專利名稱：一種SeTPSP1316啟動(dòng)子及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種啟動(dòng)子及其應(yīng)用，特別涉及一種SeTPSP1316啟動(dòng)子及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
啟動(dòng)子是DNA上結(jié)合RNA聚合酶并形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的區(qū)域。外源基因在轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物體內(nèi)的表達(dá)依靠啟動(dòng)子對(duì)其的調(diào)控作用，表達(dá)量不足往往得不到理想轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物。因此，選擇合適的相關(guān)啟動(dòng)子是增強(qiáng)外源基因表達(dá)首要問題。根據(jù)啟動(dòng)子所控制的基因表達(dá)范圍和方式不同，啟動(dòng)子可以分成組成型啟動(dòng)子和特異性啟動(dòng)子。在組成型表達(dá)啟動(dòng)子的控制下，外源基因在轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物的所有部位和所有的發(fā)育階段都會(huì)表達(dá)。外源基因在動(dòng)植物內(nèi)持續(xù)、高效的表達(dá)不但造成浪費(fèi)，往往還會(huì)引起植物的形態(tài)發(fā)生改變，影響動(dòng)植物的生長和發(fā)育。為了使外源基因在動(dòng)植物體內(nèi)有效發(fā)揮作用，同時(shí)又可減少對(duì)動(dòng)植物的不利影響，近年來人們對(duì)特異性啟動(dòng)子的研究越來越重視。隨著動(dòng)植物特異性表達(dá)啟動(dòng)子研究的不斷改進(jìn)，現(xiàn)已分離了一些特異性表達(dá)基因和增強(qiáng)序列，這些序列能特異性或優(yōu)先激活從而啟動(dòng)基因的表達(dá)，啟動(dòng)子中存在負(fù)責(zé)特異性表達(dá)的順式作用元件，受外來因素誘導(dǎo)或特定蛋白調(diào)控，包括組織特異性啟動(dòng)子和誘導(dǎo)表達(dá)型啟動(dòng)子。例如來自煙草的富含羥脯氨酸的糖蛋白(HRGP)基因，盡管其表達(dá)水平很低但是根特異性的，在煙草側(cè)根分化誘導(dǎo)過程中，在中柱鞘和內(nèi)皮層中其啟動(dòng)子表現(xiàn)短時(shí)間活躍，特別是后期根發(fā)生組織細(xì)胞中活性強(qiáng)，屬于組織特異性啟動(dòng)子。誘導(dǎo)表達(dá)是指動(dòng)植物細(xì)胞由于環(huán)境的變化而導(dǎo)致相關(guān)基因的表達(dá)。動(dòng)植物體內(nèi)存在著一套防御機(jī)制來對(duì)付不良環(huán)境，在這個(gè)過程中，環(huán)境誘導(dǎo)基因啟動(dòng)子起著關(guān)鍵的作用。動(dòng)物細(xì)胞是一種很好的材料，可以用于啟動(dòng)子提高下游基因的表達(dá)情況分析。在環(huán)境脅迫下，最先受到影響的動(dòng)物器官是脂肪體，如果將脂肪體誘導(dǎo)型特異性啟動(dòng)子應(yīng)用于植物抗脅迫基因工程中，使抗性基因在相關(guān)細(xì)胞中特異表達(dá)，這樣就能降低能量消耗，使轉(zhuǎn)基因植物在獲得抗性的同時(shí)，又不影響正常的生長發(fā)育，對(duì)抗逆、抗病蟲的基因工程具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種能夠調(diào)控目的基因高效特異表達(dá)于昆蟲脂肪體組織的SeTPS1316啟動(dòng)子，并應(yīng)用于提高昆蟲細(xì)胞的抗逆能力和植物抗逆基因工程。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種SeTPSP1316啟動(dòng)子，所述啟動(dòng)子含有下列任意一組核苷酸序列a、SEQ.ID. NO. I所示的核苷酸序列；b、與SEQ. ID. NO. I所示的核苷酸序列互補(bǔ)的序列；本發(fā)明也不排除對(duì)上述a或b所述序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)堿基的取代、缺失或修飾的核苷酸序列；或與上述a或b所述序列具有至少90%同源性的核苷酸序列。進(jìn)一步，所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子優(yōu)選為含有SEQ. ID. NO. I所示的核苷酸序列的
啟動(dòng)子。
