一種脫毒水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的菌劑及工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種脫毒水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的菌劑及工藝。彎曲芽孢桿菌NJNpd41，2012年12月31日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC?NO.7072。一種用NJNpd41水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的方法，包括將菜籽餅調(diào)含水量至50%，將NJNpd41菌液接入菜籽餅進(jìn)行固體發(fā)酵，得農(nóng)業(yè)氨基酸肥。使用該發(fā)明生產(chǎn)的農(nóng)業(yè)氨基酸肥能夠降解菜餅中所含的毒素的含量，顯著促進(jìn)茄子植株的生長(zhǎng)、增加茄子的產(chǎn)量和提高茄子的品質(zhì)。
【專利說(shuō)明】一種脫毒水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的菌劑及工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種脫毒水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的菌劑及工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]菜籽餅資源豐富，其粗蛋白質(zhì)含量約為37-42%，是一種寶貴的蛋白質(zhì)資源。菜籽餅中的粗蛋白質(zhì)80%以蛋白質(zhì)形式存在，其余20%為游離氨基酸、芥酸、核酸等。其蛋白質(zhì)絕大部分為球蛋白，氨基酸含量比較平衡(劉振中用菜籽餅制取氨基酸水解液的試驗(yàn)研究)。目前比較多方法是利用酸水解法利用菜籽餅中的氨基酸資源，但是工業(yè)費(fèi)用較高且有較大的二次污染。本發(fā)明旨在篩選產(chǎn)蛋白酶微生物，利用其分解菜餅蛋白成農(nóng)用氨基酸肥供植物利用。
[0003]菜籽餅中含有抗?fàn)I養(yǎng)因子和有毒成份，對(duì)菜籽餅的利用造成很大的障礙。目前對(duì)菜籽餅脫毒主要有物理、化學(xué)和微生物脫毒法。物理脫毒法作用機(jī)理是鈍化芥子酶活性，避免芥子酶將硫甙葡萄糖苷分解產(chǎn)生有毒物質(zhì)。這種方法具有操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，但它只能鈍化芥子酶，硫甙、單寧、芥子堿和植酸等物質(zhì)依然存在，沒(méi)有根本解決菜籽餅的無(wú)毒化。化學(xué)脫毒方法是根據(jù)菜籽餅中的硫甙葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，用一定的化學(xué)試劑進(jìn)行處理，使其失去原有毒性的方法。主要有水洗，醇類處理和雙液相萃取法?；瘜W(xué)脫毒法有一定的效果，但不能完全清除有毒物質(zhì)，在工業(yè)利用還是存在一定的困難。微生物脫毒法主要利用龐雜的微生物區(qū)系和復(fù)雜的微生物酶系對(duì)菜籽餅中的有毒物質(zhì)和抗?fàn)I養(yǎng)因子進(jìn)行降解。接種微生物后，利用微生物本身分泌出的芥子酶等酶系將硫甙分解成多種具有揮發(fā)性的異硫氰酸鹽，主要有3- 丁烯基硫氰酸鹽、4-戊烯基硫氰酸鹽、2-羥基-3- 丁烯基異硫氰酸鹽，還有少量的苯乙基異硫氰酸鹽(孟憲金脫毒方法的研究進(jìn)展)。微生物種類多，數(shù)量大、適應(yīng)性強(qiáng)、生長(zhǎng)快、易培養(yǎng)、代謝產(chǎn)酶系復(fù)雜，幾乎可以分解一切天然物質(zhì)。無(wú)論規(guī)模和數(shù)量，還是發(fā)酵作用、分解作用的徹底性，微生物的作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)物理化學(xué)法。第一，酶系繁雜，分解硫甙的芥子酶多，能夠水解復(fù)雜多變的硫甙；第二，`分解中間產(chǎn)物的酶系較復(fù)雜，能將其徹底分解，并合成自身物質(zhì)；第三，菜籽餅的其它抗?fàn)I養(yǎng)因子也能被微生物分解，如植酸、單寧、纖維素等，提高菜籽餅營(yíng)養(yǎng)成分的利用率。因此，研究菜餅的脫毒生物酶解工藝，對(duì)于推進(jìn)菜餅源農(nóng)用氨基酸肥產(chǎn)業(yè)，意義重大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中的實(shí)際問(wèn)題和需求，提供一種用于脫毒水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的菌劑。
