專利名稱：治療乙肝的中藥藥物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種治療乙型肝炎的中藥藥物組合物，尤其涉及以中藥胡黃連中所含有的環(huán)烯醚萜甙為其藥物有效成分的中藥制劑，該藥物對乙型肝炎的治療有效果，本發(fā)明還提供了該藥物的一種制備方法。
肝病是危害人類健康的病癥之一，特別是乙型肝炎，容易發(fā)展成癌病變，多年來始終是醫(yī)學界欲重點研究和突破的課題之一。目前臨床上治療乙肝還沒有特效藥，多采用例如合成藥阿昔洛韋(無環(huán)鳥苷)一類的抗病毒藥物，欲提高用來治療乙肝的效果需要配合使用干擾素。據(jù)報道阿昔洛韋與干擾素合用對治療乙肝有療效，但是干擾素價格昂貴，普通患者長期服用難以承受，同時，西藥的副作用，及長期服用使體內(nèi)毒菌產(chǎn)生抗藥性，是困繞醫(yī)學界的一個重要問題，也是促使制藥界不間斷地投入財力物力，推出新藥的主要目的。
胡黃連是玄參科植物胡黃連Picrorhiza scrophu lariiflora Pennell的干燥根莖，是多年生草本植物，生長于高寒地區(qū)的巖山上及石堆中、或淺土層的向陽處，分布于四川西部、云南西北部、西藏南部。據(jù)文獻記載，胡黃連中含有環(huán)烯醚萜甙類(又稱胡黃連素或胡黃連總甙)、三萜甙、酚類、有機酸及胡黃連醇、胡黃連甾醇、香莢蘭已酮、及鈣、鎂、鉀等十四種金屬元素。其中，胡黃連素(或胡黃連總甙)不是一個簡單的化合物，而是包括胡黃連甙-Ⅰ(Pricroside-Ⅰ)、胡黃連甙(kutkoside)和胡黃連甙-Ⅱ在內(nèi)的環(huán)烯醚萜甙混合物。
據(jù)藥典記載，胡黃連根的提取物有利膽、抗菌作用，可用于肝炎及尿路感染的治療。在傳統(tǒng)的中醫(yī)療法中，只能是水煎后服用，這種傳統(tǒng)方法一是難以最大程度發(fā)揮藥效，從另一方面講，中藥的服用不方便已是公知的。通過對中藥中有效成分的藥效研究，進而實現(xiàn)對該天然成分的提取和利用，制造出在藥效上等同甚至優(yōu)于合成藥，而在毒性上優(yōu)于合成藥的純中藥制劑，特別是純中藥注射針劑，這是對傳統(tǒng)醫(yī)學的發(fā)展。
本發(fā)明的目的在于提供一種可治療乙型肝炎的中藥藥物組合物，其中的有效成分是來自胡黃連中藥的環(huán)烯醚萜甙類化合物，亦稱胡黃連總甙提取物。
本發(fā)明進一步提供了以所述胡黃連總甙提取物為活性成分、用于治療乙肝的純中藥藥物制劑和相應的藥物劑型。
本發(fā)明的另一個目的在于提供用于治療乙肝的該純中藥藥物的制備方法，特別是胡黃連總甙提取物的制備方法。
本發(fā)明提供的藥物組合物，其含有從胡黃連原料藥得到的乙醇提取物，該提取物的組成中包括了胡黃連甙-Ⅰ、胡黃連甙-Ⅱ、胡黃連酚甙-Ⅱ、及一些三萜甙類化合物，即胡黃連總甙提取物，其中的主要活性成分是胡黃連甙-Ⅱ，從藥效學角度出發(fā)，作為本發(fā)明用于治療乙肝的藥物組合物，所述胡黃連總甙提取物中的胡黃連甙-Ⅱ的含量在21％以上，最好不低于55％。
在此基礎上，本發(fā)明還研究提出了一種治療乙肝的純中藥藥物制劑，該中藥藥物以上述胡黃連總甙提取物為有效活性成分，并包括了藥劑學上可接受的輔料組分。
本發(fā)明的藥物制劑包括針劑和口服劑，其中口服劑包括膠囊劑、口服液、片劑、顆粒劑等，針劑，特別是注射用粉針劑則要求其有效成分中胡黃連甙-Ⅱ的含有量不低于80％，尤其是不低于90％。
