前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒含有一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑，所述一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑含有檢測(cè)PCA3和PSA的特異引物和探針，檢測(cè)PCA3的引物如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示，探針如SEQ?ID?NO.5所示；檢測(cè)PSA的引物如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示，探針如SEQ?ID?NO.6所示，該試劑盒具有操作流程簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，結(jié)果判讀簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，復(fù)檢率低，模板加入后PCR反應(yīng)全程閉管，避免了污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性現(xiàn)象。
【專(zhuān)利說(shuō)明】前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，還涉及該試劑盒的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]前列腺癌為發(fā)生于男性前列腺組織中的惡性腫瘤，是前列腺腺泡細(xì)胞異常無(wú)序生長(zhǎng)的結(jié)果。前列腺癌的發(fā)病率具有明顯的地理和種族差異。在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)，它是男性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其死亡率居各種癌癥的第二位，僅次于肺癌；在亞洲，其發(fā)病率低于西方國(guó)家，但近年來(lái)呈迅速上升趨勢(shì)。前列腺癌一般50歲以后發(fā)病，95%發(fā)生于60歲以上的老年男性，發(fā)生率隨年齡增長(zhǎng)而增加。我國(guó)每年有7萬(wàn)~8萬(wàn)名前列腺癌新病人。而隱匿未被發(fā)現(xiàn)的病人數(shù)則更多。因此，凡是50歲至70歲的男性都應(yīng)該定期接受前列腺癌的專(zhuān)科篩查；而直系親屬中有前列腺癌患者的男性，則應(yīng)將篩查的時(shí)間提前到40歲。
[0003]前列腺癌在轉(zhuǎn)移發(fā)生之前，早發(fā)現(xiàn)、及時(shí)合理治療可有效降低該病的死亡率。前列腺癌常規(guī)篩查手段有直腸指檢、血清前列腺特異抗原(PSA)測(cè)定和經(jīng)直腸超聲檢查三種，其中，經(jīng)直腸指檢、血清前列腺特異抗原(PSA)測(cè)定是最基本的兩項(xiàng)檢查，一般每年檢查一次；發(fā)現(xiàn)異常時(shí)，再行經(jīng)直腸超聲波檢查和超聲引導(dǎo)下的前列腺穿刺活檢。
[0004]PSA (Prostate Specific Antigen)為前列腺組織特異性抗原，由前列腺的解剖結(jié)構(gòu)可知PSA通過(guò)前列腺導(dǎo)管進(jìn)入血液和尿液中，一些病例或生理情況下PSA會(huì)進(jìn)入血液中去，如前列腺炎癥、尿潴留、前列腺感染、前列腺增生和前列腺癌等，因此通過(guò)檢測(cè)血清PSA水平來(lái)預(yù)測(cè)前列腺癌具有一定的假陽(yáng)性率。從1991年開(kāi)始，檢測(cè)血清中PSA含量用于預(yù)測(cè)前列腺癌，含量高于4ng/mL認(rèn)為是前列腺癌陽(yáng)性，靈敏度79%，特異性20%_59%，平均靈敏度約33%，在濃度4-10ng/mL灰區(qū)部·分，特異性是最低的，這時(shí)往往需要通過(guò)侵入性的穿刺活檢進(jìn)行確定。PSA在血液中有兩種存在形式，一種與ACT結(jié)合，一種是游離狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)與良性前列腺病變相比，前列腺癌患者血清中與ACT結(jié)合的PSA含量更高一些。當(dāng)檢測(cè)出患者血清中PSA含量在4-10ng/mL灰區(qū)部分時(shí)，可用游離PSA (fPSA)比總PSA (tPSA)來(lái)增加檢測(cè)的特異性，可提高檢測(cè)特異性約20%。
[0005]近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的前列腺癌新的標(biāo)記物PCA3 (Prostate cancer antigen3),在前列腺癌中高表達(dá)，可反應(yīng)前列腺癌進(jìn)展情況。PCA3位于9號(hào)染色體，含有4個(gè)外顯子，為非編碼的mRNA，通過(guò)選擇性剪切和多聚腺苷酸化產(chǎn)生至少四種不同的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。RT-PCR分析顯示PCA3僅在前列腺組織中表達(dá),在其他組織中不表達(dá)。Northern blot檢測(cè)分析50例患者中47例PCA3高表達(dá)，而前列腺良性病變組織中不表達(dá)或低度表達(dá)(Cancer Reserch, 1999，Dec, I ；59(23):5975_9)。文獻(xiàn)(cancer res.,2002, Mayl ；62 (9):2695-8)報(bào)道比較端粒酶RNA和PCA3RNA作為前列腺癌的標(biāo)記物，PCA3指示作用更優(yōu)。PCA3為到目前為止針對(duì)前列腺癌特異性最優(yōu)的標(biāo)志物，含有4個(gè)外顯子，三個(gè)內(nèi)含子，Gandini et al2003等文獻(xiàn)報(bào)道，與其它外顯子相比，PCA3外顯子4用于前列腺癌檢測(cè)特異性最優(yōu)。