一種DNA構(gòu)建體，所述DNA構(gòu)建體包含所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子以及與之進(jìn)行可操作連接的基因序列。—種載體,所述載體含有所述的啟動(dòng)子或所述的DNA構(gòu)建體。一種重組細(xì)胞,所述的重組細(xì)胞包含所述的啟動(dòng)子或所述的DNA構(gòu)建體或所述的載體。進(jìn)一步，所述的重組細(xì)胞優(yōu)選為重組細(xì)胞Sf-9、重組細(xì)胞Tn_Hi5或重組細(xì)胞Se301，更優(yōu)選為重組細(xì)胞Tn-Hi5?！N含有所述的啟動(dòng)子或所述的DNA構(gòu)建體或所述的載體或所述重組細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞或植物愈傷組織。 進(jìn)一步，所述的動(dòng)物細(xì)胞優(yōu)選為粉紋夜蛾細(xì)胞(系)Tn_Hi5。所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子在動(dòng)物特異誘導(dǎo)基因工程中的應(yīng)用。進(jìn)一步，所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子在動(dòng)物特異誘導(dǎo)基因工程中的應(yīng)用為將下游基因置于SeTPSP1316啟動(dòng)子下游，構(gòu)建表達(dá)載體，將載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞中，得到較高特異誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞，提聞下游基因的表達(dá)。更進(jìn)一步，所述的應(yīng)用為SeTPSP1316啟動(dòng)子在粉紋夜蛾特異誘導(dǎo)基因工程中的應(yīng)用將下游基因置于SeTPSP1316啟動(dòng)子下游，構(gòu)建表達(dá)載體，將載體導(dǎo)入粉紋夜蛾細(xì)胞中，獲得較高特異誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因粉紋夜蛾細(xì)胞Tn-Hi5。此外，本發(fā)明所述SeTPSP1316啟動(dòng)子還可以應(yīng)用于植物抗逆基因工程中，具體為將抗逆基因置于SeTPSP1316啟動(dòng)子下游，構(gòu)建植物表達(dá)載體，將載體導(dǎo)入煙草等作物，得到抗逆轉(zhuǎn)基因植物。該基因可以轉(zhuǎn)化煙草、水稻等農(nóng)作物，提高其抗脅迫能力，具有重大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值。本發(fā)明提供的啟動(dòng)子核苷酸序列來自甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)。本發(fā)明利用同源克隆和RACE技術(shù)獲得甜菜夜蛾SeTPS基因上游1316bp序列啟動(dòng)子，其核苷酸如SEQ. ID. NO. I所示，具體方法如下本發(fā)明從甜菜夜蛾脂肪體中提取DNA，根據(jù)國際基因庫(GenBank EU647215)中已經(jīng)發(fā)布的甜菜夜蛾SeTPS基因上游DNA序列，設(shè)計(jì)引物，序列如下Fl(APl) GTAATACGACTCACTATAGGGCRlCAGAATGTCTAAATTGACAT利用上述引物進(jìn)行常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。將PCR產(chǎn)物與克隆載體(pEASY-T)連接轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，然后篩選陽性重組子，進(jìn)行序列測序，根據(jù)獲得的序列設(shè)計(jì)引物，引物序列如下F1316 AAAAGCTTCCGAGCTGTGAAACAGTTTTCCR2 AAGGATCCCATGGACGGAGATTGAAGTCG以甜菜夜蛾脂肪體DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物與克隆載體(pEASY_T)連接轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5ci感受態(tài)細(xì)胞，然后篩選陽性重組子，進(jìn)行序列測序，得到一個(gè)1316bp啟動(dòng)子序列，將該序列命名為SeTPSP1316。該啟動(dòng)子序列SEQ. ID. NO. I信息如下長度1316bp類型核酸