本發(fā)明還提供了該純中藥藥物制劑的一種制備方法，其包括以胡黃連為原料，用乙醇提取，并經(jīng)純化分離制取胡黃連總甙提取物，使該提取物中胡黃連甙-Ⅱ的含量在21％以上；以該胡黃連總甙提取物為有效成分，按照藥劑學方法制備成要求的藥物制劑。
胡黃連原料藥一般是在秋季采挖，除去須根及泥沙后曬干保存，在用于提取前應先粉碎，通常要求通過20-40目篩，以利于其中有效成分被充分提取。從生產(chǎn)角度考慮，本發(fā)明選用的胡黃連藥材中，包括了上述各種胡黃連甙化合物的總甙含量應該不低于18％。
根據(jù)本發(fā)明的比較優(yōu)選的實施方案，提取胡黃連總甙提取物的方法包括如下步驟(1)胡黃連原料藥粉碎后加入濃度在50％以上的乙醇提取；(2)60℃以下減壓濃縮該乙醇提取液回收乙醇；(3)將上述濃縮后的提取液加入氧化鋁柱中，用70-80％的乙醇洗脫至經(jīng)檢測洗脫液中無胡黃連總甙成分(一般情況下以胡黃連甙-Ⅱ記)；(4)洗脫液在60℃以下減壓濃縮回收乙醇至膏狀。
上述提取步驟中，乙醇的濃度不能小于50％，從提高提取率的角度考慮，乙醇的濃度越高越好，從生產(chǎn)和成本角度考慮，優(yōu)選使用約70-80％濃度的乙醇進行原料的提取，提取方法可以是滲漉、回流，或其它可行的操作方式，乙醇與原料藥之間應保持比較大的比例，以保證提取的完全，可以使用原料重量的約10-20倍的乙醇溶液滲漉或直接回流(如有必要，可采取多次回流提取)，優(yōu)選采用滲漉，將原料藥裝入滲漉器，使加入的乙醇浸沒原料，滲出液從下部流出，同時不斷添加溶劑保持浸沒原料，將滲漉液合并進行減壓濃縮，從理論上講低溫有利于提取成分的穩(wěn)定，但會增加生產(chǎn)過程的成本，所以優(yōu)選在50-60℃或更低溫度下對提取液減壓濃縮。在實際生產(chǎn)中要求盡可能地回收乙醇，將濃縮液的濃度控制到約2毫升藥液相當于1克生藥量，或通過測定其相對密度D20℃為1.12-1.15來控制濃縮過程的完成。
為有利于有效成分的分離，濃縮后的提取液需要分散在適當?shù)妮d體上，例如本發(fā)明的技術方案中是使用了氧化鋁顆粒，通常是中性氧化鋁，但不排除其它可行的載體物質(zhì)，使?jié)饪s液被其2-4倍量的氧化鋁顆粒所分散，然后使用乙醇洗脫。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，將事先烘干的、粒度為180-200目的氧化鋁裝柱，所用層析柱的規(guī)格和材質(zhì)無特別要求，可根據(jù)實際生產(chǎn)的需要選定，并按常規(guī)操作方法裝填，但裝柱量應不少于柱高的2/3，最好選用直徑與柱高之比在大約1∶6～1∶8范圍內(nèi)的柱。然后將濃縮藥液加入氧化鋁柱中，使用乙醇洗脫時，洗脫速度優(yōu)選為約850～1500ml/分鐘。
收集的洗脫液在60℃以下減壓濃縮回收乙醇至流浸膏狀，優(yōu)選濃縮溫度50-60℃，此時真空度約在400-600Mpa，所述流浸膏狀，其1毫升相當于約1-2克生藥量。經(jīng)進一步揮發(fā)溶劑，真空干燥，粉碎，即可得到所述胡黃連總甙提取物粉末。
根據(jù)本發(fā)明的技術方案，該中藥制劑劑型可以是注射針劑或口服制劑，其中口服制劑包括膠囊劑、口服液、片劑、顆粒劑等。在制備口服制劑時，選用的輔型劑可以是淀粉、糊精或環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)充填劑，制劑的后期制備工藝及設備均屬制藥領域的常規(guī)技術，本發(fā)明對此不作限定，故在此不予詳述。
