本發(fā)明涉及保健茶提取領(lǐng)域，具體而言，涉及一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的維吾爾保健茶浸提工藝。

背景技術(shù)：

維吾爾保健茶，也稱維吾爾茶、維吾爾土茶、維吾爾香茶，迄今已有1600多年的歷史。維族人民通過在日常生活中飲茶，從而起到解膩、助消化的作用；同時(shí)，維族人民又根據(jù)維吾爾醫(yī)藥學(xué)和經(jīng)驗(yàn)，以茶為基礎(chǔ)，并添加多種藥食兩用的植物，總結(jié)和實(shí)踐得到了一系列用于日常調(diào)養(yǎng)、增加營養(yǎng)和預(yù)防疾病的功能性飲品，形成了獨(dú)具特色的維吾爾保健茶，此類保健茶茶湯紅濃、滋味芳香，醇厚可口。

維吾爾傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)善于采用食療的方法養(yǎng)生，飲用保健茶用于防病健身也是歷史悠久。傳統(tǒng)的維吾爾保健茶并沒有統(tǒng)一的配方，大多是由小豆蔻、肉豆蔻、肉桂、小茴香、丁香、胡椒、生姜、孜然、紅棗、甘草、枸杞等藥材中的幾味與茯磚茶或者紅茶復(fù)配而成。對(duì)于維吾爾茶所能夠起到的功效，維吾爾醫(yī)學(xué)給出了專業(yè)性的解釋，認(rèn)為維吾爾茶具有消除疲勞、疏肝養(yǎng)胃、祛風(fēng)除寒、提神壯腎和利尿的功效，通過對(duì)其配方調(diào)整，還可以產(chǎn)生不同的功效，夏季可以消暑、生津解渴，冬季則有增加熱量和御寒的功效。

現(xiàn)階段，對(duì)于維吾爾茶的研究，主要關(guān)注點(diǎn)還是在于配方和制備工藝流程，對(duì)于維吾爾茶中有效成分提取和分析的研究并不多見，更沒有對(duì)有效成分的提取方法和條件步驟的優(yōu)化。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一目的在于提供一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的維吾爾保健茶浸提工藝，所述方法中，通過對(duì)原料進(jìn)行粉碎、凍干以及水浴浸提，從而能夠?qū)⒈＝〔柚械姆宇惖扔行С煞诌M(jìn)行充分提取。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種由本發(fā)明方法提取得到的維吾爾保健茶浸提液。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種包含本發(fā)明維吾爾保健茶浸提液的保健品和/或藥物。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的維吾爾保健茶浸提工藝，所述方法包括如下步驟：

將豆蔻、紅花、玫瑰、丁香、薄荷、小茴香、甘草、干姜、姜黃以及茯磚茶分別研磨過篩，凍干后混合；將所得混合物水浴浸提，離心后收集上清液，即為維吾爾保健茶浸提液；優(yōu)選的，所述豆蔻為印度豆蔻。

可選的，本發(fā)明所述維吾爾保健茶浸提方法中，按照重量份數(shù)計(jì)，各組分用量如下：豆蔻1～3份，紅花2～5份，玫瑰2～5份，丁香0.2～1份，薄荷1～3份，小茴香1～3份，甘草1～3份，干姜0.2～1份，姜黃0.5～2份，以及茯磚茶5～15份。

可選的，本發(fā)明所述維吾爾保健茶浸提方法中，按照重量份數(shù)計(jì)，各組分用量如下：豆蔻1.5～2份，紅花2～3份，玫瑰3～4份，丁香0.3～0.6份，薄荷2～3份，小茴香1.5～2份，甘草1～2份，干姜0.3～0.6份，姜黃0.5～1份，以及茯磚茶10～15份

可選的，本發(fā)明所述維吾爾保健茶浸提方法中，過篩所用篩網(wǎng)的孔徑為10～30目。

可選的，本發(fā)明所述維吾爾保健茶浸提方法中，水浴浸提的料液比為1:30～1:70g/ml。

可選的，本發(fā)明所述維吾爾保健茶浸提方法中，水浴浸提的溫度為50～90℃。

可選的，本發(fā)明所述維吾爾保健茶浸提方法中，水浴浸提的時(shí)間為5～45min。

可選的，本發(fā)明所述維吾爾保健茶浸提方法中，離心的轉(zhuǎn)速為3000～4000r/min；和/或，離心的時(shí)間為10～15min。

同時(shí)，本發(fā)明還提供了由本發(fā)明所述工藝得到的維吾爾保健茶浸提液。

進(jìn)一步的，本發(fā)明也提供了包含本發(fā)明維吾爾保健茶浸提液的保健品和/或藥物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