鏈型 雙鏈來源甜菜夜蛾-1316CCGAGC TGTGAAACAG TTTTCCTAAA ACATAGTAGA TAAATTCGAACGATAAGAGG-1261 CAAATTGCCA AACAGATTAT ATACATTACT ACAAATATTT AATTGTAAGTTCGTTAGTTC-1201 GATATTTAAA TTCGATGCGT TTCTAGATGC ACCTTACAGA TGTCGTTTCTAGAATGTTTA-1141 TTTTTTTAAT TCTCTTTTAT TATACGGCCT CTTTGGTCCA CTTGACGAAAGAGACCCACG-1081 GTTTTAGGAC CCACTGCCAA CTTGAAAGAG AATGTTCTAT TCGGTCGAAGTTGTTATTTT-1021 TTTCATCACT TTTTTTGGTT TGGTACACAA AAGGGCTTCT CGAGAGTGTATAGGTACTTA-961 GTGTATTTTT TAAACATAAT TTTGTTGATA AATCTCATTT AAAAAATATTAGACAATGGG-901 TTTTATATAG CTCTGTAATA TCTAAATTAA GCCCTATTTT ATAAATGAAAAAAGGCTGTG-841 AAGTGAATTT CTGAGCACAT ACCTTTAGTT TTAAAAAGTT ATAGGATTTTTTTAAACGAA-781 TCGAAAAAAT TGATTGTTTT AAAAGTACAC GTATCCTGTA TGCCAGTGTAAACAGCCGGT-721 CCAAGGTTTT TGTAACAATT ACTTGGTCGT TAAGTGAGAA TGTGTTCATGAACCAACGGA-661 ATCATCTTTG TGATATCCAT TCATTAATGA GTTATTAATT ATTTAAAATATAATTGTTTA-601 TGACAATGCC TCGATTAATT TTATTTTTTA AAAGCTTTCT ATACTTTGGATGCAATCAAT-541 AAATCTTTCT GGCCATTTAA TAATAATATT AATATCTAAT AAAGCCTGCTTTTGGTGTGC-481 AGTAAATAAT TGATTCCTTT AGGATTATAC AAGTTAGTAT AGGAGGTATTTGTTTGCGCA-421 ATAAATTCTT TAACCGAATA AACACAACAA ACGTATCCGT CTCAAAATCACTAAAAACAC-361 GTTATCAGTG GCCCAATAAA AAAATAATAT TTATTTTCAT TGGCCCAGTTCTAATTCAAT-301 TTAGTGAACA AAGTTTATAG TTACTCATAG CATTATCAAA TTCTGATACATTCGTCGCAG-241 TCAAGCATCG TGCTTTAATA ATCACAAACA CCGAATTCGC ATTTTCAGTCGGATAAGATG-181 CAAGACAATT CTTGAAGAGA GGTCAATGAG TGATAACCTC TTTACAACGACACCGCGGAC-121 CTCCGCCGCC GCCTCACAGA CGCACGCAAC CACTTCGCCC TTCTGCGACGCGTCTCGCAT-61AGTCTATAAA GGCACCCGAC GCACACAAAA GAAACAGTAC GACTTCAATCTCCGTCCATG-I ATGTCAATTTAGACATTCTGAACAACAGCGCGGGAATACACAACTTTCAAGTTACTTGCG60 ATGACAAAAA啟動(dòng)子序列SEQ. ID. NO. I中負(fù)號(hào)表示啟動(dòng)子序列，正號(hào)表示啟動(dòng)子下游序列。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在本發(fā)明提供了一種新的SeTPSpl316啟動(dòng)子，具有較高的特異誘導(dǎo)表達(dá)活性，能夠提高下游基因根特異轉(zhuǎn)錄水平；特別在功能基因的研究方面，將能夠通過該啟動(dòng)子構(gòu)建真核表達(dá)系統(tǒng)，提高下游功能基因的表達(dá)及活性，為動(dòng)物基因功能在細(xì)胞中的應(yīng)用提供有效的方法，并且將該啟動(dòng)子轉(zhuǎn)入植物中，也能應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物抗逆工程。


圖lSeTPSP1316啟動(dòng)子在重組細(xì)胞中的活性。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此基于昆蟲(粉紋夜蛾)細(xì)胞Tn_Hi5生長速度快、生活周期短、培養(yǎng)再生能力強(qiáng)和遺傳轉(zhuǎn)化效率高等特點(diǎn)，在下述實(shí)施例中以粉紋夜蛾的Tn-Hi5細(xì)胞為例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明。氨芐LB固體培養(yǎng)基、LB固體培養(yǎng)基、MS培養(yǎng)基、YEP培養(yǎng)基、YEP固體培養(yǎng)基、GIBCO細(xì)胞培養(yǎng)基等均為公知常識(shí)。實(shí)施例I :調(diào)控目的基因高效特異表達(dá)于昆蟲脂肪體組織的甜菜夜蛾SeTPSP1316啟動(dòng)子的克隆I. DNA提取利用動(dòng)物DNA提取試劑盒(TransGen，Bei jing)提取甜菜夜蛾基因組DNA，作為模板。2. TPS基因上游DNA序列擴(kuò)增利用引物Fl GTAATACGACTCACTATAGGGC 和 Rl CAGAATGTCTAAATTGACAT 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，體系如下10XBuffer 5 μ L，10mmoL/L dNTP 2 μ L，PCR 引物各 25pmol，DNA 模板