[0006]Gen-probe公司開(kāi)發(fā)的基于PCA3/PSA的尿液檢測(cè)試劑盒,應(yīng)用轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增(TMA)方法給出PCA3/PSA在尿液中的濃度(copy/mL)，然后二者相比后乘以1000即為前列腺癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估值。該方法操作流程繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，質(zhì)控及結(jié)果判讀復(fù)雜，復(fù)檢率較高15.2%，跟臨床常規(guī)PCR儀器不兼容，需另外購(gòu)置設(shè)備。更重要的是該檢測(cè)過(guò)程中需反復(fù)開(kāi)蓋加入試劑，易污染檢測(cè)環(huán)境，導(dǎo)致后續(xù)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。
[0007]基于以上幾點(diǎn)考慮，本發(fā)明給出了一種基于PCR方法的PCA3/PSA尿液檢測(cè)試劑盒，操作流程簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，質(zhì)控方法簡(jiǎn)便、結(jié)果重復(fù)性好，復(fù)檢率低，模板加入后PCR反應(yīng)全程閉管，避免了污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性現(xiàn)象。且使用該試劑盒用于前列腺癌預(yù)示診斷、療效評(píng)估、復(fù)發(fā)監(jiān)控準(zhǔn)確性好，與臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)符合率高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，本發(fā)明的目的之二在于提供前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用。
[0009]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，提供如下技術(shù)方案:
[0010]前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒含有一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑，所述一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑含有檢測(cè)PCA3和PSA的特異引物和探針，檢測(cè)PCA3的特異引物如SEQ IDN0.1和SEQ ID N0.2所示，探針如SEQ ID N0.5所示；檢測(cè)PSA的特異引物如SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.4所示，探針如SEQ ID N0.6所示。
[0011]優(yōu)選的，所述一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑還包括10 X Buffer, 2.5Mm dNTP, 25MmMgCl2, DMSO分析純；100mMDTT ；UDG,逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA酶抑制劑和水。各組分的用量為10XBuffer2 ~10μ L，2.5Mm dNTP5 ~8μ L，25Mm MgCl2I ~5μ L，DMS0 分析純 I ~6μ L ;IOOmMDTTl ~4μ L，Roche HS TAQ (貨號(hào) 12032953001 )，0.1 ~I μ L ;UDG (購(gòu)自 ΝΕΒ，貨號(hào)ΕΝ0362)，0.1~lyL;0.1~1.5 μ L逆轉(zhuǎn)錄酶和0.1 ~ 2μ L RNA酶抑制劑(使用Thermo逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，貨號(hào)K1622);引物混合物I~5 μ L (10 μ m)，探針(10 μ m)0.5-2.5 μ L滅菌純化水補(bǔ)足 50 μ L，更優(yōu)選的，10XBuffer5y L,2.5Mm dNTP7 μ L, 25Mm MgC124y L,引物混合物(10μL?)2.5μ L，探針(ΙΟμL?)Ι.25 μ L，DMSO 分析純 5 μ L ；100mMDTT2.5μ LRoche HS TAQ(貨號(hào) 12032953001),0.5μ L ；UDG (購(gòu)自 NEB，貨號(hào) EN0362)，0.25 μ L ；0.25 μ L 逆轉(zhuǎn)錄酶和
0.3 μ LRNA酶抑制劑(其成分使用Thermo逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，貨號(hào)Κ1622)，滅菌純化水16.5μ L。
[0012]一步法RT-PCR擴(kuò)增條件為:37~42°C，2_5分鐘；50~60°C，15~30分鐘；94~950C，10~30秒，60~65°C，10~30秒，40~50個(gè)循環(huán)，最后50度冷卻30秒，最優(yōu)的是37。。，5分鐘；50°C，15分鐘；擴(kuò)增940C，10秒，60°C，30秒，45個(gè)循環(huán)，50度，30秒冷卻。
