一種利用its序列鑒定黃芪及其混偽品的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用ITS序列鑒定黃芪及其混偽品的方法。包括以下步驟：1）中藥黃芪及其混偽品總DNA的提取；2）以步驟1）中提取的DNA為模板，使用SEQ?ID?NO1和2所示引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；3）PCR產(chǎn)物直接測(cè)序；4）序列拼接、對(duì)比，建立NJ樹，鑒別中藥黃芪及其混偽品。本發(fā)明首次運(yùn)用ITS序列鑒別中藥黃芪及其混偽品，該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果顯著、實(shí)用性強(qiáng)，可以快速、準(zhǔn)確的鑒別開中黃芪及其混偽品，適于廣泛推廣應(yīng)用。
【專利說明】—種利用ITS序列鑒定黃芪及其混偽品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥材來源品種鑒定【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地，涉及一種利用ITS序列鑒定黃芪及其混偽品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃芪是我國(guó)常用大眾藥材之一，2010版藥典收錄記載，為豆科植物蒙古黃芪(Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.var.mongholicus (Bge.) Hsiao)或膜英黃苗(Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.)的干燥根，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)，固表止汗,利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌的功效。現(xiàn)代藥理研究表明，中藥黃芪對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、抗菌、抗病毒、保肝、利尿等都有很好的作用。
[0003]黃芪屬品種繁多，資源分布廣泛，且2010版藥典收錄的中藥黃芪來源蒙古黃芪和膜莢黃芪為國(guó)家三級(jí)保護(hù)植物，屬漸危種，雖然近幾年中藥種植面積逐漸增加，仍有供不應(yīng)求的狀況發(fā)生。市場(chǎng)上關(guān)于黃芪的偽品，主要有華黃芪、土黃芪、紫花苜蓿、斜莖黃芪等，部分偽品含有生物堿等，誤服后果嚴(yán)重。中藥黃芪及其混偽品的鑒別對(duì)植物資源保護(hù)及藥用植物安全合理利用都具有重要的意義。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，分子鑒定方法也越來越多的應(yīng)用到中藥材的鑒別上。條形碼技術(shù)作為一種熱門、前沿的分子鑒定技術(shù)，在中藥材鑒定中得到廣泛的應(yīng)用。本發(fā)明以ITS序列為條形碼，運(yùn)用生物信息學(xué)的方法準(zhǔn)確鑒別中藥黃芪及其混偽品，為條形碼技術(shù)在中藥鑒定中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是提供一種利用ITS序列鑒別中藥黃芪及其混偽品的分子鑒定方法。
[0005]具體步驟如下:1)中藥黃芪及其混偽品總DNA的提取；2)以步驟I)中提取的DNA為模板，使用ITS4R和ITS5F引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；3) PCR產(chǎn)物直接測(cè)序；4)序列拼接、對(duì)t:匕，建立Neighbor Joining Tree (NJ樹)，鑒別中藥黃苗及其混偽品。
[0006]其中，PCR反應(yīng)體系以25 μ I計(jì)為:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.一種鑒定黃芪及其混偽品的方法，包括以下步驟: 1)提取中藥黃芪及其混偽品的總DNA；2)以步驟I)中提取的DNA為模板，使用SEQID N0.1和2所示引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)； 3)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序； 4)序列拼接、對(duì)比，建立NJ樹，鑒別中藥黃芪及其混偽品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)體系以25ul計(jì)為:
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)條件為:94°C5min ；94°Clmin、50oC lmin、72DC 1.5min+3s/cycle,30cycles:72°C 7min。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述方法在鑒定黃芪及其混偽品中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104004819SQ201310060411
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2013年2月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月26日
【發(fā)明者】黃林芳, 林余霖, 鄭司浩, 陳士林 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所