本發(fā)明屬于保健品領域，具體涉及一種具有抗乳腺癌功能的含有稻殼黃酮的保健品。

背景技術：

腫瘤是嚴重威脅人類健康的一類常見疾病，是人類健康的三大殺手之一，其中乳腺癌是一種常見的嚴重影響女性身心健康甚至危及生命的惡性腫瘤，據(jù)資料統(tǒng)計，乳腺癌發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7-10％，在婦女中僅次于子宮癌，尋找有效的抗癌藥物和方法，是世界醫(yī)學面臨的重要課題。中藥是祖國醫(yī)學用來防治疾病的有力武器，與化學合成藥物相比，中藥除了具有取材方便、價格低廉和毒副作用小等優(yōu)點外，更重要的是，在減輕臨床癥狀，提高生存質量，防止復發(fā)轉移，延長生存期，預防腫瘤，提高患者免疫力，增強放、化療敏感性，減輕放、化療不良反應等很多方面發(fā)揮著重要作用。同時，隨著社會的進步，生產(chǎn)力的發(fā)展，現(xiàn)代人越來越把注意力從化合成藥轉向天然藥，希望從天然藥物中開發(fā)出更為安全有效的新藥以替代前者，從而減少藥源疾病的發(fā)生。因此，發(fā)展中草藥不僅傳承了中華民族千百年的精華，也具有廣大的市場前景及經(jīng)濟效益。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是以我國廣泛種植的禾本科糧食作物水稻的加工副產(chǎn)物稻殼出發(fā)，制備稻殼黃酮和其他中藥提取物混合，提供一種抗乳腺癌的天然保健品。

本發(fā)明采用的技術方案是：

含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼黃酮50-70％，肉蓯蓉提取物5-10％，補骨脂提取物5-10％，

桑寄生提取物5-10％，川芎提取物5-10％，紫河車提取物5-10％。

所述的含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，所述稻殼黃酮的制備方法如下：

1)纖維素酶酶解提?。毫弦罕劝促|量比1:20-1:30，將稻殼粉末溶于水，纖維素酶加入量為150-180u/g，進行熱水浸提，控制溫度為40-60℃，ph范圍值4.0-6.0，酶解時間為1-3h，離心，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進行乙醇輔助提??；

2)乙醇輔助提取：料液比按質量比1:10-1:30，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為50-70％，提取時間為2-3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進行超聲浸提；

3)超聲浸提：料液比按按質量比1:20-1:30，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為50-70％，超聲波功率為160-200w，超聲時間為20-40min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉蒸發(fā)濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗稻殼黃酮干粉。

所述的含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，所述肉蓯蓉提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的肉蓯蓉固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取肉蓯蓉固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得肉蓯蓉提取物。

所述的含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，所述補骨脂提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的補骨脂固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取補骨脂固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得補骨脂提取物。

所述的含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，所述桑寄生提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的桑寄生固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取桑寄生固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得桑寄生提取物。

所述的含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，所述川芎提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的川芎固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取川芎固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得川芎提取物。

所述的含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，所述紫河車提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的紫河車固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取紫河車固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得紫河車提取物。

本發(fā)明的有益效果是：采用水稻加工副產(chǎn)物稻殼粉末提取的黃酮作為活性物質，制備抗乳腺癌保健品或藥品，提取方法簡單，不存在合成藥劑的毒副作用，對設備的要求低，中間產(chǎn)物及終產(chǎn)物均無毒，安全性高，生產(chǎn)成本低，而且服用和攜帶十分的方便，吸收快速且效果好，因此擁有十分廣闊市場前景，適合工業(yè)生產(chǎn)。

本發(fā)明開創(chuàng)性的技術是將稻殼黃酮最為抗乳腺癌的核心功能性原料，根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)學模型合理搭配、科學組合應用，形成具有抗乳腺癌的黃酮、中草藥混合保健品。本發(fā)明通過對人體外乳腺癌細胞的實驗研究，發(fā)現(xiàn)稻殼黃酮的組合物對體外腫瘤細胞具有較好的抑制作用，對于乳腺癌的防治有著非常顯著的效果，相對于現(xiàn)有技術，本發(fā)明所得的治療乳腺癌的黃酮與中藥組合物，成本低，工藝簡單，不僅能夠進一步提高療乳腺癌療效，還能顯著降低化藥治療的副作用。

附圖說明

圖1是稻殼黃酮組合物對人乳腺癌細胞株mcf-7細胞生長影響。

圖2是稻殼黃酮組合物抑制mcf-7細胞集落形成的集落試驗結果。

圖3是稻殼黃酮組合物抑制mcf-7細胞遷移試驗結果。

具體實施方式

實施例1含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品

(一)稻殼黃酮的制備

采用纖維素酶酶解—乙醇浸提—超聲波分步法的工藝組合提取稻殼黃酮，具體步驟如下：

1)纖維素酶酶解：將稻殼去除雜質，干燥，經(jīng)粉碎機粉碎，過60目篩，制成稻殼粉末。料液比按質量比1:30，將稻殼粉末溶于水，纖維素酶加入量為150u/g，進行熱水浸提，控制溫度為50℃，ph＝5.0，酶解時間為2h，4000r/min進行離心15min，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進行乙醇輔助浸提；

