一種肉桂地鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素的新型培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種肉桂地鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素的新型培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，利用本發(fā)明中提供的培養(yǎng)基配方和發(fā)酵控制工藝，能夠提高莫能菌素發(fā)酵單位，縮短發(fā)酵周期，降低發(fā)酵成本，并且最大限度的降低原輔料來(lái)源不受環(huán)境影響，保證其供應(yīng)充足，實(shí)現(xiàn)莫能菌素穩(wěn)定、高效的生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種肉桂地鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素的新型培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種肉桂地鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素的新型培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]莫能菌素又名莫能霉素、莫能菌酸、瘤胃素，由美國(guó)Eli Iilly公司于1967年從一株肉桂地鏈霉菌中分離到的一種脂溶性抗生素。它是一種廣譜抗球蟲(chóng)藥，對(duì)金黃色葡萄球菌，鏈球菌，枯草桿菌等革蘭氏陽(yáng)性菌和豬血痢密螺旋體等都具有較高的抗菌活性。主要用于防治雞 ，兔，犢牛，羔羊的球蟲(chóng)病和豬痢疾，并能促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育和提高飼料利用率。
[0003]目前，國(guó)內(nèi)莫能菌素的發(fā)酵生產(chǎn)采用三級(jí)發(fā)酵模式，該方式存在的主要問(wèn)題有以下幾點(diǎn):
I莫能菌素發(fā)酵水平較低，一般控制在35000u/ml左右。
[0004]2國(guó)內(nèi)發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素的培養(yǎng)基中加入葡萄糖，經(jīng)高溫滅菌，易導(dǎo)致部分葡萄糖碳化，降低總糖含量，影響發(fā)酵液質(zhì)量。
[0005]3莫能菌素發(fā)酵生產(chǎn)所需的原材料采購(gòu)成本較高。莫能菌素培養(yǎng)基中常用的有機(jī)氮源主要是花生餅粉(或黃豆餅粉)、蛋白胨、酵母粉，其市場(chǎng)價(jià)格較高。
[0006]4國(guó)內(nèi)莫能菌素的發(fā)酵培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，一般在300h以上，導(dǎo)致能耗較高。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單，有效提高發(fā)酵單位，同時(shí)最大限度的降低原輔料對(duì)發(fā)酵單位的影響，降低生產(chǎn)成本，且原輔料來(lái)源不受環(huán)境影響，保證其供應(yīng)充足，實(shí)現(xiàn)莫能菌素穩(wěn)定、高效生產(chǎn)的新型培養(yǎng)基。
[0008]本發(fā)明的另一目的是提供利用上述培養(yǎng)基生產(chǎn)莫能菌素的培養(yǎng)方法。
[0009]為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為:
一種肉桂地鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素的新型培養(yǎng)基，包括一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述一級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:麩皮I~5g/L、麥芽糖5~9g/L、魚(yú)粉3~7g/L、玉米衆(zhòng)5~9ml/L、玉米蛋白粉I~5g/L、啤酒酵母浸膏4~8g/L,硫酸銨I~5g/L、輕質(zhì)碳酸鈣I~5g/L、橄欖油或菜籽油5~9ml/L ；
所述二級(jí)種子培養(yǎng)基組成為:麩皮3~7g/L、麥芽糖6~10g/L、魚(yú)粉6~9g/L、玉米衆(zhòng)8~12ml/L、玉米蛋白粉3~7g/L、啤酒酵母浸膏5~9g/L,硫酸銨3~7g/L、輕質(zhì)碳酸鈣I~5g/L、磷酸二氫鉀0.5~0.9g/L,橄欖油或菜籽油15~25ml/L ；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麩皮8~12g/L、麥芽糖10~14g/L、魚(yú)粉7~llg/L、玉米漿15~19ml/L、玉米蛋白粉5~9g/L、啤酒酵母浸膏15~19g/L,硫酸銨4~8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣3~7g/L、磷酸二氫鉀0.5~0.9g/L，橄欖油或菜籽油25~40ml/L。氯化鈉0.3~0.7g/L、硫酸鎂0.2~0.6g/L、硫酸亞鐵0.1~0.5g/L、聚氧丙烯甘油0.3~0.4g/L。[0010]一種利用上述培養(yǎng)基生產(chǎn)莫能菌素的培養(yǎng)方法，其特征在于其工藝步驟為:
O 一級(jí)種子培養(yǎng):首先將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25~30°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的肉桂地鏈霉菌母瓶發(fā)酵液按照0.3~0.5L/m3的接種量接入該一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度20~25%、pH值6.5~8.5、培養(yǎng)時(shí)間25~35h時(shí)移種；
2)二級(jí)種子培養(yǎng):先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌，冷卻至25~30°C，并用無(wú)菌空氣保壓，將培養(yǎng)好的一級(jí)種子液移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，移種比例控制在9~11%，至菌體濃度30~35%、pH值6.5~8.5、培養(yǎng)時(shí)間30~35h時(shí)移種；
3)發(fā)酵培養(yǎng):先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20~27°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，移種比例控制在9~11%，至菌體濃度35~40%、還原糖< 1.5g/L、脂肪:< 2g/L、氨基氮:10 ~30mg/100ml、化學(xué)效價(jià)> 43000u/mL、pH:6.0~7.0、培養(yǎng)時(shí)間260~280h時(shí)終止發(fā)酵。
[0011]滅菌后的一級(jí)種子培養(yǎng)基的質(zhì)量要求:氨基氮:50~60mg/100ml、溶磷:100~150ug/ml、脂肪:10 ~25g/L、pH:6.5 ~7.5 ;
滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)基 的質(zhì)量要求:氨基氮:60~70mg/100ml、溶磷:100~150ug/ml、脂肪:15 ~30g/L、pH:6.5 ~7.5 ;
滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量要求:氨基氮:70~80mg/100ml、溶磷:150~200ug/ml、脂肪:25 ~40g/L、pH:6 ~7。
[0012]所述培養(yǎng)好的母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為:pH6~8 ;菌體濃度10~30% ;鏡檢無(wú)雜菌；發(fā)酵單位15000~25000u/ml。
[0013]所述一級(jí)種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~5h,采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；6h~移種:50~60m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速60~80r/min。
[0014]所述二級(jí)種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~12h, 20 ~30m3/h ； 13h ~移種:50 ~60m3/h ;攬祥轉(zhuǎn)速 80 ~100r/min。
[0015]所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為:
a培養(yǎng)基初始pH:發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6~7 ;
b溫度:采用變溫控制方法，O~20h:培養(yǎng)溫度29~31°C;20h~發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度32 ~33。。；
c攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制方法，O~IOOh:轉(zhuǎn)速控制在100r/min ;101~200h:轉(zhuǎn)速控制在130r/min ；201h~發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min ；d壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ；e pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6.0~7.0 ;
f 空氣流量:0 ~IOOh:150 ~200mVh ;101 ~200h:250 ~300m3/h ;201h ~發(fā)酵結(jié)束:100 ~150m3A ；h溶氧控制:
發(fā)酵前5h內(nèi)，不控制溶氧；
6~100h，溶氧控制在60%以上；
101~200h，溶氧控制在20%以上；
201~發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在30%以上。[0016]在發(fā)酵過(guò)程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料包括補(bǔ)油、補(bǔ)水、補(bǔ)糖和pH控制，其中 a補(bǔ)油工藝控制:
發(fā)酵前30h不用進(jìn)行補(bǔ)油，
發(fā)酵時(shí)間在31~120h，當(dāng)脂肪含量低于15%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為15~20%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，
發(fā)酵時(shí)間在121~200h，當(dāng)脂肪含量低于10%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為10~15%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，
發(fā)酵時(shí)間在201h~240h，當(dāng)脂肪含量低于5%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為5~8%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，
發(fā)酵時(shí)間在241h~發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)脂肪含量低于1.5%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為1.5~2.5%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量；b補(bǔ)水工藝控制:
發(fā)酵前30h不用進(jìn)行補(bǔ)水， 發(fā)酵時(shí)間在31~100h，當(dāng)菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在40~45%，每隔6~8h檢 測(cè)發(fā)酵液菌體濃度，
發(fā)酵時(shí)間在101~200h，當(dāng)菌體濃度高于45%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在40~45%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度，
發(fā)酵時(shí)間在201h~發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在35~40%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度；c發(fā)酵過(guò)程pH控制工藝:
發(fā)酵前40h，pH不進(jìn)行控制，
發(fā)酵時(shí)間在41~120h，若pH < 6.0，加入10~20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至6.0~6.5 ;若pH > 6.5，加入30%的硫酸銨溶液，調(diào)節(jié)pH至6.0~6.5，
發(fā)酵時(shí)間在121~發(fā)酵結(jié)束，若pH < 6.5，加入10~20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH控至
6.5~7.0 ;若pH > 7.0，加入30%的硫酸銨溶液，調(diào)節(jié)pH至6.5~7.0 ; d補(bǔ)入麥芽糖:
發(fā)酵前60h，還原糖含量不進(jìn)行控制，
發(fā)酵61h至200h:還原糖含量< 3%時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在3~4%，
發(fā)酵201h至發(fā)酵結(jié)束:還原糖含量< 0.5%時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在0.5~1%，
上述麥芽糖溶液中加入麥芽糖酶，其濃度控制在0.001~0.003%。
[0017]本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在:
I本發(fā)明確認(rèn)了種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)碳源、氮源和最佳配伍比例。
[0018]2本發(fā)明對(duì)種子培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)的工藝進(jìn)行了詳細(xì)的闡述，確認(rèn)了莫能菌素最佳的發(fā)酵工藝和控制參數(shù)。達(dá)到的技術(shù)效果為發(fā)酵單位在43000u/ml以上，生產(chǎn)周期不超過(guò)280h，同國(guó)內(nèi)技術(shù)相比，發(fā)酵單位提高了 22.8%，生產(chǎn)周期減少了 20h以上。
