異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛、和幻痛的治療的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及Cometin在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法中的用途。在一個優(yōu)選的實施方案，要治療的病癥是熱量異常性疼痛和熱量痛覺過敏。Cometin多肽可以作為多肽或通過施用用于表達(dá)Cometin的表達(dá)載體、用所述載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞系和包含所述細(xì)胞的膠囊投遞。
【專利說明】異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛、和幻痛的治療 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及Cometin在治療異常性疼痛（allodynia)、痛覺過敏（hyperalgesia)、 自發(fā)性疼痛（spontaneous pain)和/或幻痛（phantom pain)的方法中的用途。在一個 優(yōu)選的實施方案，要治療的病癥是熱量異常性疼痛（thermal allodynia)和熱量痛覺過敏 (thermal hyperalgesia)。優(yōu)選地，在診斷為患有痛性糖尿病神經(jīng)病變（painful diabetic neuropathy)、皰疫后神經(jīng)痛（post-herpatic neuralgia)或坐骨神經(jīng)痛（sciatica)的受 試者中治療異常性疼痛和/或痛覺過敏。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 用于治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和幻痛的許多療法的探索已經(jīng)獲得 不同程度的成功，包括非類固醇消炎藥（NSAID)、阿片樣物質(zhì)（opioids)、抗驚厥藥、抗心 律不齊藥（anti-arrhythmics)、三環(huán)抗抑郁劑（tricyclic antidepressant)和表面藥劑 (topical agent)。備選方法包括麻醉劑阻斷、類固醇的硬膜外施用和神經(jīng)外科損傷。然 而，目前所有療法在大多數(shù)患者中具有適度的功效，且是減輕的而非治愈的，并且其副作用 代表重大的限制。
[0004] 因此，對有效治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和幻痛（優(yōu)選地在僅有不影 響患者一般健康的微小副作用的情況下）的療法具有高度未滿足的需要。
[0005] 具有神經(jīng)營養(yǎng)性生長因子Cometin序列的多肽先前已經(jīng)記載于 W093/22437 (Innogenetics)。提出了蛋白質(zhì)或其拮抗劑可以用作抗腫瘤化合物，或消炎化 合物或者用作T細(xì)胞和B細(xì)胞的生長激活劑，用作骨修復(fù)化合物，作為免疫抑制細(xì)胞的誘導(dǎo) 物，用作抗集落刺激因子的抑制劑；或用作殺錐蟲劑（trypanocidal agent)。
[0006] W001/039786(Innogenetics)披露了命名為抑制性巨噬細(xì)胞活化因子（SMAF)的 多肽的特定用途，其中SMAF-1與Cometin是100%相同的。具體地，公開了 SMAF-1和/或 SMAF-2調(diào)控Thl、Th2和/或Th3細(xì)胞因子的生成，并且指示SMAF-1分子如何可以用于治 療由1型、2型和/或3型應(yīng)答介導(dǎo)的疾病，諸如炎癥、感染、變態(tài)反應(yīng)、自身免疫性疾病、移 植物排斥、移植物抗宿主疾病、惡性（malignancy)和涉及粘膜免疫的疾病。
[0007] W02010/009732(NsGene)描述了 Cometin (在名稱 Meteorin 樣或 METRNL 下）作為 對背根神經(jīng)節(jié)外植體中的神經(jīng)突長出，對室下區(qū)外植體中的成神經(jīng)細(xì)胞遷移具有影響及在 聽力損失的動物模型中具有效應(yīng)的神經(jīng)營養(yǎng)性生長因子。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 本發(fā)明提供了用于治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和幻痛的方法。該方法 使用Cometin蛋白、編碼Cometin的核苷酸序列、包含編碼Cometin的核苷酸序列的表達(dá)載 體、用編碼Cometin的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞系、或投遞分泌性Cometin的生物相容性 月父囊。