[0013]優(yōu)選的，所述試劑盒還包括樣本運(yùn)輸保存液、磁珠法提取試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。
[0014]更優(yōu)選的，所述樣本運(yùn)輸保存液的組分如下，質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%~5%十二烷基硫酸鋰，10 ~20mM NaH2PO4,10 ~20mM Na2HPO4,0.5 ~2mM 乙二胺四乙酸和 0.5 ~2mM 乙二醇二乙醚二胺四乙酸。最優(yōu)的是質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%十二烷基硫酸鋰，15mM NaH2PO4,15mM Na2HPO4, ImM乙二胺四乙酸(EDTA)，lmM乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)，pH6.7 ;使用時(shí)樣本運(yùn)輸保存液和直腸指檢(DRE)后的尿液樣本體積比可以是1:1 ；1:2 ；1:3 ；1:4 ；1:5 ；2:1 ；3:1 ；4:1 ；5:1，最優(yōu)的是1:2。
[0015]更優(yōu)選的，所述磁珠法提取試劑包括捕獲液和洗液，所述捕獲液的組分如下:所述磁珠法提取試劑包括捕獲液和洗液，所述捕獲液的組分如下:100~400mM HEPES，0.5~3MLiCl，100 ~500mM LiOH, 50 ~150mM EDTA 和 50 ~400 μ g/mL超順磁性的共價(jià)結(jié)合(dT) 14的磁珠，所述洗液的組分如下:5~20mM HEPES, 100~200mM NaCl，4~IOmM NaOH,0.5~2mM EDTA，0.1 ~0.5%(v/v)乙醇，0.01 ~0.02%(w/v)對(duì)羥基苯甲酸甲酯，0.01 ~0.05%(w/v)尼泊金丙酯，和0.05~0.3% (w/v)月桂醇硫酸酯鈉鹽。最優(yōu)的，捕獲液的組分如下:濃度為 250mM HEPES, 1.88M LiCl,310mM LiOH, lOOmM EDTA，ρΗ6.4和 250 μ g/mL超順磁性的共價(jià)結(jié)合(dT) 14 的磁珠；洗液的組分如下:10mM HEPES, 150mM NaCl，6.5mM NaOH, ImM EDTA,
0.3% (v/v)乙醇,0.02% (w/v)對(duì)羥基苯甲酸甲酯,0.01% (w/v)尼泊金丙酯,and0.l%(w/v)月桂醇硫酸酯鈉鹽，PH7.5。
[0016]磁珠法提取樣本RNA:100μ L~1000 μ L經(jīng)樣本運(yùn)輸保存液處理的尿液樣本，加入I~5倍體積或1/2~1/5倍體積的捕獲液，渦旋混勻1-5分鐘，42~75°C反應(yīng)10~60分鐘，將反應(yīng)液置于磁場(chǎng)中靜置2~10分鐘，吸棄液體，然后向含磁珠的EP管中加入200 μ L~2mL洗液，渦旋10-60秒后置于磁場(chǎng)中靜置2~10分鐘，吸棄液體,加入10~100 μ L的無(wú)RNase的水溶解RNA，在磁場(chǎng)中靜置2~10分鐘，將液體轉(zhuǎn)移至新的EP管中，稀釋O~5倍后取5 μ L檢測(cè)。優(yōu)選的，200 μ L經(jīng)樣本運(yùn)輸保存液處理的尿液樣本加入400 μ L捕獲液，渦旋混勻I分鐘，60°C反應(yīng)30分鐘,將反應(yīng)液置于磁場(chǎng)中靜置2分鐘,吸棄液體,然后向含磁珠的EP管中加入500 μ L洗液,渦旋20秒后置于磁場(chǎng)中靜置2分鐘,吸棄液體,加Λ 50 μ L的無(wú)RNase的水溶解RNA，在磁場(chǎng)中靜置2分鐘，將液體轉(zhuǎn)移至新的EP管中，稀釋5倍后取5μ L檢測(cè)。
[0017]優(yōu)選的，所述標(biāo)準(zhǔn)品為含PCA3和PSA基因片段的重組質(zhì)粒。
[0018]優(yōu)選的，所述陽(yáng)性質(zhì)控品為前列腺癌細(xì)胞株LNcap總RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA。
[0019]更優(yōu)選的，所述陰性·質(zhì)控品為正常前列腺上皮細(xì)胞株RWPE-1總RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA。
[0020]2.所述前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒在評(píng)估前列腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)、治療效果和復(fù)發(fā)監(jiān)控中的應(yīng)用。
[0021 ] 本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明公開(kāi)了基于一步PCR方法的PCA3/PSA尿液檢測(cè)試劑盒，該試劑盒操作流程簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，質(zhì)控方法簡(jiǎn)便、結(jié)果判讀簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，復(fù)檢率低，模板加入后PCR反應(yīng)全程閉管，避免了污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性現(xiàn)象。且使用該試劑盒用于前列腺癌預(yù)示診斷、療效評(píng)估、復(fù)發(fā)監(jiān)控準(zhǔn)確性好，與臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)符合率高。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖:
