一種可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法，包括樣品放入、攪拌混勻和靜止分選三個(gè)步驟。本發(fā)明通過(guò)調(diào)節(jié)磁場(chǎng)與磁珠懸濁液距離的方式，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)磁場(chǎng)大小。可以適應(yīng)不同公司、不同直徑的磁珠，具有很高的兼容性。同時(shí)配合旋轉(zhuǎn)攪拌裝置，可以減小分選時(shí)間，在提高分選效率同時(shí)加大細(xì)胞分選的回收率和純度。
【專利說(shuō)明】一種可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說(shuō)，涉及一種可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法。

【背景技術(shù)】
[0002]磁式細(xì)胞分選的基本原理是借助偶聯(lián)在磁性微粒上抗體高特異性識(shí)別并標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞表面抗原，再讓混有磁珠的細(xì)胞懸液通過(guò)磁場(chǎng)，結(jié)合了磁珠的細(xì)胞被吸附在磁場(chǎng)側(cè)壁上，而未結(jié)合的細(xì)胞被除去，得到純化的目標(biāo)細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)高效的分選和富集。磁式分選高效快速，可在2-30分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)105到1011個(gè)細(xì)胞分選。磁式細(xì)胞分選可手動(dòng)完成，簡(jiǎn)單快速，不需要特別昂貴的設(shè)備，對(duì)實(shí)驗(yàn)和技術(shù)要求較低，實(shí)驗(yàn)流程對(duì)細(xì)胞損傷小，無(wú)菌和細(xì)胞狀態(tài)更有保證，分選得到的細(xì)胞可進(jìn)行培養(yǎng)、血液回輸或者流式分析。
[0003]磁式細(xì)胞分選產(chǎn)品比較著名的品牌包括德國(guó)美天旎(MACS), Invitrogen旗下Dynal,BD公司，StemCel I公司，R&D公司等等。根據(jù)生產(chǎn)公司的不同,磁珠大小差異很大。德國(guó)美天旎(MACS)磁珠是由多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒，無(wú)毒性，微珠直徑約有50nm ；Dynal公司的Dynabeads磁珠是由氧化鐵磁性材料合成的均一超順磁微球,大小有三種，直徑分別為4.5um、2.8um和Ium ；BD公司的IMag磁珠大小介于MACS磁珠和Dynabeads之間，直徑約為200nm ；R&D公司則提供了鏈酶親和素結(jié)合的磁珠，直徑約為150nm，有點(diǎn)像膠體顆粒。目前不同直徑的磁珠用于細(xì)胞分選時(shí)，只能使用各自公司的分選磁場(chǎng)。如美天旎公司的 μ MACS, MiniMACS 等產(chǎn)品、Dynal 的 DynaMag-15 和 DynaMag-50 分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的 MagCel Iect 磁力架、StemCel I 公司的 EasySep 和 RoboSep 等。
[0004]由于各個(gè)公司提供的磁珠和磁場(chǎng)互不兼容，當(dāng)使用不用公司的磁珠時(shí)，都需要單獨(dú)購(gòu)買一套磁分選磁場(chǎng)設(shè)備，而這些設(shè)備往往價(jià)格特別昂貴。因此，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)一種可以兼容各個(gè)公司生產(chǎn)的不同直徑磁珠的細(xì)胞分選方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法。通過(guò)調(diào)節(jié)磁場(chǎng)與磁珠懸濁液距離的方式，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)磁場(chǎng)大小?？梢赃m應(yīng)不同公司、不同直徑的磁珠，具有很高的兼容性。同時(shí)配合旋轉(zhuǎn)攪拌裝置，可以減小分選時(shí)間，在提高分選效率的同時(shí)加大細(xì)胞分選的回收率和純度。
[0006]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法，依次包括如下步驟:
[0007](I)樣品放入:將樣杯遠(yuǎn)離磁分選磁場(chǎng)設(shè)備的磁鐵，將包含有目標(biāo)細(xì)胞、標(biāo)記磁珠和雜散細(xì)胞的混濁液放入樣杯中；
