專利名稱：施用肽的藥物劑型,其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腸胃外施用有聚集傾向的肽，特別是LHRH類似物或者LHRH激動劑和拮抗劑的新的醫(yī)藥配制劑型，以及它們的制備方法和應(yīng)用。
從EP 0 299 402已知使用其藥學可接受無毒酸加成鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、鞣酸鹽、馬來酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、藻酸鹽、pamoates、抗壞血酸鹽和酒石酸鹽等的形式的藥學活性十肽例如SB-030、SB-075(西曲瑞克)和SB-088。
從JP 06321800-A進一步已知含有葡萄糖酸鹽作為穩(wěn)定劑的凍干的肽和蛋白質(zhì)制劑。在一個實施例中，溶液含有2.5％的葡萄糖酸鎂，特別是血管升壓素，LHRH和胰島素被描述為活性化合物。
從文獻特別是從Powell，M.F.，Pharmaceutical Research，1258-1263(8)1991；Dathe M.Int.J.Peptide Protein Res.344-349(36)1990，和Szejtli，J.Pharmaceutical TechnologyInternational 16-22，1991得知，寡肽、即特別是具有末端酸酰胺官能的那些有形成凝膠的傾向。
EP 0 611 572中描述了具有3-15個氨基酸的肽的凍干物的制備方法，其中100-10,000份重量的肽溶解于乙酸之中并且用膨松劑例如甘露糖醇處理，然后為了獲得肽的無菌過濾的凍干物和避免形成凝膠。
DE A 195 42 873中描述了微粒形式的施用復(fù)合組合物的藥物劑型，其中使用ABA三嵌段共聚物，其嵌段A是乳酸和羥基乙酸(glycolicacid)的聚合物并且其B聚合物是攜帶選自血清蛋白質(zhì)，聚氨基酸，環(huán)糊精，環(huán)糊精衍生物，糖，氨基糖，氨基酸，洗滌劑或羧酸和這些物質(zhì)的混合物的聚乙二醇鏈。這里描述的微粒在包埋小量或者凝集-敏感量的多肽之后也應(yīng)該在相對長時間連續(xù)釋放該多肽。
DD 141 996中描述了天然LHRH的藥物劑型制劑，其在相對長的時間內(nèi)是穩(wěn)定的并且符合腸胃外施用制劑的要求。這里的關(guān)鍵點是提高這些制劑的可存儲性(第2頁，19-23行)。沒有關(guān)于溶液的可濾性的陳述。此外，為了提高可存儲性，為了使pH范圍達到pH3.5-6.5，也使用緩沖物質(zhì)(也是乙酸)。沒有解決從凝膠-形成肽鹽制備無菌凍干物的問題。
EP 0 175 506中用1N乙酸處理肽的水溶液，然后為了獲得該肽的乙酸鹽而將其凍干。因此該發(fā)明的主題是肽鹽的合成。
然而，其顯示在有聚集作用的肽的已知乙酸鹽的情況下，例如LHRH拮抗劑，利用過濾特別是高濃度下的過濾來制備腸胃外施用的無菌溶液確實是可能的，但是在凍干物溶解之后注射之前很短時間能形成聚集體。所述聚集體然后導(dǎo)致生物利用率從0.5mg/ml的肽濃度濃度-依賴性降低。
上述問題不只是在為了快速釋放活性化合物的目的而施用的注射溶液時發(fā)生，而且用表現(xiàn)出延遲釋放的注射制劑時也發(fā)現(xiàn)了上述問題。因此，摻入到控制活性化合物釋放的基質(zhì)中的肽由于它們的聚集傾向顯示出不期望的低釋放。因此，這里生物利用率也是降低的。
