本發(fā)明涉及魚類飼料領域，尤其涉及一種含有發(fā)酵龍須菜的黑鯛飼料及其制備方法。

背景技術：

黑鯛(Sparus macrocephalus)屬鱸形目，是黃海、渤海以及臺灣海峽南部水域的重要經(jīng)濟魚類，其對鹽度和溫度的適應范圍較廣，生長速度快，易進行人工養(yǎng)殖，且肉質細嫩鮮美、富有營養(yǎng)價值，深受國內(nèi)外市場歡迎。黑鯛養(yǎng)殖的餌料大部分仍然是直接投喂新鮮或冰凍的低值小雜魚，而且還絞碎成魚漿投喂，這不僅造成蛋白源的巨大浪費，飼養(yǎng)成本偏高，而且嚴重污染環(huán)境，傳播病害，長期使用冰凍小雜魚飼料還容易導致脂肪肝、體色淡化、肉質口感差等問題。另一部分養(yǎng)殖方式是采用高動物性蛋白含量的人工飼料，這類飼料與低值小雜魚(蝦)相比，盡管在減少環(huán)境污染、提高飼料營養(yǎng)價值等多方面都有明顯優(yōu)勢，但近年來優(yōu)質動物性蛋白源飼料原料(以魚粉為代表)的價格不斷上漲，為了使黑鯛飼料配方成本控制在市場可接受的范圍內(nèi)，多數(shù)飼料企業(yè)選擇了廉價的植物性原料作為飼料蛋白源。然而，實踐表明，當飼料蛋白源全部或大部分采用植物性原料時，黑鯛出現(xiàn)了明顯的生長減緩、生存率降低等后果。

龍須菜(Gracilaria lemaneiformis)屬于紅藻門，杉藻目，江籬屬，是一種紅藻類海洋植物，是中國重要的經(jīng)濟藻類。龍須菜中富含蛋白質、膳食纖維、瓊膠多糖、礦物質、高不飽和脂肪酸、氨基酸、多鹵多萜類化合物、甾醇類化合物、微量元素和維生素以及多種天然活性成分，是一種高蛋白、低熱值、高生理活性的天然理想營養(yǎng)食品的原料。然而，龍須菜中過高的瓊膠多糖和粗纖維會降低其在動物胃腸內(nèi)的消化吸收，降低其營養(yǎng)價值。因此，通過生物發(fā)酵后生產(chǎn)的發(fā)酵龍須菜粉，其中瓊膠多糖和粗纖維含量減少，動物可消化吸收利用的寡糖和蛋白質含量增加，其營養(yǎng)價值增高，可以開發(fā)作為飼料原料。因此，本發(fā)明對于開拓海藻飼料資源，緩解我國飼料原料短缺現(xiàn)狀具有重要意義。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是通過利用生物發(fā)酵技術產(chǎn)生的發(fā)酵龍須菜，以適當比例添加入黑鯛配合飼料中，解決龍須菜作為黑鯛飼料時瓊膠多糖和粗纖維含量較多，寡糖和蛋白質吸收利用率不高等問題。

為了實現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明提供了一種含有發(fā)酵龍須菜的黑鯛飼料，包括蛋白源原料、脂肪源原料、糖源原料和輔料，所述飼料還包括重量百分比為5-20％的發(fā)酵龍須菜粉；