2)乙醇輔助提取：料液比按按質量比1：20，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為60％，提取時間為3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進行超聲浸提；

3)超聲浸提：料液比按按質量比1:20，將沉淀物溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為60％，超聲波功率為180w，超聲時間為30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉蒸發(fā)濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗稻殼黃酮干粉。

(二)肉蓯蓉提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的肉蓯蓉固體粉末；按質量比1:10比例稱取肉蓯蓉固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得肉蓯蓉提取物。

(三)補骨脂提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的補骨脂固體粉末；按質量比1:10比例稱取補骨脂固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得補骨脂提取物。

(四)桑寄生提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的桑寄生固體粉末；按質量比1:10比例稱取桑寄生固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得桑寄生提取物。

(五)川芎提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的川芎固體粉末；按質量比1:10比例稱取川芎固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得川芎提取物。

(六)紫河車提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的紫河車固體粉末；按質量比1:10比例稱取紫河車固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得紫河車提取物。

(七)含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品組合物(簡稱稻殼黃酮組合物)

由以下原料按重量百分比組成：

稻殼黃酮70％,肉蓯蓉提取物10％，補骨脂提取物5％，

桑寄生提取物5％，川芎提取物5％，紫河車提取物5％。

(八)mtt實驗

本實施例使用人乳腺癌細胞株mcf-7細胞，采用mtt法檢測稻殼黃酮組合物體外抗癌活性，實驗步驟如下：

1)取對數(shù)生長期的乳腺癌癌細胞系(mcf-7)細胞接種于96孔板，過夜培養(yǎng)使其貼壁；

2)稻殼黃酮組合物的濃度(12.5、25、50mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后將96孔板放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h；

5)處理結束后，將mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓚晶體完全溶解；

6)通過測量每個孔在490nm處的吸光度值來評估m(xù)cf-7細胞的增值；結果如圖1所示。

如圖1所示，不同濃度的稻殼黃酮組合物(12.5、25和50mg/ml)分別孵育mcf-7細胞24h，然后利用mtt比色法檢測。結果顯示，處理乳腺癌細胞一段時間后，濃度為25、50mg/ml的稻殼黃酮組合物均表現(xiàn)出顯著的抑制作用，濃度為50mg/ml組抑制率在24h后達到了78％，結果表明，稻殼黃酮組合物在體外可抑制人乳腺癌細胞生長。

(九)集落形成實驗

不同的處理組的乳腺癌細胞以每孔1000個細胞的密度接種于孔板上，培養(yǎng)過夜使其貼壁。分別加入25和50mg/ml的稻殼黃酮組合物培養(yǎng)10d，吸出培養(yǎng)基，每孔用pbs仔細洗兩次。使用甲醇將集落固定20min，然后用0.5％結晶紫染色15min，用清水沖洗并拍照，結果如圖2所示。

如圖2所示，稻殼黃酮組合物抑制乳腺癌細胞集落形成的集落試驗結果。稻殼黃酮組合物孵育mcf-7細胞一段時間后，集落數(shù)量與對照組相比明顯降低。24h后濃度為25mg/ml時能夠顯著減少乳腺癌細胞形成的集落，濃度為50mg/ml時集落的減少極顯著。

(十)transwell實驗

腫瘤細胞遷移實驗采用直徑為6.5mm的transwell小室，其中內孔大小為8.0μm。將mcf-7細胞血清饑餓24h，然后使用胰蛋白酶消化，計數(shù)，并用無血清dmem培養(yǎng)基重懸。大約1×10⁵細胞被接種到上層小室，下層小室加入含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基。細胞放在37℃培養(yǎng)24h。培養(yǎng)后，上層小室內表面的細胞被遷移。將穿過小室的細胞固定和染色并在顯微鏡下統(tǒng)計。每個實驗組做三個平行取其平均值，結果如圖3所示。

由圖3可見，腫瘤細胞的一個重要特點是他們具有入侵和遷移到遠端器官的能力，這是幾乎所有癌癥死亡的主要原因，利用transwell實驗分析稻殼黃酮組合物對mcf-7細胞的遷移影響。如圖3所示，與對照組相比，稻殼黃酮組合物處理組mcf-7細胞跨膜遷移的數(shù)量大幅下降，結果顯示稻殼黃酮組合物可以顯著抑制mcf-7細胞遷移。

實施例2含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品

含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼黃酮60％，肉蓯蓉提取物5％，補骨脂提取物10％，

桑寄生提取物5％，川芎提取物10％，紫河車提取物10％。

實施例3含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品

含有稻殼黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼黃酮50％，肉蓯蓉提取物10％,補骨脂提取物10％，

桑寄生提取物10％，川芎提取物10％，紫河車提取物10％。