本發(fā)明優(yōu)選的劑型是注射劑，特別是注射用凍干粉針劑，可以按照制藥學常規(guī)方法精制處理提取物制成粉針劑。作為制備方法的一個優(yōu)選方案，制備過程進一步包括將已濃縮成膏狀的總甙提取物用70-80％的乙醇稀釋后加入氧化鋁柱，用85-90％乙醇溶液梯度洗脫至洗脫液中無胡黃連甙-Ⅱ，洗脫液于60℃以下減壓濃縮回收乙醇至無醇味；將得到的濃縮液加入經(jīng)預處理后的聚酰胺柱中，然后以90％濃度以上的乙醇再次梯度洗脫至洗脫液無無胡黃連甙-Ⅱ，洗脫液在60℃以下減壓濃縮回收乙醇，得到的濃縮物按常規(guī)方法處理并添加輔料制成注射用凍干粉針劑。
本發(fā)明制備方法所用聚酰胺柱可使用普通規(guī)格的聚酰胺產(chǎn)品裝填得到，優(yōu)選使用聚酰胺的粒度為60～90目，對所用層析柱的規(guī)格和材質(zhì)亦無特殊要求，柱的尺寸可根據(jù)實際處理量確定，但最好選用直徑與柱高之比在1∶6～1∶8范圍內(nèi)的層析柱，且裝柱量應不超過柱高的2/3。
本發(fā)明的創(chuàng)造性在于通過科學可行的方法從胡黃連中藥中提取分離出了胡黃連總甙提取物，并進一步將該提取物作為有效成分制備成用于治療肝病，特別是治療乙肝的中藥制劑。如前面所述，本發(fā)明提供的藥物的有效成分是包括胡黃連甙-Ⅱ的胡黃連總甙提取物，為達到發(fā)明目的，對原料藥中胡黃連總甙的提取率應在55％以上，同時該提取物中胡黃連甙-Ⅱ的含量也應不低于21％。
為保證藥物的質(zhì)量，在生產(chǎn)過程中需要對洗脫液和最終提取物中的有效成分含量隨時進行檢測。用于檢測所述甙類化合物的方法可以借助任何可行的檢測手段和公知的方法，本發(fā)明在此提出了一套可行的檢測方法。
首先，通過高效液相色譜分析，與胡黃連甙-Ⅱ標準品譜圖對照，證明了在總提取物中含有以胡黃連甙-Ⅱ為主要成分的胡黃連總甙混合物(從譜圖中計算主要成分的峰面積，胡黃連甙-Ⅱ約占到50-60％左右)。從紫外吸收光譜中可看到，胡黃連甙-Ⅱ標準品和胡黃連總甙提取物在265nm均有最大吸收峰，所以應該認為胡黃連甙-Ⅱ同胡黃連總甙的紫外吸收圖譜基本相一致，據(jù)此本發(fā)明采用了紫外-可見光分光光度法標準曲線粗略檢測總甙的含量；同時，采用高效液相外標法，通過標準曲線檢測和控制胡黃連總甙提取物中的胡黃連甙-Ⅱ含量，經(jīng)實際生產(chǎn)中使用證明，檢測結(jié)果的重現(xiàn)性好。應該說明的是，該方法僅作為本發(fā)明產(chǎn)品的質(zhì)量控制手段之一，不應排除其它任何可滿足要求的方法和操作。特別是總甙混合物的提取率含量測定對于本領域的技術人員是很容易實現(xiàn)的，也可以如上述以胡黃連甙-Ⅱ為標示通過對比提取物與原料物在265nm的吸光值得到總甙提取物中有效成分的提取率，而其中含有胡黃連甙-Ⅱ的有效量則可通過HPLC外標法測得。
附

圖1是胡黃連甙-Ⅱ標準品的HPLC譜圖。
附圖2是本發(fā)明制備的胡黃連總甙提取物的HPLC譜圖。
提取物中胡黃連甙-Ⅱ的HPLC測定HPLC條件
