專利名稱：農(nóng)用新穎物質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及被定義為“F-0368”的一種新穎的物質(zhì)。更具體地說，本發(fā)明涉及可用作農(nóng)用殺菌劑的這類“F-0368”物質(zhì);它的制備方法;含有該物質(zhì)的農(nóng)用化學(xué)組合物;作物病害和蔬菜病害的預(yù)防劑;農(nóng)用殺菌劑;農(nóng)用物料;采用該殺菌劑預(yù)防農(nóng)業(yè)中疾病的方法;采用該殺菌劑的作物培育方法;和可產(chǎn)生F-0368物質(zhì)的微生物。
作為對(duì)于稻瘟病的預(yù)防劑來說，通常已知的有iso-protiolane、2-苯并[C]呋喃酮、IBP、羧苯磺唑(probenazole)，EDDP等;作為對(duì)于細(xì)菌性白葉枯病的預(yù)防劑來說，已知的有吩嗪氧化物、羧苯磺唑(probenazole)、有機(jī)鎳化合物等。
因?yàn)楫?dāng)?shù)蛣┝繒r(shí)，上述的常用的化學(xué)物質(zhì)不能顯示出足夠的活性，至今已進(jìn)行了采用相對(duì)較高劑量的這種化學(xué)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)很可能會(huì)對(duì)環(huán)境如空氣、水、土壤等引起污染，且這種化學(xué)物質(zhì)有一些對(duì)人體和動(dòng)物是有害的。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種低劑量下可顯示足夠活性的新的物質(zhì)，該物質(zhì)對(duì)于各種植物病害，尤其如稻瘟病和細(xì)菌性白葉枯病具有良好的預(yù)防效應(yīng)。此外，本發(fā)明的目的還在于提供制備這種新物質(zhì)的方法，含有該新物質(zhì)的農(nóng)用化學(xué)組合物、采用這種物質(zhì)作為作物病害和蔬菜病害預(yù)防劑、采用這種物質(zhì)的農(nóng)用殺菌劑，含有這種物質(zhì)的農(nóng)用物料，采用這種殺菌劑來預(yù)防農(nóng)業(yè)上的疾病的方法，采用這種殺菌劑來栽培作物的方法和提供可產(chǎn)生這種新的物質(zhì)的微生物。
為了尋找有用的農(nóng)用化學(xué)物質(zhì)，本發(fā)明者通過從不同的土壤中分離出各種微生物，再分離出由微生物產(chǎn)生的物質(zhì)，并鑒別所獲得的物質(zhì)而進(jìn)行活性的研究。結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)，被定義為“F-0368”的放線菌株屬于如從日本東京練馬區(qū)的蔬菜田里分離出來的北里孢菌(Kitasatosporia)屬，它能在培養(yǎng)基中積聚一種物質(zhì)，它對(duì)于稻瘟病和細(xì)菌性白葉枯病具有良好預(yù)防效應(yīng)。根據(jù)該發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明者分離了由微生物所產(chǎn)生的物質(zhì)，采用已知的多種物質(zhì)比較了其理化性質(zhì)，結(jié)果，他們證實(shí)了該物質(zhì)是新的，迄今尚未被鑒定過，因此，完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的新物質(zhì)“F-0368”具有如下所描述的理化性質(zhì)。
1)結(jié)構(gòu)式
2)熔點(diǎn)165℃～168℃(采用自動(dòng)熔點(diǎn)測(cè)量裝置“METLER-FPI”進(jìn)行測(cè)定);
在133℃～134℃的溫度范圍內(nèi)升華(采用熱分析裝置“SHIMADZUTG-30”測(cè)量)。
3)對(duì)于溶劑的溶解性在甲醇、乙醇和丙酮中易溶，在乙酸乙酯和水中溶解;在氯仿、苯和己烷中不溶解。
4)紫外線吸收光譜;
最大的吸收是在225nm處λMeOHmax(E1%1cm)＝225nm(1070)5)堿性、酸性和中性的區(qū)分酸性物質(zhì)6)顯色反應(yīng)
陽性高錳酸鉀陰性碘化物(iode)，(水合)茚三酮、三氯化鐵和2，4-二硝基苯肼。
