結構的第二層，該第二層主要由II型膠原或I型膠原和III型膠原混合物組成。將所述膠原膜材料修補片固定在粘膜缺陷處，優(yōu)選地縫合，使粘膜再生。
根據(jù)本發(fā)明，如

圖1所示，粘膜表面M的缺陷通過將修補片10置于缺陷上并將該修補片固定于缺陷周圍的粘膜表面邊緣而修補。隨后使修補區(qū)域再生粘膜。在圖1中示出修補片10通過縫合線12固定于粘膜表面M?；蛘撸扪a片也可以通過與周圍宿主粘膜或待處理區(qū)域周圍的其它結構粘合而固定在缺陷上，例如使用本領域已知的有機膠或任何其它合適方法固定。
修補片10由一種制備物形成，該制備物包括具有合適的揉曲性以與其所放置的粘膜表面形狀緊密配合的膠原膜。在一優(yōu)選的實施方案中，所述膠原膜包括至少一層膠原層，其具有足夠的強度以適于縫合于粘膜并保護粘膜表面在愈合過程中不會發(fā)生創(chuàng)傷。
用作本發(fā)明的修補片的膠原膜的第一個實施方案如圖2中的14所示，膜14包括一單膠原層16，其一側具有平滑面18，平滑面相對的另一側具有網(wǎng)紋或纖維面20。平滑面18優(yōu)選是無孔的，以例如當進食時提供機械保護。纖維面20的構造使得細胞能在其上生長。在使用中，平滑面優(yōu)選地不接觸待處理的區(qū)域，而纖維面優(yōu)選地朝向待處理的區(qū)域。
在優(yōu)選的實施方案中，膠原層16主要是I型膠原、III型膠原或其混合物。這一層的一種合適材料是Biogide，購自本發(fā)明的申請人Ed.Geistlich Sohne AG fur Chemische Industrie。Biogide材料在美國專利5,837,278中描述，該文獻引入本文作參考。
圖3示出可用作本發(fā)明的修補片的多層膠原膜14′，這一膜包括如圖2所示的第一膠原層16，并進一步包括具有疏松海綿樣結構的第二膠原層22。第二膠原層22優(yōu)選附著于第一膠原層16的纖維面20以放置于粘膜表面，促進粘膜再生。第二層22可由I、II、III、IV或VII型膠原或這些膠原類型的任何組合而形成，但優(yōu)選主要由I型膠原、II型膠原或I型膠原和III型膠原的組合(例如，95％I型膠原和5％III型膠原)形成。第一層16和第二層22的組合增加了膜14′的厚度，從而易于操作并改善愈合。膜的厚度可根據(jù)應用而變換，但典型的范圍為約0.5毫米至約5毫米之間，優(yōu)選范圍為約2毫米至約5毫米之間，厚度為3毫米是最優(yōu)選的。
圖2和圖3所示的實施方案中的第一層16可以各種方式產(chǎn)生，包括但不限于美國專利5,837,278中描述的方法步驟；通過漿液的脫氣和真空干燥(薄膜樣透明膜)；或使用壓縮海綿。第一層16可由I、II、III或IV型膠原或這些膠原類型的組合而制成。
圖3所示實施方案中的海綿樣第二層22優(yōu)選地是凍干的膠原漿。第二層22可由I、II、III、IV或VII型膠原或這些膠原類型的組合而制成。優(yōu)選地，第二層由I型膠原、II型膠原或I型和III型膠原的混合物制成。
第二膠原層22可從?；蜇i材料形成，優(yōu)選地從豬材料形成。
在圖3所示實施方案中，第一膜層16和第二膜層22可以任何合適的方式相連或組合。三種合適的組合方法的例子包括用纖維蛋白膠將第一膜層附著于第二膜層；用膠原將將第一膜層附著于第二膜層；或用第二膜層所需膠原類型的膠原漿涂覆第一膜層，然后凍干該組合。
如果需要，促進粘膜再生的生長因子如EGF(表皮生長因子)、IGF-1(胰島素樣生長因子)、β-FGF(成纖維生長因子)、PDGF(血小板衍生生長因子)、TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子)可摻入膜，和/或加至置于粘膜一側的膜表面。實施例1 制備修補片(A)第一膜層根據(jù)WO93/11723(純化的I型膠原的制備，豬皮)所述程序產(chǎn)生，該文獻引入本文作參考。最后洗滌的纖維不進行凍干，而是將該材料真空脫氣并傾注于連動桿(trace)中，在室溫層流干燥。