本發(fā)明屬于動物用飼料添加劑領(lǐng)域，具體涉及一種克氏原螯蝦專用的免疫增強(qiáng)劑。
背景技術(shù)：
：克氏原螯蝦在我國被俗稱為“小龍蝦”，是原螯蝦屬中最具漁業(yè)經(jīng)濟(jì)價值的一種。目前，隨著人工養(yǎng)殖克氏原螯蝦面積的迅速擴(kuò)大，各種病害對克氏原螯蝦的危害也越來越嚴(yán)重。但是，由于國內(nèi)關(guān)于克氏原螯蝦疾病的研究比較少，關(guān)于克氏原螯蝦病害的系統(tǒng)研究資料仍然比較缺乏，對疾病控制也缺少有效對策。在蝦類的養(yǎng)殖過程中，由于大量使用抗生素存在一些潛在風(fēng)險，人們已開始把注意力轉(zhuǎn)移到如何調(diào)動或者激活蝦類自身的免疫系統(tǒng)，提高其本身的抗病力和機(jī)體自身免疫力，以達(dá)到預(yù)防和抵抗疾病的目的，因此，免疫增強(qiáng)劑成為首選。蝦類的免疫系統(tǒng)還很不成熟，作為甲殼動物和其他無脊椎動物一樣無特異性免疫功能，其免疫功能依耐于非特異性免疫機(jī)制。而免疫增強(qiáng)劑，對提高養(yǎng)殖動物非特異性免疫能力有著其獨特的功效。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：克氏原螯蝦免疫力低下的問題。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種能有效提高克氏原螯蝦非特異性免疫能力的復(fù)方制劑，以更好地滿足克氏原螯蝦集約化養(yǎng)殖的需求。本發(fā)明提供的克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑，含有如下成分：茯苓多糖、紅花、維生素C和益生菌。優(yōu)選地，上述的克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑含有的成分及各成分在所述克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑中所占的質(zhì)量百分比如下：茯苓多糖25%~50%，紅花30%~55%，維生素C10%~20%，益生菌3%~8%。優(yōu)選地，所述紅花為紅花超微粉。優(yōu)選地，所述益生菌為枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的其中之一或其組合。優(yōu)選地，所述益生菌為枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合物，總活菌數(shù)為1.5×1010~2.5×1010cfu/g。優(yōu)選地，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的活菌數(shù)比例為1:1。優(yōu)選地，所述益生菌的總活菌數(shù)為2.0×1010cfu/g。本發(fā)明還提供上述的克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑的制備方法：取各成分混合即得。本發(fā)明還提供上述的克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用方法：將所述克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑添加與飼料中喂養(yǎng)克氏原螯蝦，克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑的添加量為飼料質(zhì)量的0.25%-0.5%。本發(fā)明中所述的免疫增強(qiáng)劑具有以下優(yōu)點：1、本發(fā)明所含成分為中草藥或者中草藥提取物、益生菌等，無毒副作用、無藥殘、無耐藥性產(chǎn)生；2、本發(fā)明所含成分茯苓多糖具有誘食作用；3、本發(fā)明所含成分紅花具有很好的抵抗水體缺氧能力，提高蝦存活率；4、本發(fā)明能增強(qiáng)克氏原螯蝦的非特異性免疫功能，可用于克氏原螯蝦細(xì)菌性疾病和病毒性疾病的預(yù)防，同時也可用于減輕水體應(yīng)激對克氏原螯蝦存活的影響。5、本發(fā)明所含成分來源廣泛，且生產(chǎn)工藝簡單。附圖說明圖1顯示克氏原螯蝦血液中溶菌酶（μg/mL）含量變化。圖2顯示克氏原螯蝦血液中酸性磷酸酶（U/mL）含量變化。