流動相甲醇∶水=39∶61檢測波長265nm流速1ml/分鐘1、標準曲線準確稱取胡黃連甙-Ⅱ標準品9.0mg(北京九生源生物醫(yī)藥研究所提供)，以無水甲醇溶解轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中并定容至刻度，從中精密量取0.25ml、0.75ml、1.25ml、2.25ml，分別置于5ml容量瓶中用無水甲醇稀釋至刻度定容，分別從中精密吸取10μl注入高效液相色譜儀，作出譜圖，如圖1所示，在15.950分鐘時有最大峰。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，可繪制出標準曲線線性范圍0.45～4.05μg回歸方程Y=1E+0.6X-117231決定系數(shù)R2=0.99992、胡黃連總甙提取物中胡黃連甙-Ⅱ的測定準確稱取胡黃連總甙提取物40mg，以無水甲醇溶解轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中并定容至刻度，過0.22μm微孔濾膜，作為供試品溶液。精密吸取10μl注入高效液相色譜儀，求出峰面積代入回歸方程算出胡黃連甙-Ⅱ的含量。
發(fā)明人使用以上所述方法或?qū)嵤├哪z囊藥劑及注射針劑完成了以下藥理和藥效試驗一、急性毒性試驗用Wistar健康小鼠，采用口服和腹腔注射兩種給藥方式，測定胡黃連膠囊的半致死量(LD50)口服為15.64±1.28g/kg，腹腔為8.35±0.98g/kg。口服半致死量為臨床用量的約150倍(臨床使用劑量為100-200mg/kg)。
二、長期毒性試驗用Wistar種大鼠180只，體重70-90克，雌雄各半，隨機分成4組(對照組及三個劑量組)，對照組和大劑量組50只，中劑量組和小劑量組40只，每組雌雄各半。試驗用藥為實施例2的胡黃連膠囊。
各劑量組分別為臨床用藥量的約50倍、30倍和10倍，即大劑量組5g/kg，中劑量組3g/kg，小劑量組1g/kg，正常對照組灌等量的蒸餾水。灌胃給藥每日一次，連續(xù)六個月，試驗期間每天觀察記錄動物一般狀態(tài)，每周測動物體重一次，試驗結(jié)束后，各組動物分別稱體重，測定各項指標(包括心電圖檢查、血液學檢查、生化及病理學檢查)。在試驗的第三個月處死大劑量組和對照組動物各10只，在試驗的第六個月處死大部分動物，即每組中各處死30只，保留10只停藥一個月觀察藥物可能有的毒性影響和恢復情況，于第七個月處死。
分別對給藥組和對照組動物進行各項指標的測定，大鼠灌服藥囊6個月以后，三個劑量組的大鼠活動、食欲、大小便及生長發(fā)育均無顯著性影響，各給藥組動物的血象、肝腎功能、心電圖及主要臟器指標與對照組比較均無顯著性差異(經(jīng)t檢驗結(jié)果統(tǒng)計，p＞0.05)，且均在正常生理范圍內(nèi)。病理學檢查表明對照組及各給藥組動物各臟器組織均為正常組織結(jié)構(gòu)，未見藥物中毒性病理形態(tài)改變。
三、一般藥效學試驗1、胡黃連膠囊對大鼠慢性四氯化碳損傷的保肝作用取Wistar雄性大鼠120只，隨機分成空白對照組、四氯化碳模型組、聯(lián)苯雙酯陽性藥組、胡黃連膠囊大劑量組、胡黃連膠囊中劑量組、胡黃連膠囊小劑量組，共6個組。除空白對照組外，其余各組均皮下注射40％四氯化碳油溶液3ml/kg，每周2次，連續(xù)15周，于第6周注射四氯化碳24小時后從動物尾部取血測定SGPT和SGOT，并解剖少量動物觀察肝纖維化程度。自注射四氯化碳第7周開始，按聯(lián)苯雙酯200mg/kg、胡黃連膠囊大劑量200mg/kg、胡黃連膠囊中劑量100mg/kg、胡黃連膠囊小劑量50mg/kg、灌胃給藥，每日1次，連續(xù)60天。