7)元素分析CHO測(cè)定值(%)50.634.2545.10[理論值(%)]50.704.2245.078)紅外線吸收光譜采用KBr方法測(cè)定紅外線光譜3000，2740，2640，2520，1730，1670，1450，1430，1380，1360，1210，1150，1110，1020，890，880，760，710(cm)9)核磁共振光譜(60MHz)δ(ppm)測(cè)定系在重甲醇d6-DMSO中進(jìn)行2.05(3H，t)，4.85(2H，q)，11.33(1H，S)從上述的理化性質(zhì)來看，本發(fā)明的“F-0368”物質(zhì)是一種酸性物質(zhì)是明顯的，因此，它可以被改變?yōu)辂}的形式。這種鹽的實(shí)例如下堿金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽等;堿土金屬鹽，如鈣鹽、鎂鹽等;銨鹽;有機(jī)鹽，如三乙基銨鹽等;和鐵、銅、鈷等的復(fù)鹽。
本發(fā)明的物質(zhì)“F-0368”可以從屬于能夠產(chǎn)生物質(zhì)“F-0368”的北里孢菌(Kitasatosporia)屬的菌株中制得。
一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明者從日本東京練馬區(qū)的蔬菜田的土壤中分離出了具有下列真菌性能的屬于北里孢菌(Kitasatosporia)屬的放線菌綱，且他們將該菌株或微生物命名為北里孢菌(Kitasatosporia)SP.F-0368。該菌株于1988年1月28日保藏于日本“Ferme-tationResearchInstitute”(發(fā)酵研究院)，并得到保藏號(hào)“FERM·P-9845”，又于1989年1月26日轉(zhuǎn)移到國際保藏中心，保藏號(hào)為“FERMBP-2259”。
很自然地，上述的北里孢菌(Kitasatosporia)SP·F-0368菌株的天然或人工的突變菌株屬于北里孢菌(Kitasatosporia)屬。因此，對(duì)于本發(fā)明來說，所有能夠產(chǎn)生本發(fā)明的物質(zhì)“F-0368”的微生物均可使用，并無例外，因此，它們均被包括于本發(fā)明所使用的菌株中。
產(chǎn)生本發(fā)明的物質(zhì)“F-0368”的菌株“F-0368”的真菌學(xué)性質(zhì)如下。
(Ⅰ)形態(tài)特征本發(fā)明中所采用的放線菌“F-0368”菌株具有分支菌絲，它延伸于空氣中的氣生菌絲是片段的，且其末端形成一條5～20個(gè)孢子數(shù)的長鏈。在淀粉-瓊脂培養(yǎng)基、酵母-麥芽-瓊脂培養(yǎng)基和酵母-淀粉-瓊脂培養(yǎng)基中，菌株非常令人滿意地生長并形成孢子。它的基質(zhì)菌絲的顏色從黃褐色變?yōu)楹稚?，它的氣生菌絲的顏色從白色變?yōu)榛疑Ｓ秒娮语@微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，從主軸方向來看，已分支的孢子的末端呈直一屈曲的形式，僅在極少的情況下，呈鉤狀。孢子具有光滑的表面或不規(guī)則的多皺的表面。它呈大小為3μm～4μm×1.7μm-2.0μm的圓形或橢圓的形狀。未觀察到孢子囊、菌核和菌絲束。
(Ⅱ)培養(yǎng)特性采用不同的培養(yǎng)基來考察菌株“F-0368”的性能。根據(jù)E·B·Sharring等人(“InternationalJournalofSystematicBacteriology”Vol.16，313～340頁，1966)所報(bào)道的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，此外采用已知的培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)方法。通過采用“ColorHarmonyManual”(顏色調(diào)和手冊(cè))第4版，Container公司的方法，在用氙燈作為標(biāo)準(zhǔn)光光源的情況下，所測(cè)得的顏色作為標(biāo)準(zhǔn)顏色圖，如果發(fā)現(xiàn)相同的顏色，則首先可定出菌屬的名稱，然后，可用圓括號(hào)表示出顏色圖的編號(hào)。在下面除非特別注明外，在培養(yǎng)基中菌種的生長均在瓊脂平板培養(yǎng)中，在28℃下培養(yǎng)三周。實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)結(jié)果列于下面表1中。
