專利名稱：有利于斷裂神經(jīng)再生的生物可吸收導(dǎo)線與導(dǎo)管的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有利于哺乳動(dòng)物神經(jīng)再生的生物可吸收移植物，具體涉及在斷裂的哺乳動(dòng)物神經(jīng)近體端與遠(yuǎn)體端之間搭橋的具有神經(jīng)元粘附分子的生物可吸收導(dǎo)線與導(dǎo)管移植物。
自13世紀(jì)起就有人試圖用手術(shù)的方法來修復(fù)神經(jīng)損傷，但迄今為止，神經(jīng)損傷的功能恢復(fù)仍是一個(gè)未解決的難題。學(xué)術(shù)界曾經(jīng)認(rèn)為神經(jīng)損傷將導(dǎo)致所有相關(guān)功能永久性不可恢復(fù)。但后來人們又逐漸發(fā)現(xiàn)周圍神經(jīng)系統(tǒng)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有相當(dāng)強(qiáng)的再生能力，關(guān)鍵在于給予其適當(dāng)?shù)脑偕h(huán)境?？茖W(xué)家對(duì)于神經(jīng)再生環(huán)境作了大量研究。八十年代神經(jīng)生物學(xué)研究開始深入到了分子水平，但至今尚未找到明確答案，因?yàn)樯窠?jīng)再生的分子生物學(xué)機(jī)制仍是一個(gè)未完全解開的謎。盡管如此，就目前的技術(shù)水平而言，相對(duì)于中樞神經(jīng)再生，實(shí)現(xiàn)周圍神經(jīng)再生已更為現(xiàn)實(shí)。
目前臨床上，一般對(duì)周圍神經(jīng)斷裂的病人采用神經(jīng)外膜或束膜縫合術(shù)。但是，對(duì)于周圍神經(jīng)長距離(1厘米以上)斷性損傷的病人，直接將斷裂神經(jīng)的近體端與遠(yuǎn)體端之間進(jìn)行手術(shù)縫合會(huì)出現(xiàn)張力，妨礙神經(jīng)再生，所以對(duì)此類病人目前臨床上的常用選擇為自體神經(jīng)移植。自體神經(jīng)移植需要二次手術(shù)，在供體的傷口處可能會(huì)有麻木或感覺過敏的問題，經(jīng)常會(huì)受到移植體尺寸的限制，而且總體的預(yù)后效果并不好。異體移植也曾經(jīng)應(yīng)用過，但需要免疫抑制劑，且成功率太低。
為了避免自體或異體神經(jīng)移植的種種問題，現(xiàn)在研究較多的是神經(jīng)導(dǎo)管，又稱人工神經(jīng)移植物。神經(jīng)導(dǎo)管是用合成材料或生物材料制得，用于在斷裂神經(jīng)的近體端與遠(yuǎn)體端之間搭橋，起到引導(dǎo)及促進(jìn)神經(jīng)再生的作用。導(dǎo)管可以是中空的，可以在制備時(shí)或移植前往管腔中加入一些有生物活性的因子、細(xì)胞等，也可以將活性因子直接與導(dǎo)管內(nèi)壁交聯(lián)。一個(gè)理想的人工神經(jīng)移植物應(yīng)具有活性因子局部濃縮、減少細(xì)胞侵噬、減少神經(jīng)瘢痕和引導(dǎo)神經(jīng)再生方向的作用，從而防止神經(jīng)瘤生成和神經(jīng)過度分枝。
制備神經(jīng)導(dǎo)管的材料，可分為生物不可吸收與生物可吸收兩種。生物不可吸收的材料研究最多的是硅酮橡膠，但植入后往往有長期的副作用包括纖維化、神經(jīng)壓迫等，需要再次手術(shù)取出導(dǎo)管，故現(xiàn)在臨床上很少使用硅酮橡膠制備的神經(jīng)導(dǎo)管。生物可吸收材料制得的導(dǎo)管具有無須手術(shù)取出的優(yōu)點(diǎn)，是目前研究的主導(dǎo)方向。采用的材料包括聚乳酸(PLA)、聚羥基乙酸(PGA)和膠原蛋白等等。從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及人體臨床的數(shù)據(jù)看，聚羥基乙酸是一種非常有前途的神經(jīng)導(dǎo)管材料。用聚羥基乙酸做成的中空導(dǎo)管可成功地連接0.5～3.0厘米的人指神經(jīng)空缺，并且臨床預(yù)后與自體神經(jīng)移植的效果相當(dāng)[Mackinnon，S.E.and Dellon，A.L.(1990)Plast.Reconstr.Surg.85，419-424]。