(1)本發(fā)明方法中，通過對(duì)于提取步驟流程、物料比、提取溫度以及提取時(shí)間等條件的調(diào)整和優(yōu)化，從而能夠更為有效、高效的將維吾爾茶中的酚類等有效成分進(jìn)行提取，填補(bǔ)了領(lǐng)域的空白；

(2)本發(fā)明提取方法操作簡易、步驟簡便，且無需使用大型儀器，適于工業(yè)化生產(chǎn)；

(3)本發(fā)明維吾爾茶浸提液中有效物質(zhì)含量高，具有良好的保健作用效果。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

圖1為沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖2為維吾爾保健茶浸提液和vc的還原力回歸曲線圖；

圖3為不同濃度的維吾爾保健茶浸提液對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞活力影響；

圖4為不同濃度的維吾爾保健茶浸提液對(duì)細(xì)胞分泌no的影響。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

雖然維吾爾保健茶具有良好的保健功效，但對(duì)于茶葉中有效物質(zhì)如何進(jìn)行有效提取和分析的研究并不多見。本發(fā)明中，通過對(duì)原料處理方法、提取條件步驟的調(diào)整和優(yōu)化，提供了一種能夠有效的將維吾爾保健茶中的酚類等有效物質(zhì)進(jìn)行充分提取的方法，具體的，本發(fā)明方法包括如下步驟：

將豆蔻、紅花、玫瑰、丁香、薄荷、小茴香、甘草、干姜、姜黃以及茯磚茶分別研磨后過篩，凍干后混合；

本發(fā)明用以提取的維吾爾保健茶原料如上，由將豆蔻、紅花、玫瑰、丁香、薄荷、小茴香、甘草、干姜、姜黃以及茯磚茶所組成；

優(yōu)選的，按照質(zhì)量份數(shù)計(jì)，所述原料用量如下：豆蔻1～3份，紅花2～5份，玫瑰2～5份，丁香0.2～1份，薄荷1～3份，小茴香1～3份，甘草1～3份，干姜0.2～1份，姜黃0.5～2份，以及茯磚茶5～15份；

更優(yōu)選的，按照質(zhì)量份數(shù)計(jì)，所述原料用量如下：豆蔻1.5～2份，紅花2～3份，玫瑰3～4份，丁香0.3～0.6份，薄荷2～3份，小茴香1.5～2份，甘草1～2份，干姜0.3～0.6份，姜黃0.5～1份，以及茯磚茶10～15份；

進(jìn)一步優(yōu)選的，按照適量份數(shù)計(jì)，所述原料用量如下：印度豆蔻1.5份，紅花3份，玫瑰3份，丁香0.3份，薄荷2份，小茴香1.5份，甘草1份，干姜0.3份，姜黃0.5份，以及茯磚茶15份；

將如上任一原料配方中各組分分別研磨，然后過篩，所用篩網(wǎng)的孔徑優(yōu)選的為10～30目；更優(yōu)選的為15～20目；進(jìn)一步優(yōu)選的為18目；

然后，將篩選后的各組分在凍干機(jī)中進(jìn)行凍干處理，處理的時(shí)間優(yōu)選的為24h，凍干溫度優(yōu)選的為-5～-20℃；在凍干處理后，將各組分進(jìn)行混合，得到混合物；

將所得混合物水浴浸提；

在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方案中，水浴浸提的料液比(即混合物的質(zhì)量克數(shù)與水體積毫升數(shù)的比例)控制在1:30～1:70g/ml；和/或，水浴浸提的溫度控制在50～90℃；和/或，時(shí)間控制在5～45min；

更優(yōu)選的，本發(fā)明中，料液比控制在1:50～1:60g/ml，浴浸提的溫度控制在80～90℃，時(shí)間控制在20～25min；

通過對(duì)浸提時(shí)間、溫度以及料液比的調(diào)整和優(yōu)化，從而能夠更加有效的將維吾爾茶中的有效成分提出出來，并提高酚類等有效物質(zhì)的提取率；

在水浴浸提后，對(duì)混合體系進(jìn)行離心分離，優(yōu)選的，離心的轉(zhuǎn)速控制在3000～4000r/min；和/或，離心的時(shí)間控制在10～15min；

離心后，將上清液收集，即為得到維吾爾茶浸提液。

由上述方法所得到的維吾爾茶浸提液中具有較高的酚類物質(zhì)等功能組分含量，因而具有良好的抗氧化和提高免疫力的作用，并能夠進(jìn)一步用于制備具有抗氧化、提高免疫力功效的保健品或藥品；

