一株叢赤殼屬真菌及其在制備菌紋木中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一株叢赤殼屬真菌（Nectria?rigidiuscula）J12WU及其在制備菌紋木中的應(yīng)用，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。所述菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC?No：5963。所述菌株對(duì)木質(zhì)基材料具有優(yōu)良的浸染能力，浸染時(shí)間短，在材料表面能形成美觀的色彩及紋理，且對(duì)物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響。用所述菌株制備菌紋木的方法包括菌株活化、擴(kuò)繁與接菌培養(yǎng)步驟，首先將菌株接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上擴(kuò)繁，在22~30℃下活化與擴(kuò)繁7-15天，然后將木質(zhì)基材料滅菌，與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在22~30℃下培養(yǎng)1周或1周以上以上即可。本發(fā)明所述方法工藝合理，操作簡(jiǎn)單，所制得的菌紋木具有很好的裝飾效果，且對(duì)基材的物理力學(xué)性質(zhì)無(wú)影響，有利于大規(guī)模生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一株叢赤殼屬真菌及其在制備菌紋木中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種侵染時(shí)間短，色澤及紋理美觀，對(duì)木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響的叢赤殼屬真菌菌株及其在制備菌紋木中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]木材的真菌色變長(zhǎng)期以來(lái)被視為木材的缺陷，降低了木材的價(jià)值，實(shí)際上真菌的色變，如線條、染色等，具有自然天成、獨(dú)一無(wú)二的特點(diǎn)，具有唯一性的自然美，當(dāng)腐朽不嚴(yán)重時(shí)可以作為木材的一種奇妙的修飾。若利用這種帶有自然線條或色彩的木材制作工藝品，如花瓶、耳環(huán)、鋼筆、貼木單板等，可提高木材的附加價(jià)值。帶有天然花紋和色澤的菌紋木在市場(chǎng)，尤其裝飾、裝修、工藝品市場(chǎng) 將會(huì)受到歡迎。
[0003]但是天然獲得的菌紋木仍存在以下不足:1、原料不易獲得，帶有很強(qiáng)的偶然性，因?yàn)樘烊痪y木在自然界中只有在具有可形成菌紋木的菌種存在時(shí)才有可能形成，所以只有少部分林中的枯枝倒木中能找到少量菌紋木；2、天然菌紋木形成的時(shí)間長(zhǎng)，受到很多氣候、環(huán)境因素的影響，如干燥、寒冷、缺氧、陽(yáng)光強(qiáng)烈、其他微生物干擾等；3、天然菌紋木在自然條件下形成，易受到蟲(chóng)害或其他真菌侵染，使木材不完整或形成不美觀的腐朽或變色。
[0004]因此，有必要分離、改良一種侵染時(shí)間短，色澤及紋理美觀，對(duì)木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響的菌株，用其對(duì)木質(zhì)基材料進(jìn)行侵染處理制備菌紋木，以滿(mǎn)足裝飾、裝修、工藝品制作的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的第一技術(shù)問(wèn)題在于提供一種侵染時(shí)間短，色澤及紋理美觀，對(duì)木質(zhì)基材料物理力學(xué)強(qiáng)度無(wú)影響的真菌菌株。
[0006]本發(fā)明要解決的第二技術(shù)問(wèn)題在于提供所述真菌菌株在制備菌紋木中的應(yīng)用。
[0007]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。
[0008]除非另有說(shuō)明外，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為體積百分?jǐn)?shù)。
[0009]一株叢赤殼屬真菌菌株(Afectria命名為J12WU,經(jīng)鑒定為叢赤殼屬的一種真菌iNectria rigidiuscula)的一個(gè)株系，是從腐朽的樹(shù)樁、倒木或枯枝中分離得到，已于2012年4月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)06110:，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為 CGMCC No:5963。