由于優(yōu)選施用藥學活性肽例如LHRH激動劑和拮抗劑，例如安他瑞克(antarelix)和西曲瑞克是腸胃外藥物劑型，存在對于制備具有可接受生物利用率的穩(wěn)定注射制劑的需要，其能夠方便地制備、無菌過濾和配制。這特別適用于可溶性肽鹽的重新配制的凍干物形式的注射制劑和適用于微粒、微膠囊或植入物。就使用LHRH拮抗劑的各種領(lǐng)域而言其更為重要，這一點被越來越多的人所知曉。就該類物質(zhì)快速增長的指示領(lǐng)域來看，期望更寬選擇腸胃外特別是皮下可注射的穩(wěn)定肽溶液。
現(xiàn)在已開發(fā)出含有溶解或者分散形式的有聚集傾向的肽的適用于腸胃外施用的藥物施用劑型，其區(qū)別在于肽以其乙酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽或磷酸鹽的形式存在，并且這些施用劑型可以另外含有上述剛提到的作為自由酸的一種酸，并且，如果適當，還有選自酸、表面活性物質(zhì)、聚合物、脂質(zhì)或糖的另外的添加劑和賦形劑。
這些藥物施用劑型可以以在水中或者含水溶劑混合物中溶解或分散的形式存在。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，藥物施用劑型也可以以在生理耐受油、優(yōu)選中等鏈甘油三酯(中性油，Miglyol)或者蓖麻油、芝麻油、棉籽油、玉米油、花生油、橄欖油或者這些油的混合物中的溶解或分散形式存在。
使用的肽是LHRH拮抗劑抗排卵肽，A-75998，加尼瑞克和Nal-Glu拮抗劑，但特別是西曲瑞克，安他瑞克以及根據(jù)美國專利No.5,942,493和DE 19911771.3的拮抗劑。
賦形劑功能中使用的酸是葡糖酸、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡糖二酸、檸檬酸、抗壞血酸和氨基酸。
因此有可能抑制肽的聚集，因此滿足具有好的生物利用率的制劑的要求，因此豐富了醫(yī)藥資源，并且使用有效藥物技術(shù)進行工作。
進一步令人吃驚地發(fā)現(xiàn)通過加入葡糖酸、葡糖醛酸、檸檬酸、乳酸或者抗壞血酸，更大大提高各種西曲瑞克鹽的穩(wěn)定性。
根據(jù)本發(fā)明，無菌過濾穩(wěn)定制劑的制備和配方因此是可能的，沒有問題。
另一個優(yōu)點是加入合適的賦形劑。這些賦形劑可以是酸、表面活性物質(zhì)、聚合物、脂質(zhì)或糖。酸的例子是葡糖酸、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡糖二酸、乳酸和檸檬酸、抗壞血酸和氨基酸。使用的表面活性物質(zhì)可以是聚乙二醇12-(羥基)硬脂酸酯(Solutol)，聚氧乙烯蓖麻醇酸酯(Cremophor)，多乙氧基醚，poloxamers，磷脂，卵磷脂或者苯扎氯銨。合適的聚合物是白蛋白、聚乙二醇、纖維素衍生物、淀粉衍生物或者聚乙烯吡咯烷酮。糖的例子是環(huán)糊精和環(huán)糊精衍生物?！半x液(Chaotropic)”物質(zhì)例如脲也可以用作添加劑或賦形劑。
根據(jù)本發(fā)明的制劑的應(yīng)用領(lǐng)域特別是預(yù)防和治療所有的性激素依賴的可以受LHRH類似物，即LHRH激動劑和LHRH拮抗劑影響的情況和疾病。
這里強調(diào)下面這些良性前列腺增生，前列腺癌，早熟，多毛癥，子宮內(nèi)膜增生及其伴隨癥狀，子宮內(nèi)膜癌，體外受精(IVF/COS/ART)，避孕，月經(jīng)前綜合征(PMS)，子宮肌瘤，乳腺癌，輸卵管阻塞(PTO)，卵巢癌，子宮癌。下面的物質(zhì)特別優(yōu)選作為用于根據(jù)本發(fā)明的組合物的LHRH拮抗劑西曲瑞克，安他瑞克，抗排卵素，A-75998，加尼瑞克，Nal-Glu拮抗劑，以及根據(jù)美國專利No.5,942,493和DE 19911771.3的LHRH拮抗劑。