[0010] 如此，在第一方面，本發(fā)明涉及一種在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/ 或幻痛的方法中使用的分離的多肽，所述多肽包含選自下組的氨基酸序列：
[0011] i. SEQ ID N0:7的氨基酸序列；
[0012] ii.SEQ ID NO:7的氨基酸序列的生物學(xué)活性序列變體，其中所述變體與SEQ ID N07具有至少70 %序列同一性；和
[0013] iii. a)或b)的至少50個連續(xù)氨基酸的生物學(xué)活性片段，其中所述片段與SEQ ID N0:7是至少70%相同的。
[0014] 發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了 Cometin能夠在熱量異常性疼痛和機(jī)械性異常性疼痛兩者的 動物模型中減輕超敏感性。重要地，動物在實驗持續(xù)時間里不經(jīng)歷任何重量減輕或毒性體 征，并且沒有觀察到疼痛副作用。
[0015] 在別的方面，本發(fā)明涉及在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的 方法中使用的分離的核酸分子，所述核酸分子包含編碼多肽的核酸序列，所述多肽包含選 自下組的氨基酸序列：
[0016] i. SEQ ID N0:7的氨基酸序列；
[0017] ii.SEQ ID N0:7的氨基酸序列的生物學(xué)活性序列變體，其中所述變體與SEQ ID N07具有至少70 %序列同一性；和
[0018] iii. a)或b)的至少50個連續(xù)氨基酸的生物學(xué)活性片段，其中所述片段與SEQ ID N0:7是至少70%相同的。
[0019] 在別的方面，本發(fā)明涉及在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的 方法中使用的包含本發(fā)明的核酸分子的表達(dá)載體。
[0020] 在又一個方面，本發(fā)明涉及在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛 的方法中使用的包含依照本發(fā)明的表達(dá)載體的分離的宿主細(xì)胞。具體地，本發(fā)明涉及可用 于基于細(xì)胞的療法的宿主細(xì)胞；在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方 法中使用的基于裸細(xì)胞的療法或包囊細(xì)胞療法。
[0021] 在又一個方面，本發(fā)明涉及在通過對受試者投遞分泌性生物學(xué)活性Cometin來治 療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法中使用的可植入生物相容性膠囊， 所述膠囊包含 ：
[0022] i.生物學(xué)相容性外膜和內(nèi)部核心，
[0023] ii.所述內(nèi)部核心包含依照本發(fā)明的細(xì)胞。
[0024] 在別的方面，本發(fā)明涉及在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的 方法中使用的組合物，該組合物包含：
[0025] i.依照本發(fā)明的分離的多肽；或
[0026] ii.依照本發(fā)明的分離的核酸；或
[0027] iii.依照本發(fā)明的表達(dá)載體；或
[0028] iv.依照本發(fā)明的細(xì)胞系；或
[0029] V.依照本發(fā)明的可植入生物相容性膠囊。
[0030] 在別的方面，本發(fā)明涉及在受試者中治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/ 或幻痛的方法，其包括對有此需要的所述受試者施用治療有效量的依照本發(fā)明的Cometin 多肽。
[0031] 附圖簡述
[0032] 圖注
[0033] 圖1 :人、小鼠和大鼠 Cometin蛋白（SEQ ID N02,4,和6)的比對。預(yù)測的信號 肽為粗體。使用 CLUSTAL W(l. 7) (Thompson, J. D.，Higgins, D. G. and Gibson, T. J. (1994) CLUSTAL ff:improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, positions-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids Research, 22:4673-4680.)進(jìn)行比對。BL0SUM62 用作評分矩陣。