圖3顯示克氏原螯蝦血液中超氧化物歧化酶（U/mL）含量變化。圖4顯示克氏原螯蝦血液中酚氧化酶（U/mL）含量變化。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的理解本發(fā)明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。本發(fā)明提供了一種克氏原螯蝦飼養(yǎng)用免疫增強(qiáng)劑，含有如下成分：茯苓多糖、紅花、維生素C和益生菌。具有免疫增強(qiáng)的中草藥有效成分主要為：多糖類、皂苷類、黃酮類、生物堿類等。茯苓為多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，其主要活性成分為茯苓多糖，其結(jié)構(gòu)為含少量β-（1→6）葡聚糖支鏈的β-（1→3）-D-葡聚糖。研究結(jié)果表明，β-葡聚糖的作用機(jī)制為蝦的巨噬細(xì)胞表面具有與β-葡聚糖結(jié)合的蛋白受體，當(dāng)β-葡聚糖與其結(jié)合，連接到血淋巴顆粒細(xì)胞膜表面后發(fā)生反應(yīng)，使顆粒細(xì)胞釋放出絲氨酸，絲氨酸繼續(xù)激活酚氧化酶原發(fā)生級聯(lián)放大反應(yīng)，提高機(jī)體的免疫功能。紅花水溶液成分具有很好的抗氧化作用，有研究發(fā)現(xiàn)紅花水溶液可清除自由基，抑制小鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化。紅花的主要活性成分為紅花黃色素，紅花黃色素具有顯著的耐受缺氧能力和耐受疲勞作用，能夠輔助增強(qiáng)蝦存活率。維生素C在肝臟解毒上能誘發(fā)多功能氧化酶的活性，加速對異物、毒物以及藥物的異化作用，加強(qiáng)蝦體自身的解毒功能，提高免疫能力，同時，可使蝦體加強(qiáng)由于環(huán)境不良引起的緊迫或病原感染引起的疾病等的抗應(yīng)激能力。目前在水產(chǎn)上應(yīng)用較多的益生菌主要有光合細(xì)菌、芽孢桿菌、酵母、乳酸菌，其中芽孢桿菌對不良環(huán)境有很好的抵抗力，易于存儲，同時對蝦體的生長、消化酶活性等有很好的促進(jìn)作用，其對蝦體的免疫機(jī)能有很好的促進(jìn)作用。本發(fā)明基于上述描述，將茯苓多糖、紅花、維生素C與益生菌復(fù)配組合成方，協(xié)同發(fā)揮其增強(qiáng)非特異性免疫力與促生長的作用。以下列舉幾個具體實施例以對本發(fā)明進(jìn)一步說明:實施例1~4中益生菌粉為：枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合物，二者的活菌數(shù)比例為1:1混合，總活菌數(shù)為2.0×1010cfu/g。實施例1先將紅花干燥花進(jìn)行超微粉碎，并分別稱取茯苓多糖10kg、紅花超微粉20kg、維生素C6kg、益生菌粉2kg，混合均勻即可。實施例2先將紅花干燥花進(jìn)行超微粉碎，并分別稱取茯苓多糖15kg、紅花超微粉15kg、維生素C6kg、益生菌粉3kg，混合均勻即可。實施例3先將紅花干燥花進(jìn)行超微粉碎，并分別稱取茯苓多糖15kg、紅花超微粉25kg、維生素C5kg、益生菌粉2kg，混合均勻即可。實施例4先將紅花干燥花進(jìn)行超微粉碎，并分別稱取茯苓多糖20kg、紅花超微粉15kg、維生素C8kg、益生菌粉2kg，混合均勻即可。實施例5先將紅花干燥花進(jìn)行超微粉碎，并分別稱取茯苓多糖10kg、紅花超微粉20kg、維生素C6kg、益生菌粉2kg（枯草芽孢桿菌，總活菌數(shù)為1.8×1010cfu/g），混合均勻即可。實施例6先將紅花干燥花進(jìn)行超微粉碎，并分別稱取茯苓多糖10kg、紅花超微粉20kg、維生素C6kg、益生菌粉2kg（地衣芽孢桿菌，總活菌數(shù)為2.5×1010cfu/g），混合均勻即可。實施例7先將紅花干燥花進(jìn)行超微粉碎，并分別稱取茯苓多糖10kg、紅花超微粉20kg、維生素C6kg、益生菌粉2kg（枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的混合物，二者的活菌數(shù)比例為3:1混合，總活菌數(shù)為2.0×1010cfu/g。），混合均勻即可?？