一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備方法及應(yīng)用，菌草靈芝菌糟提取物、葡萄糖、麥芽糖、酵母提取物、KH2PO4、MgSO4·7H2O和VB1按照一定比例混合而成的液體培養(yǎng)基。本發(fā)明具有使牛樟芝菌絲體具有萌發(fā)快、大量、快速生長的特點(diǎn)，且菌絲多糖含量可達(dá)0.43-0.97%、三萜含量為0.2%-0.41%，分別比傳統(tǒng)培養(yǎng)基高2倍，可為實(shí)際生產(chǎn)中提供大量牛樟芝菌絲體的新方法，其制備方法簡單，可重復(fù)性強(qiáng)，操作簡便易行。
【專利說明】一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備方法及應(yīng)用，屬于生物科技領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]牛樟芝(An trodia cinnamomea )是我國臺灣地區(qū)特有的一種藥用菌,具有保肝、解毒、抗炎癥、抗氧化等多種功效，研究到目前為止牛樟樹iCinnamomum kanehirai)是牛樟芝的唯一宿主，由于其宿主在自然界中極少量及牛樟芝的生長速度緩慢，牛樟芝被譽(yù)為“森林中的紅寶石”。有研究表明，牛樟芝菌絲體具有與牛樟芝子實(shí)體極為相似的保健功能，為了解決人們對牛樟芝日益增長的需求，本發(fā)明篩選菌草靈芝菌糟提取物、葡萄糖、麥芽糖等作為培養(yǎng)基可以大量、快速刺激牛樟芝菌絲體生長，提高其有效成分含量的同時(shí)對樟芝市場發(fā)展也具有正確的引導(dǎo)作用，將為我國菌業(yè)產(chǎn)生重大的經(jīng)濟(jì)和社會效益。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了提高牛樟芝菌絲體生產(chǎn)能力，本發(fā)明提供了一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明解決的技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:
一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基，、所述培養(yǎng)基配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為葡萄糖1.0-3.0%,蛋白胨 0.5-1.0%,麥芽糖 0.3-1.0%,酵母提取物 0.3-1.0%, 0.1-0.3% KH2PO4,0.1-0.3%MgSO4.7H20, VB1 0.1%以及0.1%-0.5%的菌草靈芝菌糟提取物溶于100mL水中，調(diào)節(jié)pH值為5-5.5，每10mL分裝至250mL容量瓶中，在121°C滅菌20min。培養(yǎng)基冷卻后接入牛樟芝菌種。
[0004]所述菌草靈芝菌糟提取物制備方法包括以下步驟:
(1)選擇無雜菌、無蟲害、靈芝菌絲體豐富、出芝一次的優(yōu)質(zhì)菌草靈芝菌糟；
(2)選取無病蟲害、靈芝菌絲體豐富的菌草靈芝菌糟，經(jīng)破袋、破碎、曬干后稱取20g溶于100mL水中，在80-90°C的條件下水浴加熱真空回流3h后過濾，浸提液并濃縮至30mL，在_80°C條件下冷凍后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末狀固體，即為菌草靈芝菌糟提取物。
[0005]一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基在牛樟芝菌絲體生產(chǎn)中的應(yīng)用一、菌草靈芝菌糟提取物培養(yǎng)基組分及配比
該牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基在傳統(tǒng)培養(yǎng)基的條件下加入濃度為0.1-0.5%的菌草靈芝菌糟提取物。
[0006]所述的菌草靈芝菌糟提取物是由優(yōu)質(zhì)菌草靈芝菌糟，經(jīng)破袋、破碎、干燥后用熱水回流浸提裝置，經(jīng)過水浸提過濾后濃縮，進(jìn)行冷凍干燥后得到的棕褐色粉末狀固體。
[0007]所述的菌草靈芝菌糟是指挑選無雜菌、無蟲害、靈芝菌絲體豐富、出芝一次的優(yōu)質(zhì)菌草靈芝菌糟，于60°C干燥后避光密封貯存。
[0008]添加量為0.1%-0.5%的菌草靈芝菌糟添加量是指固體干重占溶液體積的百分比。
[0009]二、牛樟芝培養(yǎng)基的制備方法及牛樟芝菌絲培養(yǎng)方法菌草靈芝菌糟提取物制備工藝條件如下:以10-20g菌草靈芝菌糟加入100mL水中，在80-900C的條件下水浴加熱回流3h后過濾并濃縮至20-50mL，在_80°C條件下冷凍后放入真空干燥箱，干燥成棕褐色粉末狀固體。
[0010]本發(fā)明的菌草靈芝菌糟浸出液培養(yǎng)牛樟芝的方法:在28°C, 120rpm,黑暗培養(yǎng)16天。
[0011]本發(fā)明的所培養(yǎng)的牛樟芝菌絲在第16天時(shí)生物量高達(dá)9g/L(DW)，且接種培養(yǎng)2-3天后菌絲開始大量、萌發(fā)快速。滅菌冷卻后的培養(yǎng)基在無菌條件下接入牛樟芝菌種，菌絲生物量可達(dá)8.57-9.2g/L (DW)菌絲中的多糖含量達(dá)0.43-0.97%、三萜含量可達(dá)0.2%-0.41%。
[0012]本發(fā)明所培養(yǎng)的牛樟芝菌絲利用葡聚糖為對照品以分光光度法測定多糖含量，利用香草醛-冰醋酸法測定三萜含量，菌草靈芝菌糟提取物培養(yǎng)牛樟芝菌絲多糖為
0.43-0.97% 和三萜為 0.2%-0.41%。
[0013]本發(fā)明的效益是:
菌草靈芝菌糟是生產(chǎn)靈芝后的廢菌料，在我國數(shù)量多且來源廣，利用菌草靈芝菌糟提取物培養(yǎng)牛樟芝菌絲可使牛樟芝菌絲大量、迅速萌發(fā)；同時(shí)，菌草靈芝菌糟提取物作為添加劑培養(yǎng)牛樟芝菌絲體多糖含量0.49%-0.97%，是傳統(tǒng)培養(yǎng)基的1-2倍，三萜含量