[0034] 序列 開始 結(jié)束 匹配 非匹配％匹配 hCometin I 311 mCometin 1 311 241 70 77 rCometin 1 311 243 68 78
[0035] 圖2 :人、小鼠和大鼠 Cometin(SEQ ID N02,4,和6)和人、小鼠和大鼠 Meteorin(SEQ ID N023,24,和25)的比對。信號肽為粗體。保守Cys殘基為框示。使用 Clustal W(l. 7)進(jìn)行比對。
[0036] 序列 開始 餘束 匹配 非^配％匹配 hCometin 1 311 mCometin 1 311 241 70 77 rCometin 1 311 243 68 78 hMETRN 1 293 138 185 42 mMETRN 1 291 139 187 43 rMETRN 1 291 140 186 43
[0037] 圖 3 :人（NP_001004431. 1 ;SEQ ID N02)、小鼠（NP_659046. 1 ;SEQ ID N04)、 大鼠（NP_001014126;SEQ ID N06)、牛（XP_614019.3;SEQ ID N019)、雞（CR352488; SEQ ID N020)、熱帶爪蟾（xenopus tropicalis)(BX757299.1;SEQ ID N021)和斑馬魚 (NP_998150. 1;SEQ ID N022)Cometin蛋白序列的比對。與人序列相同的保守殘基是有陰 影的，預(yù)測的信號肽為粗體，10個保守的半胱氨酸殘基為框示，且成熟蛋白序列的保守N端 谷氨酰胺（Q)以箭頭標(biāo)記。
[0038] 圖4 :Cometin對坐骨神經(jīng)損傷后機(jī)械刺激的縮足閾值（paw withdrawal threshold)的影響。箭頭標(biāo)示鞘內(nèi)注射的時間點。數(shù)目以平均值土SEM顯示。*p〈0. 05。
[0039] 圖5 :Cometin對坐骨神經(jīng)損傷后對冷刺激的響應(yīng)的影響。箭頭標(biāo)示鞘內(nèi)注射的時 間點。數(shù)目以平均值土SEM顯示。*ρ〈0·05和**ρ〈0·01。
[0040] 圖6 :實驗組中的體重。箭頭標(biāo)示鞘內(nèi)注射的時間點。
[0041] 發(fā)明詳述
[0042] 定義：
[0043] 如本文中使用的，"生物相容性膠囊"意指該膠囊在宿主哺乳動物中植入后不引發(fā) 足以導(dǎo)致膠囊排除或使其變?yōu)椴荒苁中g(shù)（例如經(jīng)由降解實現(xiàn)）的不利宿主應(yīng)答。
[0044] 如本文中使用的，"編碼序列"是轉(zhuǎn)錄并翻譯成多肽的多核苷酸序列。
[0045] 如本文中使用的，"缺失"指氨基酸或核苷酸序列的變化，并且導(dǎo)致一個或多個氨 基酸殘基或核苷酸的缺乏。
[0046] 如本文中使用的，術(shù)語"表達(dá)載體"指能夠指導(dǎo)與其可操作連接的基因表達(dá)的載 體。一般地，在重組DNA技術(shù)中效用的表達(dá)載體經(jīng)常為質(zhì)粒形式。
[0047] 如本文中使用的，"免疫絕緣性（immunoisolatory)膠囊"意指在植入哺乳動物宿 主中后的膠囊使宿主免疫系統(tǒng)對其核心內(nèi)的細(xì)胞的不利影響最小化。
[0048] "哺乳動物啟動子"意指能夠在哺乳動物細(xì)胞中發(fā)揮功能的啟動子。
[0049] 如本文中使用的，Cometin指從任何物種，特別是哺乳動物，包括黑猩猩、牛、綿羊、 豬、鼠、馬，且優(yōu)選人，從任何來源（無論是天然的、合成的、半合成的還是重組的）獲得的具 有基本上純化的Cometin的氨基酸序列的多肽。該術(shù)語還指從這些物種中任一種獲得的 Cometin的生物學(xué)活性片段，及這些的生物學(xué)活性序列變體及進(jìn)行翻譯后修飾的蛋白質(zhì)。
[0050] Cometin的生物學(xué)活性片段可以與野生型Cometin序列在一個或多個位置處，優(yōu) 選在多達(dá)20個位置，更有選多達(dá)10個位置，更優(yōu)選多達(dá)5個位置，諸如1，2, 3,或4個位置 處有所不同。
[0051] 如本文中使用的，生長因子特征限定與那些經(jīng)典的生長因子（其是經(jīng)由受體作用 于靶細(xì)胞以引起靶細(xì)胞中的下列一項或多項應(yīng)答：生長，包括增殖，分化，存活，再生，遷移， 功能恢復(fù)，功能改善）相似的序列相關(guān)特征。
