金花茶葉活性部位，其制備方法及其用途
【專利摘要】公開了金花茶葉活性部位，其制備方法及其用途。制備方法包括：A.浸潤(rùn)：取金花茶葉粗粉，用5倍(V/W)30％或以上濃度的醇溶液浸泡過夜；B.提?。河门c步驟A中相同濃度的醇溶液對(duì)A步驟中的金花茶葉粗粉加熱回流提取2次或2次以上，醇溶液用量為金花茶葉粗粉的10～40倍(V/W)，每次提取時(shí)間為1～4小時(shí)，過濾，合并提取液，減壓濃縮，回收溶劑，得粗提液，過濾，取濾液，得藥液比重為1.05～1.25；C.大孔吸附樹脂處理：取B步驟中的濾液，經(jīng)大孔樹脂柱色譜分離，依次用10倍柱體積的10％、30％、80％、95％乙醇水洗脫，分別收集各洗脫部分，將80％乙醇水洗脫部分減壓蒸餾；所述大孔樹脂選自AB-8、D101、D201、D140、D141A、D301、D401、HP20和HPD-100；D.干燥：將C步驟獲得的80％乙醇部分冷凍干燥，即得。
【專利說明】金花茶葉活性部位，其制備方法及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥活性部位，其制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002]a-糖苷酶在食物的吸收過程中起著重要作用，食物必須與這種酶結(jié)合才能被消化吸收而使血糖升高。a_糖苷酶抑制劑是目前廣泛應(yīng)用的一類新型口服降糖藥，臨床常用的有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇，其作用部位在小腸上段，通過可逆性地抑制腸系膜刷狀緣的a_糖苷酶，延緩a_糖苷酶將多糖(如淀粉、寡糖等)分解為葡萄糖，從而減慢葡萄糖的吸收速度，降低餐后血糖。阿卡波糖主要抑制a-淀粉酶，作用于大分子多糖的消化過程；伏格列波糖和米格列醇選擇性地抑制雙糖水解酶(麥芽糖酶、蔗糖酶)，使雙糖分解為單糖的過程受阻。由于這種抑制作用是可逆的(a-糖苷酶抑制劑與a-糖苷酶結(jié)合數(shù)小時(shí)后又自行解離)，所以碳水化合物向葡萄糖的轉(zhuǎn)化僅僅是推遲，而不是完全阻斷。a-糖苷酶抑制劑對(duì)空腹血糖無直接作用，但可通過延緩腸道內(nèi)糖的消化和吸收，降低餐后高血糖，減輕葡萄糖的毒性作用，改善胰島素抵抗，進(jìn)而使患者的空腹血糖也得到一定程度的改善。
[0003]臨床上仍然亟需新的a_糖苷酶抑制劑，作為治療糖尿病的藥物。
[0004]廣西是金花茶(Camellia nitidissima chi)植物的現(xiàn)代地理分布中心,被譽(yù)為金花茶的故鄉(xiāng)。金花茶來源于山茶科(Theaceae)山茶屬植物,是茶花家族中唯一花瓣是金黃色的珍稀物種，被列為國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)植物，在國(guó)際上享有“植物界大熊貓”和“茶族皇后”之美譽(yù)。目前金花茶已成功大面積栽培，以金花茶葉為原料開發(fā)的功能保健品，已遠(yuǎn)銷全國(guó)各地。但尚未有關(guān)于其降血糖和抑制a-糖苷酶活性的研究報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明人經(jīng)過廣泛研究，發(fā)現(xiàn)在用含水乙醇提取金花茶葉后再用大孔吸附樹脂處理而獲得的80%乙醇水洗脫部分對(duì)a-糖苷酶具有良好的抑制作用，因而提出本發(fā)明。
[0006]本申請(qǐng)的一實(shí)施方案提供了金花茶活性部位的制備方法，其包括如下步驟:
[0007]A.浸潤(rùn):取金花茶葉粗粉，用5倍(V/W) 30%或以上濃度的醇溶液浸泡過夜；
[0008]B.提取:用與步驟A中相同濃度的醇溶液對(duì)A步驟中的金花茶葉粗粉加熱回流提取2次或2次以上，醇溶液用量為金花茶葉粗粉的10~40倍(V/W)，每次提取時(shí)間為I~4小時(shí)，過濾，合并提取液，回收溶劑，得粗提液，過濾，取濾液，得藥液比重為1.05~1.25 ；
[0009]C.大孔吸附樹脂處理:將所述濃縮膏用水混懸，經(jīng)大孔樹脂柱色譜分離，依次用10倍柱體積的10 %、30 %、80 %、95 %乙醇水洗脫，分別收集各洗脫物，將80 %乙醇水洗脫部分減壓蒸餾；所述大孔樹脂選自AB-8、DlOl、D201、D140、D141A、D301、D401、HP20和HPD-100 ；
[0010]D.干燥:將C步驟獲得的80%乙醇部分冷凍干燥，即得。
[0011]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了采用上述制備方法制備的金花茶葉活性部位。