末次給藥后取血測定SGPT、SGOT，總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白蛋白/球蛋白(A/G)比值及唾液酸，隨機取部分肝臟測定羥脯氨酸含量，并取肝臟做病理組織學檢查，結(jié)果如下1)對四氯化碳(CCl4)致慢性肝損傷大鼠的影響 與正常對照組相比3p＜0.001；與CCl4組相比4p＜0.05，5p＜0.01，6p＜0.0012)對四氯化碳(CCl4)致大鼠慢性肝損傷血清蛋白的作用(x±s) 與正常對照組相比1p＜0.05，2p＜0.01，3p＜0.001；與CCl4組相比4p＜0.05，5p＜0.01，6p＜0.001從該結(jié)果中可得出，大鼠皮下注射四氯化碳，至第6周可明顯損傷肝功能，使轉(zhuǎn)氨酶升高，解剖少量死亡動物可見明顯肝細胞變性壞死、纖維化形成。試驗結(jié)束時，損傷對照組大鼠血清SGPT和SGOT、唾液酸和肝組織羥脯氨酸水平明顯升高，血清TP、ALB及A/G亦有顯著的損傷性改變，病理組織學檢查可見肝硬化形成，而給藥組周胡黃連膠囊治療60天，各劑量組對四氯化碳引起大鼠肝損傷的轉(zhuǎn)氨酶升高有明顯降低作用，對血清ALB及A/G有明顯改善，且能抑制四氯化碳損傷致大鼠肝硬化的血清唾液酸的升高及肝組織羥脯氨酸的升高，病理組織學檢查也顯示胡黃連膠囊能明顯減輕肝纖維化程度，可改善肝功能，對肝纖維化的形成有治療作用。
2、胡黃連膠囊對大鼠的利膽作用雄性大鼠50只，稱重后分成5組。實驗前12小時禁食不禁水，實驗時每只鼠以戊巴比妥鈉60mg/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定于固定板上，沿腹正中線切開約2cm，打開腹腔，找到胃幽門部，翻轉(zhuǎn)十二指腸，在十二指腸降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下穿2根絲線，結(jié)扎乳頭部，向肝臟方向作“V”形切口，插入塑料管，即可見有淡黃綠色膽汁流出，結(jié)扎固定塑料管，用燒杯收集膽汁。手術后用止血鉗夾閉腹壁，以鹽水紗布覆蓋，待穩(wěn)定20分鐘后，先收集30分鐘膽汁，然后各組大鼠分別由十二指腸給予胡黃連膠囊1ml/100g(實施例2的膠囊使用時配成10g/dl濃度)，陰性對照組注入等容量生理鹽水，陽性對照組給予去氫膽酸1ml/100g。
給藥后每隔30分鐘收集膽汁一次，共3次，記錄給藥前后的膽汁，計算給藥后膽汁流量增加的百分率 結(jié)果顯示，給藥后1小時，小劑量組膽汁流量增加30.3％，中劑量組膽汁流量增加37.5％，大劑量組膽汁流量增加45.2％，陽性對照組的膽汁流量增加為32.3％，經(jīng)t檢驗，與給藥前相比差異顯著或非常顯著。
3、胡黃連膠囊對雛鴨乙肝模型鴨乙型肝炎病毒(DHBSAG)的表達和影響取1∶10稀釋的DHBSAG陽性血清200μl，腹腔接種一日齡北京雛鴨，正常飼養(yǎng)7天后，足靜脈取血，分離血清，測定DHBSAG。
取其中成陽性的鴨53只，隨機分為4組，即高、低劑量組、無環(huán)鳥苷治療組和對照組。高、低劑量組分別給予胡黃連膠囊(50mg/kg和10mg/kg，ig,Big)，無環(huán)鳥苷治療組(25mg/kg,ip,Bid)，對照組給予等量的生理鹽水，于給藥后的第10天和停藥后的第3天足靜脈取血，分離血清，-20℃冰箱保存待測。