[0010]一種用所述叢赤殼屬真菌菌株(AfectriaJ12WU制備菌紋木的方法，包括菌株活化與擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，具體包括以下步驟:
A、菌株活化與擴(kuò)繁:將叢赤殼屬真菌菌株J12WU接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30°C下培養(yǎng)7~15天至生長(zhǎng)旺盛的菌落形成，得活化與擴(kuò)繁菌株；
活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種；
B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在22~30°C下培養(yǎng)I周或以上，即得菌紋木。
[0011]本發(fā)明的有益效果包括以下幾個(gè)方面。
[0012]1、本發(fā)明所述菌株對(duì)木質(zhì)基材料的侵染效果好，在非常短的時(shí)間內(nèi)即可在木質(zhì)基材料表面產(chǎn)生彩色染色花紋。采用固體接菌法，在處理后的第2周，基材表面即有染色花紋產(chǎn)生。采用液體接菌法，在處理后的第I周，基材表面即有染色花紋產(chǎn)生。
[0013]2、本發(fā)明所述菌株及菌紋木的制備方法對(duì)木質(zhì)基材料的物理力學(xué)性能，如質(zhì)量、硬度、強(qiáng)度等無(wú)影響。接菌處理后的第4周，電鏡掃描結(jié)果顯示，真菌對(duì)木材細(xì)胞的損傷輕微，表明菌紋木的質(zhì)量、硬度、強(qiáng)度等與健康正常材均無(wú)顯著差別。
[0014]3、本發(fā)明所述菌紋木的制備方法技術(shù)路線合理、操作流程簡(jiǎn)單、原料易得、成功率高，有利于大規(guī)模生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1為實(shí)施例2中西南榿木處理4周后橫切面的表面的花紋。
[0016]圖2為實(shí)施例2中西南棺木處理4周后橫切面的表面的花紋。
[0017]圖3為實(shí)施例2中西南榿木處理4周后縱切面的表面的花紋。
[0018]圖4為實(shí)施例5中西南棺木處理后橫切面表層花紋處掃描電鏡圖。
[0019]圖5為實(shí)施例5中西南棺木處理后弦切面靠近花紋處掃描電鏡圖。
[0020]【具體實(shí)施方式】
下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0021]一株叢赤殼屬真菌菌株(Afectria rigidiuscula) J12WU,于2012年4月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:5963。
[0022]所述菌株能夠在木質(zhì)基材料表面形成彩色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種。
[0023]所述菌株在木質(zhì)基材料表面形成紅色系的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的概率更高，高于其他色系的花紋的形成概率。
[0024]所述菌株在接種到木質(zhì)基材料后的第I周即能在木質(zhì)基材料的表面產(chǎn)生枚紅色、大紅色、暗紅色、棕紅色的染色花紋。
[0025]所述菌株在接種到木質(zhì)基材料第I周后，所產(chǎn)生的花紋能深入木塊達(dá)
0.05^0.09cm。
[0026]所述菌株是通過(guò)下述具體步驟獲得的:
A、標(biāo)本采集:在腐朽樹(shù)樁、倒木或枯枝中，采集具有彩色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆茫?br> B、菌株分離與篩選:將采集的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體破碎、消毒后，置于富集培養(yǎng)基中在22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)疒15天至長(zhǎng)出菌絲；富集培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種；
然后將向四周周?chē)拾l(fā)散狀、疏松的絲狀、大紅色、邊緣平整、甚至形成粘液狀鮮黃色分生孢子的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中在22~3(TC黑暗中靜置培養(yǎng)f 12天至菌落長(zhǎng)出；增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種；
C、菌種保存:挑取增殖培養(yǎng)基中生長(zhǎng)旺盛者接種至保存培養(yǎng)基中，在22~3(TC黑暗中靜置培養(yǎng)5~12天，于4°C冰箱中凍存；保存培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種；
PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160~240、葡萄糖10~20、瓊脂14~20、自然pH ;
PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:馬鈴薯200、葡萄糖15、瓊脂17、pH 6.5^7.0 ；
MA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:麥芽膏21~28、瓊脂14~20、PH6.0~7.5 ；
MA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:麥芽膏25、瓊脂17、PH6.5~7.0 ；
OA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:燕麥片27~33、瓊脂14~20、PH6.0~7.5 ；
OA培養(yǎng)基成分以g/L優(yōu)選為:燕麥片30、瓊脂17、PH6.5~7.0。
[0027]步驟A所述的標(biāo)本采集是在溫暖潮濕的闊葉林、針葉林或針闊葉混交林中進(jìn)行。
[0028]步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在溫暖潮濕的闊葉林中進(jìn)行。
[0029]步驟A所述的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體采集后需冷藏保存?zhèn)溆?，冷藏溫度?°C。
[0030]步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在楊柳科楊屬、樺木科榿屬、樺木屬、薔薇科櫻桃屬、木棉科輕木屬或殼斗科櫟屬樹(shù)種的腐朽樹(shù)樁、倒木或枯枝中，采集具有彩色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆谩?br> [0031]所述楊屬樹(shù)種優(yōu)選毛白楊。
[0032]所述樺木屬樹(shù)種優(yōu)選西南樺。
[0033]所述棺屬樹(shù)種優(yōu)選西南棺木。
[0034]步驟B所述的破碎，是用解剖刀將木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體切成0.3~0.7cmX0.3~0.7cmX0.3~0.7cm的小塊。
[0035]步驟B所述的消毒，是用75%酒精浸泡消毒1(T15s，再用0.1%升汞浸泡消毒3^7min,再用滅菌蒸餾水清洗3次。
[0036]步驟B所述的富集培養(yǎng)的條件優(yōu)選:26°C黑暗靜置培養(yǎng)10天。
[0037]步驟B所述的菌株分離與篩選是從富集培養(yǎng)基中將菌落大紅色，圓周狀發(fā)散生長(zhǎng)，具輪紋；具大量大紅色氣生菌絲，疏松，邊緣平整，邊緣菌絲下沉于培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)，甚至已形成鮮黃色粘液狀分生孢子團(tuán)的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中。
[0038]步驟B所述的增殖培養(yǎng)的條件優(yōu)選:26°C黑暗靜置培養(yǎng)9天。
[0039]步驟C所述的保存培養(yǎng)的條件優(yōu)選:26°C黑暗靜置培養(yǎng)9天。
[0040]一種用所述的叢赤殼屬真菌菌株(Afectria制備菌紋木的方法，包括菌株活化與擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，具體包括以下步驟:
A、菌株活化與擴(kuò)繁:將叢赤殼屬真菌菌株J12WU接種到活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~30°C下培養(yǎng)疒15天至生長(zhǎng)旺盛的菌落形成，得活化與擴(kuò)繁菌株；活化與擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種；
B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與活化與擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在22~30°C下培養(yǎng)I周或以上，即得菌紋木。[0041]所述的制備方法，還可以包括后處理步驟，將接菌培養(yǎng)后得到的菌紋木刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率8~10%。
[0042]PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160~240、葡萄糖10~20、自然PH。
[0043]PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)優(yōu)選為:馬鈴薯200、葡萄糖15、PH 6.5~7.0。