在具體的使用過程中，可以單獨(dú)服用本發(fā)明的維吾爾茶浸提液或進(jìn)一步的浸提液濃縮液，從而起到抗氧化和/或提高免疫的功效；或者將本發(fā)明維吾爾茶浸提液或進(jìn)一步的浸提液濃縮液與其他功能組分和/或輔料作為復(fù)配營養(yǎng)液/藥物服用。

實(shí)施例1

分別稱取印度豆蔻1.5g，紅花3g，玫瑰花3g，丁香0.3g，薄荷2g，小茴香1.5g，甘草1g，干姜0.3g，姜黃0.5g以及茯磚茶15g；

然后，將各原料分別粉碎后過18目篩，然后在-20℃條件下凍干24h，然后混合，得到混合物；

將混合物按照料液比1:40g/ml的比例在水浴鍋中以水浸提，水浴的溫度為70℃，提取的時(shí)間為25min；

然后，將混合體系在轉(zhuǎn)速為3000r/min的條件下離心處理10min，并收集上清液，即為實(shí)施例1的維吾爾保健茶浸提液。

實(shí)施例2

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例2的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例2中，料液比為1:60g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例3

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例3的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例3中，提取時(shí)間為15min，料液比為1:50g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例4

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例4的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例4中，提取溫度為80℃，料液比為1:50g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例5

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例5的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例5中，提取時(shí)間為35min，料液比為1:50g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例6

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例6的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例6中，提取時(shí)間為15min，提取溫度為80℃，料液比為1:60g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例7

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例6的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例7中，料液比為1:40g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例8

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例8的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例8中，提取時(shí)間為35min，提取溫度為80℃，料液比為1:60g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例9

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例9的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例9中，提取時(shí)間為25min，提取溫度為90℃，料液比為1:60g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例10

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例6的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例10中，提取時(shí)間為25min，提取溫度為90℃，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例11

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例11的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例11中，提取時(shí)間為15min，提取溫度為80℃，料液比為1:40g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例12

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例12的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例12中，提取時(shí)間為35min，提取溫度為80℃，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例13

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例13的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例13中，提取溫度為90℃，料液比為1:60g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例14

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例14的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例14中，提取時(shí)間為35min，提取溫度為90℃，料液比為1:50g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例15

參照實(shí)施例1的方法得到維吾爾保健茶浸提液，即為實(shí)施例6的維吾爾保健茶浸提液；

其中，實(shí)施例15中，提取時(shí)間為15min，提取溫度為90℃，料液比為1:50g/ml，其余均與實(shí)施例1相同。

實(shí)驗(yàn)例1維吾爾保健茶浸提液總酚含量測(cè)定

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線制定

準(zhǔn)確稱取沒食子酸0.100g，用重蒸餾水溶解后定容至100ml，得到1mg/ml沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

參照國標(biāo)gb/t8313-2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法》的方法，用重蒸餾水配置不同質(zhì)量濃度的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(0、15.625、31.25、62.5、125、250、500μg/ml)，各吸取20μl加入96孔板后加100μl的20％福林酚試劑，反應(yīng)3min～8min內(nèi)，加入80μl1mol/lna2co3溶液，用酶標(biāo)儀搖動(dòng)1min，混勻放置30min后測(cè)a760nm。

以沒食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，a760nm為縱坐標(biāo)，得到如圖1所示的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)方程y＝0.0051x+0.0243，r²＝0.9996；式中：y為吸光度；x為總酚質(zhì)量濃度/(μg/ml)。

(2)維吾爾保健茶浸提液總酚含量的測(cè)定

取20μl維吾爾保健茶浸提液，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定方法，測(cè)定樣品的a760nm，根據(jù)回歸方程計(jì)算維吾爾調(diào)和土茶濾液中總酚的含量，如式(1)所示：

式中:ρ為總酚質(zhì)量濃度/(mg/ml)；v為浸提液體積/ml；m為維吾爾保健茶質(zhì)量/g。

按照如上所述方法分別測(cè)試實(shí)施例1-15的維吾爾保健茶浸提液中的總酚含量(每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算平均值)，結(jié)果如下表所示：

由如上表格的數(shù)據(jù)對(duì)比可知，不同料液比、提取時(shí)間以及提取溫度條件下，所能夠提取得到的總酚的含量并不相同，由此可見，無論是料液比、提取溫度，還是提取時(shí)間等浸提條件對(duì)于提取效率和有效物質(zhì)的提取率都是有所影響的。

進(jìn)一步的，綜合如上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在料液比1:50～1:60g/ml，浸提溫度80～90℃，時(shí)間20～25min的條件下能夠獲得較高多酚提取率。