[0012]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了藥物組合物，其包含本申請(qǐng)的金花茶葉活性部位。[0013]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了保健品，其包含本申請(qǐng)的金花茶葉活性部位。
[0014]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了化妝品，其包含本申請(qǐng)的金花茶葉活性部位。
[0015]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了上述金花茶葉活性部位在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。該藥物可以制備成滴丸、片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑或貼膏。
[0016]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了上述金花茶葉活性部位在制備保健品中的用途。
[0017]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了上述金花茶葉活性部位在制備化妝品中的用途。
【具體實(shí)施方式】
[0018]本申請(qǐng)的一實(shí)施方案提供了金花茶葉活性部位的制備方法，其包括如下步驟:
[0019]A.浸潤(rùn):取金花茶葉粗粉，用5倍(V/W) 30%或以上濃度的醇溶液浸泡過夜；
[0020]B.提取:用與步驟A中相同濃度的醇溶液對(duì)A步驟中的金花茶葉粗粉加熱回流提取2次或2次以上，醇溶液用量為金花茶葉粗粉的10~40倍(V/W)，每次提取時(shí)間為I~4小時(shí)，過濾，合并提取液，回收溶劑，得粗提液，過濾，取濾液，得藥液比重為1.05~1.25 ；
[0021]C.大孔吸附樹脂處理:將所述濃縮膏用水混懸，經(jīng)大孔樹脂柱色譜分離，依次用10柱體積的10%、30(%、80(%、95(%乙醇水洗脫，分別收集各洗脫物，將80(%乙醇水洗脫部分減壓蒸餾；所述 大孔樹脂選自AB-8、DlOl、D201、D140、D141A、D301、D401、HP20和HPD-100 ；
[0022]D.干燥:將C步驟獲得的80%乙醇部分冷凍干燥，即得。
[0023]在某些實(shí)施方案中，所述醇選自甲醇、乙醇、丙醇或其混合物。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述醇為乙醇。
[0024]在某些實(shí)施方案中，可用慢速滲漉或超聲波提取替代回流提取。
[0025]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了采用上述制備方法制備的金花茶葉活性部位。
[0026]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了藥物組合物，其包含本申請(qǐng)的金花茶葉活性部位。
[0027]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了保健品，其包含本申請(qǐng)的金花茶葉活性部位。
[0028]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了化妝品，其包含本申請(qǐng)的金花茶葉活性部位。
[0029]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了上述金花茶葉活性部位在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。該藥物可以制備成滴丸、片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑或貼膏。
[0030]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了上述金花茶葉活性部位在制備用于抑制a_糖苷酶的藥物中的用途。該藥物可以制備成滴丸、片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、合劑或貼膏。
[0031]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了上述金花茶葉活性部位在制備保健品中的用途。
[0032]本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案提供了上述金花茶葉活性部位在制備化妝品中的用涂。
[0033]實(shí)施例