表1
(Ⅲ)生理特性1)生長的溫度范圍(在麥芽糖-Bennet-瓊脂培養(yǎng)基中，滅菌前pH為7.3，并采用溫度梯度設(shè)備，在第二周末的生長情況)合適的溫度19.2℃～36.2℃可生長的溫度14.0℃～42.3℃2)明膠的液化作用(在葡萄糖-蛋白胨-明膠培養(yǎng)基中穿刺培養(yǎng))20℃陰性27℃假陽性3)牛奶的凝固和胨化(Difco，脫脂牛奶培養(yǎng)基，依次在28℃和37℃)28℃胨化陽性;凝固陰性37℃胨化陽性;凝固陰性4)黑素的形成酪氨酸-瓊脂培養(yǎng)基陰性形成黑素的培養(yǎng)基陰性蛋白胨-酵母-鐵-瓊脂培養(yǎng)基陰性胰化胨-酵母-液體培養(yǎng)基陰性5)在腺嘌呤、黃嘌呤、次黃嘌呤和酪氨酸中的溶解作用腺嘌呤，黃嘌呤和酪氨酸的溶解作用陰性。
次黃嘌呤陽性6)耐鹽性(在麥芽糖-Bennet-瓊脂培養(yǎng)基+NaCl中，28℃)當(dāng)培養(yǎng)基(NaCl)濃度2%時(shí)觀察到生長(3%時(shí)無生長)7)利用碳源的能力(在Difco培養(yǎng)基中，采用碳的瓊脂培養(yǎng)基，28℃，第二周末)陽性D-葡萄糖，L-阿拉伯糖，D-木糖，鼠李糖，水揚(yáng)苷陰性蔗糖，D-果糖，蜜三糖，i-肌醇，D-甘露糖醇(Ⅳ)化學(xué)性質(zhì)從完整細(xì)胞的水解產(chǎn)物中測(cè)得有LL-二氨基庚二酸和內(nèi)消旋-二氨基庚二酸。
從瓊脂板上的氣生菌絲中，測(cè)得大量的LL-二氨基庚二酸，而內(nèi)消旋二氨基庚二酸只測(cè)得少量。
作為糖的組分來說，所測(cè)得的有半乳糖和甘露糖。主要的甲基萘醌是MK-9(H6·H8)。脂肪酸組成是支鏈型的。胞壁酸中氨基的?；问绞且阴；?br> 如前所描述的，本發(fā)明的微生物F-0368的菌株已被鑒定是屬于北里孢菌(Kitasatosporia)屬的，因?yàn)樗哂姓鎸?shí)的分支菌絲;被分段以形成孢子長鏈，而且延伸到空氣中的氣生菌絲在完整的細(xì)胞中的氨基酸組合物含有LL-二氨基庚二酸和內(nèi)消旋二氨基庚二酸，大量的LL-二氨基庚二酸通過分析氣生菌絲中的二氨基庚二酸而檢測(cè);甲萘醌類組分主要是組成MK-9(H6·H8)，因此，該微生物菌株被鑒定是北里孢菌(Kitasatosporia)SP·F-0368。
本發(fā)明的物質(zhì)F-0368可以通過培養(yǎng)屬于北里孢菌(Kitasatosporia)屬的產(chǎn)生F-0368的微生物，如將KitasatosporiaSP·F-0368在含有通?？杀晃⑸锼玫臓I養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分離和抽提培養(yǎng)液中的物質(zhì)F-0368而得到。可用于本發(fā)明的營養(yǎng)物質(zhì)的實(shí)例是(1)作為碳源的為葡萄糖、甘油、蔗糖、糊精、淀粉等;(ⅱ)作為氮源的為大豆粉、小麥胚芽、蛋白胨、肉抽提物，酵母膏、玉米漿、銨鹽等。除這些物質(zhì)外，根據(jù)需要還可以使用碳酸鈣、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸鹽和其它無機(jī)鹽。
就培養(yǎng)微生物的方法來說，液體培養(yǎng)方法是合適的。培養(yǎng)條件，如溫度、時(shí)間和其它要進(jìn)行如此的選擇，即使其適宜于所使用的微生物的生長，這樣，物質(zhì)F-0368的產(chǎn)量就可能變?yōu)樽畲?。例如，培養(yǎng)在需氧條件下進(jìn)行，培養(yǎng)溫度為25℃～35℃，較佳為28℃。當(dāng)培養(yǎng)在通氣和攪拌下進(jìn)行92～144小時(shí)的時(shí)間周期后，物質(zhì)F-0368的產(chǎn)量達(dá)到其最大值。
為了分離和純化在培養(yǎng)液中所產(chǎn)生和積聚的物質(zhì)F-0368，可對(duì)通常所使用的各種方法進(jìn)行合適的選擇并使用。例如，利用培養(yǎng)物和雜質(zhì)之間的溶解性不同的方法;利用化合物的官能團(tuán)不同的方法，如陰離子交換樹脂法，和利用對(duì)于硅膠，DIAIONHP-20(日本，MitsubishiKasei公司的產(chǎn)品的商標(biāo))的吸附親和力的不同的方法等等，它們可以單獨(dú)地，或結(jié)合地，或重復(fù)地使用。