(B)第二膜層根據(jù)WO93/11723(純化的I型膠原的制備，豬腱)所述程序產(chǎn)生。最后洗滌的纖維不進行凍干，而是將該材料用鹽酸酸化至pH2.9-3.2，至干含量為1.2-1.8％。這一漿液凍干成海綿。(C)通過用上述pH2.9-3.2漿液覆蓋第一膜層的一側而組合第一和第二膜層。海綿在漿液上并凍干。實施例2 制備修補片(A)第一膜層根據(jù)美國專利5,837,278所述程序產(chǎn)生。(B)第二膜層根據(jù)制備II型膠原漿的WO99/19005所述程序產(chǎn)生，該文獻引入本文作參考。具體地，來自新屠宰的豬的冷凍軟骨制備物用冷水洗滌足夠長時間，使pH值至pH3-3.5。隨后將這一材料均質(zhì)5次，用水稀釋，得到干含量為0.5-2.0％的勻漿物。(C)通過將來自前一步驟的漿液傾注在第一層上而組合第一膜層和第二膜層。約30分鐘后，將組合的產(chǎn)物凍干。實施例3 制備修補片(A)第一膜層根據(jù)美國專利5,837,278所述程序產(chǎn)生。(B)通過用1N氫氧化鈉溶液在約20℃處理來自豬的脫脂皮層約4小時，然后用1N鹽酸溶液在約20℃處理約2小時，并如實施例2所述均質(zhì)而產(chǎn)生第二膜層。(C)通過將來自前一步驟的漿液傾注在第一層上而組合第一膜層和第二膜層。約30分鐘后，將組合的產(chǎn)物凍干。
另外，用無牙上頜骨的附著粘膜區(qū)確定所述材料用作在無牙牙槽嵴區(qū)域重新獲得附著粘膜的基礎時的效率。在3個動物中，在延伸自頰表面的嵴頂和腭表面上1cm的嵴頂雙側切下1cm×3cm區(qū)域。
將膜材料放入并用4-0單纖尼龍間斷縫合將其固定于宿主粘膜表面邊緣。(每個膠原膜放置物的總縫合數(shù)從10至16變化)。動物給予由肌肉內(nèi)青霉素、普魯卡因150000單位和芐星青霉素150000單位組成的術后抗生素保護，共4天。動物飲食如常，并允許在大籠中自由活動。
在3周和6周結束時制備前庭手術部位生物活檢樣本。在第3周，制備每個動物的一側(2個四分體)上的生物活檢樣本，其從上部天然殘留宿主粘膜表面延伸通過膜材料表面直至相反側的內(nèi)部移植物宿主邊緣。樣本表面合適地用縫合線標記以定位進行組織學檢查。生物活檢區(qū)用間斷縫合術閉合，以使其愈合。使每個動物的2個四分體保持6周，此時切下整個區(qū)域，剝離粘膜表面并放在一起獲得原發(fā)閉合(primary closure)。
附著粘膜區(qū)域的生物活檢樣本類似地獲得每個動物的一側在第3周取樣，另一側在6周取樣，每個時期總共3個樣本。
在術后第14天除去所有的縫合線。這些動物的臨床術后過程是順利的，沒有發(fā)炎或感染的臨床癥狀，膜材料也沒有脫落。膜留在原位，且邊緣表明從宿主粘膜外周表面發(fā)生的逐漸的上皮再形成。從術后第2周至第3周臨床可見殘留膜殘留區(qū)域。在第6周，整個手術部位發(fā)生上皮再形成，具有正常出現(xiàn)的粘膜。
在3周結束時的生物活檢樣本顯示邊緣上皮再形成，其具有正常的釘突(retepeg)形成?？煽吹缴掀みw移過膜表面的膠原降解區(qū)。在測量約.5cm×.3cm的膜的中心部分(來自原始大小3×2cm)無上皮再形成。
在6周樣本中，對修補區(qū)的完整切割和生物活檢表明，有完全發(fā)育通過修補區(qū)的優(yōu)異粘膜表面，粘膜下有新血管發(fā)生，并且有正常分層的鱗狀上皮形成。有完全接受膜材料的跡象。在表面上皮下僅可見非常小的殘留膠原。所用染色為Mason′s Trichrome以及蘇木精和曙紅。
從6周樣本制備多個切片以保證對全部修補區(qū)的完全評價，從而保證在組織學檢查過程中沒有殘留膜材料未被檢測到。
當修補片置于上牙槽嵴和腭上頜表面中時，示出與在前庭深度類型測試部位所見類似的膜材料置換。在3周，有殘留膜材料的跡象，其位于修補部位的中心部分。在修補部位的外周邊緣可見成纖維細胞和遷移的上皮。在6周樣本中，在腭表面、牙槽嵴頂和牙槽嵴的頰面上的所有樣本中均可見新附著的粘膜。這表明材料被完全接受，且有優(yōu)異的附著粘膜再形成。