[0044]步驟B所述的木 質(zhì)基材料為原木、實(shí)木塊、木板、木皮、木薄片、木棒、異形木制品中的任一種或幾種。
[0045]步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹(shù)種可以為任意樹(shù)種。
[0046]步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹(shù)種優(yōu)選自楊柳科楊屬、樺木科榿屬、樺木屬、薔薇科樓桃屬、木棉科輕木屬或殼斗科櫟屬樹(shù)種。
[0047]步驟B所述的木質(zhì)基材料的樹(shù)種更優(yōu)選自毛白楊、西南樺、西南榿木、思茅松。
[0048]步驟B所述的木質(zhì)基材料在接種前，可根據(jù)需要加工成任意的形狀。
[0049]步驟B所述的滅菌，是將木質(zhì)基材料在高壓蒸汽式滅菌器中，在121 °C下滅菌處理20分鐘以上。
[0050]步驟B所述的滅菌，是將木質(zhì)基材料置于培養(yǎng)瓶中，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木質(zhì)基材料，加少量水使木質(zhì)基材料及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌60分鐘。
[0051]步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在固體接菌時(shí)是將含有菌落的培養(yǎng)基切成與待接種木質(zhì)基材料大小、形狀相近的菌塊，將至少一塊菌塊貼在木質(zhì)基材料表面。
[0052]所述菌塊的尺寸和形狀優(yōu)選為邊長(zhǎng)f4cm的三角形、方形、多邊形或面積相近的圓形。
[0053]所述菌塊的總面積在2cm2以上。
[0054]步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化及擴(kuò)繁后的菌株充分接觸，在液體接菌時(shí)，是將待接種的木質(zhì)基材料浸入含有菌落的培養(yǎng)液中，且/或?qū)⒊蓤F(tuán)的菌絲體夾取置于木質(zhì)基材料的表面或附近。
[0055]所述菌絲體的夾取量與木質(zhì)基材料的體積比為0.r0.5:1。
[0056]所述菌絲體的夾取量的總體積在Icm3以上。
[0057]實(shí)施例1
-叢赤殼屬真菌(Afectria rigidiuscula ) J12WU的獲得、鑒定與保藏。
[0058](I)叢赤殼屬真菌iNectria rigidiuscula ) J12WU的獲得與鑒定。
[0059]本發(fā)明所述的叢赤殼屬真菌，是從西南榿木的腐朽的樹(shù)樁、倒木或枯枝中分離得到。樣品采自云南省昆明市金殿公園蕨壑云深景點(diǎn)，采集已腐朽的且在木質(zhì)部出現(xiàn)紅色系花紋的樹(shù)樁、樹(shù)枝樣品100g，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，在4°C冷藏保存?zhèn)溆谩?br> [0060]將米集的已腐朽樹(shù)樁樣品，以解剖刀切成0.3~0.5cmX0.3~0.5cmX0.3~0.5cm的小塊，用75%酒精浸泡消毒l(Tl5s,再用0.1%升萊浸泡消毒5min,再用滅菌蒸懼水清洗3次。接于PDA培養(yǎng)基中，26°C ±2°C黑暗靜置培養(yǎng)10天，至菌落長(zhǎng)出。
[0061]然向四周周?chē)l(fā)散狀、疏松的絲狀、大紅色、邊緣平整、甚至形成粘液狀鮮黃色分生孢子的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中在26°C ±2°C黑暗靜置培養(yǎng)9天，至菌落長(zhǎng)出。增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。待菌落長(zhǎng)出后，挑取長(zhǎng)勢(shì)旺盛者至保存培養(yǎng)基中，保存培養(yǎng)，保存培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，保存培養(yǎng)的條件為在26°C ±2°C黑暗靜置培養(yǎng)9天。
[0062]PDA培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯200、葡萄糖15、瓊脂17、pH 6.5^7.0。
[0063]對(duì)上述分離的菌株J12WU，通過(guò)生物學(xué)特性觀察，進(jìn)行進(jìn)一步的形態(tài)鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄如下。