[0005]本發(fā)明的另一目的是提供脫毒水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的工藝。
[0006]本發(fā)明的目的可通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0007]彎曲芽孢桿菌(Bacillus flexus)NJNpd41，2012年12月31日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC N0.7072。
[0008]彎曲芽孢桿菌NJNpd41為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，菌落形態(tài)為不規(guī)則，表面濕潤(rùn)，呈淡黃色，鋸齒狀邊緣。
[0009]一種用所述的彎曲芽孢桿菌NJNpd41生產(chǎn)的功能菌液，是將彎曲芽孢桿菌NJNpd41接種到發(fā)酵培養(yǎng)液，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)所得，發(fā)酵生產(chǎn)的條件為:pH6.0~7.5，發(fā)酵溫度范圍30~35°C，攪拌速度為180~200轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵時(shí)間為20~24h，使發(fā)酵液中含菌IX IOltl個(gè)/ml ;所用發(fā)酵培養(yǎng)液配方為:葡萄糖10g/L，酵母膏l(xiāng)g，(NH4)2SO4L Og/L,NaCl0.5g/L，其余為水，ρΗ7.2-7.5。
[0010]本發(fā)明所述的彎曲芽孢桿菌NJNpd41在水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥中的應(yīng)用。
[0011]一種用所述的彎曲芽孢桿菌NJNpd41水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的方法，包括將菜籽餅調(diào)含水量至40%~50%，優(yōu)選50% ;將所述的功能菌液接入菜籽餅進(jìn)行固體發(fā)酵，每噸菜籽餅中加入功能菌液50L~60L,優(yōu)選50L ;固體發(fā)酵過(guò)程中每天翻堆I~2次,記錄堆體溫度，待溫度回降至室溫發(fā)酵結(jié)束，最后在溫度不超過(guò)60°C的條件下將氨基酸有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下得農(nóng)用氨基酸肥。
[0012]按照本發(fā)明所述的方法制備的農(nóng)用氨基酸肥。
[0013]作為本發(fā)明的一種優(yōu)選，所制備的農(nóng)用氨基酸肥產(chǎn)品，菜籽餅毒素異硫氰酸酯含量0.73mg/g,惡唑烷硫酮含量1.71mg/g,分別比對(duì)照(直接添加清水發(fā)酵)降低了 64.6%和70.3%。產(chǎn)品中多肽及游離氨基酸總含量為15.05%，全氮含量為7.16%，總氮磷鉀養(yǎng)分為
10.89%、有機(jī)質(zhì)含量61.94%、發(fā)芽指數(shù)為80%以上、含水量質(zhì)量比為25_30%。
[0014]本發(fā)明所述的農(nóng)用氨基酸肥在促進(jìn)茄子生長(zhǎng)中的應(yīng)用。
[0015]有益效果本發(fā)明提供一株用于脫毒水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的菌劑及其農(nóng)用氨基酸肥的生產(chǎn)工藝。
`[0016]使用該發(fā)明生產(chǎn)的農(nóng)業(yè)氨基酸肥成本低于傳統(tǒng)工藝，堆肥過(guò)程簡(jiǎn)化，使用方便，同時(shí)發(fā)酵過(guò)程中彎曲芽孢桿菌NJNpd41菌株能夠降解菜餅中所含的毒素的含量，增加的生物也能改善土壤品質(zhì)。本發(fā)明對(duì)于保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保護(hù)人民的身體健康，提高農(nóng)產(chǎn)品的附加值具有重要的意義。