[0034]實(shí)施例1金花茶活性部位的制備
[0035]金花茶葉粗粉1000g，5倍70 %乙醇浸泡過夜，加熱回流提取3次，第一次3h，第二、三次分別為2.5h，合并提取液，回收溶劑，得粗提液，過濾，取濾液，得藥液比重為
1.05~1.25，將所得濾液經(jīng)DlOl大孔樹脂柱色譜分離，依次用10柱體積的10%、30%、80%,95%乙醇水洗脫，分別收集各洗脫物，將80%乙醇水洗脫部分回收溶劑，冷凍干燥，得80%乙醇部位。
[0036]實(shí)施例2藥理活性試驗(yàn)[0037]I)試劑
[0038]a-糖苷酶(a-glucosidase, EC3.2.1.20) ,4-硝基苯-a_D_ 吡喃葡萄糖苷(4_Ntrophenyl-a-D-glucopyranoside, PNPG, 026K1516),阿卡波糖(Acarbose, Lotl6869,陽性對(duì)照)和DMSO均購(gòu)自Sigma公司，牛血清白蛋白(5組分)(BSA)購(gòu)自Solarb1有限公司。
[0039]2)試驗(yàn)方法
[0040]按稍改良的方法[1]在96孔板上進(jìn)行,用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(UVmax Thermo ScientificMultiskan Go)于405nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A值。
[0041]3)數(shù)據(jù)分析
[0042]按照抑制率[1_ (樣品A試驗(yàn)組-樣品Ag白組)/ (對(duì)照A試驗(yàn)組-對(duì)照Ag白組)]X 100 %計(jì)算抑制率，并用0riginPro7.5SR1軟件計(jì)算半數(shù)抑制率濃度(IC5tl)值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差(I土 S) (η = 4)表示。
[0043]試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
[0044]表1金花茶葉活性部位和阿卡波糖抑制a_糖苷酶的IC5tl值
【權(quán)利要求】
1.金花茶葉活性部位的制備方法，其包括如下步驟: A.浸潤(rùn):取金花茶葉粗粉，用5倍(V/W)30%或以上濃度的醇溶液浸泡過夜； B.提取:用與步驟A中相同濃度的醇溶液對(duì)A步驟中的金花茶葉粗粉加熱回流提取2次或2次以上，醇溶液用量為金花茶葉粗粉的10~40倍(V/W)，每次提取時(shí)間為I~4小時(shí)，過濾，合并提取液，回收溶劑，得粗提液，過濾，取濾液，得藥液比重為1.05~1.25 ； C.大孔吸附樹脂處理:將所述濃縮膏用水混懸，經(jīng)大孔樹脂柱色譜分離，依次用10倍柱體積的10 %、30 %、80 %、95 %乙醇水洗脫，分別收集各洗脫物,將80 %乙醇水洗脫部分減壓蒸餾；所述大孔樹脂選自 AB-8、D101、D201、D140、D141A、D301、D401、HP20 和 HPD-100 ； D.干燥:將C步驟獲得的80%乙醇部分冷凍干燥，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述醇選自甲醇、乙醇、丙醇或其混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步驟B中，用慢速滲漉或超聲波提取替代回流提取。
4.金花茶葉活性部位，其按照權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的方法制備。
5.藥物組合物,其包含權(quán)利要求4所述的金花茶葉活性部位。
6.保健品，其包含權(quán)利要求4所述的金花茶葉活性部位。
7.化妝品,其包含權(quán)利要求4所述的金花茶葉活性部位。
8.權(quán)利要求4所述的金花茶葉活性部位在制備用于治療糖尿病的藥物中的用途。
9.權(quán)利要求8所述的用途，其中所述藥物被制備成滴丸、片劑、膠囊劑、顆粒劑或合劑。
10.權(quán)利要求4所述的金花茶葉活性部位在制備保健品中的用途。
11.權(quán)利要求4所述的金花茶葉活性部位在制備化妝品中的用途。
【文檔編號(hào)】A23L1/29GK104027477SQ201310070480
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2013年3月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月6日
【發(fā)明者】馮潔, 賴茂祥 申請(qǐng)人:廣西醫(yī)科大學(xué)