專利名稱：一種治療艾滋病的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用生物工程技術(shù)制備的治療艾滋病的藥物及其制備方法，特別是涉及用艾滋病病毒膜蛋白的單克隆抗體制備的治療艾滋病的藥物及其制備方法。
艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合征，是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的一種免疫性疾病。由于其傳播迅速、病死率極高，且目前尚無特效治療方法，更無疫苗可以預(yù)防，因而有“20世紀(jì)瘟疫”之稱。
現(xiàn)有的用于臨床的抗艾滋病藥物僅能推遲發(fā)病期和延長病人的生命，并且價格昂貴，毒性大。最近國外抗艾滋病藥物臨床研究結(jié)果證明，針對HIV-1膜蛋白gp160(膜蛋白gp120及跨膜蛋白gp41的前體蛋白)上的幾個特定中和表位的中和抗體(其中包括ELDKWA-表位特異性的單克隆抗體2F5)在被動免疫治療中的組合使用能抑制HIV-1病毒的粘膜傳染以及母嬰傳播，并能清除血液中的HIV-1病毒(Nature Medicine 1999，5204；Nature Medicine 2000，6200；Nature Medicine1999，5211)；人免疫缺陷病毒(HIV-1)跨膜蛋白gp41上的主要中和表位ELDKWA的表位特異性單克隆抗體能夠體外抑制多種HIV-1病毒株感染靶細(xì)胞(J.Virology 1993，676642；AIDS Res.Human Retroviruses 1994，101651；AIDS1996，10587)。
本發(fā)明的目的是提供一種有效的治療艾滋病的藥物，該藥物可對付艾滋病病毒的變異。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種制備上述治療艾滋病的藥物的方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計方案一種治療艾滋病的藥，它基本上包括至少一種單克隆抗體，所述抗體的抗原是人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的ELDKWA表位及其變異表位。
所述變異表位為ELEKWA、ELNKWA或ELDEWA。
本發(fā)明治療艾滋病的藥物優(yōu)選由以下組分組成ELDKWA-表位特異性的單克隆抗體ELEKWA-表位特異性的單克隆抗體ELNKWA-表位特異性的單克隆抗體ELDEWA-表位特異性的單克隆抗體一種制備上述治療艾滋病的藥物的方法，基本上包括以下步驟(1)、人工合成至少一條分別含有人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的中和表位的表位多肽，所述中和表位選自ELDKWA表位或/和它的變異表位或至少一次重復(fù)的ELDKWA表位或/和它的變異表位；(2)、將上述表位多肽分別耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物；
(3)、用上述耦聯(lián)物分別配以可接受的佐劑免疫動物；(4)、采用常規(guī)的細(xì)胞融合技術(shù)分別制備雜交瘤；(5)、將自上述不同雜交瘤細(xì)胞系得到的抗體純化，混合制成治療艾滋病的藥物。
其中，所述人工合成的至少一條多肽優(yōu)選為分別含有人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的至少一次重復(fù)的中和表位ELDKWA或它的變異表位。
所述ELDKWA表位的變異表位為ELEKWA、ELNKWA或ELDEWA。
研究表明，針對HIV-1膜蛋白上中和表位的抗體在艾滋病治療中能降低病毒的載量，延緩疾病的進(jìn)行。本發(fā)明治療艾滋病的藥物是含有抗人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的主要中和表位ELDKWA表位及其變異表位(如ELEKWA、ELNKWA、ELDEWA)的多種抗體的藥物，即使在艾滋病病毒產(chǎn)生變異的情況下，注射了該藥物的人體內(nèi)也會有相應(yīng)的抗體來殺滅變異的病毒。
本發(fā)明的藥物不但無毒性，而且在提高艾滋病的免疫治療效果的同時，還可降低艾滋病治療成本。
本發(fā)明采用人工合成表位多肽的方法來誘導(dǎo)、制備預(yù)先確定的表位特異性的單克隆抗體，克服了需要利用天然蛋白或重組蛋白免疫，然后大量篩選和鑒定才能得到預(yù)先確定的表位特異性的單克隆抗體的諸多復(fù)雜工作。
根據(jù)本發(fā)明，可以按照艾滋病病毒的變異情況，很快生產(chǎn)出其相應(yīng)類型的藥物，不需進(jìn)行長時間的試驗，降低生產(chǎn)成本。該技術(shù)將對世界預(yù)防醫(yī)學(xué)研究產(chǎn)生重大影響，并將帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
下面結(jié)合非限制性具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實施例一由抗HIV-1 gp41上的中和表位ELDKWA的變異表位ELNKWA-表位特異性抗體為主要活性成分制成的治療艾滋病的藥物，由以下步驟生產(chǎn)(1)、人工合成一條含有人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的4次重復(fù)的ELNKWA中和表位的表位多肽CELNKWAGELNKWAGELNKWAGELNKWA；(2)、利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydoxy succinimide ester)將上述表位多肽與載體蛋白BSA耦聯(lián)；(3)、將上述耦聯(lián)物與福氏佐劑混合(兩種物質(zhì)的體積比為，耦聯(lián)物福氏佐劑＝1∶1)免疫Balb/c小鼠。第一次用完全福氏佐劑，以后每兩周免疫一次，用不完全福氏佐劑。每次免疫的抗原劑量為含10微克表位多肽的耦聯(lián)物/次/只，共免疫3次；(4)、將免疫后的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞系采用常規(guī)的細(xì)胞融合技術(shù)融合，并制備雜交瘤；(5)、從上述雜交瘤細(xì)胞系中篩選出能產(chǎn)生預(yù)先定義的表位特異性的單克隆抗體的克隆，將提純的抗體制成治療艾滋病的藥物。
