藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，采用兩層過濾膜，第一層濾膜的孔徑可以為5μm～10μm、10μm～20μm、20μm～30μm和30μm～50μm四類，用于截流大分子基質(zhì)、顆粒、纖維和藥物殘渣等不溶性物質(zhì)；第二層濾膜孔徑不大于0.45μm，用于截留微生物。本發(fā)明方法可以有效防止濾膜堵塞，利于消除供試品抑菌活性，避免供試品中污染微生物受到損傷。對現(xiàn)行方法不能實現(xiàn)有效檢驗的藥物，可采用本發(fā)明方法進行檢驗，經(jīng)大量試驗數(shù)據(jù)證明，本方法簡便可行，結(jié)果有效。
【專利說明】藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥品微生物檢驗領(lǐng)域，具體涉及一種藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法。
【背景技術(shù)】
[0002]微生物污染是造成藥品不良事件的主要原因之一，杜絕受污染的藥品流入市場，對于保障患者的生命安全意義重大。在藥品微生物檢驗環(huán)節(jié)，能否檢測出微觀世界中的微生物，檢驗方法至關(guān)重要。薄膜過濾技術(shù)是藥品微生物檢驗領(lǐng)域，用于附集微生物的一種重要技術(shù)。對于有抗菌活性的藥物，需要采用薄膜過濾方法，充分消除藥物的抗菌活性，以利于藥品中休眠或損傷狀態(tài)的微生物復(fù)蘇、繁殖和檢出。但目前該技術(shù)存在一定缺陷:某些藥物供試液中含有卡波姆、纖維素衍生物、膠體硅、鈣皂和不溶性藥物殘渣等，試驗過程中經(jīng)常會堵塞濾膜(國家標準中規(guī)定濾膜孔徑不大于0.45 μ m)，導致試驗無法繼續(xù)。
[0003]目前，對于該類藥物并無十分有效的微生物檢驗方法。在醫(yī)藥工業(yè)發(fā)達的國家，對于該類樣品多施行生產(chǎn)過程控制。在我國，由于國情所限現(xiàn)階段還無法效仿，現(xiàn)行國家標準仍以最終檢測結(jié)果作為產(chǎn)品是否合格的依據(jù)。但是，由于方法存在缺陷，導致部分受到微生物污染，特別是低水平污染的藥品檢測結(jié)果合格，流入臨床，給患者的身體健康甚至是生命安全造成嚴重威脅。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，采用兩層過濾膜，第一層濾膜用于截流大分子基質(zhì)、顆粒、纖維和藥物殘渣等不溶性物質(zhì)，第二層濾膜用于截留微生物，可以有效防止濾膜堵塞，利于消除供試品的抑菌活性，避免供試品中污染微生物受到損傷。
[0005]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，包括以下步驟:
[0006]I)按常規(guī)步驟取規(guī)定量的供試品制備成供試液，將供試液通過第一層濾膜過濾，截留大分子基質(zhì)、顆粒、纖維和藥物殘渣等不溶性物質(zhì)，供試液繼續(xù)通過第二層濾膜，截留供試液中潛在的微生物；
[0007]2)用沖洗液對第一層和第二層濾膜進行沖洗，沖洗液通過濾膜方式與供試液相同，沖洗液將第一層濾膜上可能附著的微生物洗脫至第二層濾膜，同時洗脫兩層濾膜上附著的具有抗菌活性的物質(zhì)；
[0008]3)根據(jù)檢驗?zāi)康模瑢⒌谝粚雍偷诙訛V膜分別接入相應(yīng)的培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)；
[0009]4)根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果，按照現(xiàn)行中國藥典或其他國家標準要求，進行結(jié)果判斷。
[0010]具體地，檢驗過程中，供試液將通過第一層和第二層，共兩層過濾膜。
[0011]具體地，根據(jù)檢驗?zāi)康牡男枰蚬┰囈禾匦?，在步驟2)之后單獨增加對第二層濾膜沖洗液的沖洗量，以充分消除第二層濾膜上抗菌活性物質(zhì)的存在。[0012]具體地,所述第一層濾膜按孔徑大小分為四種:5 μ m~10 μ m、10 μ m~20 μ m、20 μ m ~30 μ m 和 30 μ m ~50 μ m。
[0013]具體地，所述第一層濾膜為上述四種中的一種。
[0014]具體地，所述第一層濾膜可選擇兩種或兩種以上不同孔徑的濾膜疊加使用。
[0015]具體地，所述第二層濾膜按照國家標準要求孔徑不大于0.45 μ m。