耸显r非特異性免疫指標(biāo)、存活率及增重率的測定試驗一、實驗材料1、主要試劑和材料免疫增強(qiáng)劑（本發(fā)明實施例1~7制得）、蝦基礎(chǔ)配方飼料、溶菌酶檢測試劑盒（比濁法）、酸性磷酸酶測定試劑盒（微板法）、超氧化物歧化酶測定試劑盒（羥胺法）、酚氧化酶試劑盒（ELISA），其他試劑均符合試驗要求。2、主要儀器設(shè)備酶標(biāo)儀、紫外分光光度計。3.實驗動物取自某克氏原螯蝦育種基地，體態(tài)正常、健康無病、大小均一的體長4cm左右的幼蝦。二、實驗方法1.實驗分組體長約為4cm的克氏原螯蝦幼蝦1200尾，隨機(jī)分成8組，即對照組、實施例1組、實施例2組、實施例3組、實施例4組、實施例5組、實施例6組、實施例7組。每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)50尾蝦。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，另外7個試驗組飼喂基礎(chǔ)日糧中添加免疫增強(qiáng)劑（免疫增強(qiáng)劑的添加量為飼料重量的0.3%）。2.飼養(yǎng)條件養(yǎng)殖桶直徑80cm，水深25cm；每3天換水1次，換水量約1/3；全天不間斷充氣，保證溶氧量≥3mg/L；水溫控制在25℃左右；飼養(yǎng)水體的pH控制在7.2-8.0之間；避光飼養(yǎng)，采用內(nèi)徑為5cm且長約10cm的PVC管作為蝦的棲息場所，每只蝦一個管。3.檢測樣本采集以養(yǎng)殖桶為單位，于飼養(yǎng)30d后對克氏原螯蝦的存活率、增重率進(jìn)行統(tǒng)計。分別于飼養(yǎng)10d、20d、30d后，從每組克氏原鰲蝦中隨機(jī)挑選無傷者10尾用50mg/L丁香酚麻醉后進(jìn)行血淋巴采集。血淋巴制備方法如下：用經(jīng)抗凝劑（56gEDTA-Na2加入500ml生理鹽水）潤洗過的規(guī)格為1ml的一次性注射器自蝦頭胸甲后部血竇插入心臟取血，置于離心管中，于4℃冰箱中過夜。然后，以4000rpm離心10min，取上清液作為待檢血清。4.評價指標(biāo)選擇存活率和增重率這兩個指標(biāo)評價各實施例對克氏原螯蝦促生長方面的影響。選用溶菌酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶、酚氧化酶作為非特異性免疫指標(biāo)。這4種酶的活性均采用相關(guān)試劑盒進(jìn)行檢測，具體操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。三、試驗結(jié)果1.存活率和增重率實施例1~7對克氏原螯蝦的存活率和增重率的結(jié)果見表1.。從表中數(shù)據(jù)可知，使用免疫增強(qiáng)劑后，各實施例組的存活率和平均增重率明顯比對照組高，說明本免疫增強(qiáng)劑對克氏原螯蝦有顯著的促生長作用。表1.各實施例對克氏原螯蝦生長指標(biāo)的影響處理組存活率（%）平均增重率（%）對照組80.67±4.16a312.91±15.59a實施例1組88.67±3.05b375.53±13.62b實施例2組88.00±2.00b374.51±18.57b實施例3組90.67±1.15b376.42±21.51b實施例4組88.00±2.00b392.99±6.38b實施例5組89.33±1.15b376.87±20.06b實施例6組87.33±1.15b382.27±27.34b實施例7組89.33±2.31b378.92±10.61b注：同列數(shù)據(jù)間小寫字母不同代表差異顯著（P＜0.05）2.非特異性免疫指標(biāo)按試劑盒說明書進(jìn)行各項非特異性免疫指標(biāo)的檢測，實施例1~7的試驗結(jié)果見圖1~圖4.。從圖中數(shù)據(jù)可知，各實施例均對克氏原螯蝦血液中的酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶的含量增加具有顯著促進(jìn)作用；在蝦生長前期，各實施例均對克氏原螯蝦血液中的酚氧化酶活性具有顯著提高作用；在蝦生長中后期，各實施例均對克氏原螯蝦血液中的溶菌酶活性具有顯著提高作用。以上結(jié)果表明本免疫增強(qiáng)劑能夠提高克氏原螯蝦的非特異性免疫能力。以上所述實施例僅是為充分說明本發(fā)明而所舉的較佳的實施例，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁1 2 3