其中，所述蛋白源原料是魚粉、豆粕、發(fā)酵龍須菜；所述脂肪源原料是魚油或豆油、或它們的混合物；所述糖源原料是淀粉；所述輔料是甘露寡糖、復合維生素、混合礦物質、微晶纖維素、大豆磷脂粉、DL-蛋氨酸、磷酸二氫鈣、氯化膽堿、抗壞血酸、魷魚膏以及它們的一種或幾種的混合物。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，所述飼料包括重量百分比為5％的發(fā)酵龍須菜粉。其中，所述飼料由如下重量百分比的營養(yǎng)成分組成：粗蛋白40.1～42.0％，粗脂肪11.5～12.2％，余下為碳水化合物、粗纖維、灰分和水分。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，所述輔料包括復合維生素和混合礦物質；其中所述復合維生素的重量百分比0.5～1％，混合礦物質的重量百分比為0.5～1％。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，所述輔料由以下重量百分比的各組分構成：復合維生素0.5～1％，混合礦物質0.5～1％，微晶纖維素0～2％，大豆磷脂粉0～2％，DL-蛋氨酸0.1～0.5％，磷酸二氫鈣1～2％，氯化膽堿0.2～0.5％，DL-蛋氨酸0.1～0.5％，抗壞血酸0.2～0.5％，魷魚膏0.2～0.5％其中的一種或幾種的混合物。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，所述飼料按照下述原料重量百分比配制：發(fā)酵龍須菜粉5％，魚粉52％，豆粕11％，魚油7％，淀粉19％，微晶纖維素2％，磷酸二氫鈣1.5％，氯化膽堿0.2％，復合維生素1％，混合礦物質1％，DL-蛋氨酸0.1％，魷魚膏0.3％。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，所述飼料按照下述原料重量百分比配制：發(fā)酵龍須菜粉5％，魚粉48％，豆粕18％，豆油3％，魚油4％，淀粉16％，復合維生素1％，混合礦物質1％，大豆磷脂粉2％，DL-蛋氨酸0.1％，磷酸二氫鈣1.5％，氯化膽堿0.2％，魷魚膏0.2％，。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述黑鯛飼料的制備方法，包括以下步驟：

S1龍須菜采集：龍須菜采集后，清洗，去除雜質，用離心脫水機脫水后曬干，將曬干的龍須菜放入干燥箱烘干，水分含量控制在10～15％，然后用粉碎機粉碎至40目，備用；

S2發(fā)酵龍須菜粉制備：將3％(w/v)粉碎至顆粒大小40目的龍須菜加入蒸餾水，再加入2％(w/v)NaCl均勻混合后，調節(jié)pH7.6，121℃滅菌20min，再接種發(fā)酵菌液10％(v/v)，溫度25℃，發(fā)酵罐轉速150r/min，發(fā)酵時間72小時，得到龍須菜發(fā)酵液，發(fā)酵液55℃烘干，獲取發(fā)酵龍須菜混合物干粉；

S3混合：按規(guī)定的重量百分數(shù)混合發(fā)酵龍須菜粉以及粉碎后的蛋白源原料、糖源原料和輔料各組分，攪拌均勻，得到物料A；

S4膨化：將所述物料A進膨化飼料機膨化，得到物料B；

S5噴涂：按照規(guī)定的重量百分數(shù)將脂肪源原料噴涂到物料A上，完全吸收后，即可得到飼料成品。

其中，根據(jù)步驟S2所述的發(fā)酵龍須菜的制備，其所用發(fā)酵細菌為海洋瓊膠酶高產(chǎn)菌——黃桿菌，該菌種于2008年1月16日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌株保藏編號為：CGMCC NO.2342。

其中，步驟S2的發(fā)酵菌液由以下制備方法制得：黃桿菌接種于2216E固體培養(yǎng)基平板活化，然后再轉接于100ml搖瓶培養(yǎng)基中，pH7.6，25℃，恒溫搖床培養(yǎng)箱中150r/min轉速下活化培養(yǎng)40小時，得到菌液。

其中，所述步驟S4中將物料A的水分調整為28％后進膨化飼料機膨化，膨化溫度為110～120℃。

由于黑鯛是雜食性魚類，本發(fā)明將適當比例的發(fā)酵龍須菜粉添加入黑鯛配合飼料中，發(fā)酵的龍須菜粉比未經(jīng)發(fā)酵的龍須菜粉營養(yǎng)成分更理想，更適合作為黑鯛飼料。經(jīng)過發(fā)酵，龍須菜中瓊膠多糖和粗纖維含量降低了，增加動物可消化吸收利用的寡糖和蛋白質含量，同時經(jīng)過發(fā)酵后提高發(fā)酵產(chǎn)物中蛋白質含量，此外通過微生物發(fā)酵可以分解原料中部分有害物質，降低其毒性。