該藥物在實際應(yīng)用中的使用劑量根據(jù)患者的病情來確定。
實施例二由抗HIV-1 gp41上的中和表位ELDKWA及其變異表位ELNKWA、ELEKWA和ELDEWA的抗體為主要活性成分制成的治療艾滋病的藥物，由以下步驟生產(chǎn)(1)、人工合成4條分別含有人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的中和表位ELDKWA及其變異表位ELNKWA、ELEKWA或ELDEWA的多肽C ELDKWA G ELDKWA G ELDKWA G ELDKWAC ELNKWA G ELNKWA G ELNKWA G ELNKWAC ELEKWA G ELEKWA G ELEKWA G ELEKWAC ELDEWA G ELDEWA G ELDEWA G ELDEWA(2)、利用戊二醛或MBS將上述多肽分別耦聯(lián)到載體蛋白牛血清白蛋白上形成耦聯(lián)物；(3)、將上述耦聯(lián)物分別與福氏佐劑混合(兩種物質(zhì)的體積比為，耦聯(lián)物∶福氏佐劑＝1∶1)后，分別免疫Balb/c小鼠。第一次用完全福氏佐劑，以后每兩周免疫一次，用不完全福氏佐劑。每次免疫的抗原劑量為含10微克表位多肽的耦聯(lián)物/次/只，共免疫3次；(4)、將免疫后的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞系采用常規(guī)的細(xì)胞融合技術(shù)融合，并制備雜交瘤；(5)、從上述雜交瘤細(xì)胞系篩選出能產(chǎn)生預(yù)先定義的4種表位特異性的單克隆抗體的克隆。
(6)、自上述雜交瘤細(xì)胞系分別得到抗HIV-1 gp41上的中和表位ELDKWA及其變異表位ELNKWA、ELEKWA、ELDEWA的4種單克隆抗體，將上述抗體混合，制成治療艾滋病的藥物，其中，各種抗體的加入量由適用人群的統(tǒng)計學(xué)處理得出的各種表位的出現(xiàn)概率進(jìn)行調(diào)整。
使用本發(fā)明的藥物，可以明顯抵抗艾滋病病毒的變異，降低艾滋病病毒的載量，延緩疾病的進(jìn)行，最后達(dá)到治愈的目的。
權(quán)利要求
1.一種治療艾滋病的藥，它基本上包括至少一種單克隆抗體，所述抗體的抗原是人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的ELDKWA表位及其變異表位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療艾滋病的藥，其特征在于所述變異表位為ELEKWA、ELNKWA或ELDEWA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療艾滋病的藥，其特征在于它是由以下組分組成的ELDKWA-表位特異性的單克隆抗體ELEKWA-表位特異性的單克隆抗體ELNKWA-表位特異性的單克隆抗體ELDEWA-表位特異性的單克隆抗體
4.一種制備權(quán)利要求1-3所述的治療艾滋病的藥物的方法，基本上包括以下步驟(1)、人工合成至少一條分別含有人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的中和表位的表位多肽，所述中和表位選自ELDKWA表位或/和它的變異表位或至少一次重復(fù)的ELDKWA表位或/和它的變異表位；(2)、將上述表位多肽分別耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上形成耦聯(lián)物；(3)、用上述耦聯(lián)物分別配以可接受的佐劑免疫動物；(4)、采用常規(guī)的細(xì)胞融合技術(shù)分別制備雜交瘤；(5)、將自上述不同雜交瘤細(xì)胞系得到的抗體純化，混合制成治療艾滋病的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備治療艾滋病的藥物的方法，其特征在于所述人工合成的至少一條多肽分別含有人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的至少一次重復(fù)的中和表位ELDKWA或它的變異表位。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的制備治療艾滋病的藥物的方法，其特征在于所述ELDKWA表位的變異表位為ELEKWA、ELNKWA或ELDEWA。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療艾滋病的藥及其制備方法,本發(fā)明治療艾滋病的藥,它基本上包括至少一種單克隆抗體,所述抗體的抗原是人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的ELDKWA中和表位及其變異表位,所述變異表位為ELEKWA、ELNKWA、ELDEWA F。本發(fā)明藥的制備方法為(1)人工合成至少一條分別含有人免疫缺陷病毒跨膜蛋白gp41上的中和表位ELDKWA或/和它的變異表位;(2)將上述多肽分別耦聯(lián)到載體蛋白或載體多肽上:(3)用上述耦聯(lián)物免疫動物;(4)制備雜交瘤;(5)將得到的抗體配以藥用佐劑,制成藥物。
文檔編號A61P31/18GK1339318SQ0012348
公開日2002年3月13日 申請日期2000年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月18日
發(fā)明者陳應(yīng)華, 肖翌, 田海軍 申請人:清華大學(xué)