培養(yǎng)物質(zhì)的活性部分的確證可以借助硅膠薄層層析法(TLC)進(jìn)行。
分離和純化物質(zhì)F-0368的方法的一個(gè)實(shí)例如下就是說，盡管物質(zhì)F-0368也存在于菌絲體中，但它主要存在于培養(yǎng)過濾液中;因此，首先將助濾劑加至發(fā)酵培養(yǎng)液中通過過濾或離心分離將菌絲體除去，然后用鹽酸將所獲得的培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至酸性(pH值為2)，通過裝有吸附樹脂(DIAIONHP-20)的層析柱除去一些有色物質(zhì)，由此，洗提出活性物質(zhì)。
然后，收集該活性部分并通過采用乙酸乙酯，利用其在酸性下可以溶解于有機(jī)溶劑中的性能萃取該活性部分。然后，減壓濃縮抽提液，由此而獲得物質(zhì)F-0368的粗抽提物。
隨后，采用吸附層析法，如硅膠柱層析法使該粗抽提物經(jīng)歷純化過程，收集活性部分，然后將其濃縮和干燥，結(jié)果得到呈游離酸形式的物質(zhì)F-0368的晶體。
進(jìn)一步地，可以通過常用的方法將分離得的呈游離酸形式的晶體修飾成為各種鹽的形式。
就其它的方法來看，下面的合成方法也可以產(chǎn)生本發(fā)明的物質(zhì)F-0368。
在溶劑，如鹽酸、硫酸、甲苯磺酸，甲磺酸等的存在下，將由下列通式所表示的3-甲基-4-低級(jí)烷氧基羰基-2(5H)-呋喃酮[用S·W·Pelletier等人“Tetrahedron，31，(15)1659”所描述的合成方法制備)溶解于諸如水或水和醇，如甲醇，乙醇等的混合物中，然后將它們?cè)谑覝亍?00℃的溫度下經(jīng)歷1～24小時(shí)的一個(gè)時(shí)間周期以進(jìn)行反應(yīng)，由此可以獲得作為最終產(chǎn)物的物質(zhì)F-0368。
通式
其中R代表具有1～6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的低級(jí)烷基在低劑量下，本發(fā)明的物質(zhì)F-0368具有足夠的預(yù)防活性，并且對(duì)于稻瘟病和細(xì)菌性白葉枯病具有極好的預(yù)防效應(yīng)。
這就是說，預(yù)防稻瘟病的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，本發(fā)明的物質(zhì)F-0368不僅通過被噴灑在葉子的表面上，顯示了這種預(yù)防效應(yīng)，而且，尤其，在土壤處理和噴灑于水表面的實(shí)驗(yàn)中也顯示了很好的預(yù)防效應(yīng)。通過將該物質(zhì)噴灑于水表面，它顯示出對(duì)于細(xì)菌性白葉枯病(它是稻類植物的細(xì)菌病)具有極好的預(yù)防效應(yīng)。
本發(fā)明的物質(zhì)F-0368的這種高活性不僅可以通過將其噴灑于作物葉子的表面上來體現(xiàn)，而且可以通過土壤處理和將其噴灑于水表面來體現(xiàn)，這表明該物質(zhì)具有卓越的預(yù)防效應(yīng)。
此外，本發(fā)明的物質(zhì)F-0368所顯示的對(duì)于稻瘟病(它是由于真菌而引起的稻類作物病)和對(duì)于細(xì)菌性白葉枯病(它是由于細(xì)菌引起的稻類作物病)的極好的預(yù)防效應(yīng)是一種獨(dú)特的現(xiàn)象。
偶然地，當(dāng)濃度為500μg/ml時(shí)，物質(zhì)F-0368在體外對(duì)于細(xì)菌、酵母菌和絲狀真菌不顯示其抗微生物的活性。
此外，物質(zhì)F-0368對(duì)于鼠具有低的急性毒性，可以看出它對(duì)于人類和動(dòng)物的傷害很小，因此，它是一種極好的農(nóng)用滅菌劑。