[0052] "序列同一性"：高水平的序列同一性指示第一序列源自第二序列的可能性。氨 基酸序列同一性需要兩個比對序列之間的相同氨基酸序列。如此，與參照序列共享70% 氨基酸同一性的候選序列需要在比對后，候選序列中70 %的氨基酸與參照序列中的相應(yīng) 氨基酸相同?？梢越柚谟嬎銠C(jī)分析，諸如但不限于ClustalW計算機(jī)比對程序（Higgins D. , Thompson J. , Gibson T. , Thompson J. D. , Higgins D. G. , Gibson T. J. , 1994. CLUSTAL ff: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids Res. 22:4673-4680)，及其中提出的缺省參數(shù)測定同一性。ClustalW軟件以 歐洲生物信息學(xué)研究所的ClustalW WWW服務(wù)從http://www. ebi. ac. uk/clustalw可獲得。 使用具有其缺省設(shè)置的此程序，比對詢問和參照多肽的成熟（生物活性）部分。計算完全 保守殘基的數(shù)目，并將其除以參照多肽的長度。這樣做時，在比對和隨后的序列同一性測定 中忽視任何標(biāo)簽或融合蛋白序列，其形成詢問序列的部分。
[0053] ClustalW算法可以類似地用于比對核苷酸序列?？梢砸耘c對氨基酸序列的指示相 似的方式計算序列同一性。
[0054] 用于比較序列的數(shù)學(xué)算法的另一個優(yōu)選的，非限制性例子是Myers和 Miller，CABI0S(1989)的算法。此類算法并入ALIGN程序（第2.0版）中，該ALIGN程序 是FASTA序列比對軟件包（Pearson WR, Methods Mol Biol, 2000, 132:185-219)的一部分。 比對基于全局比對計算序列同一'I"生。AlignO不對序列末端中的缺口罰分。在利用ALIGN og AlignO程序來比較氨基酸序列時，優(yōu)選使用具有缺口打開/延長罰分為-12/-2的 BL0SUM50取代矩陣。
[0055] 本文中使用的術(shù)語"受試者"用于意指可以接受Cometin多肽或多核苷酸，治療性 細(xì)胞或生物相容性膠囊施用的任何哺乳動物。特別意圖用本發(fā)明的方法治療的受試者包括 人，及非人靈長類、綿羊、馬、牛、山羊、豬、犬、貓、兔、豚鼠、倉鼠、沙鼠、大鼠和小鼠，及自這 些宿主衍生或起源的器官、腫瘤和細(xì)胞。
[0056] 如本文中使用的，術(shù)語"基本上純化的"指從其天然環(huán)境取出，分離或分開，且至少 60%沒有，優(yōu)選75%沒有，且最優(yōu)選90%沒有與其天然關(guān)聯(lián)的其它組分的核酸或氨基酸序 列。
[0057] 如本文中使用的，"插入"或"添加"指與天然存在的分子相比分別導(dǎo)致一個或多個 氨基酸殘基或核苷酸的添加的氨基酸或核苷酸序列變化。
[0058] 如本文中使用的，"取代"指將一個或多個氨基酸或核苷酸分別用不同氨基酸或核 苷酸替換。
[0059] "治療/處理"可以以幾種不同方式，包括治愈性、改善性及作為預(yù)防實施。治愈性 治療一般針對治愈已經(jīng)存在治療個體中的臨床狀況（condition)，諸如疾病或感染。改善性 治療一般意指為了改善個體中現(xiàn)有的臨床狀況的治療。預(yù)防性治療一般針對預(yù)防臨床狀況 或降低患上狀況的風(fēng)險或降低狀況的程度。本發(fā)明涉及所有這些類型的治療。
[0060] 如本文中使用的，術(shù)語"載體"指能夠轉(zhuǎn)運已經(jīng)與其連接的另一種核酸的核酸分 子。一類載體是"質(zhì)粒"，其指可以連接有其它DNA區(qū)段的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。在本說明書中， "質(zhì)粒"和"載體"可以互換使用，因為質(zhì)粒是最常使用的載體形式。然而，本發(fā)明意圖包括 發(fā)揮等同功能的此類其它表達(dá)載體形式，諸如病毒載體（例如復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺 病毒和腺伴隨病毒）。
[0061] 異常件疼痛
[0062] 異常性疼痛（意指"其它能"）是一種由于通常不引起疼痛并且可以為熱量或機(jī)械 /觸覺性的刺激所致的疼痛。它是來自通常不導(dǎo)致疼痛感覺的刺激的疼痛，并且可以在對部 位的損傷后發(fā)生。異常性疼痛不同于痛覺過敏和自發(fā)性疼痛，其分別在"痛覺過敏"和"自 發(fā)性疼痛"分節(jié)中描述。異常性疼痛是一類超敏感性。
[0063] 存在有不同種類或類型的異常性疼痛：
[0064] ?機(jī)械性異常性疼痛（又稱為觸覺性異常性疼痛）
[0065] 〇靜態(tài)機(jī)械性異常性疼痛-響應(yīng)光觸覺/壓力的疼痛
[0066] 〇動態(tài)機(jī)械性異常性疼痛-響應(yīng)刷擦（brushing)的疼痛
[0067] ?熱量（熱或冷）異常性疼痛-來自受影響區(qū)域中正常適度皮膚溫度的疼痛