[0017]產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上的產(chǎn)品相比具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0018]I)利用彎曲芽孢桿菌NJNpd41對(duì)菜籽餅蛋白進(jìn)行降解生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥料，操作簡(jiǎn)單，效率較高，肥料中龐大的微生物系統(tǒng)對(duì)土壤的改善有一定的作用。
[0019]2)彎曲芽孢桿菌NJNpd41利用復(fù)雜的酶系對(duì)菜籽餅中的有毒物質(zhì)和抗?fàn)I養(yǎng)因子進(jìn)行降解。接種菌株NJNpd41后，能夠?qū)惲蚯杷狨ズ蛺哼蛲榱蛲暮拷档桨踩狄韵?。?guó)外有報(bào)道少孢根霉在堆肥過(guò)程中可以將異硫氰酸脂和惡唑烷硫酮含量分別降低43.1%和34%，而在菌株NJNpd41作用下，異硫氰酸脂和惡唑烷硫酮含量分別降低64.6%和70.3%。
[0020]3)試驗(yàn)結(jié)果表明，在茄子幼苗期和茄子大田種植施用本產(chǎn)品后，能顯著促進(jìn)茄子植株的生長(zhǎng)、增加茄子的產(chǎn)量和提高茄子的品質(zhì)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1.不同菌種轉(zhuǎn)化菜餅產(chǎn)生多肽及游離氨基酸含量
[0022]圖2.依據(jù)16S rDNA序列構(gòu)建的NJNpd41號(hào)菌株與相關(guān)模式菌種的系統(tǒng)發(fā)育樹
[0023]圖3.不同接種量產(chǎn)生多肽及游離氨基酸含量
[0024]圖4.41-C、CK-C堆肥過(guò)程中溫度變化[0025]圖5. 41C、CKC堆肥過(guò)程中多肽及游離氨基酸含量變化
[0026]生物材料保藏信息
[0027]NJNpd41，彎曲芽孢桿菌Bacillus flexus，2012年12月31日保存于中國(guó)微生物 菌種保藏管理委員普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科 學(xué)院微生物研究所，保藏編號(hào)CGMCC N0. 7072。
【具體實(shí)施方式】
[0028]實(shí)施例1菌種篩選
[0029]1、菜籽餅的獲得
[0030]由江蘇新天地生物肥料工程中心有限公司提供。
[0031]2、菌株的分離及鑒定
[0032]將海南采集回的土壤樣品按1 :10(g/v)的比例加入無(wú)菌蒸餾水中，充分振蕩后靜 置30分鐘，取3ml上清液加入菜籽餅培養(yǎng)基（10g菜籽餅加入到1L去離子水中），30°C震 蕩培養(yǎng)5天后獲得富集液。取0. 5ml富集液涂布LB酪蛋白平板，30°C培養(yǎng)24h。挑單個(gè) 菌苔，點(diǎn)接于LB酪蛋白培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24h后觀察透明圈的有無(wú)，若產(chǎn)生透明圈，分別 測(cè)量透明圈和菌落的直徑，并計(jì)算其比值，選擇比值較大的菌株進(jìn)行進(jìn)一步研究。按5%的 接種量接種菌株于200g生菜籽餅中，調(diào)含水量至50%，放入30°C培養(yǎng)箱固體發(fā)酵，每天調(diào) 含水量保持濕潤(rùn)，6天后取樣茚三酮比色法測(cè)定多肽及游離氨基酸總含量（圖1)。挑選出 轉(zhuǎn)化氨基酸含量最高的41號(hào)菌株進(jìn)行16s rDNA鑒定并送中國(guó)微生物菌種保藏管理委員 會(huì)普通微生物中心保存，16S rDNA的PCR反應(yīng)的5’端引物5’ -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’ (Escherichia coli bases8to 27)，3，端引物 5，-TACCTTGTTACGACT T_3，(Escherichia coli basesl507tol492)。擴(kuò)增反應(yīng)體系如下：10XTaq聚合酶反應(yīng)緩沖液5 ii L， dNTP (20mmol ? u L 0 4 u L,引物(25pmol ? u L :)各 2 u L, Mg2+ (25mmol ? u L :) 4 u L,菌體少 許，TaqDNA 聚合酶(5U ? u I71) 0. 5 u L,加水至 50 u L。反應(yīng)條件：95°C變性 5min, 94。。30s， 55°C 30s，72°C lmin，30個(gè)循環(huán)；最后72°C延伸lOmin。