本發(fā)明的農(nóng)用滅菌劑中含有作為活性組分的物質(zhì)F-0368和/或它的鹽，可以列出下列的實(shí)例(1)其中采用F-0368物質(zhì)的滅菌劑;(2)用水稀釋物質(zhì)F-0368，和固體粉末，或其它合適的載體，根據(jù)需要，可加入輔料，如擴(kuò)展劑等而獲得的滅菌劑;(3)通過農(nóng)用化學(xué)物質(zhì)的生產(chǎn)所通常采納的方法，其中將物質(zhì)與各種液體或固體載體相混合，如果需要的話，再加入輔助劑，如調(diào)濕劑，擴(kuò)展劑，分散劑，乳化劑，粘結(jié)劑等而制得的各種滅菌劑配方，如此制得的物質(zhì)呈水分散性的粉末，液體，水溶性粉末，溶膠，乳濁液，粉末，顆粒，油等形式。根據(jù)使用目的，合適地使用這些不同的產(chǎn)品是所需要的。
在制備這些配方時(shí)，所用的載體可以是固體或液體。這些合適的固體載體可以列舉出小麥麩皮;大豆粉，纖維質(zhì)粉末，植物抽提后的殘余物，樹皮和其它植物載體;和粘土，滑石，高嶺土，膨潤土，中國陶土，碳酸鈣，硅藻土，二氧化硅;合成硅酸鈣，和其它無機(jī)物質(zhì)。合適的液體載體可以列舉出水;脂族烴，如輕石油，煤油，礦物油等;芳族烴，如苯，甲苯，二甲苯，甲基萘等;氯代烴，如氯仿，二氯乙烷等;醇，如甲醇，乙醇，異丙醇，正丁醇等;酮，如丙酮，甲乙酮，環(huán)己酮等;含氮有機(jī)溶劑，如乙醇胺，二甲基甲酰胺等，和其它種種。
從改善配方的性能或增加生物效應(yīng)的觀點(diǎn)來看，將不同的輔助劑加入本發(fā)明的農(nóng)用的滅菌劑中是合理的。實(shí)例是各種陰離子或離子化的表面活性劑;高分子量的化合物，如藻酸鈉，羧甲基纖維素，甲基纖維素，聚乙烯醇，阿拉伯樹膠，明膠，酪蛋白等;紙漿亞硫酸鹽廢液，“DORILESS”(由日本SankyoCo.Ltd制造和銷售的產(chǎn)品的商標(biāo))等。
本發(fā)明的農(nóng)用滅菌劑中可能含有各種其他的活性組分，它們不會(huì)削弱物質(zhì)F-0368的預(yù)防效應(yīng)。這些活性組分是，例如殺真菌劑，殺蟲劑，除草劑，殺螨劑，植物生長調(diào)節(jié)劑，殺線蟲劑，殺菌劑，防護(hù)劑，誘引劑等。
本發(fā)明還提供了其中含有物質(zhì)F-0368和/或它的鹽的農(nóng)用物料。這些農(nóng)用物料可以通過將物質(zhì)F-0368和/或它的鹽與肥料，培養(yǎng)稻類作物種子系的土壤，園藝中使用的培養(yǎng)土，營養(yǎng)液培養(yǎng)的肥料等相混合或拌和而獲得。
為了用本發(fā)明的物質(zhì)F-0368來滅除農(nóng)業(yè)中的致病真菌，可以將物質(zhì)F-0368摻入至上述的農(nóng)用滅菌劑和農(nóng)用物料中，由此可殺死農(nóng)業(yè)上的致病真菌。
為了采用物質(zhì)F-0368防止農(nóng)業(yè)病害，可通過在作物的莖和葉上噴灑以使用物質(zhì)F-0368，或通過土壤灌溉而使植物的根部吸收該物質(zhì)來進(jìn)行處理是足夠的。
在物質(zhì)F-0368被施用于滅除或防止農(nóng)業(yè)病害的情況下，當(dāng)該物質(zhì)是被噴灑于葉子表面時(shí)，所使用的物質(zhì)的濃度通常為10ppm～5，000ppm，或較佳地為100ppm～2，000ppm。
在本發(fā)明的物質(zhì)F-0368被施用于育苗箱和水表面的情況下，顆粒狀的該物質(zhì)的濃度應(yīng)在0.1%～50%，或較佳地是0.2%～20%的范圍內(nèi)。
上述顆粒的施用量通常是每一個(gè)育苗箱(大小為30×60×3cm，其中約含有51土)30～100g的范圍內(nèi)，和每10公畝水稻田用3～5Kg。
從上面的解釋中可以明顯地看到，且從下列的較佳實(shí)例中變得更明顯，本發(fā)明的物質(zhì)F-0368在低劑量時(shí)防止疾病的效應(yīng)是極好的尤其，它對(duì)于稻瘟病和稻類作物的細(xì)菌性白葉枯病具有卓越的防止作用，而對(duì)于人和動(dòng)物則很少毒性。因此，從工業(yè)的觀點(diǎn)來看，農(nóng)用的滅菌劑，農(nóng)用物料，殺滅農(nóng)業(yè)上的致病真菌和細(xì)菌的方法，和防止農(nóng)業(yè)病的方法是很有意義的。另外，物質(zhì)F-0368可以用屬于北里孢菌(Kitasatosporia)屬的產(chǎn)生F-0368物質(zhì)的微生物而有效地產(chǎn)生。
下面，應(yīng)該注意到本發(fā)明不受這些實(shí)例和實(shí)驗(yàn)的例子的限制，但是，它包括了從前面已經(jīng)描述了的發(fā)現(xiàn)很容易推斷的所有可能的實(shí)施例。