為了使神經(jīng)再生得到更好的環(huán)境與條件，研究者們?cè)陂_發(fā)管腔內(nèi)充填活性因子或管壁交聯(lián)活性因子的導(dǎo)管上做了大量工作，這些因子包括神經(jīng)生長因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子、表皮生長因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、層粘連蛋白(laminin)等等。日本的一個(gè)研究小組曾經(jīng)用管腔內(nèi)充填有神經(jīng)生長因子和堿性成纖維細(xì)胞生長因子的PGA導(dǎo)管成功地連接貓坐骨神經(jīng)2.5厘米的空缺[Kiyotani T.and Teramachi M.et al.Brain Research 740(1996)66-74]?？墒窃谏窠?jīng)導(dǎo)管的應(yīng)用中，目前存在的主要問題是再生過程中神經(jīng)瘤的形成。再生神經(jīng)的生長錐由于在導(dǎo)管中的生長仍缺乏方向性，導(dǎo)致反向生長，是神經(jīng)瘤形成的主要原因。
本發(fā)明的目的在于解決上述存在問題，提供一種能促使神經(jīng)再生具有良好方向性的生物可吸收導(dǎo)線與導(dǎo)管，這種導(dǎo)線、導(dǎo)管或?qū)Ь€-導(dǎo)管的聯(lián)合應(yīng)用，能有效消除或減少神經(jīng)再生中神經(jīng)瘤的形成，改善臨床預(yù)后效果。
本發(fā)明包括有利于斷裂神經(jīng)再生的生物可吸收導(dǎo)線與導(dǎo)管移植物。
本發(fā)明生物可吸收導(dǎo)線的技術(shù)解決方案其特殊之處是該導(dǎo)線具有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
本發(fā)明生物可吸收導(dǎo)管的技術(shù)解決方案其特殊之處是該導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
所述的導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子可以是導(dǎo)管內(nèi)壁包被有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
所述的導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子也可以是導(dǎo)管管壁內(nèi)含有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
所述的導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子還可以是導(dǎo)管管腔內(nèi)埋置有具有至少一種神經(jīng)元粘附分子的介質(zhì)。
所述的介質(zhì)可以是生物可吸收導(dǎo)線，也可以是生物可吸收膠狀物。
本發(fā)明所述的神經(jīng)元粘附分子是指脊椎動(dòng)物源的神經(jīng)元粘附分子，此類分子是指神經(jīng)元粘附分子的全部或部分一級(jí)結(jié)構(gòu)、具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的突變蛋白或具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的融合蛋白。
所述的脊椎動(dòng)物源包括但不局限于人源。
本發(fā)明所述的導(dǎo)線具有至少一種神經(jīng)元粘附分子可以是導(dǎo)線表面包被有至少一種神經(jīng)元粘附分子，也可以是導(dǎo)線線體中具有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