用pH9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋純化鼠抗DHBSAG(解放軍302醫(yī)院提供)至1∶10000，加入40孔聚乙烯塑料，鏈霉素(ST)液洗三次，每次5分鐘，每孔加入100μl包被液37℃水浴1小時，傾去包被液，以磷酸-鏈霉素(PB-ST)液洗三次，每次5分鐘，每孔加200μl的10％牛血清(CFS)封閉，37℃水浴2小時，PB-ST洗板后，每孔加入100μl待測血清樣品，同時設陽性、陰性和空白對照孔。37℃水浴1小時，PB-ST洗板，每孔加入1∶600稀釋的酶標鼠抗-DHBSAG(解放軍302醫(yī)院提供)100μl，37℃水浴1.5小時，每孔加入100μl的鄰苯二胺(OPD)底物，37℃避光放置15分鐘，加1滴2M的硫酸終止反應，用DG-3022型酶聯(lián)免疫檢測儀測定光密度OD490的值。
按照以下公式計算出各組動物DHBSAG表達水平(P/N) 判定P/N＞2.1為陽性，P/N在1.5-2.1之間為可疑，P/N＜1.5為陰性。
各試驗組的測定結(jié)果如下(注*p＜0.01)給藥前 給藥后 停藥后3天高劑量組(50mg/kg)0.36±0.15 0.19±0.12* 0.19±0.13*低劑量組(10mg/kg)0.37±0.13 0.21±0.11* 0.21±0.12*無環(huán)鳥苷組(25mg/kg) 0.35±0.14 0.20±0.13* 0.20±0.13*對照組 0.36±0.13 0.37±0.12 0.38±0.14
從以上結(jié)果看出，治療后DHBSAG表達水平呈顯著下降，陽性對照物無環(huán)鳥苷治療后DHBSAG表達水平亦呈下降，停藥后3天，三組的DHBSAG表達水平與治療后相比沒有顯著變化。
根據(jù)該結(jié)果可統(tǒng)計出陰轉(zhuǎn)率高劑量組 低劑量組 無環(huán)鳥苷組 對照組給藥前的陽性鴨(只)1413 1312給藥后的陰性鴨(只)9 6 7 0停藥后陰性鴨(只) 9 6 7 0陰轉(zhuǎn)率(％)6446 540其中，高、低劑量組在治療前后DHBSAG的陰轉(zhuǎn)率分別為64％和46％，陽性對照物無環(huán)鳥苷治療前后DHBSAG的陰轉(zhuǎn)率為54％，高劑量組與陽性對照組比較有顯著的差異。三組治療組治療后與生理鹽水組比較都有顯著的統(tǒng)計學差異(p＜0.05或p＜0.01)。由此可以證明，本發(fā)明的胡黃連膠囊對雛鴨乙型肝炎模型病毒有明顯的以致作用。
從以上研究試驗可看到，本發(fā)明采用純天然中藥-胡黃連藥物治療乙型肝炎，具有抑制乙肝病毒復制，保肝、降低轉(zhuǎn)氨酶的作用，同時還有利膽降脂作用，無反彈現(xiàn)象，可以代替干擾素、轉(zhuǎn)移因子等西藥制劑，成為具有良好開發(fā)前景的純中藥制劑。
以下通過實施例詳細說明本發(fā)明技術方案的實施，但不應以此限定本發(fā)明的實施范圍。
實施例1取干燥的胡黃連原料藥粉碎過20目篩，裝入滲漉器中，用15倍重量的80％乙醇滲漉，滲漉過程中保持藥材始終被乙醇浸沒，滲漉液的流速為850毫升/分鐘，收集滲漉液于約58℃以下減壓濃縮回收乙醇，直至濃縮液濃度為生藥量的約2倍體積(即約2ml藥液相當于1g生藥)。