實施例1利用偏振顯微鏡檢查，對于加了或者沒有加賦形劑的各種西曲瑞克鹽溶液進行聚集作用研究。
在有十字標起偏器的偏振光顯微鏡中，聚集的肽溶液表現(xiàn)出非常類似于液晶結(jié)構(gòu)的圖像。與此相反，沒有聚集的肽溶液不產(chǎn)生這樣的效果。
表1加入葡糖酸對西曲瑞克乙酸鹽溶液聚集性能的影響
因此加入葡糖酸通過延遲或防止聚集而引起西曲瑞克乙酸鹽溶液穩(wěn)定性的提高。
另一項實驗集中在沒有加入或者加入了葡糖酸的西曲瑞克葡糖酸鹽。表2總結(jié)了最重要的結(jié)果。
表2從散裝(bulk)西曲瑞克葡糖酸鹽產(chǎn)物制備的各種溶液的聚集性能
因此乙酸鹽相比，西曲瑞克葡糖酸鹽提供了優(yōu)勢。加入葡糖酸延長西曲瑞克葡糖酸鹽溶液的貨架壽命。
此外，就其聚集性能對葡糖醛酸對西曲瑞克乙酸鹽溶液的穩(wěn)定化影響以及對作為另一種鹽，西曲瑞克葡糖醛酸鹽的穩(wěn)定化影響進行了測試。表3總結(jié)了結(jié)果。
表3沒有加入或者加入了葡糖醛酸的西曲瑞克乙酸鹽和西曲瑞克葡糖醛酸鹽各種濃度溶液的聚集性能
通過用類似于葡糖酸鹽的葡糖醛酸鹽代替乙酸鹽也能夠獲得關(guān)于西曲瑞克溶液的聚集穩(wěn)定性的顯著提高。通過向西曲瑞克葡糖醛酸鹽溶液加入葡糖醛酸，甚至可以進一步提高這些溶液的聚集穩(wěn)定性。
表4加入10％的α-環(huán)糊精、20％的羥丙基-β-環(huán)糊精或者20％的γ-環(huán)糊精之后以天數(shù)表示的西曲瑞克乙酸鹽溶液的無聚集期
通過加入羥丙基-β-環(huán)糊精、特別是γ-環(huán)糊精可以顯著提高西曲瑞克乙酸鹽溶液的聚集穩(wěn)定性。
表5加入α-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精或者γ-環(huán)糊精之后以天數(shù)表示的2.5毫克/毫升西曲瑞克葡糖酸鹽溶液的無聚集期
通過加入羥丙基-β-環(huán)糊精或者γ-環(huán)糊精也可以顯著提高西曲瑞克葡糖酸鹽溶液的聚集穩(wěn)定性。
表6加入聚乙烯吡咯烷酮(Kollidon12PF或17PF)之后以天數(shù)表示的西曲瑞克乙酸鹽溶液的無聚集期
通過加入各種類型的聚乙烯吡咯烷酮，也可以顯著提高西曲瑞克乙酸鹽溶液的聚集穩(wěn)定性。
表7利用偏振顯微鏡并且根據(jù)目測圖像(外觀)評價加入各種賦形劑的西曲瑞克溶液的聚集性能
實施例2將西曲瑞克原料溶解于濃度是10mg/ml的30％強度的乙酸中，并且用添加劑的水溶液稀釋，達到肽在3％乙酸中的最終濃度是1mg/ml。然后將該溶液滅菌并凍干(每小瓶5mg)。
重新配制這些凍干物之后，在下面的試驗中對溶液(2.5mg/ml的西曲瑞克)研究其聚集體形成和釋放性能●偏振顯微鏡(pol.mic.)沒有聚集的天數(shù)。
●濾過率％根據(jù)標準方法制備西曲瑞克溶液，并且利用離心通過0.22微米或者0.45微米濾器過濾。通過HPLC測定濾液中西曲瑞克的濃度，并且以過濾之前的起始濃度為基礎(chǔ)的％值表示(濾過率％)。
●體外釋放縮寫形式(RRS，在格林溶液中釋放)1小時和6小時之后釋放百分率％使用格林溶液作為介質(zhì)用流動通過方法(flow-through process)在37℃下測定體外釋放性能。通過HPLC進行濃度測定。將相應(yīng)于10mg的西曲瑞克堿的西曲瑞克樣品稱重到流動-通過池中，混合以4ml水并且攪拌10分鐘。向樣品中加入6ml格林溶液之后，攪拌下以0.5ml/min的流速使格林溶液均勻抽吸通過流動池。