在附圖中

圖1表示本發(fā)明的物質(zhì)F-0368的紫外線吸收光譜2表示物質(zhì)F-0368的紅外吸收光譜。
實(shí)施例1(制備物質(zhì)F-0368的實(shí)例)1.北里孢菌(Kitasatosporia)SP·F-0368微生物的培養(yǎng)菌株
種子培養(yǎng)基中采用下列組成1.5%糊精，3%淀粉，1%大豆粉，0.3%肉抽提物，0.3%多元蛋白胨，0.3%酵母膏，0.3%碳酸鈣，和0.1%氯化鈉(滅菌以前培養(yǎng)基的pH值為7.0)。
將各自均為70ml的上述種子培養(yǎng)基分別放入多個(gè)錐形瓶中，每個(gè)瓶子的容積均是500ml。然后，將北里孢菌(Kitasatosporia)SP·F-0368微生物菌株接入每一個(gè)這種錐形瓶中，然后在28℃下?lián)u瓶培養(yǎng)72小時(shí)。
然后，將1l這種種子培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至其中含有1001生產(chǎn)培養(yǎng)基的罐中。該生產(chǎn)培養(yǎng)基含有1.5%精精，3%淀粉，1%大豆粉，0.3%內(nèi)抽提物，0.3%多元蛋白胨，0.3%酵母膏，0.3%碳酸鈣，0.1%氯化鈉，和0.2%消沫劑CA-123(滅菌前培養(yǎng)基的pH為6.5)。
培養(yǎng)是在通氣和攪拌下，于28℃進(jìn)行96小時(shí)。培養(yǎng)中的通氣量是1001/分。攪拌轉(zhuǎn)速是200rpm。
2.物質(zhì)F-0368的分離和收集培養(yǎng)完成后，用鹽酸將培養(yǎng)液(其pH值為8.4)的pH調(diào)節(jié)至2.5，然后，將作為過濾輔助物的“硅藻土”(Celite)(美國Johns-ManvilleProductsCorp的硅藻土和有關(guān)產(chǎn)品的商標(biāo))以4%的比例加入到培養(yǎng)液中，用于過濾。接著用50ml乙酸乙酯將約501經(jīng)過濾的培養(yǎng)液(pH值為2.5)抽提二次，此后，減壓下濃縮乙酸乙酯層，由此可獲得約180g其中含有物質(zhì)F-0368的干固體物質(zhì)。將該固體物質(zhì)進(jìn)一步溶解于少量乙酸乙酯中，并將其通過預(yù)先用乙酸乙酯充入的硅膠柱，從而用乙酸乙酯展開該固體物質(zhì)，收集活性部分，并用氫氧化鈉將它的pH值調(diào)節(jié)至8.0后，用11蒸餾水抽提。以這種方法，將經(jīng)抽提的活性部分完全轉(zhuǎn)移至蒸餾水中(pH值為8.0)。然后，用鹽酸將蒸餾水的pH值調(diào)節(jié)至2.0，將干的固體物質(zhì)置于pH值調(diào)節(jié)至2.0的層析柱(DIAIONHP-20)中，用該酸性水溶液(pH值為2.0)展開該物質(zhì)。然后，收集活性部分(約1.51)并用1.51乙酸乙酯將其抽提二次，然后在減壓下濃縮乙酸乙酯層，由此獲得約18g物質(zhì)F-0368的白色的平面形晶體。
實(shí)例2將5ml3N鹽酸水溶液加入150mg(0.96mM)的3-甲基-4-甲氧基羰基-2(5H)呋喃酮中，在80℃-85℃的溫度下攪拌3小時(shí)。然后用乙酸乙酯抽提反應(yīng)產(chǎn)物，在減壓下分餾溶劑。結(jié)果獲得油狀的物質(zhì)。然后將乙酸乙酯-正己烷加入這樣所獲得的油狀物質(zhì)中，并將其結(jié)晶，由此可獲得110mg物質(zhì)F-0368，產(chǎn)率為80.9%。
下面，將列舉本發(fā)明的農(nóng)用滅菌劑的配方的實(shí)例。但是，應(yīng)該看到對(duì)于物質(zhì)F-0368的添加劑的種類和它們的混合比例不受這些實(shí)例的限制，并可在很廣的范圍內(nèi)變化。
實(shí)例3粉末將3份(重量)物質(zhì)F-0368，2份(重量)滑石和55份(重量)粘土在混合機(jī)中均勻地混合，然后，將混合后的物料磨碎而獲得粉末。
實(shí)例4水分散性粉末將20份(重量)物質(zhì)F-0368，5份(重量)調(diào)濕劑(烷基苯磺酸型)，2份(重量)白炭和73份(重量)粘土在混合機(jī)中均勻地混合，然后，將經(jīng)混合的物料磨碎而獲得水分散性的粉末。
