本發(fā)明涉及飼料
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地說(shuō)，涉及一種以高吸附性花生殼粉為載體的刺參專用特異性卵黃液添加劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：刺參(apostichopusjaponicas)又稱仿刺參，屬于棘皮動(dòng)物門(echinodermate)、海參綱(holothrioider)，刺參科(stichopodidae)，仿刺參屬(apostichopus)。在我國(guó)主要產(chǎn)于遼寧省、山東省等北方沿海。因其較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，目前已成為北方地區(qū)最重要的名貴養(yǎng)殖品種之一，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，刺參病害問(wèn)題日趨嚴(yán)重，目前常見的疾病主要包括腐皮綜合征、口圍腫脹癥、爛邊癥、爛胃病和化板癥等。其中腐皮綜合征已成為刺參養(yǎng)殖業(yè)最常見也是危害最嚴(yán)重的疾病，嚴(yán)重制約著刺參養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前刺參養(yǎng)殖業(yè)濫用抗生素和化學(xué)藥物情況普遍，抗生素和化學(xué)藥物反復(fù)使用容易產(chǎn)生耐藥性，存在藥物殘留，在倡導(dǎo)綠色農(nóng)業(yè)的今天必將退出歷史舞臺(tái)。卵黃抗體具有無(wú)毒、無(wú)殘留、不產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，發(fā)展前景備受矚目。此外卵黃抗體產(chǎn)出率高，并具有耐熱、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛地制成產(chǎn)品來(lái)進(jìn)行動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療。當(dāng)前卵黃抗體產(chǎn)品大都為卵黃粉和全蛋粉，但是傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝中中需經(jīng)過(guò)冷凍干燥或噴霧干燥，成本較高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于簡(jiǎn)化卵黃抗體制備工藝，改變制備卵黃抗體產(chǎn)品的傳統(tǒng)方法，不再使用冷凍干燥或噴霧干燥技術(shù)，而是直接將高吸附性花生殼粉包裹卵黃液進(jìn)行加工，自然晾干后粉碎，制成刺參飼料添加劑。減少凍干過(guò)程中卵黃抗體的損失，同時(shí)雞蛋里其它的營(yíng)養(yǎng)成分得到很有效的利用，降低產(chǎn)品的成本。我們嘗試選擇以冰凍脹剝技術(shù)處理后的花生殼粉作為高效載體包裹卵黃液制備飼料添加劑，省去卵黃液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥脫水這一過(guò)程，僅需置于室溫陰涼處干燥3～5天即可得到成品，使生產(chǎn)工藝大為簡(jiǎn)化，成本大為降低。本發(fā)明的技術(shù)方案由載體和特異性卵黃液組成。載體為經(jīng)冰凍脹剝技術(shù)處理后獲得的高吸附性花生殼粉，特異性卵黃液由刺參細(xì)菌性疾病相應(yīng)病原菌免疫蛋雞獲得。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種以高吸附性花生殼粉為載體的刺參專用特異性卵黃液添加劑，包括物質(zhì)制備而成：特異性卵黃液40wt％～70wt％，高吸附性花生殼粉30wt％～60wt％，山梨酸鉀；所述的山梨酸鉀的添加量為卵黃液質(zhì)量的0.05％～0.1％。優(yōu)選方式下，所述的高吸附性花生殼粉采用冰凍脹剝技術(shù)處理，處理方法如下：(1)將80-120目干燥花生殼粉放入超微粉碎機(jī)中粉碎10-15min，粉碎后過(guò)200目篩網(wǎng)；(2)在步驟(1)超微粉碎后得到的花生殼粉中添加其2-3倍質(zhì)量蒸餾水，并于-20℃冰凍1-2天，冰凍后再于15-28℃解凍；(3)重復(fù)步驟(2)1-3次，將所得花生殼粉均勻平鋪并置于15-28℃干燥3-5天，即得高吸附性花生殼粉。