[0019]3本發(fā)明適用于規(guī)模化發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素，能夠滿足年產(chǎn)40000噸莫能菌素預(yù)混劑的生產(chǎn)需求。[0020]4培養(yǎng)基中使用麥芽糖，避免出現(xiàn)葡萄糖碳化現(xiàn)象，不會(huì)影響菌種培養(yǎng)效果。
[0021]具體實(shí)施方法
下面用實(shí)例予以說(shuō)明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實(shí)例是用于說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書(shū)加以確定。
[0022]下述實(shí)施例的菌種選用肉桂地鏈霉菌:生產(chǎn)使用的菌種來(lái)源為母瓶發(fā)酵液。母瓶發(fā)酵液質(zhì)量:pH6~8 ;菌體濃度10~30% ;鏡檢無(wú)雜菌；發(fā)酵單位15000~25000u/ml。
[0023]實(shí)施例1
一級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積1.5m3，有效體積為lm3。
[0024]麩皮1kg、麥芽糖5kg、魚(yú)粉3kg、玉米衆(zhòng)5L、玉米蛋白粉1kg、啤酒酵母浸膏4kg,硫酸銨1kg、輕質(zhì)碳酸鈣1kg、橄欖油5L。
[0025]將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的肉桂地鏈霉菌母瓶發(fā)酵液接入一級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，接種量控制在0.3L。滅菌后一級(jí)種子培養(yǎng)基的氨基氮:51mg/100ml、溶磷:104ug/ml、脂肪:12g/L、pH:7.3。
[0026]一級(jí)種子培養(yǎng):罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~5h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；6h~移種:50m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速60r/min。
[0027]一級(jí)種子培養(yǎng) 結(jié)束，菌體濃度21% ；pH值8.3 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間25h。
[0028]二級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積15m3，有效體積為10m3。
[0029]麩皮30kg、麥芽糖60kg、魚(yú)粉60kg、玉米衆(zhòng)80kg、玉米蛋白粉30kg、啤酒酵母浸膏50kg,硫酸銨30kg、輕質(zhì)碳酸韓10kg、磷酸二氫鉀5kg,橄欖油150L。
[0030]先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌，冷卻至25°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)基氨基氮61mg/100ml、溶磷105ug/ml、脂肪16g/L、pH7.4。然后將一級(jí)種子液全部移入
二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。
[0031]二級(jí)種子培養(yǎng)條件:罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C ;空氣流量:0~12h，20m3/h ； 13h ~移種:50m3/h ;攬祥轉(zhuǎn)速 80r/min。
[0032]二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，其菌體濃度31% ；pH值8.2 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間30h。
[0033]發(fā)酵培養(yǎng)基制備過(guò)程:發(fā)酵罐體積130m3，有效體積為100m3。
[0034]麩皮800kg、麥芽糖1000kg、魚(yú)粉700kg、玉米漿1500kg、玉米蛋白粉500kg、啤酒酵母浸膏1500kg，硫酸銨400kg、輕質(zhì)碳酸鈣300kg、磷酸二氫鉀50kg，橄欖油2500L、氯化鈉30kg、硫酸鎂20kg、硫酸亞鐵10kg、聚氧丙烯甘油30kg
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基氨基氮72mg/100ml、溶磷154ug/ml、脂肪27g/L、pH6.9。然后將二級(jí)種子液移入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
[0035]發(fā)酵培養(yǎng)控制方法:
1)溫度:采用變溫控制方法，O~20h:培養(yǎng)溫度29~31°C;20h~發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度32 ~33。。；
2)攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制方法，O~IOOh:轉(zhuǎn)速控制在100r/min ；101~200h:轉(zhuǎn)速控制在130r/min ；201h~發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min
3)壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ；
4)pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6.0~7.0 ;5)無(wú)菌檢查:發(fā)酵過(guò)程中進(jìn)行菌檢，要求無(wú)其它雜菌；
6)空氣流量:0~IOOh:150m3A ；101 ~200h:250m3/h ；201h ~發(fā)酵結(jié)束:IOOm3A ；
7)溶氧控制:發(fā)酵前5h內(nèi)，不控制溶氧；6~100h，溶氧控制在60%以上；101~200h，溶氧控制在20%以上；201~發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在30%以上。
[0036]發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，氨基氮13mg/100ml、pH6.8、還原糖0.73g/L ;脂肪1.12g/L、菌體濃度35%、化學(xué)效價(jià)43521u/ml、發(fā)酵周期261h。 [0037]實(shí)施例2
一級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積1.5m3，有效體積為lm3。
[0038]麩皮2kg、麥芽糖6kg、魚(yú)粉4kg、玉米衆(zhòng)6L、玉米蛋白粉2kg、啤酒酵母浸膏5kg,硫酸銨2kg、輕質(zhì)碳酸|丐2kg、菜籽油6L。
[0039]將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至26°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的肉桂地鏈霉菌母瓶發(fā)酵液接入一級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，接種量控制在0.3L。滅菌后一級(jí)種子培養(yǎng)基的氨基氮:53mg/100ml、溶磷:112ug/ml、脂肪:14g/L、pH:7.2。