PCR產(chǎn)物與0. 75%的瓊脂糖凝膠上 電泳檢測(cè)。挑選正確大小片段的PCR產(chǎn)物送上海美吉公司測(cè)序，根據(jù)測(cè)定完成的16S rDNA 序列，在RDP數(shù)據(jù)庫(kù)（http ：//rdp. cme. msu. edu/index, jsp)中下載與轉(zhuǎn)化菌株16S rDNA序 列同源的序列，同時(shí)在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)（http ：//www. ncbi. nlm. nih. gov)在線查詢分析，采用 MEGA3. 1軟件構(gòu)建16S rDNA系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖2)，41號(hào)菌株被確認(rèn)為彎曲芽孢桿菌（Bacillus flexus)，送交中國(guó)微生物菌種保藏管理委員普通微生物中心，保藏日期為2012年12月31 日，保藏號(hào)為CGMCC N0. 7072。
[0033]實(shí)施例2、功能菌菌劑的生產(chǎn)
[0034]將菌種保藏號(hào)為CGMCC N0. 7072的Bacillus flexus NJNpd41接種至發(fā)酵培養(yǎng)液 進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵條件為：pH7. 0，發(fā)酵溫度范圍30-35°C，攪拌速度為180-200轉(zhuǎn)/ 分鐘，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，得功能菌菌液，菌液的含菌或芽孢量> 101(1個(gè)/ml。所用發(fā)酵培 養(yǎng)液配制方法為，以配制1L培養(yǎng)基為例：葡萄糖10g,酵母膏l(xiāng)g, (NH4)2S041. 0g, NaClO. 5g, 其余為水，pH7. 2-7. 5 ;121°C滅菌 20min。
[0035]實(shí)施例3、固體發(fā)酵生 產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥
[0036]3. 1固體發(fā)酵工藝的獲得[0037]利用遞進(jìn)法獲得固體發(fā)酵的工藝，首先將菌液以不同濃度加入菜籽餅堆肥中，發(fā)酵堆總重2kg(干重)，發(fā)酵5天，獲得最佳菌液添加量(圖3)，測(cè)定每天氨基酸變化得到最佳堆肥天數(shù)，獲得最終固體發(fā)酵工藝。發(fā)酵方式如下:每噸固體有機(jī)物料中加入功能菌菌液50L，固體發(fā)酵過(guò)程中每天翻堆I次，記錄堆體溫度(圖4)，待溫度回降至室溫發(fā)酵結(jié)束(不同室溫時(shí)間不等)，最后在溫度不超過(guò)60°C的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下，包裝出廠即為成品氨基酸有機(jī)肥。發(fā)酵完后測(cè)定各處理中的氨基酸的含量，結(jié)果如圖，5%，16天接種堆肥為最佳配方，多肽及游離氨基酸達(dá)到干重15.05%以上(圖5)。
[0038]3.2固體大堆發(fā)酵生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥
[0039]根據(jù)上述配方和工藝，將菜籽餅按含水量調(diào)至50%，發(fā)酵堆總重(干重)20kg，將蛋白酶降解菌NJNpd41接入混合堆，每噸固體有機(jī)物料中加入功能菌菌液IL進(jìn)行條剁式固體發(fā)酵，每天翻堆I次，記錄堆體溫度，待溫度回降至室溫發(fā)酵結(jié)束；設(shè)計(jì)未加蛋白酶降解菌菜籽餅有機(jī)肥作為對(duì)照(CK)。發(fā)酵結(jié)束后新型氨基酸有機(jī)肥中多肽及游離氨基酸總含量為15.05% (干重)，比CK增加了 151.7%。最后再對(duì)農(nóng)用氨基酸肥中殘留菜籽餅毒素異硫氰酸酯及惡唑烷硫酮的含量進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法分別參考GB13087-91和GB13089-9，原料菜餅中異硫氰酸脂含量為2.06mg/g，惡唑烷硫酮為5.76mg/g。經(jīng)過(guò)堆肥之后，CK處理中異硫氰酸脂含量為1.66mg/g,惡唑烷硫酮為4.28mg/g。41號(hào)菌處理后異硫氰酸酯含量最終為
0.73mg/g, 口惡唑烷硫酮含量最終為1.71mg/g。