Iμ L (約200ng), Taq酶2U,加滅菌雙蒸水至50 μ L。PCR 反應(yīng)步驟為94°C 預(yù)變性 5min ;93°C 變性 30sec，50°C 退火 30sec，72°C 延伸90sec，循環(huán)30次；最后72°C延伸lOmin。I %瓊脂糖凝膠電泳，利用膠回收試劑盒(TransGen, Beijing)回收片段,將所得片段連入pEASY-T載體(TransGen, Beijing)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞(TransGen，Bei jing)，然后利用氨芐LB固體培養(yǎng)基篩選陽性重組子，并進(jìn)行PCR鑒定，然后進(jìn)行序列測序，獲得一個(gè)1350bp序列。3. SeTPS啟動(dòng)子獲得利用引物F1316AAAAGC TTC CGA GCT GTG AAA CAG TTT TCC和 R2 AAG GAT CCCATG GAC GGA GAT TGA AGT CG 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，體系如下10 XBuffer 5 μ L, 10mmoL/L dNTP
2μ L，PCR引物各25pmol，DNA模板I μ L(以步驟2獲得的1750bp序列為模板)，Taq酶2U，加滅菌雙蒸水至50 μ L0PCR 反應(yīng)步驟為94°C預(yù)變性 5min ;93°C變性 30sec，50°C退火 30sec，72°C延伸90sec,循環(huán)30次；最后72°C延伸lOmin。I %瓊脂糖凝膠電泳,利用膠回收試劑盒回收片段，將所得片段連入pEASY-T載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，然后利用氨芐LB固體培養(yǎng)基篩選陽性重組子，并進(jìn)行PCR鑒定，然后進(jìn)行序列測序，獲得一個(gè)1316bp序列，命名為SeTPSP1316啟動(dòng)子，序列見SEQ. ID. NOl所示。實(shí)施例2 :表達(dá)載體構(gòu)建及重組細(xì)胞的構(gòu)建I. PCR擴(kuò)增根據(jù)實(shí)施例I分離的SeTPSP1316啟動(dòng)子核苷酸序列，設(shè)計(jì)引物正向引物5’-GCC GCT AGC CCG AGC TGT GAA ACA GTT-3’劃橫線部分為NheI酶切位點(diǎn)反向引物5’-GGC CTC GAG TCA GCA CTG TGT TTG TAT TG-3’劃橫線部分為XholI酶切位點(diǎn)以SeTPSP1316啟動(dòng)子全長測序質(zhì)粒為模板，利用上述正向和反向引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為及步驟為94°C預(yù)變性5min ;93°C變性30sec，55°C退火30sec，72°C延伸90sec，循環(huán)30次；最后72°C延伸IOmin02.陽性重組子取上述PCR產(chǎn)物2 μ L與pEASY-T載體(TransGen，Bei jing)連接轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞(TRANS，北京)，然后在含有氨芐(50mg/L)的LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)過夜，篩選陽性重組子，進(jìn)行PCR鑒定，獲得陽性大腸桿菌。3.載體的構(gòu)建利用質(zhì)粒提取試劑盒(TRANS，北京)提取上述步驟2得到的陽性大腸桿菌的質(zhì)粒，將質(zhì)粒用NheI和XholI酶切，與用相同限制酶酶切的熒光素酶報(bào)告基因pGL3-Basic表達(dá)載體(購買于Promega公司)連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，然后在含有氨芐(50mg/L)的LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)過夜，對(duì)生長出的菌落進(jìn)行PCR鑒定和質(zhì)粒酶切鑒定，獲得表達(dá)載體pGL3-SeTPSP1316，即熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。4.重組細(xì)胞的構(gòu)建1)粉紋夜蛾細(xì)胞株(Tn_Hi5)(中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供)在含體積濃度10%胎牛血清(fetal serum)的Gibico細(xì)胞培養(yǎng)基中，27 °C條件下培養(yǎng)48h至細(xì)胞長滿后，轉(zhuǎn)移到24孔板中27°C培養(yǎng)24h后，可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。