本發(fā)明同時(shí)請(qǐng)求保護(hù)所述的以高吸附性花生殼粉為載體的刺參專用特異性卵黃液添加劑的低成本制備方法，包括如下步驟：(1)將高免雞蛋用清水洗凈，200-250ppm的次氯酸鈉溶液進(jìn)行消毒5分鐘，然后用清水進(jìn)行清洗，晾干。之后將高免雞蛋的蛋黃和蛋清分離，取蛋黃打入容器中，攪拌；(2)將蛋黃攪拌到體積膨脹，顏色變淺，呈濃稠狀，即為含特異性卵黃抗體的卵黃液，并稱量質(zhì)量；(3)向步驟(2)得到的蛋黃液中添加其質(zhì)量0.05％-0.1％的山梨酸鉀；(4)將含特異性卵黃抗體的卵黃液質(zhì)量的3/7-3/2的高吸附性花生殼粉分少量多次添加，邊加入邊攪拌，使高吸附性花生殼粉與含特異性卵黃抗體的卵黃液完全混合；(5)將混合均勻的含特異性卵黃抗體的卵黃液與花生殼粉混合物置于飼料顆粒機(jī)中壓制成直徑為2-10mm顆粒，并置于室內(nèi)陰涼處自然晾干，至水分含量降低至10wt％以下；(6)將陰干后的顆粒置于粉碎機(jī)中二次粉碎，粉碎的顆粒過(guò)60-100目篩網(wǎng)，即得成品。優(yōu)選方式下，所述高免雞蛋為抗黃海希瓦氏菌高免雞蛋、抗?fàn)N爛弧菌高免雞蛋?；ㄉ鷼し劬哂歇?dú)特的物理構(gòu)造，其橫截面為板層結(jié)構(gòu)，縱截面為蜂窩狀構(gòu)造，具有較大的比表面積。本發(fā)明利用花生殼粉這一結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，采用冰凍脹剝技術(shù)，在花生殼粉中加入蒸餾水直接冰凍，板層間隙吸水后冰凍形成冰晶，體積增大使其結(jié)構(gòu)出現(xiàn)裂縫，多次凍融后，致使裂縫不斷向?qū)挾群蜕疃确较蜓诱共⑿纬筛罅芽p，最終使板層結(jié)構(gòu)解體，比表面積進(jìn)一步增大，吸附性進(jìn)一步增強(qiáng)。又由于花生殼粉主要成分為纖維素，對(duì)刺參無(wú)毒副作用，輔以刺參病原菌相應(yīng)卵黃抗體，使卵黃抗體在刺參健康養(yǎng)殖和快速增產(chǎn)方面發(fā)揮獨(dú)特作用。本發(fā)明的刺參飼料添加劑的使用方法為：刺參飼料添加劑與飼料的質(zhì)量比為(1％～5％)：(95％～99％)，將添加劑加到飼料中混合均勻，往育苗池中施用。本發(fā)明的技術(shù)創(chuàng)新在于：(1)花生殼粉來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉；(2)含特異性卵黃抗體的卵黃液中的特異性igy可以防止刺參相應(yīng)細(xì)菌性疾?。?3)特異性卵黃中的其他營(yíng)養(yǎng)成分可有效促進(jìn)刺參生長(zhǎng)，并明顯增強(qiáng)海刺參的機(jī)體免疫力和抗病力；(4)減少抗生素和化學(xué)藥物使用量；(5)安全無(wú)毒，使用方便；(6)天然的花生殼粉載體解決了以往卵黃抗體生產(chǎn)提純過(guò)程中需要大量消耗能源的難題，極大的降低了成本。附圖說(shuō)明圖1是普通花生殼粉橫截面，圖2是冰凍脹剝技術(shù)處理后花生殼粉橫截面，圖3是標(biāo)準(zhǔn)igy濃度曲線。具體實(shí)施方式下述非限制性實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例中所述試驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；如無(wú)特殊說(shuō)明，所述試劑和生物材料，均可從商業(yè)途徑獲得。實(shí)施例1以高吸附性花生殼粉為載體的刺參專用抗?fàn)N爛弧菌特異性卵黃液添加劑的制備方法，包括如下步驟：(1)將120目干燥花生殼粉放入超微粉碎機(jī)中粉碎15min，粉碎后過(guò)200目篩網(wǎng)；(2)在步驟(1)超微粉碎后得到的花生殼粉中添加其2倍質(zhì)量蒸餾水，并于-20℃冰凍2天，冰凍后再于15℃解凍；(3)重復(fù)步驟(2)3次，將所得花生殼粉均勻平鋪并置于15℃干燥3天，即得高吸附性花生殼粉。(4)將抗?fàn)N爛弧菌高免雞蛋的蛋黃和蛋清分離，取蛋黃打入容器中，攪拌；(5)將蛋黃液攪拌到體積膨脹，顏色變淺，呈濃稠狀，并稱量質(zhì)量500g；(6)向步驟(2)得到的蛋黃液中添加0.25g的山梨酸鉀；(7)將蛋黃液質(zhì)量的3/7的高吸附性花生殼粉214g分六次添加，邊加入邊攪拌，使高吸附性花生殼粉與蛋液完全混合；(8)將混合均勻的蛋黃液與花生殼粉混合物置于飼料顆粒機(jī)中壓制成直徑為2mm顆粒，并置于室內(nèi)陰涼處自然晾干，至水分含量降低至10％以下；(9)將陰干后的顆粒置于粉碎機(jī)中二次粉碎，粉碎的顆粒過(guò)100目篩網(wǎng)，即得成品。