[0068] 異常性疼痛是許多疼痛狀況，諸如神經(jīng)病、復(fù)雜區(qū)域疼痛綜合征（complex regional pain syndrome)、皰疫后神經(jīng)痛、纖維肌痛（fibromyalgia)、和偏頭痛的臨床特 征。異常性疼痛也可以是由用于治療神經(jīng)損傷，包括脊髓損傷的一些干細(xì)胞群體引起的。在 本發(fā)明的一個實施方案中，要治療的異常性疼痛是機(jī)械性/觸覺性異常性疼痛。在本發(fā)明 的另一個實施方案中，要治療的異常性疼痛是熱量異常性疼痛。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實 施方案中，要治療的異常性疼痛是冷異常性疼痛。
[0069] 傷害感受和機(jī)械性感覺中涉及的細(xì)胞類型是造成異常性疼痛的細(xì)胞。在健康個體 中，傷害性感受器感測關(guān)于細(xì)胞應(yīng)激或損傷和皮膚溫度的信息，并將其轉(zhuǎn)送到脊髓。這些神 經(jīng)元的細(xì)胞體處于背根神經(jīng)節(jié)（位于脊髓兩側(cè)的重要結(jié)構(gòu)）中。然后，軸突通過背角以與二 級神經(jīng)元（secondary neuron)產(chǎn)生聯(lián)系。二級神經(jīng)元與脊髓的另一（對側(cè)）側(cè)交叉，并且 達(dá)到丘腦的核。從那里起，經(jīng)由一個或多個神經(jīng)元將信息帶到腦的身體感覺皮層。機(jī)械感 受器遵循相同的一般途徑。然而，它們在脊髓水平不交叉，但是在下髓質(zhì)水平交叉。另外， 它們在與疼痛束在空間上截然不同的束中分組。
[0070] 盡管有此解剖學(xué)分開，機(jī)械感受器可以通過與相同中間神經(jīng)元（其活化可以降低 或完全消除疼痛感覺）形成連接影響傷害性感受器的輸出。另一種調(diào)控疼痛信息傳送的方 式經(jīng)由腦的下行纖維進(jìn)行。這些纖維經(jīng)由不同中間神經(jīng)元起作用以阻斷信息從傷害性感受 器傳送到二級神經(jīng)元。
[0071] 關(guān)于疼痛調(diào)控的這兩種機(jī)制都牽涉異常性疼痛病理學(xué)。幾項研究提出了對脊髓的 損傷可以導(dǎo)致傷害性感受器、機(jī)械感受器和中間神經(jīng)元的損失和重構(gòu)，導(dǎo)致機(jī)械感受器傳 送疼痛信息。不同研究報告了損傷部位的下行纖維的出現(xiàn)。所有這些變化最終影響脊髓內(nèi) 部的線路，并且改變的信號平衡可能導(dǎo)致與異常性疼痛有關(guān)的劇烈疼痛感覺。
[0072] 不同細(xì)胞類型也已經(jīng)與異常性疼痛聯(lián)系起來。例如，存在有如下的報告，即丘腦中 的小膠質(zhì)可以通過改變二級傷害性感受器的特性促成異常性疼痛。相同效果通過募集免疫 系統(tǒng)細(xì)胞諸如單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞在脊髓中實現(xiàn)。
[0073] 如已經(jīng)提及的，存在有調(diào)控疼痛知覺的下行神經(jīng)元。許多這些神經(jīng)元在腦干的核 中起源，并且通過中腦的導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)（PAG)區(qū)。
[0074] 身體擁有其它機(jī)制來控制疼痛：釋放內(nèi)源阿片樣物質(zhì)，尤其是在PAG水平。存在有 如下的神經(jīng)元，其在PAG釋放腦啡肽、內(nèi)啡肽、和強(qiáng)啡肽，并且因此調(diào)控其調(diào)控疼痛感知的 能力。其它神經(jīng)元也可以在疼痛來源處釋放其內(nèi)源阿片樣物質(zhì)。若這點發(fā)生，則疼痛信息 從傷害性感受器至二級神經(jīng)元的傳送被阻斷，并且不感覺疼痛。不幸地，這些內(nèi)源機(jī)制在患 有異常性疼痛的人中經(jīng)常是受損且非功能性的，因此需要應(yīng)用藥物。
[0075] 許多化合物減輕來自異常性疼痛的疼痛。一些對某些類型的異常性疼痛是特異性 的，而其它是一般性的。它們包括非類固醇消炎藥（NSAID)、阿片樣物質(zhì)、和靶向不同離子通 道的化合物。
[0076] 本發(fā)明涉及Cometin用于治療異常性疼痛的用途。優(yōu)選地，要治療的異常性疼痛 是熱量異常性疼痛，甚至更優(yōu)選地，要治療的熱量異常性疼痛是冷異常性疼痛。
[0077] 痛覺討敏
[0078] 痛覺過敏是對通常感到疼痛的刺激的極端響應(yīng)。刺激可以是機(jī)械性/觸覺性或熱 量的。
[0079] 痛覺過敏類似于與神經(jīng)損傷有關(guān)的其它疼痛種類，諸如異常性疼痛，因此可以響 應(yīng)此狀況的標(biāo)準(zhǔn)治療，如"異常性疼痛"分節(jié)中描述的。痛覺過敏也可以表征為一類超敏感 性。