本發(fā)明的飼料具有營養(yǎng)全面、誘食性好、消化吸收率高、促進幼魚生長的效果，使得幼魚攝食積極且抗應激能力強。還可以減少魚粉的使用量，降低魚種的蛋白需求水平。與現(xiàn)有的黑鯛飼料相比，黑鯛對發(fā)酵龍須菜的蛋白利用率、脂肪利用率、可溶性多糖利用率以及能量轉化率均較高。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步說明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。

實施例1

實施例1是為了檢測發(fā)酵龍須菜的最適宜添加量，分別采用添加0(對照)、5％(F1)、10％(F2)、15％(F3)、20％(F4)的發(fā)酵龍須菜干粉替代魚粉或其他植物蛋白源，制成黑鯛配合飼料，飼料配方如表1所示(數(shù)值為重量百分比)，制備步驟如下：

①龍須菜粉制備：收集新鮮的龍須菜，清洗干凈，去除雜質，用離心脫水機脫水后曬干。將曬干的龍須菜放入干燥箱烘干，控制干燥后的龍須菜的水分含量在10～15％之間，然后用粉碎機粉碎至40目，備用；

②發(fā)酵龍須菜粉制備：將3％(w/v)粉碎至顆粒大小40目的龍須菜加入蒸餾水，再加入2％(w/v)NaCl均勻混合后，調節(jié)pH7.6，121℃滅菌20min，再接種發(fā)酵菌液10％(v/v)，溫度25℃，發(fā)酵罐轉速150r/min，發(fā)酵時間72小時，得到龍須菜發(fā)酵液。發(fā)酵液55℃烘干，獲取發(fā)酵龍須菜混合物干粉；

③混合：按照表1所示的飼料配方，將其中的塊狀蛋白源原料、糖源原料也粉碎至80～120目，然后按規(guī)定的重量百分數(shù)混合龍須菜粉、各蛋白源原料組分、糖源原料組分和輔料組分，攪拌均勻，得到物料A；

④膨化：將物料A中的水分調整為28％，進膨化飼料機膨化，膨化溫度為110～120℃，得到物料B；

⑤噴涂：按照表1規(guī)定的重量百分數(shù)將魚油噴涂到物料A上，恢復壓力后，待豆油完全吸收，即可得到飼料成品。

其中，根據(jù)步驟②所述的發(fā)酵龍須菜的制備，其所用發(fā)酵細菌其所用發(fā)酵細菌為海洋瓊膠酶高產(chǎn)菌——黃桿菌，該菌種于2008年1月16日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌株保藏編號為：CGMCC NO.2342。

其中，根據(jù)步驟②所述的發(fā)酵龍須菜的制備，其所用的發(fā)酵菌液由以下制備方法制得：黃桿菌接種于2216E固體培養(yǎng)基平板活化，然后再轉接于100ml搖瓶培養(yǎng)基中，pH7.6，25℃，恒溫搖床培養(yǎng)箱中150r/min轉速下活化培養(yǎng)40小時，得到菌液。

表1不同發(fā)酵龍須菜飼料配方組成

注：1.淀粉、豆粕為市售產(chǎn)品，可從國內(nèi)原料市場采購；

2.魚粉為美國魚粉，粗蛋白含量68％，魚油含量為9.4％；

3.復合維生素、混合礦物質、磷酸二氫鈣、氯化膽堿等輔料可從國內(nèi)飼料廠采購。

實施例2

為了比較含發(fā)酵龍須菜和未發(fā)酵龍須菜的飼料配方對黑鯛生長性能的促進作用，分別采用添加發(fā)酵龍須菜5％(F1)、未發(fā)酵龍須菜10％(G1，G2)，G2組是在G1組飼料的基礎上按2％的質量比添加商業(yè)甘露寡糖的飼料，制成黑鯛配合飼料，飼料配方如表2所示(數(shù)值為重量百分比)，制備步驟同實施例1。