實(shí)施例2以高吸附性花生殼粉為載體的刺參專用抗黃海希瓦氏菌特異性卵黃液添加劑的制備方法，包括如下步驟：(1)將120目干燥花生殼粉放入超微粉碎機(jī)中粉碎15min，粉碎后過(guò)200目篩網(wǎng)；(2)在步驟(1)超微粉碎后得到的花生殼粉中添加其2倍質(zhì)量蒸餾水，并于-20℃冰凍2天，冰凍后再于15℃解凍；(3)重復(fù)步驟(2)3次，將所得花生殼粉均勻平鋪并置于15℃干燥3天，即得高吸附性花生殼粉。(4)將抗黃海希瓦氏菌高免雞蛋的蛋黃和蛋清分離，取蛋黃打入容器中，攪拌；(5)將蛋黃液攪拌到體積膨脹，顏色變淺，呈濃稠狀，并稱量質(zhì)量500g；(6)想步驟(2)得到的蛋黃液中添加0.25g的山梨酸鉀；(7)將蛋黃液質(zhì)量的3/2的高吸附性花生殼粉750g分8次添加，邊加入邊攪拌，使高吸附性花生殼粉與蛋黃液完全混合；(8)將混合均勻的蛋黃液與花生殼粉混合物置于飼料顆粒機(jī)中壓制成直徑為10mm顆粒，并置于室內(nèi)陰涼處自然晾干，至水分含量降低至10％以下；(9)將陰干后的顆粒置于粉碎機(jī)中二次粉碎，粉碎的顆粒過(guò)100目篩網(wǎng)，即得成品。實(shí)施例3以高吸附性花生殼粉為載體的刺參專用抗?fàn)N爛弧菌特異性卵黃液添加劑中igy含量測(cè)定將標(biāo)準(zhǔn)igy包被液倍比稀釋成一定梯度(1-0.015625ug/ml)，將特異性添加劑樣品也稀釋成一定梯度，每孔加100ul包被96孔酶標(biāo)板，4℃過(guò)夜。用洗滌液洗滌酶標(biāo)板3次，每孔加100ul封閉液，37℃溫育后甩干、洗滌3次，再向各孔加兔抗雞igg-hrp100ul，37℃反應(yīng)1h；洗滌液洗滌各孔5次，每孔加100ultmb底物溶液，室溫下顯色20min，每孔加50ul終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀測(cè)od450/630。以標(biāo)準(zhǔn)igy的od值對(duì)igy濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得待測(cè)樣品的濃度。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。例如：以高吸附性花生殼粉為載體的刺參專用抗?fàn)N爛弧菌特異性卵黃液添加劑實(shí)際測(cè)得卵黃抗體(實(shí)施例1)含量為5.083g/kg。實(shí)施例4選取實(shí)施例1所制備的特異性卵黃添加劑分別按5％、3％和1％添加至刺參商品飼料中，所得飼料直接投喂刺參，投喂時(shí)間為50天，養(yǎng)殖水桶體積為0.05/m3，養(yǎng)殖密度為30頭刺參/桶(每頭刺參體重為10.64±0.84g)。刺參飼喂實(shí)驗(yàn)之后，對(duì)其實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析對(duì)比。表1不同添加劑使用量刺參體重變化添加劑使用量實(shí)驗(yàn)前體重(g)/桶實(shí)驗(yàn)后體重(g)/桶日增重率(％)5％添加量2984561.063％添加量3044701.091％添加量3044340.86對(duì)照3104360.81表2飼喂刺參免疫指標(biāo)對(duì)比添加劑使用量細(xì)胞吞噬率(％)體腔液溶菌酶活性(u/ml)5％添加量6549.38±1.473％添加量6043.74±1.631％添加量3534.25±1.77對(duì)照3232.68±1.27經(jīng)以上實(shí)施例4及分析可看出，本發(fā)明所述的刺參飼料添加劑不僅能提高海參生長(zhǎng)，還能有效提高刺參免疫力和對(duì)病原菌的抵抗力，且效益十分明顯，因此具有廣闊應(yīng)用前景。表3各種方法生產(chǎn)igy制劑綜合比較從表3可以看出，在不考慮人工成本及設(shè)備折舊等因素的情況下，本方法前期投入的設(shè)備成本最低，單位能耗降到了原來(lái)的1/5甚至更多，節(jié)能效果顯著，而且生產(chǎn)過(guò)程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)方式靈活，制約因素較少，具有很大的商業(yè)價(jià)值。另外，本發(fā)明對(duì)載體進(jìn)行了比較，具體如圖1、2所示；其中，圖1是普通花生殼粉橫截面，圖2是本發(fā)明冰凍脹剝技術(shù)處理后花生殼粉橫截面。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12