●大鼠動物試驗以％表示的注射之后168小時施用劑量在肌肉中西曲瑞克的殘留量。
表8a給出一些制備批次(batch)的西曲瑞克乙酸鹽凍干物和從中制備的2.5mg/ml西曲瑞克乙酸鹽溶液的相應(yīng)試驗結(jié)果。表8a
從提到的實施例證明，用各個試驗物質(zhì)組的大量賦形劑(表面活性物質(zhì)、酸、氨基酸、聚合物、糖、糖醇、環(huán)糊精、防腐劑)，各自或者與這些賦形劑的混合物能夠?qū)崿F(xiàn)體外(偏振顯微鏡檢查，濾過率，體外釋放)和體內(nèi)穩(wěn)定化作用。其降低了聚集傾向，因此改善了活性化合物的體外釋放也導(dǎo)致在大鼠實驗中肽活性化合物的生物利用率提高，因此降低了大鼠肌肉中的殘留量。
下面表8b中列出了沒有加入或者加入穩(wěn)定化賦形劑的含有各種西曲瑞克鹽批次的其它體外和體內(nèi)數(shù)據(jù)表8b
實施例3在大鼠肌肉實驗中，由于168小時之后它們降低了西曲瑞克的殘留量，基本上沒有聚集傾向/延遲聚集(更好的濾過率/偏振顯微鏡檢查)并且表現(xiàn)出在格林溶液中更快地體外釋放的西曲瑞克制劑因而變得突出。預(yù)計這樣的制劑有更高的生物利用率。
表8a和8b已經(jīng)列出了大鼠肌肉實驗的一些結(jié)果。
在表9所示另一項大鼠肌肉實驗中，除了肌肉中的殘留量之外，另外測定了血漿中西曲瑞克含量。也借助這些數(shù)據(jù)，受試賦形劑的穩(wěn)定化影響是清楚的。
此外，用西曲瑞克的其它鹽形式代替乙酸鹽獲得大鼠肌肉實驗中生物利用率的提高并且伴隨著降低的殘留量是可能的。
表9
權(quán)利要求
1.適合腸胃外施用的藥物施用劑型，其含有溶解或者分散形式的有聚集傾向的肽，特征在于肽以其乙酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽或磷酸鹽的形式存在，并且在于這些施用劑型另外含有上述提到的作為自由酸的一種酸，并且，如果適當，還有選自酸、表面活性物質(zhì)、聚合物、脂質(zhì)或糖的另外的添加劑和賦形劑。
2.權(quán)利要求1的用于腸胃外施用的藥物施用劑型，所述施用劑型以在水中或者含水溶劑混合物中溶解或分散的形式存在。
3.權(quán)利要求1的用于腸胃外施用的藥物施用劑型，所述施用劑型以在生理可耐受油、優(yōu)選中等鏈甘油三酯(中性油，Miglyol)或者蓖麻油、芝麻油、棉籽油、玉米油、花生油、橄欖油或者這些油的混合物中的溶解或分散形式存在。
4.含有權(quán)利要求1-3的有聚集傾向的肽的用于腸胃外施用的藥物施用劑型，其特征在于所述肽是LHRH拮抗劑抗排卵素，A-75998，加尼瑞克和Nal-Glu拮抗劑，但是特別是西曲瑞克、安他瑞克和根據(jù)美國專利No.5,942,493和DE 19911771.3的拮抗劑。
5.權(quán)利要求1-4的藥物施用劑型，特征在于賦形劑功能中使用的酸是葡糖酸、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡糖二酸、檸檬酸、抗壞血酸和氨基酸。
6.權(quán)利要求1-4的藥物施用劑型，其特征在于使用的表面活性物質(zhì)是聚乙二醇12-(羥基)硬脂酸酯(Solutol)、聚氧乙烯蓖麻醇酸酯(Cremophor)、多乙氧基醚、poloxamers、磷脂、卵磷脂或者防腐劑形式的例如苯扎氯銨或乙酸苯基汞。
7.權(quán)利要求1-4要求的藥物施用劑型，其特征在于使用的聚合物是白蛋白、聚乙二醇、纖維素衍生物、淀粉衍生物或者聚乙烯吡咯烷酮。