[0064]A、形態(tài)特征:在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，菌落直徑約4.9cm,生長(zhǎng)速度較慢；菌落大紅色，圓周狀發(fā)散生長(zhǎng)，具輪紋；具大量氣生菌絲，疏松，邊緣平整，邊緣菌絲下沉于培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)，于中央部位形成鮮黃色粘液狀分生孢子團(tuán)。具鐮刀形及卵圓形分生孢子，成熟鐮刀形孢子產(chǎn)自瓶型分生孢子梗，具6-9分隔，形狀彎曲，向兩尖端端逐漸變?yōu)檎?xì)，中間細(xì)胞為深色，尖端兩細(xì)胞顏色變?yōu)橥该鏖L(zhǎng)60-80 ii mX寬7-12 u m,卵圓形分生孢子長(zhǎng)5-7 u mX寬 3-4 um。[0065]B、培養(yǎng)特征:在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天左右即可于中央部位形成鮮黃色粘液狀分生孢子團(tuán)。以液體馬鈴薯培養(yǎng)基在搖床上培養(yǎng)7天，其菌絲體呈直徑為0.1、.5cm形狀不規(guī)則的小顆粒，培養(yǎng)液大紅色。在木塊上接種培養(yǎng)期間也形成大紅色菌落及鮮黃色粘液狀分生孢子團(tuán)。
[0066]C、菌株的穩(wěn)定性:該菌生長(zhǎng)溫度范圍在3~35°C，適宜生長(zhǎng)溫度為20~30°C，生長(zhǎng)PH值在5.5~7.5，最適宜PH值為6.5~7.2。
[0067]D、5.8S rDNA序列分析:對(duì)該菌株進(jìn)行5.8S rDNA序列測(cè)定，以菌株J12WU 的總 DNA 為模板，在弓丨物 ITSl (5，-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和 ITS4(5，-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ )的引導(dǎo)下PCR擴(kuò)增該菌株的5.8S rDNA序列，PCR反應(yīng)體系為:2iUDNA 模版、1.5iil 引物 ITSU1.5 ill 引物 ITS4、Taqmix22 yl、去離子水 20u I,共 50ul。PCR 反應(yīng)程序:a、94°C 4min ;b、94°C lmin，50°C 45s，72°C lmin，35 個(gè)循環(huán)；c、72°C IOmin。
[0068]將PCR反應(yīng)產(chǎn)物送到生物公司測(cè)序得ITS序列，經(jīng)復(fù)檢，在美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)中比對(duì)，比對(duì)結(jié)果表明，菌株J12WU與叢赤殼屬真菌(Afedria rigidiuscula、的5.8S rDNA序列的相似性達(dá)到了 99%。通過(guò)序列比對(duì)和形態(tài)特征將菌株J12WU鑒定為叢赤殼屬真菌(Afectria rigidiuscula)0本發(fā)明所述的菌株J12WU其5.8S rDNA序列如序列表所示。
[0069](2)叢赤殼屬真菌(Afectria rigit/i) Jl2WU 的保藏。
[0070]通過(guò)上述鑒定結(jié)果，確認(rèn)菌株J12WU為叢赤殼屬真菌(Afectria rigidiuscula')的一個(gè)株系，編號(hào)命名為J12WU，于2012年4月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:5963。
[0071]實(shí)施例2
-由叢赤殼屬真菌{Nectria rigidiuscula ) J12WU制備菌紋木。
[0072](1)菌紋木制備。
[0073]首先，將叢赤殼屬真菌iNectria rigidiuscula)J12WU接種到PDA液態(tài)培養(yǎng)基上，在26°C ±2°C下黑暗搖床培養(yǎng)9天，形成紅色的菌絲體及其菌絲體孢子懸浮液。
[0074]PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯200、葡萄糖15、pH6.5~7.0。
[0075]然后，將待接種的西南榿木原木鋸成2cmX2cmX 2cm的方形木塊(共計(jì)12塊)，分別裝在底面直徑6cm高Ilcm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌40分鐘。
[0076]夾取木塊放入菌懸液中沾上菌絲或孢子后，放入一并經(jīng)過(guò)消毒的蛭石中，并將成團(tuán)的菌絲體夾取置于木塊表面，所夾菌絲體積與木塊體積的比值約為0.3:1。在26°C ±2°C下黑暗培養(yǎng)，I周后取出其中6塊木塊，4周后取出剩余6塊木塊。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率10%，得菌紋木。
[0077](2)結(jié)果觀察。
[0078]分別將接種I周及4周 的木塊用BenQ Scanner 5560掃描儀在2400分辨率下掃描后劈開(kāi)木塊觀察。