[0040]研制成的氨基酸有機(jī)肥多肽及游離氨基酸總含量為15.05%、全氮含量為7.16%、總氮磷鉀養(yǎng)分為10.89%、有機(jī)質(zhì)含量61.94%。以上結(jié)果表明所研制配方和工藝完全能夠最大化的發(fā)酵生產(chǎn)新型氨基酸有機(jī)肥，且該氨基酸有機(jī)肥完全能夠符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。
[0041]實(shí)施例4、溫室試驗(yàn)
[0042]I)促生盆栽試驗(yàn)在江蘇新天地生物有機(jī)肥工程中心有限公司溫室(江蘇宜興)里進(jìn)行，共設(shè)2個(gè)對(duì)照一個(gè)處理，處理組為實(shí)施例3中3.2生產(chǎn)的新型氨基酸有機(jī)肥41C處理，對(duì)照組分別為菜籽餅不加入蛋白酶降`解菌處理(CKC)和化肥對(duì)照處理(化肥處理與41C等養(yǎng)分)。作物為茄子，每個(gè)處理9盆，每盆裝2 kg土，肥料的添加量為1% (Dff)0肥料與土充分混合均勻，常規(guī)管理。定期測(cè)定爺子生長(zhǎng)指數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1、表2、表3、表4、表5、表6和表7。I)株高:與兩個(gè)對(duì)照相比，本專利研制的41C農(nóng)用氨基酸肥能夠增加植株的株高，較CKC比較移苗后二十天呈現(xiàn)出顯著性差異，一直保持到移苗后50天。2)莖粗:與CKC處理相比，本專利研制的41C農(nóng)用氨基酸肥能夠增加植株的莖粗，移苗后二十天即表現(xiàn)出顯著性差異。與化肥處理相比，30天以后同樣達(dá)到顯著性差異。3)倒三片長(zhǎng):與CKC和化肥對(duì)照相比，本專利研制的41C農(nóng)用氨基酸肥能夠增加植株的倒三片長(zhǎng)，移苗后二十天即均表現(xiàn)出顯著性差異。4)倒三葉寬:與CKC處理相比，本專利研制的41C農(nóng)用氨基酸肥能夠增加植株的倒三葉寬，移苗后二十天即表現(xiàn)出顯著性差異。與化肥處理相比，30天以后達(dá)到顯著性差異。5)葉綠素含量:與CKC處理相比，本專利研制的41C處理能夠增加植株的葉綠素含量，移苗后二十天即表現(xiàn)出顯著性差異。6)葉片數(shù)量:與CKC處理相比，本專利研制的41C處理能夠增加植株的葉片數(shù)量，移苗后二十天即表現(xiàn)出顯著性差異。7)地上部鮮重和干重:與CKC和化肥處理相比，本專利研制的41C處理能夠增加植株的地上部鮮重和干重，移苗后20天即均表現(xiàn)出顯著性差異。8)地下部鮮重和干重:與CKC和化肥處理相比，本專利研制的41C處理能夠增加植株的地下部鮮重和干重，移苗后20即均表現(xiàn)出顯著性差異。[0043]試驗(yàn)結(jié)果整體表明，本專利研制的氨基酸有機(jī)肥能夠促進(jìn)茄子植株的生長(zhǎng)，本發(fā)明的配方和工藝能夠顯著促進(jìn)功能菌的固體發(fā)酵效率，增加肥料的養(yǎng)分和去除原料中的毒素，最終促進(jìn)茄子植株的生長(zhǎng)。
[0044]2)促生大田試驗(yàn)在江蘇宜興某農(nóng)業(yè)園里進(jìn)行，共設(shè)5個(gè)對(duì)照一個(gè)處理，處理為本專利研制的新型氨基酸有機(jī)肥處理41C，對(duì)照分別為空白對(duì)照(BLK)，原料菜籽餅對(duì)照(C)、菜籽餅不加入蛋白酶降解菌發(fā)酵對(duì)照(CKC)、普通有機(jī)肥對(duì)照(OOF)和化肥對(duì)照(CF)。作物為茄子，每個(gè)處理3個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)8m2，每小區(qū)種21棵苗，肥料的添加量為41C處理160Kg/畝，其他除BLK處理以外，均與41C等養(yǎng)分(養(yǎng)分不足用化肥補(bǔ)齊)，常規(guī)管理。測(cè)定各處理生產(chǎn)果實(shí)的產(chǎn)量及品質(zhì)，結(jié)果見(jiàn)表8:41C較5個(gè)對(duì)照處理，硝酸鹽含量最低，差異顯著；可溶性糖含量，維生素C及蛋白質(zhì)含量最高，并且差異顯著，可見(jiàn)41C能夠明顯提高果實(shí)的品質(zhì)。另外，果實(shí)產(chǎn)量方面，41C較5個(gè)對(duì)照處理也最高，并且也差異顯著，可見(jiàn)41C能夠提高作物的產(chǎn)量。不加菌發(fā)酵的CKC處理，相比化肥處理，除了維生素C比化肥顯著性高以外，硝酸鹽，可溶性糖，蛋白質(zhì)以及產(chǎn)量均無(wú)顯著性差異，而41C相比CF處理，硝酸鹽顯著降低，可溶性糖，維生素C，蛋白質(zhì)以及果實(shí)產(chǎn)量均顯著性提高，硝酸鹽顯著降低27%，可溶性糖，維生素C，蛋白質(zhì)以及果實(shí)產(chǎn)量分別提高54%，24%，53%和25%。不發(fā)酵的菜餅C處理的產(chǎn)量?jī)H僅比空白高，顯著低于其他施肥處理。