8.權(quán)利要求1-4要求的藥物施用劑型，其特征在于使用的糖是環(huán)糊精或者其衍生物以及糖醇。
9.權(quán)利要求1-4的藥物施用劑型，其特征在于使用脲或者其它離液物質(zhì)作為賦形劑。
10.權(quán)利要求1，2和4的腸胃外施用的藥物施用劑型，其特征在于以高于0.5mg/ml的濃度在溶液中存在乙酸、葡糖酸、葡糖醛酸、乳酸、檸檬酸或者抗壞血酸的肽鹽。
11.權(quán)利要求1-9的藥物施用劑型，其特征在于通過使用聚合物優(yōu)選乳酸和羥基乙酸的均聚物或共聚物延遲活性化合物的釋放并且在于所述肽以乙酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽或磷酸鹽形式存在，并且如果適當，使用權(quán)利要求5-9的其它賦形劑。
12.權(quán)利要求1，2，4和10的腸胃外施用的藥物施用劑型，其特征在于使用的肽是高于0.5mg/ml濃度的溶液中的西曲瑞克、安他瑞克和根據(jù)美國專利No.5,942,493和DE 19911771.3的拮抗劑。
13.權(quán)利要求1-9和11的藥物施用劑型，其特征在于通過使用聚合物優(yōu)選乳酸和羥基乙酸的均聚物或共聚物延遲活性化合物的釋放，其中肽抗排卵素、A-75998、加尼瑞克和Nal-Glu拮抗劑、特別是西曲瑞克、安他瑞克和根據(jù)美國專利No.5,942,493和DE 19911771.3的拮抗劑以它們的乙酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽或磷酸鹽形式存在，并且如果適當，可以含有其它賦形劑。
14.制備權(quán)利要求1和4的藥物施用劑型的方法，其特征在于用乙酸、葡糖醛酸、葡糖酸、乳酸、檸檬酸或抗壞血酸復(fù)分解肽鹽，以化學計量比例制備相應(yīng)的鹽，溶解于注射用水，如果適當，與權(quán)利要求5-9要求的賦形劑混合，然后無菌過濾，分散到注射小瓶中并且凍干。
15.制備權(quán)利要求1和4的藥物施用劑型的方法，其特征在于用乙酸、葡糖醛酸、葡糖酸、乳酸、檸檬酸或抗壞血酸復(fù)分解肽鹽，以化學計量比例制備相應(yīng)的鹽，這些鹽以本身公知的方法摻入到乳酸和羥基乙酸的均聚物或共聚物的緩釋微粒中，并且將這些微粒懸浮于用于注射目的的生理可耐受介質(zhì)中。
16.前述一項或多項權(quán)利要求的新的藥物施用劑型用于對于性激素-依賴性良性和惡性疾病的腸胃外施用的用途。
17.前述一項或多項權(quán)利要求的新的藥物組合物用于對于性激素-依賴性良性和惡性疾病的腸胃外施用的用途，其中所述疾病特別是良性前列腺增生、前列腺癌、早熟、多毛癥、子宮內(nèi)膜增生及其伴隨癥狀，子宮內(nèi)膜癌，體外受精(IVF/COS/ART)，避孕，月經(jīng)前綜合征(PMS)，子宮肌瘤，乳腺癌，輸卵管阻塞(PTO)，卵巢癌和子宮癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及腸胃外施用的藥物施用劑型，其含有以其乙酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽或磷酸鹽形式存在的有聚集傾向的溶解的或分散的肽，并且其還含有上面提到的作為游離酸的一種酸。
文檔編號A61K9/08GK1469734SQ01817704
公開日2004年1月21日 申請日期2001年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月18日
發(fā)明者H·鮑爾, H 鮑爾, M·戴姆, 錕 碌偎, W·薩里凱奧蒂斯 申請人:贊塔里斯股份公司