實(shí)例5顆粒將20份(重量)物質(zhì)F-0368，5份(重量)“TOXANON”(由日本SanyoKaseiK.K.制造并注冊(cè)的表面活性劑商標(biāo))和90份膨潤土采用濕型擠壓法制成顆粒，然后，干燥并篩分顆粒而獲得所需要的顆粒大小。
下面，將列舉出實(shí)驗(yàn)實(shí)例以測(cè)試本發(fā)明的農(nóng)用滅菌劑的有效性和急性毒性。
實(shí)驗(yàn)1預(yù)防稻瘟病試驗(yàn)(噴灑在葉子上的試驗(yàn))用噴灑槍將上面實(shí)例3中所制備的含有物質(zhì)F-0368的水分散性粉末以15ml/每缽的定額噴灑到栽培于直徑為9cm的植物缽中的稻類作物上(CV.“Nihonbare”，在2-2.5葉子階段)。噴灑一天后，將稻瘟病(即Pyriculariaoryzae)的致病真菌的孢子懸浮液通過噴灑而接種到該稻類作物上，然后將其置放于溫度為24℃-26℃，相對(duì)濕度為90%或更高的恒濕箱中。4天后，清點(diǎn)病變的葉子的斑點(diǎn)數(shù)目以檢查滅菌劑的預(yù)防效應(yīng)。結(jié)果列于下面表2中。但應(yīng)注意預(yù)防效應(yīng)的值是用下列方程式計(jì)算的。
從上面的表2中可以明顯地看出，通過噴灑于葉子上，物質(zhì)F-0368對(duì)于稻瘟病呈現(xiàn)出優(yōu)良的預(yù)防效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)2預(yù)防稻瘟病的試驗(yàn)(通過施用于育苗箱中的試驗(yàn))將50g如上面的實(shí)例4中所制備的其中含有1%物質(zhì)F-0368的顆粒均勻地分散于在尺寸為長30cm，寬60cm，高3cm的育苗箱中生長的稻類作物上(CV.“Nihonbare”，在2.5葉子階段)。顆粒分散后24小時(shí)，將幼種系連同土壤(1×1×3cm)一起取出，移植至1/15000公畝的Wagner體中，土壤粘附到種子的根部。移植40天后，將Pyriculariaoryzae(即稻瘟病的致病真菌)的孢子懸浮液通過噴灑而接種于該幼種系上進(jìn)行接種，然后，將其置于溫度為24℃-26℃，相對(duì)濕度為90%或以上的恒濕箱內(nèi)，保持該狀態(tài)。7天后，清點(diǎn)病變斑點(diǎn)數(shù)以檢查該顆粒狀滅菌劑的防病效應(yīng)。以與上面的實(shí)驗(yàn)1相同的方法來計(jì)算預(yù)防效應(yīng)的值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于下面的表3中。
表3
從表3中可以很明顯地看到，通過施用于育苗箱中，物質(zhì)F-0368比通常的稻瘟病滅菌劑呈現(xiàn)出更好的預(yù)防效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)3稻瘟病預(yù)防效應(yīng)的試驗(yàn)(施用于水表面上的試驗(yàn))將其中分別含有1%，2.5%和5%的根據(jù)實(shí)例3所制備的物質(zhì)F-0368的三種顆粒各自從上層水表面均勻地撒播于在1/10000公畝的Wagner缽(充入的水深為3cm)中生長的稻類作物上。
自撒播顆粒7天后，將稻瘟病的致病真菌(Pyriculariaoryzae)的孢子懸浮液噴灑于該稻類作物上進(jìn)行接種，將其置于溫度維持在24℃-26℃，相對(duì)濕度為90%的恒濕箱中。置于箱內(nèi)7天后，清點(diǎn)該稻類作物的上面兩片葉子的病變?nèi)~斑的數(shù)目以檢查該顆粒狀滅菌劑的預(yù)防效應(yīng)。然后，也用與上面的實(shí)驗(yàn)1相同的方法來計(jì)算預(yù)防效應(yīng)的值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于下面的表4中。
從上面的表4中可以明顯地看到，通過施用于水表面，本發(fā)明的物質(zhì)F-0368對(duì)于稻瘟病比通常的滅菌劑具有更好的預(yù)防效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)4稻類白葉枯病的預(yù)防效應(yīng)試驗(yàn)(施用于水表面的試驗(yàn))將其中分別含有2.5%和5%根據(jù)上面的實(shí)例3所制得的物質(zhì)F-0368的兩種顆粒各自從上層水表面均勻地撒播于在1/1000公畝的Wagner缽(充入的水的深度為3cm)中生長的稻類作物上(CV.“Nihonbare”，在生長出第五葉子的階段)。