[0023]圖1為前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒下限檢測(cè)散點(diǎn)圖。
[0024]圖2為前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒下限檢測(cè)ROC曲線。
[0025]圖3為前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒上限檢測(cè)散點(diǎn)圖。
[0026]圖4為前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒下限檢測(cè)ROC曲線。
[0027]圖5為PCA3標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0028]圖6為PSA標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0029]圖7為前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒檢測(cè)散點(diǎn)圖。[0030]圖8為前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ROC曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0031]下面將結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如分子克隆實(shí)驗(yàn)指南(第三版，J-薩姆布魯克等著)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0032]實(shí)施例1試劑盒檢測(cè)試劑、檢測(cè)條件下限檢測(cè)能力
[0033]1.前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒:包括樣本運(yùn)輸保存液、磁珠法提取試劑、一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。
[0034]樣本運(yùn)輸保存液:成分為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%十二烷基硫酸鋰，IOmM NaH2PO4, IOmMNa2HPO4,0.5mM 乙二胺四乙酸(EDTA)，0.5mM 乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)，pH6.7 ；
[0035]磁珠法提取試劑:
[0036](I)捕獲液:濃度為 IOOmM HEPES,0.5M LiCl，IOOmM LiOH, 50mM EDTA 和 50 μ g/mL超順磁性的共價(jià)結(jié)合(dT) 14 的磁珠(0.7 ~1.05 μ Mparticles, Sera-Mag?), pH6.4 ；
[0037](2)洗液:5mM HEPES, IOOmM NaCl,4mM NaOH,0.5mM EDTA,0.l%(v/v)乙醇，
0.01%(w/v)對(duì)羥基苯甲酸甲酯,0.01%(w/v)尼泊金丙酯和0.05%(w/v)月桂醇硫酸酯鈉鹽，ρΗ7.5。
[0038]磁珠法提取樣本RNA: 100 μ L經(jīng)樣本運(yùn)輸保存液處理的尿液樣本加入20 μ L捕獲液，渦旋混勻I分鐘，42°C反應(yīng)1·0分鐘,將反應(yīng)液置于磁場(chǎng)中靜置2分鐘,吸棄液體,然后向含磁珠的EP管中加入200 μ L洗液，渦旋10秒后置于磁場(chǎng)中靜置2分鐘，吸棄液體,加入10 μ L的無(wú)RNase的水溶解RNA，在磁場(chǎng)中靜置2分鐘，將液體轉(zhuǎn)移至新的EP管中，取5 μ L檢測(cè)。
[0039]一步法 RT-PCR 擴(kuò)增試劑，包括 2μ L10XBuffer，5y L2.5Mm dNTP,
Iμ L25Mm MgCl2,1 μ L PCA3和PSA弓丨物混合物(引物濃度分別為10 μ m，具體序列如下:PCA3 上游引物 5’ -ccaggaagatctgcatggtggg-3’ (SEQ ID N0.1) ；PCA3 下游引物5，-gatgacccaagatggcggc-3，(SEQ ID N0.2) ;PSA 上游引物 5，_cctgctcgggtgattctg_3，(SEQ ID N0.3) ;PSA 下游引物 5，-gccacgatggtgtccttgat-3，(SEQ ID N0.4)),0.5μ L濃度為 10 μ m 的探針混合物(PCA3 探針:5’ -gcacagagatccctgggagaaatgcc-3’ (SEQ IDN0.5);PSA 探針:5，-gggcccacttgtctgtaatggtgtgc_3’ (SEQ ID N0.6),DMSO 分析純 I μ L ;IOOmMDTT, I μ L ；0.1 μ LRoche HS TAQ (貨號(hào) 12032953001 )，0.1 μ L UDG (購(gòu)自 NEB 公司，貨號(hào)ΕΝ0362) ;0.1 μ L逆轉(zhuǎn)錄酶和0.1 μ L RNA酶抑制劑(其成分使用Thermo逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，貨號(hào)Κ1622),滅菌純化水34.3 μ L。
[0040]一步法 RT-PCR 反應(yīng)條件:37°C，5 分鐘；50°C，15 分鐘；94°C，5 分鐘；擴(kuò)增 94°C，10秒，60°C，30秒，45個(gè)循環(huán)，最后50°C冷卻30秒。