[0080] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及Cometin用于治療痛覺過敏的用途。在一個實施 方案中，要治療的痛覺過敏是機(jī)械性/觸覺性痛覺過敏。在另一個實施方案中，要治療的痛 覺過敏是熱量痛覺過敏，優(yōu)選冷痛覺過敏?？傊?，異常性疼痛和痛覺過敏可以表征為超敏感 性。
[0081] 自發(fā)件疼痛
[0082] 自發(fā)性疼痛的特征在于是在沒有任何觸發(fā)物的情況中發(fā)生的疼痛。自發(fā)性疼痛 的臨床癥狀包括有時與感覺遲鈍和/或感覺異常有關(guān)的釘和針、射擊、燃燒、刺痛和發(fā)作性 (電擊樣）疼痛的感覺。感覺遲鈍定義為不愉快的、異常的觸覺感覺，并且其可以認(rèn)為是一 種自發(fā)發(fā)生的疼痛。感覺異常定義為沒有明顯的長期身體效應(yīng)的受試者皮膚的麻刺感、剌 痛感或麻木感覺。自發(fā)性疼痛似乎可能由傳入途徑中的神經(jīng)元的自發(fā)活性引起。
[0083] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及Comet in用于治療自發(fā)性疼痛的用途。
[0084] 幻痛
[0085] 幻痛感覺描述為與在身體上不作為身體部分的肢或器官相關(guān)的受試者經(jīng)歷的知 覺?；猛锤杏X最常在臂或腿的截肢術(shù)后記錄，但是也可以在除去乳房或內(nèi)部器官后發(fā)生?；?痛感覺在個體間存在變化。幻痛可以作為與運動、觸覺、溫度、壓力和發(fā)癢相關(guān)的感覺經(jīng)歷。
[0086] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及Comet in用于治療幻痛的用途。
[0087] 異常性疼痛和痛覺過敏的原因
[0088] 異常性疼痛、痛覺過敏和一般為超敏感性可以源自多種病癥，其中一些病癥在下 文列出。
[0089]
【權(quán)利要求】
2. 前述權(quán)利要求中任一項的多肽，其中所述多肽與具有SEQ ID N0:7序列的蛋白質(zhì) 具有至少70 %序列同一'I"生，更優(yōu)選至少75%，更優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選 90 %，更優(yōu)選95 %，更優(yōu)選98 %。
3. 前述權(quán)利要求中任一項的多肽，所述多肽是其中描述的變體多肽，其中任何氨基酸 取代是保守取代。
4. 前述權(quán)利要求中任一項的多肽，其包含SEQ ID N07中與在SEQ ID N07中相同的位 置處的保守半胱氨酸。
5. 依照前述權(quán)利要求中任一項的多肽，其中所述多肽能夠形成至少一個分子內(nèi)半胱氨 酸橋。
6. 依照前述權(quán)利要求中任一項的多肽，其中所述多肽在治療異常性疼痛和/或痛覺過 敏的方法中使用。
7. -種在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法中使用的分離 的核酸分子，所述核酸分子包含編碼多肽的核酸序列，所述多肽包含選自下組的氨基酸序 列： i. SEQ ID NO:7的氨基酸序列； ii. SEQ ID N0:7的氨基酸序列的生物學(xué)活性序列變體，其中所述變體與SEQ ID N07具 有至少70 %序列同一性；和 iii. a)或b)的至少50個連續(xù)氨基酸的生物學(xué)活性片段，其中所述片段與SEQ ID N0:7 是至少70%相同的。
8. 權(quán)利要求7的核酸分子，其中編碼的多肽與SEQ ID NO: 7的序列具有至少70%序列 同一性，更優(yōu)選至少75 %，更優(yōu)選至少80 %，更優(yōu)選至少85 %，更優(yōu)選90 %，更優(yōu)選95 %，更 優(yōu)選98%。
9. 權(quán)利要求7至8中任一項的核酸分子，其中所述核酸分子包含選自下組的核苷酸序 列： i. 選自由SEQ ID NO: 1、13和16組成的組的核苷酸序列； ii. 與選自由SEQ ID N0:l、13和16組成的組的核苷酸序列具有至少70%序列同一性 的核苷酸序列；和 iii. 選自由SEQ ID NO: 1、13和16組成的組的序列的至少150個連續(xù)核苷酸的核酸序 列。
10. 依照權(quán)利要求7-9的核酸分子，其中所述核酸分子在治療異常性疼痛和/或痛覺過 敏的方法中使用。 II. 一種在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法中使用的表達(dá)載 體，其包含權(quán)利要求7-10中任一項的核酸分子。
12. 權(quán)利要求11的載體，其進(jìn)一步包含與所述核酸分子可操作連接的啟動子，優(yōu)選 地其中所述啟動子是組成性啟動子，諸如其中所述組成性啟動子選自下組：CAG、CMV、人 UbiC、JeT、RSV、EF-lalpha、SV40、和 Mtl。