神經(jīng)元粘附分子[Neuronal Cell Adhesion Molecules(neuronalCAMs)]通過調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的粘附和遷移、軸突生長及成束、突觸形成和細(xì)胞內(nèi)信息傳導(dǎo)來控制細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。神經(jīng)元粘附分子具有促軸突生長和再鞘(remyelination)的活性。神經(jīng)細(xì)胞粘附分子從結(jié)構(gòu)上可分作三大類免疫球蛋白超家族類(immunoglobulin superfamily)、細(xì)胞粘附素(cadherin)類和整合素(integrin)類。其中免疫球蛋白超家族類是最大的一類。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)元粘附分子有NCAM，F(xiàn)3/F11，L1，NgCAM，NrCAM，CHL1，TAG1/axonin-1，neurofascin，BIG1，BIG2等[R.Douglas Fields & Kouichi Itih，Trends in Neurosciences，Vol.19，No.11.(1996)；Yoshihiro Yoshihara and Miwa Kawasaki et al.，Vol.28No.1，pp51-69(1995)]。
Neural cell adhesion molecule(NCAM)是在神經(jīng)細(xì)胞表面最豐富的粘附分子之一，70年代被發(fā)現(xiàn)。雖然NCAM來自一個(gè)基因，但是由于RNA(核糖核酸)剪切水平和翻譯水平的不同，最終有多種的NCAM分子。除了免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域外，NCAM還有與纖粘連蛋白(fibronectin)同源的區(qū)域(Christo Goridis & Jean-FrancoisBrunet，Seminars in Cell Bioligy，1992，3192)。
L1家族蛋白與許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，目前發(fā)現(xiàn)的L1蛋白均有6個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域與5個(gè)fibronectin III型(FNIII)結(jié)構(gòu)域及一個(gè)疏水性穿膜區(qū)域、長度在85-147個(gè)氨基酸之間的胞內(nèi)序列。L1蛋白主要在發(fā)育中的周圍及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)，參與神經(jīng)細(xì)胞粘附(Michael Hortsch，Neuron，Vol.17，587-593，October，1996)。CHL1是1996年發(fā)現(xiàn)的L1家庭的新成員，與L1有很高的同源性[Holm J.and Hillenbrand R.，et al.Eur J.Neurosci，19961613-1629]，是一個(gè)神經(jīng)識(shí)別分子，有促進(jìn)軸突生長的作用。
本發(fā)明提供的一種生物可吸收導(dǎo)線與導(dǎo)管，由于其上具有至少一種神經(jīng)元粘附分子，故這種導(dǎo)線和/或?qū)Ч艿闹踩耄墒股窠?jīng)細(xì)胞的生長錐粘附到連接哺乳動(dòng)物神經(jīng)近體端與遠(yuǎn)體端的導(dǎo)線和/或?qū)Ч苌?，使生長錐能沿導(dǎo)線和/或?qū)Ч芏ㄏ蛏L，從而避免神經(jīng)再生過程中神經(jīng)瘤的形成。這是由于神經(jīng)元粘附分子具有自體相吸作用(homophilic interaction，即互為配體與受體)和/或異體相吸作用(heterophilic interaction)。神經(jīng)元粘附分子在生長的軸突上也自然表達(dá)。斷裂神經(jīng)的生長錐因?yàn)楸磉_(dá)有神經(jīng)元粘附分子，故可以與導(dǎo)線和/或?qū)Ч苌习坏纳窠?jīng)元粘附分子結(jié)合，從而沿導(dǎo)線和/或?qū)Ч苌L。由于沿導(dǎo)線、導(dǎo)管生長的軸突表面自然表達(dá)神經(jīng)元粘附分子，后長的軸突可粘附于先長的軸突生長(稱作接觸介導(dǎo)吸引，contact attraction)，從而使得再生軸突從總體上沿導(dǎo)線、導(dǎo)管定向生長，避免了神經(jīng)瘤的形成。