[0008](2)攪拌混勻:拌頭向下插入樣杯，緩慢加速旋轉(zhuǎn)，使磁珠與目標(biāo)細(xì)胞充分結(jié)合；
[0009](3)靜止分選:停止攪拌,將樣杯放置于分選設(shè)備磁場(chǎng)的磁鐵上方,調(diào)節(jié)樣杯與磁鐵之間的距離，采用磁力計(jì)監(jiān)測(cè)樣杯底部磁場(chǎng)強(qiáng)度，使樣杯底部磁場(chǎng)強(qiáng)度與使用的磁珠相匹配，將磁珠和磁珠標(biāo)記的細(xì)胞吸附在樣杯底部，靜止5-15分鐘后，用移液的方式將上清液移出；剩余在樣杯內(nèi)的就是分選后的細(xì)胞。
[0010]所述步驟(I)中樣杯與磁鐵(3)之間的距離大于20cm。
[0011]所述標(biāo)記磁珠為德國(guó)美天旎磁珠、Dynal公司的Dynabeads磁珠、BD公司的IMag磁珠、StemCel I公司磁珠和R&D公司的鏈酶親和素結(jié)合磁珠中的一種。
[0012]所述磁分選磁場(chǎng)設(shè)備為美天旎公司的μ MACS和MiniMACS產(chǎn)品、Dynal的DynaMag-15 和 DynaMag-50 分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的MagCel Iect 磁力架、StemCelI公司的EasySep和RoboSep中的一種。
[0013]本發(fā)明的有益效果是:通過(guò)調(diào)節(jié)磁場(chǎng)與磁珠懸濁液距離的方式，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)磁場(chǎng)大小?？梢赃m應(yīng)不同公司、不同直徑的磁珠，具有很高的兼容性。同時(shí)配合旋轉(zhuǎn)攪拌裝置，可以減小分選時(shí)間，在提高分選效率同時(shí)加大細(xì)胞分選的回收率和純度。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1是本發(fā)明方法的磁力分選裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明:
[0016]本發(fā)明的磁分選磁場(chǎng)設(shè)備的工作原理與現(xiàn)有技術(shù)是相同的，可以參考現(xiàn)有技術(shù)，所以不再敘述，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)的不同點(diǎn)是分選方法不同，下面進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明:
[0017]本發(fā)明的可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法，依次包括如下步驟:
[0018](I)樣品放入:將樣杯遠(yuǎn)離磁分選磁場(chǎng)設(shè)備的磁鐵，將包含有目標(biāo)細(xì)胞、標(biāo)記磁珠和雜散細(xì)胞的混濁液放入樣杯中；
[0019](2)攪拌混勻:拌頭向下插入樣杯，緩慢加速旋轉(zhuǎn)，使磁珠與目標(biāo)細(xì)胞充分結(jié)合；
[0020](3)靜止分選:停止攪拌,將樣杯放置于分選設(shè)備磁場(chǎng)的磁鐵上方,調(diào)節(jié)樣杯與磁鐵之間的距離，采用磁力計(jì)監(jiān)測(cè)樣杯底部磁場(chǎng)強(qiáng)度，使樣杯底部磁場(chǎng)強(qiáng)度與使用的磁珠相匹配，將磁珠和磁珠標(biāo)記的細(xì)胞吸附在樣杯底部，靜止5-15分鐘后，用移液的方式將上清液移出；剩余在樣杯內(nèi)的就是分選后的細(xì)胞。
[0021]所述步驟(I)中樣杯與磁鐵(3)之間的距離大于20cm。
[0022]所述標(biāo)記磁珠為德國(guó)美天旎磁珠、Dynal公司的Dynabeads磁珠、BD公司的IMag磁珠、StemCel I公司磁珠和R&D公司的鏈酶親和素結(jié)合磁珠中的一種。
[0023]所述磁分選磁場(chǎng)設(shè)備為美天旎公司的μ MACS和MiniMACS產(chǎn)品、Dynal的DynaMag-15 和 DynaMag-50 分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的MagCel Iect 磁力架、StemCelI公司的EasySep和RoboSep中的一種。
[0024]如圖1所示，樣杯2中按照細(xì)胞分選的需要，可以裝有清洗液、收集液或者目標(biāo)細(xì)胞、標(biāo)記磁珠和雜散細(xì)胞的混濁液。磁鐵3安防在樣杯2的下面，可以將磁珠和磁珠標(biāo)記的細(xì)胞吸附在樣杯2底部。樣杯2與磁鐵3之間的距離可以進(jìn)行自動(dòng)調(diào)整。用于細(xì)胞分選的磁鐵2強(qiáng)度在表面處最強(qiáng)，隨著距離的增加，磁場(chǎng)強(qiáng)度逐漸變小。