從撒播顆粒起7天后，將稻類白葉枯病的致病菌，稻白葉枯病黃單孢菌(Xathomonasoytzae)的懸浮液通過針刺法接種到葉子上，將這樣接種的稻類作物置于暖房中，在暖房里20天后，測(cè)量病變損傷部分的長度以檢查顆粒狀滅菌劑的預(yù)防效應(yīng)。結(jié)果列于下面的表5中。然后，用下面的方程式來計(jì)算預(yù)防效應(yīng)的值。
從上面的表5中可以明顯地看到，通過施用于水表面，本發(fā)明的物質(zhì)F-0368對(duì)于稻類作物的白葉枯病具有極好的預(yù)防效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)5急性毒性采用JCL/ICR種的雄性小鼠(年齡5星期;重量28±1g)，LD50的值(通過向腹膜腔給藥始二周后的死亡率而測(cè)定)顯示出化學(xué)物質(zhì)的量約為200mg/kg。
權(quán)利要求
1.一種物質(zhì)F-0368，其特征在于它包含下列結(jié)構(gòu)式
2.一種制備物質(zhì)F-0368或它的鹽的方法，其特征在于培養(yǎng)屬于北里孢菌(Kitasatosporia)屬的產(chǎn)生物質(zhì)F-0368的微生物;從經(jīng)培養(yǎng)的物質(zhì)中分離和收集所說的物質(zhì)F-0368。
3.一種制備物質(zhì)F-0368或它的鹽的方法，其特征在于將由下列分子式所表示的3-甲基-4-低級(jí)烷氧基羰基-2(5H)-呋喃酮進(jìn)行水解反應(yīng)。
(其中R代表具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的低級(jí)烷基)。
4.一種組合物，其特征在于它主要包括物質(zhì)F-0368或它的鹽，可作為農(nóng)用化合物的一種稀釋劑和載體或賦形劑。
5.一種作物病害預(yù)防劑，其特征在于它主要包括作為活性組分的有效量的物質(zhì)F-0368或它們的鹽，可作為農(nóng)用化學(xué)物質(zhì)的一種稀釋劑和載體或賦形劑。
6.如權(quán)利要求5所述的作物病害預(yù)防劑，其特征在于所述的作物病是稻瘟病和白葉枯病。
7.一種預(yù)防作物病害的方法，其特征在于用權(quán)利要求5中所提出的預(yù)防劑處理作物。
8.一種防止作物病害的農(nóng)用滅菌劑，其特征在于它主要包括作為活性組分的有效量的物質(zhì)F-0368或它們的鹽，可作為農(nóng)用化學(xué)物質(zhì)的稀釋劑或載體或賦形劑。
9.如權(quán)利要求8所述的農(nóng)用滅菌劑，其特征在于所述的作物病是稻瘟病和細(xì)菌性白葉枯病。
10.一種農(nóng)用物料，其特征在于它含有物質(zhì)F-0368或它們的鹽。
11.一種培養(yǎng)作物的方法，其特征在于用權(quán)利要求10中所提出的農(nóng)用物料來栽培作物。
12.一種產(chǎn)生物質(zhì)F-0368的微生物北里孢菌(Kitasatospori SP.F-0368;FERM BP-2259)。
全文摘要
本發(fā)明揭示了一種新的物質(zhì)F-0368，或它的鹽，制備物質(zhì)F-0368或它的鹽的方法，一種主要包括物質(zhì)F-0368或它的鹽，可作為農(nóng)用物質(zhì)的稀釋劑和載體或賦形劑，一種對(duì)于作物病，如稻瘟病和細(xì)菌性白葉枯病的預(yù)防劑，一種用預(yù)防劑處理作物來預(yù)防植物病的方法，一種防止諸如稻瘟病和細(xì)菌性白葉枯病的作物病害的農(nóng)用滅菌劑，其中含有物質(zhì)F-0368或它的鹽的農(nóng)用物料，一種用該農(nóng)用物料來栽培植物的方法和產(chǎn)生物質(zhì)F-0368的微生物。
文檔編號(hào)C12R1/01GK1036955SQ89101378
公開日1989年11月8日 申請(qǐng)日期1989年3月15日 優(yōu)先權(quán)日1988年3月11日
發(fā)明者田口龍祐, 菅原日出男, 齊藤英夫, 宮崎幸雄, ∴田五郎, 水野卓, 古市昭也, 野村昌秀, 浜崎泰彥, 杉山待子, 中村克広 申請(qǐng)人:科研制藥株式會(huì)社