取藥液量3倍左右的中性氧化鋁顆粒，粒度為通過200目篩，裝柱，使氧化鋁裝柱量為柱的約2/3，將上述濃縮藥液倒入柱中，以80％的乙醇溶液洗脫，洗脫速度900-1000ml/分鐘，收集洗脫液，隨時檢測，至洗脫液中不合胡黃連總甙。洗脫液合并于60℃以下減壓濃縮回收乙醇至流浸膏狀(1ml相當于約1克生藥量)，其中胡黃連甙-Ⅱ的含量24.5％。(或直接干燥粉碎，加入輔料制成口服藥劑)。
上述總甙提取物用80％的乙醇稀釋后加入氧化鋁柱中，用90％乙醇溶液洗脫至洗脫液中無甙-Ⅱ，洗脫液于60℃以下減壓濃縮回收乙醇至無醇味；將得到的濃縮液加入經(jīng)予處理后的聚酰胺柱中，然后以約95％濃度以上的乙醇洗脫至洗脫液無甙-Ⅱ，洗脫液在60℃以下減壓濃縮回收乙醇至無醇味，測定該濃縮物中胡黃連甙-Ⅱ含量為92％。
濃縮物以蒸餾水稀釋后，進行分裝和滅菌，制成注射針劑。
或該濃縮物以注射用水稀釋，稀釋液用5層濾紙抽濾，濾液再經(jīng)G6垂融漏斗過濾，濾液通過超濾法用0.22μm微孔濾膜再次過濾精制，然后分裝，凍干，制成注射用凍干粉針劑。
本實施例中的胡黃連總甙提取物的HPLC譜圖見附圖2，操作方法及胡黃連甙-Ⅱ成分檢測均采用前述HPLC方法，可知在15.147分鐘時有最大峰。
總甙提取物的測定可以其中所含甙-Ⅱ粗略標示，通過紫外分光光度法加以控制1、標準曲線精密稱取胡黃連甙-Ⅱ(由北京九生源生物醫(yī)藥研究所提供)0.0031g，以無水甲醇溶解并定容至50ml，從中分別精密量取0.9ml、1.7ml、2.5ml、3.3ml、4.1ml，分別用無水甲醇稀釋至50ml，使用紫外分光光度計測定其在265nm的吸光值，繪制出標準曲線。
線性范圍11.16～50.84ug/ml回歸方程Y=49.66X+0.035決定系數(shù)R=1.0002、總甙含量的測定(1)原料中總甙準確稱取胡黃連原料粉末0.2g，精密加入甲醇50ml，超聲提取30分鐘，過濾后殘渣再次加入甲醇50ml超聲提取30分鐘，合并濾液，60℃以下減壓濃縮至干，加蒸餾水20ml溶解后用氯仿萃取3次，每次20ml，合并水層60℃以下減壓濃縮至干，產(chǎn)物用無水甲醇溶解并定容至50ml，從中精密量取1ml，加入無水甲醇稀釋至50ml,265nm比色，測定吸光值，比照甙-Ⅱ的標準曲線，換算標示出總甙大約含量，約19％；(2)提取物中總甙準確稱取胡黃連總甙提取物0.1g，用20ml蒸餾水溶解，氯仿萃取3次，每次20ml，棄去氯仿層，取水層在60℃減壓回收溶劑至干，在用無水甲醇溶解并定容至50ml，從中精密量取1ml，用無水甲醇稀釋至50ml，搖勻作為供試品溶液，使用紫外分光光度計測定其在265nm的吸光值，根據(jù)標準曲線標示總甙的大約含量。
實施例2取干燥的胡黃連原料藥粉碎過20目篩，裝入滲漉器中，用10倍重量的70％乙醇滲漉，滲漉過程中保持藥材始終被乙醇浸沒，滲漉液的流速為900毫升/分鐘，收集滲漉液于60℃以下減壓濃縮回收乙醇，直至濃縮液濃度達到相當于生藥量的2倍體積(即約2ml藥液相當于1g生藥)，此時相對密度D20℃為1.12-1.15。
取藥液量2倍左右的氧化鋁顆粒，粒度為通過180-200目篩，裝柱，使氧化鋁裝柱量為柱的約2/3，將上述濃縮藥液倒入柱中，以70％的乙醇溶液洗脫，洗脫速度1200-1300ml/分鐘，收集洗脫液，隨時檢測，至洗脫液中不含胡黃連總甙成分。洗脫液合并于60℃以下減壓濃縮回收乙醇至流浸膏狀(1ml相當于約1克生藥量)，轉(zhuǎn)入搪瓷盤中，加熱保持60℃蒸發(fā)溶劑至稠膏狀，然后置于真空干燥箱中約50-60℃真空干燥，將干燥物進行疏松，粉碎，過80目篩，得到棕黃色細粉，測定其中胡黃連甙-Ⅱ的含量23％。