[0041 ] 標(biāo)準(zhǔn)品:以前列腺癌細(xì)胞株LNcap IygS RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA為模板，分別以SEQ ID N0.7 與 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.9 與 SEQ ID N0.10 為引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，分別獲得670bp的PCA3和589bp的PSA，然后將PCR產(chǎn)物裝入T載體(使用Thermo ScientificInsTAclone PCR Cloning Kit,貨號(hào) kl213),測(cè)序驗(yàn)證后得到 PCA3/PSA 重組質(zhì)粒。
[0042]質(zhì)控品:陽(yáng)性質(zhì)控品為前列腺癌細(xì)胞株LNcap (購(gòu)自上海細(xì)胞所)1 μ g總RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA ;陰性質(zhì)控品為正常前列腺上皮細(xì)胞株RWPE-1 (購(gòu)自上海細(xì)胞所)IygS RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA。
[0043] 結(jié)果判讀:患者的PCA3score為尿液樣本中PCA3濃度比上PSA濃度乘以1000，即
【權(quán)利要求】
1.前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述試劑盒含有一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑，所述一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑含有檢測(cè)PCA3和PSA的特異引物和探針，檢測(cè)PCA3的特異引物如SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示，探針如SEQ ID N0.5所示；檢測(cè)PSA的特異引物如SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.4 所示，探針如 SEQ ID N0.6 所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑還包括 10 X Buffer，2.5Mm dNTP,25Mm MgCl2, DMSO ; IOOmMDTT ;UDG，逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA酶抑制劑和水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括樣本運(yùn)輸保存液、磁珠法提取試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述樣本運(yùn)輸保存液的組分如下，質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%~5%十二烷基硫酸鋰，10~20mM NaH2PO4,10~20mM Na2HPO4,0.5~2mM乙二胺四乙酸和0.5~2mM乙二醇二乙醚二胺四乙酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述磁珠法提取試劑包括捕獲液和洗液，所述捕獲液的組分如下:100~400mM HEPES，0.5~3M LiCl，100~500mM LiOH, 50~150mM EDTA和50~400 μ g/mL超順磁性的共價(jià)結(jié)合(dT) 14的磁珠，所述洗液的組分如下:5 ~20mM HEPES, 100 ~200mM NaCl，4 ~IOmM NaOH,0.5 ~2mM EDTA,0.1~0.5%(v/v)乙醇，0.01~0.02% (w/v)對(duì)羥基苯甲酸甲酯，0.01~0.05%(w/v)尼泊金丙酯，和0.05~0.3% (w/v)月桂醇硫酸酯鈉鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)品為含PCA3和PSA基因的重組質(zhì)粒。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述陽(yáng)性質(zhì)控品為前列腺癌細(xì)胞株LNcap總 RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述陰性質(zhì)控品為正常前列腺上皮細(xì)胞株RWPE-1總RNA逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述前列腺癌尿液檢測(cè)試劑盒在評(píng)估前列腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)、治療效果和復(fù)發(fā)監(jiān)控中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103849683SQ201410037699
【公開(kāi)日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2014年1月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月26日
【發(fā)明者】王弢, 渠香云, 何林富, 高鵬 申請(qǐng)人:上海度微醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司