[0016]本發(fā)明具有以下有益效果:本發(fā)明的藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，采用兩層過濾膜，根據(jù)濾膜不同孔徑和材質(zhì)，分別截流大分子基質(zhì)、顆粒、纖維和藥物殘渣等不溶性物質(zhì)或微生物，防止濾膜堵塞，利于消除供試品的抑菌活性，避免供試品中污染微生物受到損傷。對現(xiàn)行方法不能實現(xiàn)有效檢驗的藥物，可采用本發(fā)明方法進行檢驗，經(jīng)大量試驗數(shù)據(jù)證明，本方法簡便可行，結(jié)果有效。
【具體實施方式】
[0017]以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步作描述，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0018]藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，包括以下步驟:
[0019]I)按常規(guī)步驟取規(guī)定量的供試品制備成供試液，將供試液通過第一層濾膜過濾，截留大分子基質(zhì)、顆粒、纖維和藥物殘渣等不溶性物質(zhì)，供試液繼續(xù)通過第二層濾膜，截留供試液中潛在的微生物；
[0020]2)用沖洗液對第一層和第二層濾膜進行沖洗，沖洗液通過濾膜方式與供試液相同，沖洗液將第一層濾膜上可能附著的微生物洗脫至第二層濾膜，同時洗脫兩層濾膜上附著的具有抗菌活性的物質(zhì)；
[0021]3)根據(jù)檢驗?zāi)康?，將第一層和第二層濾膜分別接入相應(yīng)的培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)；
[0022]4)根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果，按照現(xiàn)行中國藥典或其他國家標準要求，進行結(jié)果判斷。
[0023]具體地，檢驗過程中，供試液將通過第一層和第二層，共兩層過濾膜。
[0024]具體地，根據(jù)檢驗?zāi)康牡男枰蚬┰囈禾匦?，在步驟2)之后單獨增加對第二層濾膜沖洗液的沖洗量，以充分消除第二層濾膜上抗菌活性物質(zhì)的存在。
[0025]具體地,所述第一層濾膜按孔徑大小分為四種:5 μ m~10 μ m、10 μ m~20 μ m、20 μ m ~ 30 μ m 和 30 μ m ~50 μ m。
[0026]具體地，所述第一層濾膜為上述四種中的一種。
[0027]具體地，所述第一層濾膜可選擇兩種或兩種以上不同孔徑的濾膜疊加使用。
[0028]具體地，所述第二層濾膜按照國家標準要求孔徑不大于0.45 μ m。
[0029]實施例1
[0030]以更昔洛韋眼用凝膠無菌檢查試驗為例。
[0031]1.培養(yǎng)基與 試劑:硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、0.1%蛋白胨緩沖液、無水氯化鈣。
[0032]2.試驗用樣品:更昔洛韋眼用凝膠。
[0033]3.實驗菌種:枯草芽孢桿菌[CMCC(B) 63501]、大腸埃希菌[CMCC(B) 44102]、金黃色葡萄球菌[CMCC(B) 26003];生孢梭菌[CMCC(B) 64941]、白色念珠菌[CMCC (F) 98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]均由中國食品藥品鑒定研究院提供。
[0034]4.菌液制備:大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌采用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，生孢梭菌采用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，30~35°C培養(yǎng)18~24小時；白色念珠菌采用改良馬丁培養(yǎng)基，20~25°C培養(yǎng)24~48小時；黑曲霉采用沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，20~25°C培養(yǎng)5~7天。按藥典規(guī)定制備上述試驗菌懸液,使最終稀釋濃度均小于IOOcfu
[0035]5.無菌檢查試驗