向得到的細粉中混入15％淀粉漿混勻制成軟材，經(jīng)10～20目篩制粒及40～60℃下干燥，分裝入膠囊，即成為本發(fā)明的胡黃連膠囊制劑，規(guī)格為200mg/粒。
實施例3按照實施例2的方法制備出總甙提取物粉末，然后加入物料量5～20％的干淀粉及1～5％的硬脂酸鎂等，經(jīng)混合，制粒，干燥，壓片，即制得片劑。
實施例4實施例2制備的總甙提取物粉末，加入蔗糖水及常規(guī)量的防腐劑、穩(wěn)定劑等輔料，過濾、滅菌，分裝入10ml瓶中，制成口服液。
權利要求
1.一種治療乙肝的中藥藥物組合物，其含有用乙醇作溶劑，從胡黃連原料藥中提取得到的胡黃連總甙提取物，該提取物中胡黃連甙-Ⅱ的含量在21％以上。
2.治療乙型肝炎的中藥藥物，其中的活性成分為權利要求1的組合物，并包括藥劑學可接受的輔料組分。
3.權利要求2所述的中藥藥物，其劑型包括注射針劑和口服制劑。
4.權利要求3所述的藥物，其劑型為注射用凍干粉針劑，且所述胡黃連總甙提取物中的胡黃連甙-Ⅱ含量在90％以上。
5.治療乙肝的中藥藥物的制備方法，其包括以胡黃連中藥為原料，用乙醇提取，并經(jīng)純化分離制取胡黃連總甙提取物，該提取物中胡黃連甙-Ⅱ的含量為21％以上；以該提取物為有效成分按照藥劑學方法制備成制劑。
6.權利要求5所述的制備方法，其中，提取胡黃連總甙提取物的方法包括如下步驟(1)用50％濃度以上的乙醇提取胡黃連原料藥；(2)60℃以下減壓濃縮該乙醇提取液；(3)將上述濃縮后的提取液加入氧化鋁柱中，用70-80％的乙醇洗脫至檢測洗脫液中無胡黃連總甙；(4)洗脫液在60℃以下減壓濃縮至膏狀。
7.權利要求6所述的方法，其中，乙醇液洗脫時的洗脫速度為850-1500毫升/分鐘。
8.權利要求5所述的制備方法，其中，藥物制劑的制備包括按照藥劑學方法制備成注射針劑和口服劑。
9.權利要求5所述的制備方法，其還包括將已濃縮成膏狀的胡黃連總甙提取物經(jīng)乙醇稀釋后用聚酰胺柱進一步精制的過程，得到的精制產(chǎn)物按常規(guī)制藥工藝處理并添加輔料制成注射用凍干粉針劑。
10.權利要求9所述的制備方法，其中，所述進一步精制包括將已濃縮成膏狀的總甙提取物用70-80％的乙醇稀釋后加入氧化鋁柱中，用85-90％乙醇溶液梯度洗脫至洗脫液中無胡黃連總甙，洗脫液于60℃以下減壓濃縮回收乙醇至無醇味；將得到的濃縮液加入經(jīng)予處理后的聚酰胺柱中，用90％濃度以上的乙醇洗脫至洗脫液中無胡黃連甙-Ⅱ，收集洗脫液在60℃以下減壓濃縮回收乙醇，得到的濃縮物按常規(guī)方法處理并添加輔料制成注射用凍干粉針劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于治療乙肝的純中藥藥物及其制備方法,該藥物中的有效成分是有來自中藥胡黃連的環(huán)烯醚萜甙類化合物,且其中的主要成分為胡黃連甙－Ⅱ,本發(fā)明還提供了該中藥的制劑劑型,尤其是注射用凍干粉針劑。經(jīng)藥理藥效學試驗表明,本發(fā)明胡黃連提取物制成的藥劑可用于治療乙肝,并在陰轉(zhuǎn)率方面優(yōu)于合成西藥阿昔洛韋,可以代替干擾素、轉(zhuǎn)移因子等西藥制劑,具有良好的開發(fā)前景。
文檔編號A61K9/19GK1298705SQ0013576
公開日2001年6月13日 申請日期2000年12月19日 優(yōu)先權日2000年12月19日
發(fā)明者周亞偉, 孟繁林, 孫煒光 申請人:吉林省力源藥業(yè)股份有限公司