本發(fā)明的導(dǎo)管可以做成其管壁具有濾膜性能的，以致于對(duì)管壁外部物質(zhì)按分子量大小起選擇性透過作用[Aebischer P.andGuenard V.et al.(1988)Brain Res.454，179-187]。所述的導(dǎo)管可以用同一種或多種材料做成多層的[den Dunnen.W F.A.et al.(1996)JBiomed.Mater.Res.31，105-115；Hoppen，H.J.and Leenslag，J.W.et al.(1990)Biomaterials 11，286-289]。
下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體說明。
實(shí)施例1包被有神經(jīng)元粘附分子的生物可吸收導(dǎo)線(1)神經(jīng)元粘附分子NCAM-Fc融合蛋白的制備NCAM基因(Genbank號(hào)X15049)的第42到第2233號(hào)核苷酸與人免疫球蛋白G1的Fc片段融合，融合基因插入表達(dá)載體pEE14。用該載體轉(zhuǎn)化CHOK1細(xì)胞，挑選出能高表達(dá)NCAM-Fc融合蛋白的穩(wěn)定表達(dá)型細(xì)胞株。融合蛋白用Protein-A柱純化。
(2)導(dǎo)線制作采用符美國藥典6/0號(hào)(直徑0.07毫米)的PGA多絲手術(shù)縫合線，將此縫合線浸潤于經(jīng)無菌過濾的、含有1mg/ml NCAM-Fc蛋白的生理磷酸鹽緩沖溶液中，4℃過夜，130℃熱處理70分鐘，隨即應(yīng)用于手術(shù)。
所選用的神經(jīng)元粘附分子不限于NCAM-Fc，生物可吸收導(dǎo)線的材料也不限于PGA；導(dǎo)線直徑包括但不局限于0.07毫米。
實(shí)施例2管壁包被有神經(jīng)元粘附分子的生物可吸收導(dǎo)管(1)此導(dǎo)管所包被的神經(jīng)元粘附分子同例1。
(2)導(dǎo)管制作采用符美國藥典2/0號(hào)(直徑0.3毫米)的PGA多絲手術(shù)縫合線經(jīng)織帶機(jī)編織成內(nèi)徑4-5毫米，長2.5厘米的中空管，用環(huán)氧乙烷消毒后，將此導(dǎo)管浸潤于經(jīng)無菌過濾的、含有1mg/ml NCAM-Fc蛋白的生理磷酸鹽緩沖溶液中，4℃過夜，130℃熱處理70分鐘，充氮，-20℃儲(chǔ)存。
此生物可吸收導(dǎo)管的材料不限于PGA，其制作方法和尺寸也不限于本例所述方法。
實(shí)施例3管壁內(nèi)含有至少一種神經(jīng)元粘附分子的導(dǎo)管這種導(dǎo)管可參照文獻(xiàn)[P.Aebischer，A.N.Salessiotis et al.(1989)Journal of Neuroscience Research 23282-289]中所述的方法制作。簡單地說，先制備干重比為40％的牛血清白蛋白(BSA)/乙烯-醋酸乙烯共聚物(EVA)溶液，將一定量的NCAM-Fc凍干粉加入到此溶液中混勻，用含NCAM-Fc的BSA/EVA溶液經(jīng)金屬模具制成不同規(guī)格的導(dǎo)管，將此導(dǎo)管浸入10％的純EVA溶液4次后，風(fēng)干即成。
管壁內(nèi)含有至少一種神經(jīng)元粘附分子的導(dǎo)管的制備包括但不局限于本實(shí)施例中所述的方法；可選用的神經(jīng)元粘附分子包括但不局限于NCAM-Fc。
實(shí)施例4埋置有具有至少一種神經(jīng)元粘附分子的生物可吸收膠狀物的導(dǎo)管膠狀物的制作將一定量的NCAM-Fc凍干粉與含層粘連蛋白的膠(Matrigel)混合即得。Matrigel的制備方法參見[Kleinman，etal.(1986)Biochemistry，25312]。也可將一定量NCAM-Fc的凍干粉與醫(yī)用明膠(gelatin)混合制得。醫(yī)用明膠在神經(jīng)再生中被證明是安全的[Brown R.E.and Erdmann D.et al.(1996)J Reconstr.Microsurg.12，149-152]。
將此膠狀物埋置于生物可吸收導(dǎo)管即制成本例導(dǎo)管。生物可吸收導(dǎo)管可采用符美國藥典2/0號(hào)(直徑0.3毫米)的PGA多絲手術(shù)縫合線經(jīng)織帶機(jī)編織制成。