2)采用脂質(zhì)體(lipofectin,購買于invitrogen公司)介導(dǎo)質(zhì)粒的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染液為在Gibico細(xì)胞培養(yǎng)基中加入Iyg熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒(pGL3-SeTPSP1316)，0. 5μ g內(nèi)源參照質(zhì)粒(pRL-TKControl Vector, Promega),最后加入 I μ I 脂質(zhì)體(lipofectin,購買于invitrogen公司)，使總體積達(dá)到200 μ I,室溫(25°C )吹打混勻約15min后,獲得轉(zhuǎn)染液。轉(zhuǎn)染前把步驟I)的24孔板中含胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液倒出，用300 μ I的Gibico細(xì)胞培養(yǎng)液清洗兩次。再分別將轉(zhuǎn)染液均勻地釋放到上述清洗后的24孔板培養(yǎng)的細(xì)胞中，每孔釋放20μ 1，27°C條件下培養(yǎng)6h后，把孔板中的轉(zhuǎn)染液全部倒出，每孔加入400μ I的含體積濃度10%胎牛血清(fetal serum)的Gibico培養(yǎng)基，在27°C培養(yǎng)48小時(shí)后，待細(xì)胞長滿后吹打收集細(xì)胞，獲得含表達(dá)載體pGL3-SeTPSP1316的粉紋夜蛾細(xì)胞Tn_Hi5。每個(gè)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
重復(fù)三次以上實(shí)施例3 SeTPSP1316啟動(dòng)子在重組細(xì)胞中活性的測定(I)重組細(xì)胞按照實(shí)施例2方法分別將表達(dá)載體pGL3_SeTPSP1316轉(zhuǎn)染粉紋夜蛾細(xì)胞Sf-9(中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供)、粉紋夜蛾細(xì)胞Tn-Hi5和粉紋夜蛾細(xì)胞Se301(中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供)，培養(yǎng)含表達(dá)載體pGL3-SeTPSP1316的粉紋夜蛾細(xì)胞Sf-9、含表達(dá)載體pGL3-SeTPSP 1316的粉紋夜蛾細(xì)胞Tn-Hi 5和含表達(dá)載體pGL3-SeTPSP1316的粉紋夜蛾細(xì)胞Se301。對(duì)照以pGL3_Basic空載(Promega)作為陰性對(duì)照替代實(shí)施例2中突光素酶報(bào)告質(zhì)粒，PRT-TK(Promega)作為內(nèi)源參照質(zhì)粒替代實(shí)施例2中內(nèi)源參照質(zhì)粒來配制轉(zhuǎn)染液，按照實(shí)施例2的方法分別轉(zhuǎn)染粉紋夜蛾細(xì)胞Sf-9 (中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供)、粉紋夜蛾細(xì)胞Tn-Hi5和粉紋夜蛾細(xì)胞Se301 (中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供)作為對(duì)照。(2)具體的測定方法為先將含表達(dá)載體pGL3_SeTPSP1316的粉紋夜蛾細(xì)胞Sf_9、含表達(dá)載體pGL3-SeTPSP1316的粉紋夜蛾細(xì)胞Tn_Hi5和含表達(dá)載體pGL3_SeTPSP1316的粉紋夜蛾細(xì)胞Se301培養(yǎng)孔板及各個(gè)對(duì)照孔板中的培養(yǎng)液全部倒掉，再分別加入200 μ I的Dua I-GI O Luciferase Reagent (Promega)米用 GloMax Multi 多功能檢測儀(Promega)測定熒光素酶活性(Luciferase)。測完熒光素酶后，每孔(不需要其他處理)再加入200 μ I的Stop Glo Reagent (Promega)再利用GloMax Multi多功能檢測儀測定海腎突光素酶活性(Renilla Luminescence),啟動(dòng)子在重組細(xì)胞中的相對(duì)活性計(jì)算方法為數(shù)據(jù)分析采用熒光素酶活性的數(shù)值除以海腎熒光素酶活性的數(shù)值，為最終的活性表達(dá)結(jié)果。PGL3-B、Sf-9、Η 5和Se301活性進(jìn)行相對(duì)表達(dá)分析，其中的最低值為0%，最高值為100%，從而獲得相關(guān)的數(shù)據(jù)，結(jié)果見圖I所示。如圖I的結(jié)果顯示SeTPSP1316啟動(dòng)子在Sf_9細(xì)胞中相對(duì)活性比較低，而Tn_Hi5細(xì)胞轉(zhuǎn)染的SeTPSP1316啟動(dòng)子的相對(duì)表達(dá)活性最高，為Se301的5倍。根據(jù)這些熒光素酶報(bào)告基因的檢測結(jié)果顯示，Se301和Tn-Hi5細(xì)胞系中，SeTPSP1316啟動(dòng)子能夠提高下游PGL3-熒光素酶基因表達(dá)活性，具有較高的特異表達(dá)能力，這為篩選和提供良好的啟動(dòng)子用于功能基因的研究提供應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)將SeTPSP1316啟動(dòng)子轉(zhuǎn)入到植物中，將提高其抗脅迫能力，具有重大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值。