[0040]一級(jí)種子培養(yǎng):罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~5h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；6h~移種:52m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速65r/min。
[0041]一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度22% ；pH值8.0 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間27h。
[0042]二級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積15m3，有效體積為10m3。
[0043]麩皮40kg、麥芽糖70kg、魚(yú)粉70kg、玉米漿90kg、玉米蛋白粉40kg、啤酒酵母浸膏60kg,硫酸銨40kg、輕質(zhì)碳酸韓20kg、磷酸二氫鉀6kg,菜籽油170L。
[0044]先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌，冷卻至26°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)基氨基氮63mg/100ml、溶磷115ug/ml、脂肪19g/L、pH7.2。然后將一級(jí)種子液全部移入
二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。
[0045]二級(jí)種子培養(yǎng)條件:罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C ;空氣流量:0~12h，22m3/h ； 13h ~移種:52m3/h ;攬祥轉(zhuǎn)速 85r/min。
[0046]二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，其菌體濃度32% ；pH值7.9 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間32h。
[0047]發(fā)酵培養(yǎng)基制備過(guò)程:發(fā)酵罐體積130m3，有效體積為100m3。
[0048]麩皮900kg、麥芽糖1100kg、魚(yú)粉800kg、玉米漿1600kg、玉米蛋白粉600kg、啤酒酵母浸膏1600kg,硫酸銨500kg、輕質(zhì)碳酸|丐400kg、磷酸二氫鉀60kg,菜籽油3000L、氯化鈉40kg、硫酸鎂30kg、硫酸亞鐵20kg、聚氧丙烯甘油33kg
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至22°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基氨基氮73mg/100ml、溶磷162ug/ml、脂肪30g/L、pH6.7。然后將二級(jí)種子液移入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
[0049]發(fā)酵培養(yǎng)控制方法:
1)溫度:采用變溫控制方法，O~20h:培養(yǎng)溫度29~31°C;20h~發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度32 ~33。。；
2)攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制方法，O~IOOh:轉(zhuǎn)速控制在100r/min ；101~200h:轉(zhuǎn)速控制在130r/min ；201h~發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min
3)壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ；
4)pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6.0~7.0 ;5)無(wú)菌檢查:發(fā)酵過(guò)程中進(jìn)行菌檢，要求無(wú)其它雜菌；
6)空氣流量:0~IOOh:160m3A ；101 ~200h:260m3/h ；201h ~發(fā)酵結(jié)束:120m3/h ；
7)溶氧控制:發(fā)酵前5h內(nèi)，不控制溶氧；6~100h，溶氧控制在60%以上；101~200h，溶氧控制在20%以上；201~發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在30%以上。
[0050]發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束,氨基氮17mg/100ml、pH6.7、還原糖0.89g/L ;脂肪1.51g/L、菌體濃度36%、化學(xué)效價(jià)43975u/ml、發(fā)酵周期265h。
[0051]實(shí)施例3
一級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積1.5m3，有效體積為lm3。
[0052]麩皮3kg、麥芽糖7kg、魚(yú)粉5kg、玉米衆(zhòng)7L、玉米蛋白粉3kg、啤酒酵母浸膏6kg,硫酸銨3kg、輕質(zhì)碳酸|丐3kg、菜籽油7L。
[0053]將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至27°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的肉 桂地鏈霉菌母瓶發(fā)酵液接入一級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，接種量控制在0.3L。滅菌后一級(jí)種子培養(yǎng)基的氨基氮:55mg/100ml、溶磷:124ug/ml、脂肪:18g/L、pH:7.0。
[0054]一級(jí)種子培養(yǎng):罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~5h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；6h~移種:55m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速70r/min。
[0055]一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度23% ；pH值7.5 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間30h。
[0056]二級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積15m3,有效體積為10m3。
[0057]麩皮50kg、麥芽糖80kg、魚(yú)粉80kg、玉米漿100kg、玉米蛋白粉50kg、啤酒酵母浸膏70kg,硫酸銨50kg、輕質(zhì)碳酸韓30kg、磷酸二氫鉀7kg,菜籽油200L。
[0058]先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌，冷卻至27°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)基氨基氮65mg/100ml、溶磷125ug/ml、脂肪21g/L、pH7.0。然后將一級(jí)種子液全部移入
二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。
[0059]二級(jí)種子培養(yǎng)條件:罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C ;空氣流量:0~12h，25m3/h ； 13h ~移種:55m3/h ;攬祥轉(zhuǎn)速 90r/min。
