專利名稱：一種涂抹平板菌落的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，具體涉及一種涂抹平板菌落的方法。
背景技術(shù)：
涂抹平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成，這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在(否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞)，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中， 使其涂抹均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)，是國家食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的重要微生物活菌檢測計數(shù)方法之一。廣泛應(yīng)用于某些成品檢定(如殺蟲菌劑等)、生物制品檢驗、土壤含菌量測定以及食品、環(huán)境衛(wèi)生和科研等領(lǐng)域。涂抹平板計數(shù)法的關(guān)鍵在于涂抹效果，這直接影響到計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前，國內(nèi)外大都采用涂抹棒(或刮鏟)進(jìn)行平板涂抹。但涂抹棒(或刮鏟)涂抹的缺點是操作要求比較高，且費時、費力，最重要的是涂抹棒(或刮鏟)在來回涂抹的時產(chǎn)生的剪切力，會使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破裂而死亡，從而出現(xiàn)檢測結(jié)果偏低的現(xiàn)象。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種更加方便、快速和可靠的涂抹平板菌落的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)中用涂抹棒(或刮鏟)時操作要求比較高，且費時、費力以及檢測結(jié)果偏低等缺點。本發(fā)明的涂抹平板菌落的方法，其特征在于，將經(jīng)均質(zhì)處理使所含活菌分散均勻的樣液移到含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，然后倒入若干個已滅菌的鋼珠，蓋上培養(yǎng)皿蓋，晃動培養(yǎng)皿，使里面的鋼珠動起來，并朝不同方向做無規(guī)則運動，使樣液分散均勻，再停止晃動，將鋼珠倒出，反轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，常規(guī)條件下培養(yǎng)。優(yōu)選，所述的培養(yǎng)皿為直徑為9cm的培養(yǎng)皿，所述的鋼珠的直徑為3mm,表面光潔度為Vll,所述在培養(yǎng)皿中倒入若干個已滅菌的鋼珠，其數(shù)量為6 10個/個培養(yǎng)皿，進(jìn)一步優(yōu)選為7個。本發(fā)明的有益效果如下I.本發(fā)明利用鋼珠涂板，鋼珠涂板可以克服用涂抹棒或刮鏟時產(chǎn)生的剪切力，減少因此導(dǎo)致的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破裂死亡，提高了涂抹平板計數(shù)的準(zhǔn)確率。2.本發(fā)明通過輕微晃動培養(yǎng)皿，使鋼珠做無規(guī)則的運動來涂抹，能迅速將樣液涂布均勻，不需要不停的轉(zhuǎn)動涂抹棒或刮鏟，較涂抹棒或刮鏟操作簡便，省力。3.本發(fā)明可以通過多個培養(yǎng)皿的重疊，同時晃動達(dá)到多個培養(yǎng)皿進(jìn)行涂抹，解決了用涂抹棒(或刮鏟)一次只能涂抹一個的問題，這既省力又省時，提高效率，明顯減少了常規(guī)用涂抹棒(或刮鏟)涂抹的工作量。4.本發(fā)明在整個涂抹過程中，培養(yǎng)皿開啟的時間很短，所以培養(yǎng)基與外界接觸的時間短，從而克服了涂抹棒(或刮鏟)涂抹時始終要使培養(yǎng)皿處于開啟的狀態(tài)，與外界接觸時間較長的缺點，顯著降低涂抹時被污染的機(jī)率。
具體實施例方式以下實施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。以下實施例(除實施例I夕卜)所用的鋼珠直徑為3mm的小鋼珠，其表面光潔度VII，可以在2mL離心管中裝入7粒直徑3_的小鋼珠，然后置于121 °C高壓滅菌O. 5h備用。涂抹棒為澳大利亞進(jìn)口的微生物實驗專用耐高溫有機(jī)塑料涂抹棒，外三角邊長6cm，內(nèi)三角邊長4. 5cm,直徑為O. 5cm，手柄長18. 5cm。實施例I :以產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)為樣品材料,從斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)產(chǎn)酸克雷伯氏菌SZ7-1到LB培養(yǎng)液(公知培養(yǎng)基，250mL的三角瓶裝50mL培養(yǎng)液)中，然后在30°C溫度下，150r/min轉(zhuǎn)速的搖床中震蕩培養(yǎng)24h。用移液槍取ImL培養(yǎng)好的菌液，采用梯度稀釋法稀釋至10_7，并從最后稀釋好的、搖晃打散使活菌分散均勻的試管中取IOOyL加入不同的滅菌的、含有LB固體培養(yǎng)基的直徑9cm的培養(yǎng)皿中。將培養(yǎng)皿上蓋開啟一小口，在不同的培養(yǎng)皿中倒入不同個數(shù)的已經(jīng)滅菌好的直徑為3_、表面光潔度Vii的小鋼珠，鋼珠的個數(shù)見表I所示，合上培養(yǎng)皿蓋子，然后輕輕的晃動培養(yǎng)皿，使里面的鋼珠動起來，并朝不同方向做無規(guī)則運動，使菌液分布均勻，幾秒鐘后，停止晃動，將鋼珠倒出，蓋上培養(yǎng)皿蓋，反轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，置于室溫下常規(guī)培養(yǎng)。待長出單菌落后進(jìn)行統(tǒng)計，其結(jié)果如表I所示。表I :不同鋼珠數(shù)目涂布試驗結(jié)果(CFU/mL)
權(quán)利要求
1.一種涂抹平板菌落的方法，其特征在于，將經(jīng)均質(zhì)處理使所含活菌分散均勻的樣液移到含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，然后倒入若干個已滅菌的鋼珠，蓋上培養(yǎng)皿蓋，晃動培養(yǎng)皿，使里面的鋼珠動起來，并朝不同方向做無規(guī)則運動，使樣液分散均勻，再停止晃動，將鋼珠倒出，反轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，常規(guī)條件下培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的涂抹平板菌落的方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)皿為直徑為9cm的培養(yǎng)皿，所述的鋼珠的直徑為3mm，表面光潔度為VII，所述在培養(yǎng)皿中倒入若干個已滅菌的鋼珠，其數(shù)量為6 10個/個培養(yǎng)皿。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的涂抹平板菌落的方法，其特征在于，所述的鋼珠數(shù)量為7個/個培養(yǎng)皿。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種涂抹平板菌落的方法。它是將經(jīng)均質(zhì)處理使所含活菌分散均勻的樣液移到含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，然后倒入若干個已滅菌的鋼珠，蓋上培養(yǎng)皿蓋，晃動培養(yǎng)皿，使里面的鋼珠動起來，并朝不同方向做無規(guī)則運動，使樣液分散均勻，再停止晃動，將鋼珠倒出，反轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，常規(guī)條件下培養(yǎng)。本發(fā)明利用鋼珠涂板，鋼珠涂板可以克服用涂抹棒或刮鏟時產(chǎn)生的剪切力，減少因此導(dǎo)致的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破裂死亡，提高了涂抹平板計數(shù)的準(zhǔn)確率。本發(fā)明通過輕微晃動培養(yǎng)皿，使鋼珠做無規(guī)則的運動來涂抹，能迅速將樣液涂布均勻，不需要不停的轉(zhuǎn)動涂抹棒或刮鏟，較涂抹棒或刮鏟操作簡便，省力。
文檔編號C12N1/00GK102876577SQ201210371239
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者康麗華, 袁輝林, 王勝坤, 陸俊錕, 廖紹波, 馬海賓, 江業(yè)根 申請人:中國林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所