實(shí)驗(yàn)例2

(1)維吾爾保健茶浸提液還原能力

配制0.2ml不同質(zhì)量濃度的維吾爾保健茶浸提液(即不同總酚濃度的維吾爾保健茶浸提液)和vc溶液，與0.5ml磷酸緩沖液(0.2mmol/l，ph值6.6)和0.5ml鐵氰化鉀溶液(l.0％，質(zhì)量分?jǐn)?shù))混勻，50℃孵育30min，迅速冷卻；加入0.5ml三氯乙酸溶液(10％，質(zhì)量分?jǐn)?shù))，混合后3000r/min離心10min，取上清液0.5ml，加入0.5ml純水和0.1ml三氯化鐵溶液(0.1％，質(zhì)量分?jǐn)?shù))混勻，測(cè)定混合物溶液在700nm的吸光度；

根據(jù)測(cè)試數(shù)據(jù)得到如圖2所示的維吾爾保健茶浸提液和vc的還原力回歸曲線，由圖2可知，維吾爾保健茶浸提液和vc均具有一定的還原力，且還原力隨著體系質(zhì)量濃度(維吾爾保健茶浸提液以總酚計(jì))的增大而增強(qiáng)，呈明顯的量效關(guān)系。

進(jìn)一步的，維吾爾保健茶浸提液的還原力回歸方程：y＝0.009x+0.096，r²＝0.993，vc還原力線性回歸方程：y＝0.005x+0.012；

由此可見，在同等質(zhì)量濃度下，維吾爾保健茶浸提液的fe³⁺還原能力要強(qiáng)于vc，本發(fā)明維吾爾保健茶具有良好的抗氧化保健功能。

(2)維吾爾保健茶浸提液細(xì)胞毒性試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)方法

mtt工作液配制：稱取0.10g甲氮甲唑藍(lán)，加入20mlpbs溶解，避光過濾，配制成5mg/mlmtt溶液。

mtt終止液配制：稱取20.00gsds，加入0.176ml濃鹽酸后，定容至20ml。

采用mtt法檢測(cè)樣品對(duì)raw264.7細(xì)胞毒性的影響。待細(xì)胞長至對(duì)數(shù)期后，取細(xì)胞懸浮液稀釋細(xì)胞數(shù)為1×10⁶個(gè)/ml，以每孔100μl接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)16～18h。向96孔板中加入不同總酚濃度的維吾爾保健茶浸提液，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，吸去上清液，每孔加入100μlmtt工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，加入100μlmtt終止液。待完全溶解后，用酶標(biāo)儀測(cè)定550nm處吸光度值，結(jié)果如圖3所示。

由圖3的測(cè)試結(jié)果可知，不同濃度的維吾爾保健茶浸提液(以總酚計(jì))對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞活力影響的測(cè)試結(jié)果表明，各樣品處理組細(xì)胞存活率與空白對(duì)照組相比較差異不顯著。

由此可見，在一定濃度范圍(6.25～100ug/ml，以總酚計(jì))內(nèi)，本發(fā)明維吾爾保健茶浸提液對(duì)細(xì)胞無明顯的毒性作用。

(3)維吾爾保健茶浸提液對(duì)raw264.7細(xì)胞分泌no的影響

1.2不同濃度樣品刺激raw264.7細(xì)胞釋放no

取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×10⁶個(gè)/ml，以每孔100μl接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)16h。以不同濃度的維吾爾保健茶浸提液(以總酚計(jì))處理細(xì)胞，24h后griess法檢測(cè)細(xì)胞上清液中no的含量。

取不同濃度的維吾爾保健茶浸提液刺激raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)液中，采用griess法檢測(cè)，結(jié)果如圖4所示；

由圖4結(jié)果可知，正常對(duì)照組raw264.7巨噬細(xì)胞上清液中僅含少量的no，添加6.25ug/ml、12.5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml水提取，細(xì)胞培養(yǎng)液中no含量分別為1.52um、4.25um、14.14um、24.94um、37.24um，較空白對(duì)照組顯著提高，表明維吾爾保健茶水提物對(duì)細(xì)胞免疫具有正向調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)免疫因子的釋放，且效果明顯。

本發(fā)明中采用粉碎、冷凍、混合以及水浴浸提等方法以得到維吾爾保健茶浸提液，同時(shí)通過對(duì)浸提的料液比、溫度以及時(shí)間等條件的調(diào)整和優(yōu)化，進(jìn)一步提高了酚類等有效物質(zhì)的提取率。同時(shí)，由本發(fā)明方法所提取得到的吾爾保健茶浸提液不會(huì)對(duì)細(xì)胞活性產(chǎn)生任何影響，同時(shí)還具有良好的抗氧化還原能力，并能夠提高細(xì)胞免疫能力。

盡管已用具體實(shí)施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識(shí)到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。