本例中，可選用的神經(jīng)元粘附分子包括但不局限于NCAM-Fc；可選用的膠狀物包括但不局限于Matrigel和gelatin?？蛇x用的導(dǎo)管包括但不局限于本實(shí)施例中所述的導(dǎo)管。
以下試驗(yàn)是應(yīng)用導(dǎo)管和導(dǎo)線，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行神經(jīng)再造手術(shù)，并對(duì)再生神經(jīng)進(jìn)行形態(tài)學(xué)和組織學(xué)研究。
其中——導(dǎo)管采用符美國藥典2/0號(hào)(直徑0.3毫米)的PGA多絲手術(shù)縫合線經(jīng)織帶機(jī)編織成內(nèi)徑4-5毫米，長2.5厘米的中空管，用環(huán)氧乙烷消毒后，充氮，-20℃儲(chǔ)存，此為生物可吸收導(dǎo)管；導(dǎo)線為兩種，一種是未經(jīng)NCAM-Fc蛋白浸潤、處理過的符美國藥典6/0號(hào)PGA縫合線；另一種是經(jīng)NCAM-Fc蛋白浸潤、處理過的符美國藥典6/0號(hào)PGA縫合線，即例1導(dǎo)線。
將體重4～5公斤的貓分為3組，每組4只，共12只。
第一組(4只)導(dǎo)管。
第二組(4只)導(dǎo)管和未經(jīng)NCAM-Fc蛋白浸潤、處理過的導(dǎo)線。
第三組(4只)導(dǎo)管和經(jīng)NCAM-Fc蛋白浸潤、處理過的導(dǎo)線。
貓經(jīng)3～5mg/kg的鹽酸氯胺酮麻醉后，露出坐骨神經(jīng)，切除2厘米的左大腿中部坐骨神經(jīng)。在第一組中，將神經(jīng)的近體端與遠(yuǎn)體端插入導(dǎo)管中，將神經(jīng)與導(dǎo)管縫合。在第二組中，先將神經(jīng)的近體端與導(dǎo)管一端縫合，再三次將未經(jīng)NCAM-FC蛋白浸潤、處理過的導(dǎo)線從神經(jīng)近體端穿入，經(jīng)導(dǎo)管空腔從神經(jīng)遠(yuǎn)體端穿出，最后將神經(jīng)遠(yuǎn)端與導(dǎo)管另一端縫合。在第三組中，手術(shù)操作同第二組，但使用經(jīng)NCAM-Fc蛋白浸潤、處理過的導(dǎo)線。手術(shù)中用直徑0.15毫米的尼龍手術(shù)縫合線將導(dǎo)管與神經(jīng)縫合，作為標(biāo)記。貓右大腿的坐骨神經(jīng)作為對(duì)照。
12只貓均存活，5個(gè)月后將貓?zhí)幩?。取下?shí)驗(yàn)貓的左右坐骨神經(jīng)進(jìn)行形態(tài)學(xué)和組織學(xué)觀察。
在所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，均未發(fā)現(xiàn)導(dǎo)管或?qū)Ь€，表明5個(gè)月后實(shí)驗(yàn)中使用的導(dǎo)管和導(dǎo)線全部降解吸收。在所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中均觀察到再生神經(jīng)。在第一和第二組中，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的再生神經(jīng)兩端(有尼龍手術(shù)縫合線為標(biāo)記)均觀察到腫起節(jié)段，標(biāo)志著神經(jīng)再生過程中出現(xiàn)神經(jīng)瘤。在第三組中，4只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的再生神經(jīng)兩端均未觀察到腫起節(jié)段，表明未出現(xiàn)神經(jīng)瘤。
坐骨神經(jīng)經(jīng)2.5％戊甲醛固定，2％四氧化鋨(OsO4)再固定后，用乙醇脫水，包埋。從再生神經(jīng)的中部切下1微米厚的切片，甲苯胺藍(lán)染色。用電腦系統(tǒng)對(duì)有髓神經(jīng)纖維的密度及直徑定量記錄，結(jié)果見表1、表2。
表1有髓神經(jīng)纖維的密度(條/100×100微米2)
表2有髓神經(jīng)纖維直徑(微米)的平均值
表1、表2的數(shù)據(jù)顯示PGA導(dǎo)管是用于神經(jīng)移植的較好替代物，導(dǎo)線與導(dǎo)管聯(lián)合使用對(duì)于有髓神經(jīng)纖維的數(shù)量及直徑無顯著影響。
權(quán)利要求
