專利名稱：一種克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法
技術領域：
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵技術領域，特別是ー種克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法。
背景技術：
透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid，簡稱HA)，又名玻璃酸，其分子量在幾十萬到幾百萬之間，由于結(jié)構(gòu)上的特點，決定它具有比較特殊的物理化學性質(zhì)，其水溶液有著良好的粘彈性和流變性，在食品，化妝和醫(yī)用方面都有應用。不同用途的HA對分子量有不同要求，小分子量的HA多用于保健品中，中等分子量的HA主要應用于化妝品，而高分子量的HA可用于眼科粘性手術、治療關節(jié)病、軟組織修復和作為藥物載體等，特別是在預防和減少外科手術后組織粘連中具有很高的應用價值。因此HA的生產(chǎn)中，高分子量和高產(chǎn)率依然是研究的主要目標。近年來我國HA組織提取法研究已趨于成熟。但原料緊缺，エ藝復雜，成本高，無法滿足國內(nèi)市場需要。目前透明質(zhì)酸已由傳統(tǒng)的動物器官提取法轉(zhuǎn)為微生物發(fā)酵法生產(chǎn)，微生物發(fā)酵法是制備HA的主要方法，國外對發(fā)酵法研究較早，技術也日見成熟，但因生產(chǎn)廠家少，世界需求仍然缺口大；近年來我國不少學者雖積極進行這方面的研究，但由于在菌種選育、發(fā)酵エ藝和提取純化等方面的難題，使我國在這方面的研究進展緩慢。我國應加快發(fā)酵法生產(chǎn)透明質(zhì)酸的步伐，關鍵是在提高產(chǎn)率，提高產(chǎn)品分子量和分離純化的技術方面進行攻關，趕上世界先進水平，以減少進ロ量。在獸疫鏈球菌發(fā)酵過程中，透明質(zhì)酸的產(chǎn)量在一定范圍內(nèi)隨著底物濃度的增加而増加，若底物濃度過高，對透明質(zhì)酸的生產(chǎn)有抑制作用，得到的透明質(zhì)酸相對分子質(zhì)量也較小。而且在產(chǎn)生HA的同時還會有乳酸生成，對菌體的生長和HA的產(chǎn)生都有抑制作用，在此發(fā)明中，針對發(fā)酵底物的不同和生成產(chǎn)物的多少，研究底物和產(chǎn)物對透明質(zhì)酸生產(chǎn)的抑制作用，井指出解除抑制的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術缺陷，提供ー種克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法。為達到上述目的，本發(fā)明的方案為透明質(zhì)酸的發(fā)酵エ藝，以獸疫鏈球菌為種子，包括ー級種培養(yǎng)，ニ級種培養(yǎng)及發(fā)酵培養(yǎng)，各過程培養(yǎng)基重量配方如下表
權(quán)利要求
1. ー種克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法，以獸疫鏈球菌為種子，發(fā)酵エ 藝過程包括ー級種培養(yǎng)，ニ級種培養(yǎng)及發(fā)酵培養(yǎng)，其特征在于各過程培養(yǎng)基重量配方如下表培養(yǎng)基組成一級種子(％)ニ級種子(％)發(fā)酵培養(yǎng)(％)蛋白膝1.0。-3.01.0-3.01.0-3.0酵母膏1.0。-4.01.0-4.01.0-3.0氯化鈉0.5。-1.50.5-1.5硫酸鎂0.05-0.2磷酸鉀0.05-0.2硫酸銨0.5-1.5葡萄糖0.5。-3.00.5-3.05.0-7.0瓊脂2.0。-3.0PH7.5。-8.07.5-8.07.5-8.0滅菌112°C 20min112°C 20min121°C 20min
2.如權(quán)利要求1所述的克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法，其特征在于ー級種培養(yǎng)是從斜面試管轉(zhuǎn)種到錐形瓶中進行，培養(yǎng)溫度33°C 37°C，培養(yǎng)時間18 M小吋。
3.如權(quán)利要求1所述的克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法，其特征在于ニ級種培養(yǎng)的步驟為首先配制ニ級種子培養(yǎng)基，按照重量8% 12%的接種量接入一級種子進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度33°C 37°C，培養(yǎng)時間20 M小吋，OD66tl值增加到0. 8 1. 2時接入發(fā)酵液中。
4.如權(quán)利要求1所述的克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法，其特征在于發(fā)酵培養(yǎng)的步驟為首先配制發(fā)酵培養(yǎng)基，按照重量5% 10%的接種量接入ニ級種子進行培養(yǎng)，發(fā)酵溫度33°C 37°C，發(fā)酵周期30 35小吋。
全文摘要
一種克服葡萄糖及乳酸抑制的透明質(zhì)酸發(fā)酵方法，以獸疫鏈球菌為種子，發(fā)酵工藝過程包括一級種培養(yǎng)，二級種培養(yǎng)及發(fā)酵培養(yǎng)。一級種培養(yǎng)是從斜面試管轉(zhuǎn)種到錐形瓶中進行，培養(yǎng)溫度33℃～37℃，培養(yǎng)時間18～24小時；二級種培養(yǎng)的步驟為首先配制二級種子培養(yǎng)基，按照8％～12％的接種量接入一級種子進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度33℃～37℃，培養(yǎng)時間20～24小時，OD660值增加到0.8～1.2時接入發(fā)酵液中；發(fā)酵培養(yǎng)的步驟為首先配制發(fā)酵培養(yǎng)基，按照5％～10％的接種量接入二級種子進行培養(yǎng)，發(fā)酵溫度33℃～37℃，發(fā)酵周期30～35小時。
文檔編號C12R1/46GK102559801SQ201110429599
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月20日
發(fā)明者余永紅, 劉曉連, 李亞蕾, 楊波, 羅瑞明 申請人:寧夏大學