[0025]磁鐵2為汝鐵硼材質(zhì)的永磁鐵，磁化方向?yàn)樯厦鍺極，下面S極，上表面中心位置處磁場(chǎng)強(qiáng)度最強(qiáng)，為lOOOmT。
[0026]具體地說(shuō)，可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法包括三個(gè)步驟:
[0027](I)樣品放入:調(diào)節(jié)樣杯2與磁鐵3之間的距離大于20cm ;將包含有目標(biāo)細(xì)胞、標(biāo)記磁珠和雜散細(xì)胞的混濁液放入樣杯2。
[0028]在距離磁鐵20cm處的磁場(chǎng)強(qiáng)度已經(jīng)很小，可近似認(rèn)為是零。這樣做的做法，相當(dāng)于將混濁液遠(yuǎn)離磁場(chǎng)。
[0029](2)攪拌混勻:在遠(yuǎn)離磁場(chǎng)的情況下，攪拌頭I向下插入樣杯2 ;緩慢加速旋轉(zhuǎn)，增加磁珠與目標(biāo)細(xì)胞的接觸機(jī)會(huì)，使磁珠與目標(biāo)細(xì)胞充分結(jié)合；
[0030](3)靜止分選:停止攪拌，調(diào)節(jié)樣杯2與磁鐵3之間的距離，采用磁力計(jì)監(jiān)測(cè)樣杯2底部磁場(chǎng)強(qiáng)度，使樣杯2底部磁場(chǎng)強(qiáng)度為設(shè)定值,例如采用Dynabeads直徑4.5um的磁珠分選人類T細(xì)胞，需要的磁場(chǎng)強(qiáng)度為200mT。
[0031]然后靜止一段時(shí)間5?15分鐘，用移液的方式將上清液移出；剩余在樣杯內(nèi)的就是分選后的細(xì)胞。
[0032]以上所述的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)思想及特點(diǎn)，其目的在于使本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員能夠理解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，不能僅以本實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的專利范圍，即凡本發(fā)明所揭示的精神所作的同等變化或修飾，仍落在本發(fā)明的專利范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法，其特征在于，依次包括如下步驟: (1)樣品放入:將樣杯遠(yuǎn)離磁分選磁場(chǎng)設(shè)備的磁鐵，將包含有目標(biāo)細(xì)胞、標(biāo)記磁珠和雜散細(xì)胞的混濁液放入樣杯中； (2)攪拌混勻:拌頭向下插入樣杯，緩慢加速旋轉(zhuǎn)，使磁珠與目標(biāo)細(xì)胞充分結(jié)合； (3)靜止分選:停止攪拌，將樣杯放置于分選設(shè)備磁場(chǎng)的磁鐵上方，調(diào)節(jié)樣杯與磁鐵之間的距離，采用磁力計(jì)監(jiān)測(cè)樣杯底部磁場(chǎng)強(qiáng)度，使樣杯底部磁場(chǎng)強(qiáng)度與使用的磁珠相匹配，將磁珠和磁珠標(biāo)記的細(xì)胞吸附在樣杯底部，靜止5-15分鐘后，用移液的方式將上清液移出；剩余在樣杯內(nèi)的就是分選后的細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法，其特征在于，所述步驟(I)中樣杯與磁鐵(3)之間的距離大于20cm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法，其特征在于，所述標(biāo)記磁珠為德國(guó)美天旎磁珠、Dynal公司的Dynabeads磁珠、BD公司的IMag磁珠、StemCell公司磁珠和R&D公司的鏈酶親和素結(jié)合磁珠中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可調(diào)節(jié)磁場(chǎng)的磁式細(xì)胞分選方法，其特征在于，所述磁分選磁場(chǎng)設(shè)備為美天旎公司的μ MACS和MiniMACS產(chǎn)品、Dynal的DynaMag-15和DynaMag-50分選架、BD 公司的 Imagnet、R&D 的 MagCellect 磁力架、StemCell 公司的 EasySep 和 RoboSep中的一種。
【文檔編號(hào)】C12N5/00GK104388377SQ201410680428
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月24日
【發(fā)明者】孫雪蓮, 朱建民, 魏華英, 劉江, 張道紅, 周洪銳, 田建國(guó), 葉青, 梅劍春, 黃慧玲, 李洲, 劉曉華 申請(qǐng)人:關(guān)節(jié)動(dòng)力安達(dá)（天津）生物科技有限公司, 天津中新科炬生物制藥有限公司