[0045]大田試驗(yàn)最終表明,Bacillus flexus41能夠有效的促進(jìn)菜餅的酶解,增加其中游離氨基酸和寡肽的含量，發(fā)酵研制成的氨基酸有機(jī)肥，能夠顯著促進(jìn)大田茄子的產(chǎn)量和提聞爺子的品質(zhì)。
[0046]表1不同處理對(duì)爺子株高的影響(單位:cm)
[0047]
【權(quán)利要求】
1.彎曲芽孢桿菌(Bacillusflexus)NJNpd41，2012年12月31日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員普通微生物中心，保藏編號(hào)CGMCC N0.7072。
2.一種用權(quán)利要求1所述的彎曲芽孢桿菌NJNpd41生產(chǎn)的功能菌液，其特征在于是將彎曲芽孢桿菌NJNpd41接種到發(fā)酵培養(yǎng)液，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)所得，發(fā)酵生產(chǎn)的條件為:PH6.0~7.5，發(fā)酵溫度范圍30~35°C，攪拌速度為180~200轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵時(shí)間為20~24h，使發(fā)酵液中含菌I X IOltl個(gè)/ml ;所用發(fā)酵培養(yǎng)液配方為:葡萄糖10g/L，酵母膏l(xiāng)g，(NH4)2SO4L Og/L, NaCl0.5g/L，其余為水，ρΗ7.2-7.5。
3.權(quán)利要求1所述的彎曲芽孢桿菌NJNpd41在水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥中的應(yīng)用。
4.一種用權(quán)利要求1所述的彎曲芽孢桿菌NJNpd41水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的方法，其特征在于包括將菜籽餅調(diào)含水量至40%~50%，將權(quán)利要求2所述的功能菌液接入菜籽餅進(jìn)行固體發(fā)酵，每噸菜籽餅中加入菌液50L~60L，固體發(fā)酵過(guò)程中每天翻堆I~2次，記錄堆體溫度，待溫度回降至室溫發(fā)酵結(jié)束，最后在溫度不超過(guò)60°C的條件下將氨基酸有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下得農(nóng)用氨基酸肥。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用權(quán)利要求1所述的彎曲芽孢桿菌NJNpd41水解菜籽餅生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸肥的方法，其特征在于包括將菜籽餅調(diào)含水量至50%，將權(quán)利要求2所述的功能菌液接入菜籽餅進(jìn)行固體發(fā)酵，每噸菜籽餅中加入菌液50L，固體發(fā)酵過(guò)程中每天翻堆I~2次，記錄堆體溫度，待溫度回降至室溫發(fā)酵結(jié)束，最后在溫度不超過(guò)60°C的條件下將氨基酸有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至30%以下得農(nóng)用氨基酸肥。
6.按照權(quán)利要求4所述的方法制備的農(nóng)用氨基酸肥。
7.權(quán)利要求6所述的農(nóng)用氨基酸`肥在促進(jìn)茄子生長(zhǎng)中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12R1/07GK103881948SQ201410089043
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2014年3月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月11日
【發(fā)明者】沈其榮, 李 榮, 劉紅軍, 黃蓉, 文春燕, 張瑞福, 喬策策, 邵鋮 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)