13. 權(quán)利要求16的載體，其中所述啟動子是誘導(dǎo)型啟動子，諸如其中所述誘導(dǎo)型啟動 子選自下組：了6卜〇11、了6卜(^廠]\1〇-]\0^-1^1?、]\^1、孕酮、冊486、雷怕霉素〇^^11^(^11)誘導(dǎo) 型啟動子。
14. 權(quán)利要求11至13中任一項的載體，其中所述載體選自下組：α病毒 (alphavirus)、腺病毒（adenovirus)、腺伴隨病毒（adeno associated virus)、桿狀病 毒（baculovirus)、HSV、冠狀病毒（coronavirus)、牛乳頭狀瘤病毒（Bovine papilloma virus)、和Mo-MLV，優(yōu)選腺伴隨病毒。
15. 依照權(quán)利要求11至14的載體，其中所述載體在治療異常性疼痛和/或痛覺過敏的 方法中使用。
16. -種在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法中使用的分離的 細(xì)胞系，其用權(quán)利要求11至15的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)。
17. 依照權(quán)利要求18的細(xì)胞系，其中所述細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞，更優(yōu)選靈長類細(xì)胞，更 優(yōu)選人細(xì)胞。
18. 權(quán)利要求17的細(xì)胞系，其中所述細(xì)胞系選自下組：永生化視網(wǎng)膜色素性上皮細(xì)胞、 永生化人成纖維細(xì)胞和永生化人星形膠質(zhì)細(xì)胞，優(yōu)選地其中所述細(xì)胞系是ARPE-19細(xì)胞。
19. 權(quán)利要求17的細(xì)胞系，其中所述細(xì)胞系選自下組：干細(xì)胞，包括人神經(jīng)干細(xì)胞或前 體細(xì)胞、人神經(jīng)膠質(zhì)干細(xì)胞或前體細(xì)胞、和胎兒干細(xì)胞。
20. 權(quán)利要求17至19中任一項的細(xì)胞系，其尚未從人胚胎衍生。
21. -種在通過對受試者投遞分泌性生物學(xué)活性Cometin來治療異常性疼痛、痛覺過 敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法中使用的可植入生物相容性膠囊，所述膠囊包含： i. 生物學(xué)相容性外膜和內(nèi)部核心， ii. 所述內(nèi)部核心包含依照權(quán)利要求16至20中任一項的細(xì)胞。
22. 權(quán)利要求21的膠囊，其中所述生物相容性膜是容許所述化合物通過的半透性外 膜。
23. 權(quán)利要求21至22的膠囊，其中所述內(nèi)部核心包含基質(zhì)。
24. -種在治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法中使用的組合 物，所述組合物包含： i. 依照權(quán)利要求1-6中任一項的分離的多肽；或 ii. 依照權(quán)利要求7-10中任一項的分離的核酸；或 iii. 依照權(quán)利要求11至15中任一項的表達(dá)載體；或 iv. 依照權(quán)利要求16至20中任一項的細(xì)胞系；或 v. 依照權(quán)利要求21至23中任一項的可植入生物相容性膠囊。
25. 依照權(quán)利要求24的組合物，其中所述組合物是藥物，并且包含藥學(xué)可接受載體、稀 釋劑或賦形劑。
26. 依照權(quán)利要求24或25的組合物，其中所述組合物是無菌且等張的。
27. 依照前述權(quán)利要求24至26中任一項的組合物，其中所述組合物制備為在緩釋配制 劑中施用。
28. 依照前述權(quán)利要求24至27中任一項的組合物，其用于對診斷為患有痛性糖尿病神 經(jīng)病變（painful diabetic neuropathy)、皰疫后神經(jīng)痛（post-herpaticneuralgia)或坐 骨神經(jīng)痛（sciatica)的受試者施用。
29. 依照前述權(quán)利要求24至28中任一項的組合物，其中所述組合物用于治療熱量異常 性疼痛（thermal allodynia)。
30. 依照權(quán)利要求29的組合物，其中所述組合物用于治療冷異常性疼痛（cold allodynia)〇
31. 依照前述權(quán)利要求24至30中任一項的組合物，其中所述組合物用于治療機(jī)械性異 常性疼痛（mechanical allodynia)。
32. 依照前述權(quán)利要求24至31中任一項的組合物，其中所述組合物用于治療自發(fā)性疼 痛。
33. 依照前述權(quán)利要求24至32中任一項的組合物，其中所述組合物用于治療痛覺過 敏。