[0079]侵染深度:在接種的第I周內(nèi)，木塊表面即出現(xiàn)花紋，到第I周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò)0.07cm。在接種到第4周結(jié)束時(shí)，深入木塊超過(guò)0.09cm。
[0080]花紋的顏色和類(lèi)型:到第I周結(jié)束時(shí)，木塊表面形成玫瑰紅色的無(wú)規(guī)則、不均勻的團(tuán)塊狀、線狀染色；到第4周結(jié)束時(shí)，木塊表面形成面積更大顏色更深的玫瑰紅色的連續(xù)的無(wú)規(guī)則、不均勻的團(tuán)狀組合成似抽象花紋狀的花邊裝飾的染色。
[0081]實(shí)施例3
-由叢赤殼屬真菌{Nectria rigidiuscula ) J12WU制備菌紋木。
[0082](I)菌紋木制備。
[0083]首先，將叢赤殼屬真菌iNectria rigidiuscula)J12WU接種到PDA液態(tài)培養(yǎng)基上，在28±2°C下黑暗搖床培養(yǎng)7天，形成紅色的菌絲體及其菌絲體孢子懸浮液。
[0084]PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯160、葡萄糖20、pH7.0^7.5。
[0085]然后，將待接種的西南榿木原木鋸成2cmX 2cmX 3cm的方形木塊(共計(jì)40塊，按照GB1931-1991《木材含水率測(cè)定方法》烘至絕干,用精確到0.001的電子天秤稱(chēng)每一木塊的絕干質(zhì)量)，分別裝在底面直徑6cm高Ilcm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌40分鐘。
[0086]夾取木塊放入菌懸液中沾上菌絲或孢子后，放入一并經(jīng)過(guò)消毒的蛭石中，并將成團(tuán)的菌絲體夾取置于木塊表面，所夾菌絲體積與木塊體積的比值約為0.5:1。在25°C ±2°C下黑暗培養(yǎng)4周。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率8%，得菌紋木。
[0087](2)結(jié)果觀察。
[0088]侵染深度:取其中10塊劈開(kāi)觀察侵染深度。木塊表面遍布花紋，花紋深入木塊超過(guò) 0.1cm。
[0089]花紋的顏色和類(lèi)型:到第4周結(jié)束時(shí)，木塊表面形成玫瑰紅色的不均勻的團(tuán)狀染色，團(tuán)塊邊緣呈曲線，組合成無(wú)規(guī)則的連片的花紋狀染色。
[0090]實(shí)施例4
-由叢赤殼屬真菌{Nectria rigidiuscula ) J12WU制備菌紋木。
[0091](I)菌紋木制備。
[0092]首先，將叢赤殼屬真菌iNectria rigidiuscula)J12WU接種到PDA液態(tài)培養(yǎng)基上，在24°C ±2°C下黑暗搖床培養(yǎng)15天，形成紅色的菌絲體及其菌絲體孢子懸浮液。
[0093]PDA液態(tài)培養(yǎng)基成分以g/L計(jì)為:馬鈴薯240、葡萄糖10、pH6.5~7.0。[0094]然后，將待接種的西南榿木原木鋸成7CmX5CmX5Cm的方形木塊(共計(jì)40塊)，分別裝在底面直徑IOcm高12cm的培養(yǎng)瓶中。接著，將蛭石倒入培養(yǎng)瓶中至覆蓋木塊，加少量水使木塊及蛭石濕潤(rùn)，蓋上瓶蓋，置于高壓蒸汽式滅菌器中，在121°C滅菌60分鐘。
[0095]夾取木塊放入菌懸液中沾上菌絲或孢子后，放入一并經(jīng)過(guò)消毒的蛭石中，并將成團(tuán)的菌絲體夾取置于木塊表面，所夾菌絲體積與木塊體積的比值約為0.1:1。在28°C ±2°C下黑暗培養(yǎng)4周。最后，將木塊刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率9%，得菌紋木。
[0096](2)結(jié)果觀察。
[0097]侵染深度:取其中10塊木塊劈開(kāi)觀察侵染深度。木塊表面遍布花紋，花紋深入木塊超過(guò)0.09cm。
[0098]花紋的顏色和類(lèi)型:到第4周結(jié)束時(shí)，木塊表面形成玫瑰紅色的不均勻無(wú)規(guī)則的染色，組合成各種抽象花紋狀的圖案。
[0099]實(shí)施例5
—菌紋木表面花紋面積百分率。
[0100]實(shí)驗(yàn)材料:接種后的實(shí)施例2中的菌紋木，接種時(shí)間分別為I周和4周。
[0101]實(shí)驗(yàn)方法:分別將接種后的實(shí)施例2中的接種時(shí)間分別為I周和4周的菌紋木的花紋面，用BenQ Scanner 5560掃描儀在2400分辨率下掃描后，所得圖片以Scion ImageSoftware軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0102]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種I周和4周后菌紋木表面帶線及染色花紋面積百分率分別為63.17% 和 81.02%。
[0103]實(shí)施例6
——菌紋木的質(zhì)量損失率。