權(quán)利要求
1.一種SeTPSP1316啟動(dòng)子，其特征在于所述啟動(dòng)子含有下列任意一組核苷酸序列a、SEQ. ID. NO. I所示的核苷酸序列；b、與SEQ. ID. NO. I所示的核苷酸序列互補(bǔ)的序列。
2.如權(quán)利要求I所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子，其特征在于所述啟動(dòng)子為含有SEQ.ID. NO. I所示的核苷酸序列的啟動(dòng)子。
3.一種DNA構(gòu)建體，其特征在于所述DNA構(gòu)建體包含權(quán)利要求I所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子以及與之進(jìn)行可操作連接的基因序列。
4.一種載體，其特征在于所述載體含有權(quán)利要求I所述的啟動(dòng)子或權(quán)利要求3所述的DNA構(gòu)建體。
5.一種重組細(xì)胞，其特征在于所述的重組細(xì)胞包含權(quán)利要求I所述的啟動(dòng)子、權(quán)利要 求3所述的DNA構(gòu)建體或權(quán)利要求4所述的載體。
6.如權(quán)利要求5所述的重組細(xì)胞，其特征在于所述的重組細(xì)胞為重組Tn-Hi5細(xì)胞。
7.一種含有權(quán)利要求I所述的啟動(dòng)子、權(quán)利要求3所述的DNA構(gòu)建體、權(quán)利要求4所述的載體或權(quán)利要求5所述重組細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞。
8.如權(quán)利要求7所述的動(dòng)物細(xì)胞為粉紋夜蛾細(xì)胞Tn-Hi5。
9.如權(quán)利要求I所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子在動(dòng)物特異誘導(dǎo)基因工程中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為將下游基因置于SeTPSP1316啟動(dòng)子下游，構(gòu)建表達(dá)載體，將載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞中，獲得較高特異誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞。
10.如權(quán)利要求9所述的SeTPSP1316啟動(dòng)子在動(dòng)物特異誘導(dǎo)基因工程中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為SeTPSP1316啟動(dòng)子在粉紋夜蛾特異誘導(dǎo)基因工程中的應(yīng)用將下游基因置于SeTPSP1316啟動(dòng)子下游，構(gòu)建表達(dá)載體，將載體導(dǎo)入粉紋夜蛾細(xì)胞Tn_Hi5中，獲得較高特異誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因粉紋夜蛾細(xì)胞Tn-Hi5。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種SeTPSp1316啟動(dòng)子、DNA構(gòu)建體、載體、重組細(xì)胞及所述的SeTPSp1316啟動(dòng)子在動(dòng)物細(xì)胞中的應(yīng)用，所述啟動(dòng)子含有下列任意一組核苷酸序列a、SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列；b、與SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列互補(bǔ)的序列；本發(fā)明SeTPSp1316啟動(dòng)子具有較高特異誘導(dǎo)表達(dá)活性，能夠提高下游基因在Tn-Hi5和Se301細(xì)胞系中的特異轉(zhuǎn)錄水平，從而為基因的功能和轉(zhuǎn)基因植物抗逆研究提供應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C12N15/63GK102634517SQ201210097399
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月1日
發(fā)明者唐斌, 張文慶, 王世貴 申請(qǐng)人:杭州師范大學(xué)