[0060]二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，其菌體濃度33% ；pH值7.5 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間33h。
[0061]發(fā)酵培養(yǎng)基制備過(guò)程:發(fā)酵罐體積130m3，有效體積為100m3。
[0062]麩皮1000kg、麥芽糖1200kg、魚(yú)粉900kg、玉米漿1700kg、玉米蛋白粉700kg、啤酒酵母浸膏1700kg，硫酸銨600kg、輕質(zhì)碳酸鈣500kg、磷酸二氫鉀70kg，菜籽油3300L、氯化鈉50kg、硫酸鎂40kg、硫酸亞鐵30kg、聚氧丙烯甘油35kg
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至24°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基氨基氮75mg/100ml、溶磷174ug/ml、脂肪33g/L、pH6.5。然后將二級(jí)種子液移入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
[0063]發(fā)酵培養(yǎng)控制方法:
1)溫度:采用變溫控制方法，O~20h:培養(yǎng)溫度29~31°C;20h~發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度32 ~33。。；
2)攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制方法，O~IOOh:轉(zhuǎn)速控制在100r/min ；101~200h:轉(zhuǎn)速控制在130r/min ；201h~發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min
3)壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ；
4)pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6.0~7.0 ;5)無(wú)菌檢查:發(fā)酵過(guò)程中進(jìn)行菌檢，要求無(wú)其它雜菌；
6)空氣流量:0~IOOh:170m3A ；101 ~200h:270m3/h ；201h ~發(fā)酵結(jié)束:130m3/h ；
7)溶氧控制:發(fā)酵前5h內(nèi)，不控制溶氧；6~100h，溶氧控制在60%以上；101~200h，溶氧控制在20%以上；201~發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在30%以上。
[0064]發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束,氨基氮21mg/100ml、pH6.5、還原糖1.0g/L ;脂肪1.62g/L、菌體濃度37%、化學(xué)效價(jià)44613u/ml、發(fā)酵周期270h。
[0065]實(shí)施例4 一級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積1.5m3，有效體積為lm3。
[0066]麩皮4kg、麥芽糖8kg、魚(yú)粉6kg、玉米衆(zhòng)8L、玉米蛋白粉4kg、啤酒酵母浸膏7kg,硫酸銨4kg、輕質(zhì)碳酸|丐4kg、橄欖油8L。
[0067]將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至28°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的肉桂地鏈霉菌母瓶發(fā)酵液接入一級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，接種量控制在0.3L。滅菌后一級(jí)種子培養(yǎng)基的氨基氮:57mg/100ml、溶磷:138ug/ml、脂肪:22g/L、pH:6.8。
[0068]一級(jí)種子培養(yǎng):罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~5h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；6h~移種:57m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速75r/min。
[0069]一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度24% ；pH值7.1 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間32h。
[0070]二級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積15m3，有效體積為10m3。
[0071 ] 麩皮60kg、麥芽糖90kg、魚(yú)粉90kg、玉米衆(zhòng)110kg、玉米蛋白粉60kg、啤酒酵母浸膏80kg,硫酸銨60kg、輕質(zhì)碳酸韓40kg、磷酸二氫鉀8kg,橄欖油230L。
[0072]先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌，冷卻至28°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)基氨基氮68mg/100ml、溶磷141ug/ml、脂肪26g/L、pH6.7。然后將一級(jí)種子液全部移入
二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。
[0073]二級(jí)種子培養(yǎng)條件:罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C ;空氣流量:0~12h，28m3/h ； 13h ~移種:57m3/h ;攬祥轉(zhuǎn)速 95r/min。
[0074]二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，其菌體濃度34% ；pH值7.0 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間34h。
[0075]發(fā)酵培養(yǎng)基制備過(guò)程:發(fā)酵罐體積130m3，有效體積為100m3。
[0076]麩皮1100kg、麥芽糖1300kg、魚(yú)粉1000kg、玉米漿1800kg、玉米蛋白粉800kg、啤酒酵母浸膏1800kg，硫酸銨700kg、輕質(zhì)碳酸鈣600kg、磷酸二氫鉀80kg，橄欖油3700L、氯化鈉60kg、硫酸鎂50kg、硫酸亞鐵40kg、聚氧丙烯甘油38kg。
[0077]先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至26°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基氨基氮77mg/100ml、溶磷186ug/ml、脂肪34g/L、pH6.3。然后將二級(jí)種子液移入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)
酵培養(yǎng)。
[0078]發(fā)酵培養(yǎng)控制方法:
1)溫度:采用變溫控制方法，O~20h:培養(yǎng)溫度29~31°C;20h~發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度32 ~33。。；
2)攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制方法，O~IOOh:轉(zhuǎn)速控制在100r/min ；101~200h:轉(zhuǎn)速控制在130r/min ；201h~發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min