組織學外觀表明在上頜后區(qū)中的這一材料與根形植入物一起可用于重建附著粘膜，雖然在這一測試中未具體研究這一區(qū)域的效率。
動物中所選的用于前庭移植的部位是位于上頜和下頜尖牙以及前磨牙前庭粘膜區(qū)。這一區(qū)域在Papio anubis狒狒飼養(yǎng)和咀嚼過程中特別易于發(fā)生創(chuàng)傷的部位，其可作為應激產(chǎn)生測試部位。因此，在如下情形中放置材料，即非?？赡鼙划a(chǎn)生的感染和修補片的移動損害。這一現(xiàn)象在任何測試部位均沒有發(fā)生，且材料保持在原位，并被宿主細胞活性的非常溫和過程生物降解。
基于這些測試，可以總結出用膠原膜作為本發(fā)明的修補片是自體軟組織移植物的非常好的替代物。某些類型的異質(zhì)(alloplastic)或異種(allogeneic)表面敷料易于產(chǎn)生傷口攣縮并形成疤痕。另外，人工皮膚表面敷料也易于生物降解和過早脫落，或者保留時間過長導致遲發(fā)炎性應答。本發(fā)明未見疤痕形成或延長的炎性應答，也沒有使用手術敷料有時會發(fā)生的粘膜下纖維化。
因此，這一材料看來可用作游離粘膜移植物或分層皮片移植物的替代物，以保持前庭高度和在根形植入物區(qū)域恢復附著粘膜。這一方法的一些顯然優(yōu)勢為膜將(a)生物降解，而無負面炎性應答，(b)促進所述區(qū)域再生正常粘膜，(c)技術上適用于手術操作并顯示對縫合的耐受。
由于所述實施方案可進行許多修改和變化，因此上述描述和附圖中所示的所有部分均是舉例性而非限制性的。
權利要求
1.促進粘膜再生的方法，包括用粘膜再生制備物覆蓋粘膜損傷區(qū)域，所述粘膜再生制備物包括一種膜，其由衍生自天然含膠原組織的純化膠原材料組成；將膜固定在所述區(qū)域上；以及使所述區(qū)域再生粘膜。
2.權利要求1的方法，其中所述膜包括一屏障層，該層包括一外部平滑屏障面，并進一步包括與所述平滑屏障面相對的纖維面。
3.權利要求1的方法，其中所述屏障層主要是I型膠原、III型膠原或其混合物。
4.權利要求3的方法，其中所述膜包括一多層膠原膜材料片，其包括一附著于所述纖維面的膠原材料基質(zhì)層。
5.權利要求4的方法，其中所述基質(zhì)層包括I型膠原、II型膠原、III型膠原、IV型膠原、VII型膠原或其組合。
6.權利要求1的方法，其中所述膜厚度約為0.5-5毫米。
7.權利要求5的方法，其中所述基質(zhì)層主要包括I型膠原。
8.權利要求5的方法，其中所述基質(zhì)層主要包括II型膠原。
9.權利要求1的方法，其中所述膜攜帶至少一種再生粘膜的生長因子。
10.權利要求9的方法，其中所述至少一種生長因子選自表皮生長因子(EGF)、胰島素樣生長因子(IGF-1)、成纖維生長因子(β-FGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)或其混合物。
11.權利要求1的方法，其中所述粘膜損傷是口腔粘膜損傷。
12.用于促進粘膜再生的粘膜再生制備物，所述粘膜再生制備物包括一種膜，其由衍生自天然含膠原組織的純化膠原材料組成。
13.粘膜再生制備物促進粘膜再生的應用，所述制備物包括一種膜，其由衍生自天然含膠原組織的純化膠原材料組成。
14.衍生自天然含膠原組織的純化膠原材料在制備用于促進粘膜再生的粘膜再生制備物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過施用由衍生自天然含膠原組織的純化膠原材料組成的膜而促進粘膜損傷的愈合的方法。本發(fā)明還涉及用于促進粘膜再生的粘膜再生制備物及其用途。
文檔編號A61L31/00GK1383897SQ02118498
公開日2002年12月11日 申請日期2002年4月27日 優(yōu)先權日2001年4月27日
發(fā)明者彼得·蓋斯特里西, 洛塔爾·施勒賽爾, 腓力·J·博伊恩 申請人:Ed·蓋斯特里西父子化學工業(yè)股份公司