專利名稱：一種人全血清的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品的生產(chǎn)方法，特別是一種人全血清的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
臨床上由于手術(shù)、創(chuàng)傷后的蛋白質(zhì)喪失，以及過度分解代謝造成的蛋白質(zhì)的喪失，需要輸注蛋白。目前，市場上提供的蛋白制品為單一蛋白質(zhì)，其臨床適應(yīng)癥的局限性大。由于人全血清中多元成分蛋白質(zhì)對熱的耐受程度不同，給制取完全蛋白成份的人全血清帶來很大的困難?，F(xiàn)在，國際上只有德國一家公司能夠生產(chǎn)這種人全血清，但其生產(chǎn)工藝未被公開，其制品僅作了β-丙內(nèi)酯病毒滅活，病毒滅活不夠徹底。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種病毒滅活更徹底的人全血清生產(chǎn)方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣完成的，它包括有冰凍血漿融化步驟和β-丙內(nèi)酯滅活病毒步驟，其特征在于(1)血漿融化溫度為20-25℃，(2)將重量體積比為1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血漿中升溫至30±1℃，攪拌4個(gè)小時(shí)，進(jìn)行滅活病毒，(3)在上述滅活病毒后的血漿中按體積比的5％加入蓖麻油，在20±1℃下攪拌30分鐘，將上述含蓖麻油血漿置于離心機(jī)分離后，棄油層，得水相血漿，(4)將上述分離后的水相血漿加入C18樹脂中進(jìn)行層析，(5)將上述層析流出液降溫至2-1℃進(jìn)行離心分離，取其上清液，棄沉淀物，(6)在上清液中按重量/體積比的3％加入AEROSIL吸附材料，溫度為2-4℃，(7)在ZETAPlus60LP過濾介質(zhì)中過濾，得上清液，(8)在上述上清液中按重量/體積比的1％加入Celite503吸附材料，溫度為2-4℃，(9)上述液體在ZETAPlusOELIPIO過濾介質(zhì)中過濾，(10)對上述過濾液進(jìn)行超濾透析，(11)在超濾透析后的液體中按重量/體積比的10％加入葡萄糖，辛酸鈉26.5-27.5克，PH7.0±0.2，溫度60±5℃，10小時(shí)進(jìn)行巴氏滅活病毒，(12)加入注射用水稀釋后，使蛋白濃度5.3％，按重量/體積比的5％加入葡萄糖，加辛酸鈉0.165mmol/g，(13)用孔徑為0.2μm的膜進(jìn)行過濾除菌分裝，(14)在溫度為30-32℃下存放14天進(jìn)行放孵處理，得到人全血清制品。可采用2000以上的多人份混漿作制備全血清的原料。本發(fā)明由于在S/O病毒滅活的基礎(chǔ)上增加了巴氏滅活工藝，針對制品的多元成分蛋白質(zhì)對熱的耐受程度的不同，在保護(hù)劑種類、用量、PH值、離子強(qiáng)度的合理選擇，使制品既保證了病毒滅活的徹底性，又確保各種有效成分不變性，同時(shí)，由于在制備中采用多人份混漿作原料抗A抗B血凝素含量低，本制品在輸注時(shí)可以不考慮血型問題，因此，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有病毒滅活更徹底，使用更安全和方便的顯著優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的人全血清生產(chǎn)方法包括有以下步驟(1)用2000人份的混合冰凍血漿為原料，在融漿罐中融漿，水溫20-30℃，漿融化后的溫度為23℃，(2)取20L融化后的混漿，加入含磷酸三丁酯224.4ml和200g曲拉通x-100組成的S/O滅活劑母液2L，升溫至30±1℃，攪拌4小時(shí)進(jìn)行滅活病毒，(3)在上述S/O滅活病毒后的血漿中加入1.1L蓖麻油，攪拌30分鐘，置于離心機(jī)中，溫度20±1℃，離心轉(zhuǎn)速為25000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間20分鐘后萃取S/O滅活劑，用泵抽出油層廢棄物約1.3L，得水相21.6L，(4)將萃取后血漿置于C18樹脂中進(jìn)行層析，流速為60cm/小時(shí)，得層析流出液25L，(5)將上述流出液置于反應(yīng)罐中降溫至1℃然后進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速14000轉(zhuǎn)/分鐘，得上清液24.5L，棄沉淀物90g，(6)在上述上清液中加入重量/體積比的3％的AEROSIL吸附材料735g，在3℃溫度下攪拌2小時(shí)進(jìn)行吸附纖維蛋白原、VIII、IX因子及其它凝血因子，(7)通過ZETAPlus60LP過濾介質(zhì)進(jìn)行過濾，過濾速度為6L/分鐘，得上清液體積24L，(8)在上述濾后的上清液中加入Celite503吸附劑240g，在3℃溫度下攪拌28小時(shí)，(9)用ZETAPlusOELIPIO過濾介質(zhì)過濾，去除血漿中不穩(wěn)定的脂蛋白，速度9L/分鐘，得上清液23.5L，(10)用分子量為8K的膜包超濾透析，透析后體積為18L，蛋白濃度為6.5％(11)在上述液體中加葡萄糖1800g、辛酸鈉26.5g，調(diào)PH為7.1，升溫至60℃，保持10小時(shí)進(jìn)行巴氏滅活病毒，(12)用分子量為8K的膜包進(jìn)行超濾透析，透析后的體積為16L，蛋白濃度6.2％，葡萄糖含量5.1％，辛酸鈉含量0.14mmol/g，(13)加入注射用水2.7L進(jìn)行稀釋，蛋白濃度5.3％，加葡萄糖119g，加辛酸鈉4.1g，PH為7.1，(14)用孔徑為0.2μm的膜進(jìn)行過濾除菌后分裝，其規(guī)格有50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶等，(15)將分裝后的制品移到30-32℃的庫房中放置14天，進(jìn)行放孵，得到無菌無毒的人全血清制品。
權(quán)利要求
1.一種人全血清的生產(chǎn)方法，它包括有冰凍血漿融化步驟和β-丙內(nèi)酯滅活病毒步驟，其特征在于(1)血漿融化溫度為20-25℃，(2)將重量體積比為1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血漿中升溫至30±1℃，攪拌4個(gè)小時(shí)，進(jìn)行滅活病毒，(3)在上述滅活病毒后的血漿中按體積比的5％加入蓖麻油，在20±1℃下攪拌30分鐘，將上述含蓖麻油血漿置于離心機(jī)分離后，棄油層，得水相血漿，(4)將上述分離后的水相血漿加入C18樹脂中進(jìn)行層析，(5)將上述層析流出液降溫至2-1℃進(jìn)行離心分離，取其上清液，棄沉淀物，(6)在上清液中按重量/體積比的3％加入AEROSIL吸附材料，溫度為2-4℃，(7)在ZETAplus60LP過濾介質(zhì)中過濾，得上清液，(8)在上述上清液中按重量/體積比的1％加入Celite503吸附材料，溫度為2-4℃，(9)上述液體在ZETAPlusOELIPIO過濾介質(zhì)中過濾，(10)對上述過濾液進(jìn)行超濾透析，(11)在超濾透析后的液體中按重量/體積比的10％加入葡萄糖，辛酸鈉26.5-27.5克，PH7.0±0.2，溫度60±5℃，10小時(shí)進(jìn)行巴氏滅活病毒，(12)加入注射用水稀釋后，使蛋白濃度5.3％，按重量/體積比的5％加入葡萄糖，加辛酸鈉0.165mmol/g，(13)用孔徑為0.2μm的膜進(jìn)行過濾除菌分裝，(14)在溫度為30-32℃下存放14天進(jìn)行放孵處理，得到人全血清制品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人全血清的生產(chǎn)方法，其特征在于采用2000以上的多人份混漿作制備全血清的原料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人全血清的生產(chǎn)方法，它包含有以下步驟，以多人份的冰凍混血漿為原料→融漿→S/D滅活病毒→植物油滅活劑→C
文檔編號A61K35/16GK1411819SQ02116619
公開日2003年4月23日 申請日期2002年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月15日
發(fā)明者安康, 馬小偉, 潘若文, 劉文芳, 范蓓 申請人:華蘭生物工程股份有限公司