3)壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ；
4)pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6.0~7.0 ;5)無(wú)菌檢查:發(fā)酵過(guò)程中進(jìn)行菌檢，要求無(wú)其它雜菌；
6)空氣流量:0~IOOh:180m3A ；101 ~200h:280m3/h ；201h ~發(fā)酵結(jié)束:140m3/h ；
7)溶氧控制:發(fā)酵前5h內(nèi)，不控制溶氧；6~100h，溶氧控制在60%以上；101~200h，溶氧控制在20%以上；201~發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在30%以上。
[0079]發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束,氨基氮24mg/100ml、pH6.3、還原糖1.2g/L ;脂肪1.76g/L、菌體濃度38%、化學(xué)效價(jià)44216u/ml、發(fā)酵周期275h。
[0080]實(shí)施例5
一級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積1.5m3，有效體積為lm3。
[0081]麩皮5kg、麥芽糖89kg、魚(yú)粉7kg、玉米衆(zhòng)9L、玉米蛋白粉5kg、啤酒酵母浸膏8kg,硫酸銨45kg、輕質(zhì)碳酸|丐5kg、菜籽油9L。
[0082]將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至30°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的肉桂地鏈霉菌母瓶發(fā)酵液接入一級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)，接種量控制在0.3L。滅菌后一級(jí)種子培養(yǎng)基的氨基氮 :60mg/100ml、溶磷:149ug/ml、脂肪:25g/L、pH:6.5。
[0083]一級(jí)種子培養(yǎng):罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~5h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；6h~移種:60m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速80r/min。
[0084]一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度25% ；pH值6.6 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間35h。
[0085]二級(jí)種子培養(yǎng)基制備:種子罐體積15m3,有效體積為10m3。
[0086]麩皮70kg、麥芽糖100kg、魚(yú)粉100kg、玉米漿120kg、玉米蛋白粉70kg、啤酒酵母浸膏90kg,硫酸銨70kg、輕質(zhì)碳酸|丐50kg、磷酸二氫鉀9kg,菜籽油250L。
[0087]先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌，冷卻至30°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)基氨基氮70mg/100ml、148ug/ml、脂肪30g/L、pH6.5。然后將一級(jí)種子液全部移入二級(jí)種子罐進(jìn)行培養(yǎng)。
[0088]二級(jí)種子培養(yǎng)條件:罐壓0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C ;空氣流量:0~12h，30m3/h ； 13h ~移種:60m3/h ;攬祥轉(zhuǎn)速 100r/min。
[0089]二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，其菌體濃度35% ；pH值6.6 ;無(wú)其它雜菌污染；培養(yǎng)時(shí)間35h。
[0090]發(fā)酵培養(yǎng)基制備過(guò)程:發(fā)酵罐體積130m3，有效體積為100m3。
[0091 ] 麩皮1200kg、麥芽糖1400kg、魚(yú)粉1100kg、玉米漿1900kg、玉米蛋白粉900kg、啤酒酵母浸膏1900kg,硫酸銨800kg、輕質(zhì)碳酸|丐700kg、磷酸二氫鉀90kg,菜籽油4000L、氯化鈉70kg、硫酸鎂60kg、硫酸亞鐵50kg、聚氧丙烯甘油40kg
先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至27°C，并用無(wú)菌空氣保壓。滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基氨基氮80mg/100ml、溶磷199ug/ml、脂肪39g/L、pH6。然后將二級(jí)種子液移入發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。[0092] 發(fā)酵培養(yǎng)控制方法:
1)溫度:采用變溫控制方法，O~20h:培養(yǎng)溫度29~31°C;20h~發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度32 ~33。。；
2)攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制方法，O~IOOh:轉(zhuǎn)速控制在100r/min ；101~200h:轉(zhuǎn)速控制在130r/min ；201h~發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min
3)壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ；
4)pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6.0~7.0 ;
5)無(wú)菌檢查:發(fā)酵過(guò)程中進(jìn)行菌檢，要求無(wú)其它雜菌；6)空氣流量:0~IOOh:200m3A ；101 ~200h:300m3/h ；201h ~發(fā)酵結(jié)束:150m3/h ；
7)溶氧控制:發(fā)酵前5h內(nèi)，不控制溶氧；6~100h，溶氧控制在60%以上；101~200h，溶氧控制在20%以上；201~發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在30%以上。
[0093]發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束,氨基氮29mg/100ml、pH6.1、還原糖1.4g/L ;脂肪1.95g/L、菌體濃度3840%、化學(xué)效價(jià)43395u/ml、發(fā)酵周期280h。
[0094]在上述實(shí)施例1-5中，在發(fā)酵過(guò)程中需要進(jìn)行補(bǔ)料。補(bǔ)料采用流加法，補(bǔ)料包括補(bǔ)油、補(bǔ)水、補(bǔ)糖和pH控制,其中
a補(bǔ)油工藝控制:
發(fā)酵前30h不用進(jìn)行補(bǔ)油，
發(fā)酵時(shí)間在31~120h，當(dāng)脂肪含量低于15%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為15~20%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，