1.一種用于在斷裂的哺乳動(dòng)物神經(jīng)近體端與遠(yuǎn)體端之間起導(dǎo)向作用的生物可吸收導(dǎo)線，其特征是該導(dǎo)線具有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
2.一種用于在斷裂的哺乳動(dòng)物神經(jīng)近體端與遠(yuǎn)體端之間搭橋的生物可吸收導(dǎo)管，其特征是該導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
3.如權(quán)利要求2所述的導(dǎo)管，其特征是所述的導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子是指導(dǎo)管內(nèi)壁包被有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
4.如權(quán)利要求2所述的導(dǎo)管，其特征是所述的導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子是指導(dǎo)管管壁內(nèi)含有至少一種神經(jīng)元粘附分子。
5.如權(quán)利要求2所述的導(dǎo)管，其特征是所述的導(dǎo)管內(nèi)具有至少一種神經(jīng)元粘附分子是指導(dǎo)管管腔內(nèi)埋置有具有至少一種神經(jīng)元粘附分子的介質(zhì)。
6.如權(quán)利要求5所述的導(dǎo)管，其特征是所述的介質(zhì)是生物可吸收導(dǎo)線。
7.如權(quán)利要求5所述的導(dǎo)管，其特征是所述的介質(zhì)是生物可吸收膠狀物。
8.如權(quán)利要求1所述的導(dǎo)線，其特征是所述的神經(jīng)元粘附分子是指脊椎動(dòng)物源的神經(jīng)元粘附分子。
9.如權(quán)利要求2—7任何一權(quán)利要求所述的導(dǎo)管，其特征是所述的神經(jīng)元粘附分子是指脊椎動(dòng)物源的神經(jīng)元粘附分子。
10.如權(quán)利要求1或8所述的導(dǎo)線，其特征是所述的神經(jīng)元粘附分子是指神經(jīng)元粘附分子的全部或部分一級(jí)結(jié)構(gòu)、具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的突變蛋白或具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的融合蛋白。
11.如權(quán)利要求2—7任何一權(quán)利要求所述的導(dǎo)管，其特征是所述神經(jīng)元粘附分子是指神經(jīng)元粘附分子的全部或部分一級(jí)結(jié)構(gòu)、具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的突變蛋白或具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的融合蛋白。
12.如權(quán)利要求8所述的導(dǎo)線，其特征是所述的脊椎動(dòng)物源指人源。
13.如權(quán)利要求9所述的導(dǎo)線，其特征是所述的脊椎動(dòng)物源指人源。
全文摘要
一種用于在斷裂的哺乳動(dòng)物神經(jīng)近體端與遠(yuǎn)體端之間起導(dǎo)向作用的生物可吸收導(dǎo)線,它具有至少一種神經(jīng)元粘附分子。一種用于在斷裂的哺乳動(dòng)物神經(jīng)近體端與遠(yuǎn)體端之間搭橋的生物可吸收導(dǎo)管,它具有至少一種神經(jīng)元粘附分子。所述的神經(jīng)元粘附分子是指神經(jīng)元粘附分子的全部或部分一級(jí)結(jié)構(gòu)、具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的突變蛋白或具有神經(jīng)元粘附分子生物活性的融合蛋白。本導(dǎo)線、導(dǎo)管植入能防止神經(jīng)瘤形成。
文檔編號(hào)A61L29/04GK1340363SQ0012691
公開日2002年3月20日 申請(qǐng)日期2000年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月1日
發(fā)明者肖志成, 周黎 申請(qǐng)人:肖志成, 周黎