[0104]實(shí)驗(yàn)材料:實(shí)施例3中的接種4周后的菌紋木。
[0105]實(shí)驗(yàn)方法:按照GB1931-1991《木材含水率測(cè)定方法》將實(shí)施例3中的接種4周后的菌紋木(未劈開(kāi)的30塊)烘至絕干，用精確到0.001的電子天秤稱(chēng)木塊質(zhì)量，得到菌紋木木塊的絕干質(zhì)量。按下式計(jì)算菌紋木的質(zhì)量損失率。
[0106]質(zhì)量損失率=(接種前木塊絕干質(zhì)量-菌紋木木塊絕干質(zhì)量)接種前木塊絕干質(zhì)量X 100%。
[0107]以30塊木塊的質(zhì)量損失率的平均值為菌紋木平均質(zhì)量損失率。
[0108]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種4周后菌紋木的平均質(zhì)量損失率為2.01%。
[0109]實(shí)施例7
——菌紋木的表面硬度損失率。
[0110]實(shí)驗(yàn)材料:接種后的實(shí)施例4中的菌紋木與同樹(shù)種健康材。
[0111]實(shí)驗(yàn)方法:按照GB/T 1941-2009《木材硬度試驗(yàn)方法》對(duì)未處理的西南榿木健康材及實(shí)施例4所得的菌紋木(未劈開(kāi)的30塊)進(jìn)行表面硬度測(cè)試。按下式計(jì)算菌紋木的平均表面硬度損失率。
[0112]平均表面硬度損失率=(未處理健康材表面硬度平均值-菌紋木表面硬度平均值)+未處理健康材表面硬度平均值X100%。
[0113]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種4周后菌紋木的平均表面硬度損失率為5.24%。
[0114]實(shí)施例8——菌紋木的順紋抗壓強(qiáng)度損失率。
[0115]實(shí)驗(yàn)材料:實(shí)施例6中的菌紋木和同樹(shù)種健康材。
[0116]實(shí)驗(yàn)方法:將實(shí)施例6中的菌紋木(共計(jì)30塊)和未處理的西南榿木健康材按照GB1931-1991《木材含水率測(cè)定方法》將木塊烘至絕干。然后參照GB 1935-2009-T《木材順紋抗壓強(qiáng)度試驗(yàn)方法》，測(cè)定木塊的順紋抗壓強(qiáng)度。按下式計(jì)算菌紋木的平均順紋抗壓強(qiáng)度損失率。
[0117]平均順紋抗壓強(qiáng)度損失率=(未處理健康材順紋抗壓強(qiáng)度平均值-菌紋木順紋抗壓強(qiáng)度平均值)+未處理健康材順紋抗壓強(qiáng)度平均值X100%。
[0118]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:接種4周后菌紋木的平均順紋抗壓強(qiáng)度損失率為6.39%。
[0119]實(shí)施例9
——菌紋木微觀結(jié)構(gòu)觀察。
[0120]實(shí)驗(yàn)材料:實(shí)施例2中接種4周的菌紋木。
[0121]實(shí)驗(yàn)方法:將接種后的實(shí)施例2中的菌紋木鋸成0.6cmX0.6cmX0.6cm的立方體，立方體至少一個(gè)表面含有花紋，置于恒溫水浴鍋中在80°C ±5°C水煮至木塊下沉。以切片機(jī)削平含花紋的表面，在真空裝置中對(duì)含花紋的表面及其垂直面實(shí)施噴金，置于掃描電鏡下觀察拍照。
[0122]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:菌絲體分布于菌紋木形成染色花紋的區(qū)域，染色花紋附近有少量菌絲，距花紋0.2cm外無(wú)菌絲分布；從 菌絲體分布情況來(lái)看，菌絲體主要位于西南榿木的細(xì)胞腔中，通過(guò)細(xì)胞壁上的紋孔出入細(xì)胞腔，而西南榿木的各類(lèi)細(xì)胞壁，尤其是木纖維的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整，與無(wú)菌絲體分布區(qū)域未有明顯差別。由于西南榿木的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整無(wú)損，其木材的物理力學(xué)性質(zhì)受到的影響極其輕微，與健康材幾無(wú)差別。
【權(quán)利要求】
1.一株叢赤殼屬真菌菌株(AfectriaJ12WU,已于2012年4月6日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC，地址為:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100080)，其保藏編號(hào)為CGMCC No:5963。
2.如權(quán)利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株能夠在木質(zhì)基材料表面形成枚紅色、大紅色、暗紅色、棕紅色的帶狀、塊狀、團(tuán)狀、點(diǎn)狀花紋中任一種或幾種。