34. 依照權(quán)利要求33的組合物，其中所述痛覺過敏是熱量痛覺過敏。
35. 依照權(quán)利要求34的組合物，其中所述痛覺過敏是冷痛覺過敏。
36. 依照權(quán)利要求33的組合物，其中所述痛覺過敏是機(jī)械性痛覺過敏。
37. 依照前述權(quán)利要求24至36中任一項的組合物，其中要治療的受試者沒有經(jīng)歷重量 減輕。
38. 依照前述權(quán)利要求24至37中任一項的組合物，其中要治療的受試者是哺乳動物， 優(yōu)選靈長類，更優(yōu)選人。
39. 依照前述權(quán)利要求24至38中任一項的組合物，其中所述組合物用于系統(tǒng)性施用， 優(yōu)選靜脈內(nèi)或皮下注射。
40. 依照前述權(quán)利要求24至39中任一項的組合物，其中通過胃腸外注射，優(yōu)選皮下注 射或鞘內(nèi)施用來施用所述治療。
41. 依照前述權(quán)利要求24至40中任一項的組合物，其中所述組合物以1 μ g/ kg-10, 000 μ g/kg，諸如 1 μ g/kg-7, 500 μ g/kg，諸如 1 μ g/kg-5, 000 μ g/kg，諸如 1 μ g/ kg-2, 000 μ g/kg,諸如 1 μ g/kg-1, 000 μ g/kg,諸如 1 μ g/kg-700 μ g/kg,諸如 5 μ g/ kg-500 μ g/kg,諸如10 μ g/kg至100 μ g/kg體重的劑量施用。
42. 依照前述權(quán)利要求24至41中任一項的組合物，其中每日重復(fù)所述施用。
43. 依照前述權(quán)利要求24至42中任一項的組合物，其中每周至少1-3次，諸如每周2-5 次，諸如每周3-6次重復(fù)所述施用。
44. 依照前述權(quán)利要求24至43中任一項的組合物，其中所述組合物在治療異常性疼痛 和/或痛覺過敏的方法中使用。
45. -種在受試者中治療異常性疼痛、痛覺過敏、自發(fā)性疼痛和/或幻痛的方法，其包 括對有此需要的所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項的多肽。
46. 依照權(quán)利要求45的方法，其中所述受試者診斷為患有痛性糖尿病神經(jīng)病變、皰疹 后神經(jīng)痛或坐骨神經(jīng)痛的受試者施用。
47. 依照權(quán)利要求45的方法，其中所述治療針對異常性疼痛和/或痛覺過敏。
48. 依照權(quán)利要求47的方法，其中所述治療針對熱量異常性疼痛。
49. 依照權(quán)利要求48的方法，其中所述異常性疼痛是冷異常性疼痛。
50. 依照權(quán)利要求47的方法，其中所述治療針對機(jī)械性異常性疼痛。
51. 依照權(quán)利要求45的方法，其中所述治療針對自發(fā)性疼痛。
52. 依照權(quán)利要求47的方法，其中所述治療針對痛覺過敏。
53. 依照權(quán)利要求52的方法，其中所述痛覺過敏是熱量痛覺過敏。
54. 依照權(quán)利要求53的方法，其中所述痛覺過敏是冷痛覺過敏。
55. 依照權(quán)利要求53的方法，其中所述痛覺過敏是機(jī)械性痛覺過敏。
56. 依照權(quán)利要求45的方法，其中要治療的受試者沒有經(jīng)歷重量減輕。
57. 依照權(quán)利要求45的方法，其中要治療的受試者是哺乳動物，優(yōu)選靈長類，更優(yōu)選 人。
58. 依照權(quán)利要求45的方法，其中系統(tǒng)性施用所述多肽。
59. 依照權(quán)利要求45的方法，其中通過胃腸外注射，優(yōu)選皮下注射或通過鞘內(nèi)施用來 施用所述多肽。
60. 依照權(quán)利要求45的方法，其中所述治療以1 μ g/kg-10, 000 μ g/kg，諸如1 μ g/ kg-7, 500 μ g/kg，諸如 1 μ g/kg-5, 000 μ g/kg，諸如 1 μ g/kg-2, 000 μ g/kg，諸如 1 μ g/ kg-1, 000 μ g/kg，諸如 1 μ g/kg-700 μ g/kg，諸如 5 μ g/kg-500 μ g/kg，諸如 10 μ g/kg 至 100 μ g/kg體重的劑量施用。
61. 依照權(quán)利要求45的方法，其中每日重復(fù)所述施用。
62. 依照權(quán)利要求45的方法，其中每周至少1-3次，諸如每周2-5次，諸如每周3-6次 重復(fù)所述施用。
【文檔編號】C12N5/00GK104105501SQ201280054226
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2012年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月5日
【發(fā)明者】J.R.喬根森, L.U.瓦爾伯格, T.E.約翰森 申請人:Ns基因公司