發(fā)酵時(shí)間在121~200h，當(dāng)脂肪含量低于10%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為10~15%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，
發(fā)酵時(shí)間在201h~240h，當(dāng)脂肪含量低于5%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為5~8%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液 脂肪含量，
發(fā)酵時(shí)間在241h~發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)脂肪含量低于1.5%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為1.5~2.5%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量。
[0095]b補(bǔ)水工藝控制:發(fā)酵過(guò)程中，按照工藝要求必須定時(shí)補(bǔ)入一定量的水，其目的是控制發(fā)酵液的粘度和菌體濃度，有利于代謝產(chǎn)物的生成。
[0096]發(fā)酵前30h不用進(jìn)行補(bǔ)水，
發(fā)酵時(shí)間在31~100h，當(dāng)菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在40~45%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度，
發(fā)酵時(shí)間在101~200h，當(dāng)菌體濃度高于45%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在40~45%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度，
發(fā)酵時(shí)間在201h~發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在35~40%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度。
[0097]c發(fā)酵過(guò)程pH控制工藝:
發(fā)酵前40h，pH不進(jìn)行控制，
發(fā)酵時(shí)間在41~120h，若pH < 6.0，加入10~20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至6.0~6.5 ;若pH > 6.5，加入30%的硫酸銨溶液，調(diào)節(jié)pH至6.0~6.5，
發(fā)酵時(shí)間在121~發(fā)酵結(jié)束，若pH < 6.5，加入10~20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH控至
6.5~7.0 ;若pH > 7.0，加入30%的硫酸銨溶液，調(diào)節(jié)pH至6.5~7.0。
[0098]d補(bǔ)入麥牙糖:
發(fā)酵前60h，還原糖含量不進(jìn)行控制，
發(fā)酵61h至200h:還原糖含量< 3%時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在3~4%，
發(fā)酵201h至發(fā)酵結(jié)束:還原糖含量< 0.5%時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在0.5~1%，
上述麥芽糖溶液中加入麥芽糖酶，其濃度控制在0.001~0.003%。
【權(quán)利要求】
1.一種肉桂地鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)莫能菌素的新型培養(yǎng)基，包括一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述一級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:麩皮1~5g/L、麥芽糖.5~9g/L、魚(yú)粉3~7g/L、玉米衆(zhòng)5~9ml/L、玉米蛋白粉1~5g/L、啤酒酵母浸膏4~8g/L,硫酸銨1~5g/L、輕質(zhì)碳酸鈣1~5g/L、橄欖油或菜籽油5~9ml/L ； 所述二級(jí)種子培養(yǎng)基組成為:麩皮3~7g/L、麥芽糖6~10g/L、魚(yú)粉6~9g/L、玉米衆(zhòng)8~12ml/L、玉米蛋白粉3~7g/L、啤酒酵母浸膏5~9g/L,硫酸銨3~7g/L、輕質(zhì)碳酸鈣1~5g/L、磷酸二氫鉀0.5~0.9g/L,橄欖油或菜籽油15~25ml/L ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麩皮8~12g/L、麥芽糖10~14g/L、魚(yú)粉7~llg/L、玉米漿.15~19ml/L、玉米蛋白粉5~9g/L、啤酒酵母浸膏15~19g/L,硫酸銨4~8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣3~7g/L、磷酸二氫鉀0.5~0.9g/L，橄欖油或菜籽油25~40ml/L，氯化鈉0.3~0.7g/L、硫酸鎂0.2~0.6g/L、硫酸亞鐵0.1~0.5g/L、聚氧丙烯甘油0.3~0.4g/L。
2.一種利用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)基生產(chǎn)莫能菌素的培養(yǎng)方法，其特征在于其工藝步驟為: . 1)一級(jí)種子培養(yǎng):首先將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25~30°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的肉桂地鏈霉菌母瓶發(fā)酵液按照0.3~0.5L/m3的接種量接入該一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度20~25%、pH值6.5~8.5、培養(yǎng)時(shí)間25~35h時(shí)移種； . 2)二級(jí)種子培養(yǎng):先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌，冷卻至25~30°C，并用無(wú)菌空氣保壓，將培養(yǎng)好的一級(jí)種子液移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，移種比例控制在9~11%，至菌體濃度30~35%、pH值6.5~8.5、培養(yǎng)時(shí)間30~35h時(shí)移種； . 3)發(fā)酵培養(yǎng):先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20~27°C，并用無(wú)菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，移種比例控制在9~11%，至菌體濃度35~40%、還原糖< 1.5g/L、脂肪:< 2g/L、氨基氮:10 ~30mg/100ml、化學(xué)效價(jià)> 43000u/mL、pH:6.0~7.0、培養(yǎng)時(shí)間260~280h時(shí)終止發(fā)酵。
3.按照權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征是: 滅菌后的一級(jí)種子培養(yǎng)基的質(zhì)量要求:氨基氮:50~60mg/100ml、溶磷:100~150ug/ml、脂肪:10 ~25g/L、pH:6.5 ~7.5 ; 滅菌后的二級(jí)種子培養(yǎng)基的質(zhì)量要求:氨基氮:60~70mg/100ml、溶磷:100~150ug/ml、脂肪:15 ~30g/L、pH:6.5 ~7.5 ; 滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量要求:氨基氮:70~80mg/100ml、溶磷:150~200ug/ml、脂肪:25 ~40g/L、pH:6 ~7。