3.如權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的菌株，其特征在于，所述菌株在接種到木質(zhì)基材料后的第I周即能在木質(zhì)基材料的表面產(chǎn)生彩色的染色花紋。
4.如權(quán)利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株是通過(guò)下述具體步驟獲得的: A、標(biāo)本采集:在腐朽樹(shù)樁、倒木或枯枝中，采集具有彩色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆茫? B、菌株分離與篩選:將采集的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體破碎、消毒后，置于富集培養(yǎng)基中在22~30°C黑暗中靜置培養(yǎng)疒15天至長(zhǎng)出菌絲；富集培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種； 然后將向四周周?chē)l(fā)散狀、疏松的絲狀、大紅色、邊緣平整、甚至形成粘液狀鮮黃色分生孢子的菌落挑取，接種至增殖培養(yǎng)基中在22~3(TC黑暗中靜置培養(yǎng)5~12天至菌落長(zhǎng)出；增殖培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種； C、菌種保存:挑取增殖培養(yǎng)基中生長(zhǎng)旺盛者接種至保存培養(yǎng)基中，在22~3(TC黑暗中靜置培養(yǎng)5~12天，然后于4°C冰箱中凍存；保存培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種。`
5.如權(quán)利要求4所述的菌株，其特征在于，步驟A所述的標(biāo)本采集是在溫暖潮濕的闊葉林、針葉林或針闊葉混交林中進(jìn)行。
6.如權(quán)利要求4或5任一項(xiàng)所述的菌株，其特征在于，步驟A所述的標(biāo)本采集優(yōu)選在優(yōu)選在楊柳科楊屬、樺木科棺屬、樺木屬、松科松屬、薔薇科樓桃屬、木棉科輕木屬或殼斗科櫟木屬樹(shù)種的腐朽樹(shù)樁、倒木或枯枝中，采集具有彩色的線狀、帶狀、塊狀、團(tuán)狀或點(diǎn)狀花紋中的任一種或幾種的木質(zhì)基材料組織，連帶其上面生長(zhǎng)的真菌子實(shí)體，保存?zhèn)溆谩?br> 7.一種用權(quán)利要求1所述的叢赤殼屬真菌(Afectria rigit/iyscy/a) J12WU制備菌紋木的方法，包括菌株活化與擴(kuò)繁、接菌培養(yǎng)工序，其特征在于，包括以下具體步驟: A、菌株活化與擴(kuò)繁:將叢赤殼屬真菌菌株(Afectriarigidiuscula ) J12WU接種到活化及擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，在22~3(TC下培養(yǎng)7~15天，得活化與擴(kuò)繁菌株；活化及擴(kuò)繁培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基、PDA液態(tài)培養(yǎng)基、MA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基中的任一種； B、接菌培養(yǎng):將待接種的木質(zhì)基材料滅菌后，與活化及擴(kuò)繁菌株充分接觸，在22~3(TC下培養(yǎng)I周或以上，即得菌紋木。
8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，還可以包括后處理步驟，將接菌培養(yǎng)后得到的菌紋木刮去表面的菌絲，洗凈后干燥至含水率8~10%。
9.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化菌株充分接觸，在固體接菌時(shí)是將含有菌落的培養(yǎng)基切成與待接種木質(zhì)基材料大小、形狀相近的菌塊，將至少一塊菌塊貼在木質(zhì)基材料表面。
10.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟B所述的將待接種的木質(zhì)基材料與活化菌株充分接觸，在液體接菌時(shí)，是將待接種的木質(zhì)基材料浸入含有菌落的培養(yǎng)液中，且/或?qū)⒊蓤F(tuán)的菌絲體夾 取置于木質(zhì)基材料的表面或附近。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK103525707SQ201310428219
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年9月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月19日
【發(fā)明者】伍建榕, 何海珊, 邱堅(jiān), 羅蓓, 伍建玲, 甘昌濤 申請(qǐng)人:西南林業(yè)大學(xué)