0.2%-0.41% ;其牛樟芝菌絲生物量是傳統(tǒng)培養(yǎng)基的1-1.5倍。菌草靈芝菌糟是一種大量、快速制備牛樟芝菌絲體的材料，即可提高牛樟芝菌絲體的生物量，又可以提高其有效含量，可以作為培養(yǎng)基代替?zhèn)鹘y(tǒng)的培養(yǎng)基，大量快速生產(chǎn)牛樟芝菌絲體。

【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例1
選取無病蟲害、靈芝菌絲體豐富的菌草靈芝菌糟，經(jīng)破袋、破碎、曬干后稱取20g溶于100mL水中，在90°C的條件下水浴加熱真空回流3h后過濾，浸提液并濃縮至30mL，在_80°C條件下冷凍后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末狀固體，即為菌草靈芝菌糟提取物。
[0015]本實(shí)施例的牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備:葡萄糖2.5%，蛋白胨0.5%，麥芽糖0.3%，酵母提取物0.3%, 0.1% KH2PO4,0.1% MgSO4.7H20, VB1 0.1%以及0.1%的菌草靈芝菌糟提取物溶于100mL水中，調(diào)節(jié)pH值為5.5，每10mL分裝至250mL容量瓶中，在121°C滅菌20min,冷卻后備用。
[0016]培養(yǎng)方法:在28°C，120rpm，黑暗培養(yǎng)16天。
[0017]經(jīng)測量，其菌絲生長量為8.67g/L (DW)，多糖含量為0.97%，三萜含量為0.28%。
[0018]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
[0019]實(shí)施例2
選取無病蟲害、靈芝菌絲體豐富的菌草靈芝菌糟，經(jīng)破袋、破碎、曬干后稱取20g溶于100mL水中，在85°C的條件下水浴加熱真空回流3h后過濾，浸提液并濃縮至40mL，在_80°C條件下冷凍后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末狀固體，即為菌草靈芝菌糟提取物。
[0020]本實(shí)施例的牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備:葡萄糖3.0%，蛋白胨1.0%，麥芽糖1.0%，酵母提取物1.0%, 0.3% KH2PO4, 0.3% MgSO4 ^H2O7VB1 0.1%以及0.5%的菌草靈芝菌糟提取物溶于100mL水中，調(diào)節(jié)pH值為5，每10mL分裝至250mL容量瓶中，在121°C滅菌20min。培養(yǎng)基冷卻后接入牛樟芝菌種。
[0021]培養(yǎng)方法:在28°C，120rpm，黑暗培養(yǎng)16天。
[0022]經(jīng)測量，其菌絲生長量為9.2g/L (Dff),多糖含量為0.78%，三萜含量為0.41%。
[0023]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
[0024]實(shí)施例3
選取無病蟲害、靈芝菌絲體豐富的菌草靈芝菌糟，經(jīng)破袋、破碎、曬干后稱取20g溶于100mL水中，在90°C的條件下水浴加熱真空回流3h后過濾，浸提液并濃縮至20mL，在_80°C條件下冷凍后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末狀固體，即為菌草靈芝菌糟提取物。
[0025]本實(shí)施例的牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基的制備:葡萄糖1.0%，蛋白胨0.5%，麥芽糖0.5%，酵母提取物0.5%, 0.2% KH2PO4,0.2% MgSO4.7H20, VB1 0.1%以及0.1%的菌草靈芝菌糟提取物溶于100mL水中，調(diào)節(jié)pH值為5.5，每10mL分裝至250mL容量瓶中，在121°C滅菌20min。培養(yǎng)基冷卻后接入牛樟芝菌種。
[0026]培養(yǎng)方法:在280C，120rpm,黑暗培養(yǎng)16天。
[0027]經(jīng)測量，其菌絲生長量為9.0g/L (Dff),多糖含量為0.85%，三萜含量為0.35%。
[0028]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為葡萄糖1.0-3.0%,蛋白胨 0.5-1.0%,麥芽糖 0.3-1.0%,酵母提取物 0.3-1.0%,0.1-0.3% KH2PO4,0.1-0.3% MgSO4 ^H2O7VB1 0.1%以及0.1%_0.5%的菌草靈芝菌糟提取物溶于100mL水中，調(diào)節(jié)pH值為5-5.5，每10mL分裝至250mL容量瓶中，在121°C滅菌20min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基，其特征在于:所述菌草靈芝菌糟提取物制備方法包括以下步驟: (1)選擇無雜菌、無蟲害、靈芝菌絲體豐富、出芝一次的優(yōu)質(zhì)菌草靈芝菌糟； (2)選取無病蟲害、靈芝菌絲體豐富的菌草靈芝菌糟，經(jīng)破袋、破碎、曬干后稱取20g溶于100mL水中，在80-90°C的條件下水浴加熱真空回流3h后過濾，浸提液并濃縮至30mL，在_80°C條件下冷凍后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末狀固體，即為菌草靈芝菌糟提取物。
3.—種如權(quán)利要求1所述的一種牛樟芝菌絲體培養(yǎng)基在牛樟芝菌絲體生產(chǎn)中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12R1/645GK104130948SQ201410329541
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月11日
【發(fā)明者】李晶, 林占熺, 謝長海, 羅紅建, 林冬梅, 童金華, 王培丹, 邵恩斯 申請人:福建農(nóng)林大學(xué)