4.按照權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)好的母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為:pH6~8 ;菌體濃度10~30% ;鏡檢無(wú)雜菌；發(fā)酵單位15000~25000u/ml。
5.按照權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述一級(jí)種子培養(yǎng)條件為:罐壓.0.03~0.05MPa ;罐溫31~33°C;空氣流量:0~5h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；6h~移種:50~60m3/h ;攬祥轉(zhuǎn)速60~80r/m1n。
6.按照權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征是在于所述二級(jí)種子培養(yǎng)條件為:罐壓.0.03 ~0.05MPa ;罐溫 31 ~33°C;空氣流量:0 ~12h，20 ~30m3/h ;13h ~移種:50 ~60m3/h ;攬拌轉(zhuǎn)速80~100r/m1n。
7.按照權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為: a培養(yǎng)基初始pH:發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在6~7 ; b溫度:采用變溫控制方法，O~20h:培養(yǎng)溫度29~31°C;20h~發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度32 ~33。。； c攪拌轉(zhuǎn)速:采用變頻攪拌控制方法，O~IOOh:轉(zhuǎn)速控制在100r/min ;101~200h:轉(zhuǎn)速控制在130r/min ；201h~發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在90r/min ；d壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ；e pH控制:發(fā)酵過(guò)程中pH控制在6.0~7.0 ; f 空氣流量:0 ~IOOh:150 ~200mVh ;101 ~200h:250 ~300m3/h ;201h ~發(fā)酵結(jié)束:100 ~150m3A ；h溶氧控制: 發(fā)酵前5h內(nèi)，不控制溶氧； .6~100h，溶氧控制在60%以上； .101~200h，溶氧控制在20%以上； .201~發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在30%以上。
8.按照權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于在發(fā)酵過(guò)程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料包括補(bǔ)油、補(bǔ)水、補(bǔ)糖和pH控制，其中 a補(bǔ)油工藝控制: 發(fā)酵前30h不用進(jìn)行補(bǔ)油， 發(fā)酵時(shí)間在31~120h，當(dāng)脂肪含量低于15%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為15~20%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量， 發(fā)酵時(shí)間在121~200h，當(dāng)脂肪含量低于10%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為10~15%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量， 發(fā)酵時(shí)間在201h~240h，當(dāng)脂肪含量低于5%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為5~8%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量， 發(fā)酵時(shí)間在241h~發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)脂肪含量低于1.5%，補(bǔ)入橄欖油或菜籽油，控制脂肪含量為1.5~2.5%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量；b補(bǔ)水工藝控制: 發(fā)酵前30h不用進(jìn)行補(bǔ)水， 發(fā)酵時(shí)間在31~100h，當(dāng)菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在40~45%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度， 發(fā)酵時(shí)間在101~200h，當(dāng)菌體濃度高于45%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在40~45%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度， 發(fā)酵時(shí)間在201h~發(fā)酵結(jié)束，當(dāng)菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發(fā)酵液菌體濃度在35~40%，每隔6~8h檢測(cè)發(fā)酵液菌體濃度；c發(fā)酵過(guò)程pH控制工藝: 發(fā)酵前40h，pH不進(jìn)行控制， 發(fā)酵時(shí)間在41~120h，若pH < 6.0，加入10~20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至6.0~6.5 ;若pH > 6.5，加入30%的硫酸銨溶液，調(diào)節(jié)pH至6.0~6.5，發(fā)酵時(shí)間在121~發(fā)酵結(jié)束，若pH < 6.5，加入10~20%的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH控至.6.5~7.0 ;若pH > 7.0，加入30%的硫酸銨溶液，調(diào)節(jié)pH至6.5~7.0 ; d補(bǔ)入麥芽糖: 發(fā)酵前60h，還原糖含量不進(jìn)行控制， 發(fā)酵61h至200h:還原糖含量< 3%時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在3~4%， 發(fā)酵201h至 發(fā)酵結(jié)束:還原糖含量< 0.5%時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在0.5~1%， 上述麥芽糖溶液中加入麥芽糖酶，其濃度控制在0.001~0.003%。
【文檔編號(hào)】C12P17/16GK103937848SQ201410147478
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年4月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月14日
【發(fā)明者】任勇, 王 義 申請(qǐng)人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司