[0036]中國藥典要求無菌檢查應(yīng)用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45 μ m,而卡波姆凝膠無法通過該孔徑濾膜，因此，不能采用供試品稀釋后直接過濾的方法。某些二價粒子、強親水性電解質(zhì)等會使卡波姆凝膠發(fā)生絮凝，因此，可考慮先將卡波姆凝膠沉淀，分離，再進行檢驗。使卡波姆凝膠沉淀的介質(zhì)不會對供試品中微生物造成損傷，綜合考慮各種影響因素，選擇氯化鈣進行試驗。
[0037]供試液的制備:取供試品15支，用50mL0.1%無菌蛋白胨緩沖液稀釋，然后加入10 %無菌氯化鈣溶液溶解，邊加邊振搖，此時二價離子和羧酸根結(jié)合形成不溶性鹽，逐漸產(chǎn)生大量絮狀沉淀，至沉淀量不再增加，使用氯化鈣溶液約80mL。
[0038]取上述供試液過濾，供試液首先通過第一層濾膜(孔徑20 μ m~30 μ m)，絮狀沉淀被截留；然后供試液通過第二層濾膜(孔徑應(yīng)不大于0.45 μ m)，供試液中的微生物被截留。采用沖洗液，按照供試液通過方式對兩層濾膜進行沖洗，總沖洗量為500ml。分別將100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)的濾筒內(nèi)。
[0039]結(jié)果判斷:應(yīng)首先滿足中國藥典結(jié)果判斷原則。經(jīng)培養(yǎng)后，如果培養(yǎng)液整體澄清或第一層、第二層濾膜之間的培養(yǎng)液澄清(第一層濾膜以上的培養(yǎng)液渾濁為顆粒物、沉淀物等造成，如確有可疑，應(yīng)進行轉(zhuǎn)接試驗)，則判供試品符合規(guī)定；如果培養(yǎng)液整體渾濁，則判供試品不符合規(guī)定。培養(yǎng)結(jié)果見表1。
[0040]表1無菌檢查方法驗證結(jié)果
[0041]
【權(quán)利要求】
1.藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)按常規(guī)步驟取規(guī)定量的供試品制備成供試液，將供試液通過第一層濾膜過濾，截留大分子基質(zhì)、顆粒、纖維和藥物殘渣等不溶性物質(zhì)，供試液繼續(xù)通過第二層濾膜，截留供試液中潛在的微生物； 2)用沖洗液對第一層和第二層濾膜進行沖洗，沖洗液通過濾膜方式與供試液相同，沖洗液將第一層濾膜上可能附著的微生物洗脫至第二層濾膜，同時洗脫兩層濾膜上附著的具有抗菌活性的物質(zhì)； 3)根據(jù)檢驗?zāi)康模瑢⒌谝粚雍偷诙訛V膜分別接入相應(yīng)的培養(yǎng)基中，進行培養(yǎng)； 4)根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果，按照現(xiàn)行中國藥典或其他國家標準要求，進行結(jié)果判斷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，其特征在于，供試液將通過第一層和第二層，共兩層過濾膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，其特征在于，根據(jù)檢驗?zāi)康牡男枰蚬┰囈禾匦裕诓襟E2)之后，單獨增加對第二層濾膜沖洗液的沖洗量，以充分消除第二層濾膜上抗菌活性物質(zhì)的存在。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，其特征在于，所述第一層濾膜按孔徑大小分為四種:5 μ m~10 μ m、10 μ m~20 μ m、20 μ m~30 μ m和30 μ m~50 μ m0
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，其特征在于，所述第一層濾膜為上述四種中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，其特征在于，所述第一層濾膜可選擇兩種或兩種以上不同孔徑的濾膜疊加使用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥品微生物檢驗雙濾膜過濾方法，其特征在于，所述第二層濾膜按照國家標準要求孔徑不大于0.45 μ m。
【文檔編號】C12Q1/04GK103555810SQ201310492956
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】丁勃, 王志宏, 劉艷, 徐曉潔, 冷佳蔚, 胡文宏, 國明 申請人:山東省食品藥品檢驗所