表2不同飼料配方組成

注：1.淀粉、豆粕為市售產(chǎn)品，可從國內(nèi)原料市場采購；

2.魚粉為美國魚粉，粗蛋白含量68％，魚油含量為9.4％；

3.復合維生素、混合礦物質、磷酸二氫鈣、氯化膽堿等輔料可從國內(nèi)飼料廠采購。

實施例3

以實施例1制備的配制飼料，飼養(yǎng)約13.3g的黑鯛。本實施例是在海上魚排進行的網(wǎng)箱養(yǎng)殖，養(yǎng)殖網(wǎng)箱為1×1×1.5m，有蓋網(wǎng)，以防逃逸和水鳥。每組3個平行試驗，每個平行試驗30尾魚。養(yǎng)殖期間的溫度為20～26℃，鹽度為27～31度，養(yǎng)殖60天后，測定各生長指標，實施例1的結果如表3所示。

表3不同發(fā)酵龍須菜飼料對黑鯛生長的影響

注：FCR為飼料轉化率；SGR為特定生長率；PPV為蛋白質儲積率；數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；同行數(shù)據(jù)中，無相同小寫字母標注者表示相互間差異顯著(P<0.05)。

從表3的生長指標來看，以實例1配制的黑鯛飼料配方中，含重量百分比為5％的發(fā)酵龍須菜粉的飼料組的末體重、增重率、FCR、SGR、PPV和成活率都優(yōu)于其他組。綜合以上數(shù)據(jù)的比較，可以得出發(fā)酵龍須菜粉在黑鯛飼料中的最適添加量為重量百分比5％，該比例可以達到較好的養(yǎng)殖效果。

實施例4

以實施例2制備的配制飼料，飼養(yǎng)約13.3g的黑鯛。本實施例是在海上魚排進行的網(wǎng)箱養(yǎng)殖，養(yǎng)殖網(wǎng)箱為1×1×1.5m，有蓋網(wǎng)，以防逃逸和水鳥。每組3個平行試驗，每個平行試驗30尾魚。養(yǎng)殖期間的溫度為20～26℃，鹽度為27～31度，養(yǎng)殖60天后，測定各生長指標，實施例2的結果如表4所示。

表4不同龍須菜飼料對黑鯛生長的影響

注：數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；同行數(shù)據(jù)中，無相同小寫字母標注者表示相互間差異顯著

(P<0.05)。

從表4的生長指標來看，以實例2配制的黑鯛飼料配方中，含重量百分比為5％的發(fā)酵龍須菜粉的飼料組的末體重、增重率、FCR、SGR和PPV都顯著優(yōu)于龍須菜飼料組(P<0.05)，成活率也優(yōu)于龍須菜飼料組。綜合以上數(shù)據(jù)的比較，可以得出添加重量百分比為5％的發(fā)酵龍須菜的黑鯛飼料且優(yōu)于添加重量百分比為10％的龍須菜粉的黑鯛飼料。添加比例為5％發(fā)酵龍須菜粉的黑鯛飼料，能夠促進黑鯛生長，達到較好的養(yǎng)殖效果。

從實施例1-4的數(shù)據(jù)可得出，黑鯛飼料中發(fā)酵龍須菜含量為5％優(yōu)于發(fā)酵龍須菜含量為(0％、10％、15％和20％)的其他配比，在其他組分相同的情況下，且優(yōu)于添加添加重量百分比為10％的龍須菜粉的黑鯛飼料。

實施例5

為了得到最佳的含發(fā)酵龍須菜黑鯛飼料配方，在發(fā)酵龍須菜含量為5％的基礎上，調整了原料、輔料的配比，制成不同的黑鯛配合飼料，飼料配方如表5所示(數(shù)值為重量百分比)，制備步驟同實施例1。

表5發(fā)酵龍須菜飼料優(yōu)化配方組成

實施例6

以實施例5制備的配制飼料，飼養(yǎng)約10.5g的黑鯛。本實施例是在海上魚排進行的網(wǎng)箱養(yǎng)殖，養(yǎng)殖網(wǎng)箱為2×2×2m，有蓋網(wǎng)，以防逃逸和海鳥。每組3個平行試驗，每個平行試驗80尾魚。養(yǎng)殖期間的溫度為21～27℃，鹽度為27～31度。養(yǎng)殖90天后，測定各生長指標，實施例5的結果如表6所示。

表6優(yōu)化發(fā)酵龍須菜飼料對黑鯛生長的影響

注：數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；同行數(shù)據(jù)中，無相同小寫字母標注者表示相互間差異顯著(P<0.05)。

從表6的生長指標來看，在發(fā)酵龍須菜粉重量百分比均為5％的基礎上，在添加不同重量比的原料時，Ⅳ組(優(yōu)化組3)配方飼料組的末體重、增重率和FCR均顯著優(yōu)于其他組(P<0.05)，SGR、PPV和成活率也優(yōu)于其他組。綜合以上數(shù)據(jù)的比較，可以得出按照Ⅳ組(優(yōu)化組3)的配方制備含有發(fā)酵龍須菜的黑鯛飼料時，可以達到較好的養(yǎng)殖效果。

實施例7

以實施例1和2制備的配制飼料，飼養(yǎng)約13.3g的黑鯛。本實施例是在海上魚排進行的網(wǎng)箱養(yǎng)殖，養(yǎng)殖網(wǎng)箱為1×1×1.5m，有蓋網(wǎng)，以防逃逸和水鳥。每組3個平行試驗，每個平行試驗30尾魚。養(yǎng)殖期間的溫度為20～26℃，鹽度為27～31度，養(yǎng)殖60天后，測定魚體和肌肉營養(yǎng)指標，實施例1和2的結果如表7所示。

表7不同飼料對黑鯛營養(yǎng)指標的影響

注：數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；同列數(shù)據(jù)中，無相同小寫字母標注者表示相互間差異顯著(P<0.05)。

從表7的營養(yǎng)指標來看，添加發(fā)酵龍須菜粉重量百分比為5％(F1)的黑鯛飼料組，黑鯛肌肉中蛋白質含量顯著高于其他飼料組(P<0.05)，表明添加發(fā)酵龍須菜粉重量百分比為5％的黑鯛飼料，可以增加黑鯛肌肉蛋白質含量，達到提高黑鯛營養(yǎng)價值的效果。

實施例8

以實施例1和2制備的配制飼料，飼養(yǎng)約13.3g的黑鯛。本實施例是在海上魚排進行的網(wǎng)箱養(yǎng)殖，養(yǎng)殖網(wǎng)箱為1×1×1.5m，有蓋網(wǎng)，以防逃逸和水鳥。每組3個平行試驗，每個平行試驗30尾魚。養(yǎng)殖期間的溫度為20～26℃，鹽度為27～31度，養(yǎng)殖60天后，測定魚血清和肝臟抗氧化能力及溶菌酶指標，實施例1和2的結果如表8所示。

表8不同飼料對黑鯛免疫指標的影響(U mgprot-1)

注：數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；同列數(shù)據(jù)中，無相同小寫字母標注者表示相互間差異顯著(P<0.05)。

從表8的血清和肝臟抗氧化能力及溶菌酶指標來看，添加發(fā)酵龍須菜粉重量百分比為5％(F1)的黑鯛飼料組，黑鯛血清和肝臟抗氧化能力及溶菌酶活性均高于其他飼料組，表明添加發(fā)酵龍須菜粉重量百分比為5％的黑鯛飼料，可以增加黑鯛免疫和抗病力，達到提高黑鯛成活率的效果。

最后應說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。