專利名稱：一種添加中藥提取液的茶樹菇深層發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種添加中藥提取液的茶樹菇深層發(fā)酵方法。屬生物工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
茶樹菇屬擔(dān)子菌綱，糞銹傘科，田菇屬，又名茶菇、油茶菇、神菇。是近年來發(fā)展起來的一種食用菌新品種。茶樹菇營養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)含量高，含有人體必需的氨基酸，并且有豐富的B族維生素和鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、鋅等礦質(zhì)元素。中醫(yī)認(rèn)為該菇性平、甘溫、無毒，具有較高的藥用價(jià)值，有清熱、平肝、明目、健脾的功效。其提取物多糖對(duì)小白鼠肉瘤S-180和艾氏腹水癌的抑制率高達(dá)80-90 %，是一種集營養(yǎng)、保健、理療于一身的綠色食品。茶樹菇以液體發(fā)酵進(jìn)行生產(chǎn)時(shí)，在培養(yǎng)基中添加適量的中藥，能促進(jìn)其生長或活性產(chǎn)物的產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種添加中藥提取液的茶樹菇深層發(fā)酵方法。本發(fā)明的技術(shù)方案為將茶樹菇子實(shí)體通過組織分離法接入固體斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待長好后移至搖瓶種子液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的種子液接入添加了刺參水提液的搖瓶發(fā)酵液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。發(fā)酵結(jié)束后，離心獲得濕菌絲體，部分烘干至恒重后稱重。部分濕菌絲體經(jīng)過勻漿，熱水浸提，上清液濃縮，乙醇沉淀，脫蛋白，脫色，透析后冷凍干燥得到茶樹菇胞內(nèi)粗多糖。比較中藥材添加前后菌絲體和胞內(nèi)粗多糖產(chǎn)量的差異(結(jié)果見表1)。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)例將具體說明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對(duì)本發(fā)明的限定。實(shí)例一1.菌種培養(yǎng)出發(fā)菌種為市售茶樹菇(Agrocybe aegirit)；(1)組織分離法斜面培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基，含1. 5% 2. 0%瓊脂，pH自然；組織分離方法將子實(shí)體外表用酒精進(jìn)行表面消毒后，放入超凈工作臺(tái)上，用消毒過的刀片與鑷子切取菌柄與菌蓋交界處組織塊接入斜面培養(yǎng)基上，PH自然，置于25°C溫度下暗培養(yǎng)，5d后菌絲開始萌發(fā)，每隔2d檢查1次，除去污染，選擇菌絲生長速度快和長勢(shì)強(qiáng)的試管作為純母種；(2)搖瓶種子培養(yǎng)搖瓶種子培養(yǎng)基PDA1L加磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，ρΗ6· 0 ；培養(yǎng)方法從斜面菌種中取3 4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養(yǎng)基中，250mL三角瓶裝培養(yǎng)基IOOmL于25°C，150r/min，振蕩培養(yǎng)7d ；
(3)中藥水提液的制備稱取刺參(已切片)10g，W 5倍量水浸泡lh，用電爐煎熬至溫和的沸騰狀態(tài)保持30min，倒出藥汁，殘?jiān)a(bǔ)加適量冷水，再煮沸20min，倒出藥汁。合并藥汁，過濾，濃縮后用于茶樹菇深層培養(yǎng)。(4)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉2g/100mL、酵母粉0. 3g/100mL、磷酸二氫鉀0. 2g/100mL、硫酸鎂 0.05g/100mL ；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)好的種子以15%的接種量分別接入未添加和添加了刺參水提液50mL的IOOmL搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中25°C，150r/min，振蕩培養(yǎng)7d ；培養(yǎng)結(jié)束后離心獲得濕菌絲體，取部分烘干至恒重后稱重得到菌絲體產(chǎn)量。2.胞內(nèi)粗多糖的提取濕菌絲體經(jīng)過勻漿，熱水浸提，提取溫度80°C -90°C，加水量為4倍體積濕菌絲體，總提取時(shí)間為10h，提取3次，提取液濃縮后加入3倍體積95%乙醇在4°C醇析。SOOOrpm離心得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復(fù)溶后按多糖溶液1/5的體積加入氯仿，然后加入氯仿體積1/5的正丁醇，混合后振蕩20min。蛋白質(zhì)與氯仿-正丁醇生成凝膠，4000rpm離心20min，收集上清液，反復(fù)操作8次至氯仿-正丁醇層不渾濁為止。然后在上清液中加入95%乙醇置4°C冰箱過夜，次日離心收集沉淀。沉淀物用蒸餾水復(fù)溶后將5%的多糖溶液用NaOH調(diào)PH至9. 0，然后滴加20 %的H2A (用量為多糖溶液體積的15 % )，保持PH8. 0-9. 0，4h后終止反應(yīng)，加入95%乙醇置4°C冰箱過夜，次日離心收集沉淀。沉淀物用蒸餾水復(fù)溶后取50mL裝入透析袋中，扎緊袋口，懸浮于蒸餾水中，透析48h，中間每隔12小時(shí)換水一次。冷凍干燥后得到茶樹菇胞內(nèi)粗多糖。稱重后計(jì)算多糖產(chǎn)量。表1刺參水提液對(duì)茶樹菇菌絲體和胞內(nèi)多糖產(chǎn)量的影響
菌絲體產(chǎn)量(mg/100mL) 胞內(nèi)多糖產(chǎn)量(mg/1 OOmg)
權(quán)利要求
1.一種添加中藥提取液的茶樹菇深層發(fā)酵方法，其特征在于所述的中藥提取液是刺參水提液，是將一定量刺參，加5倍量水浸泡lh，用電爐煎熬至溫和的沸騰狀態(tài)保持30min，倒出藥汁，殘?jiān)a(bǔ)加適量冷水，再煮沸20min，倒出藥汁，合并藥汁，過濾，濃縮后得到。
2.權(quán)利要求1所述的茶樹菇深層發(fā)酵方法，其特征在于在發(fā)酵培養(yǎng)基中按照1 1的比例加入了刺參水提液。
全文摘要
本發(fā)明屬生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種添加中藥提取液的茶樹菇深層發(fā)酵方法。將已切片的中藥材(刺參)，水浸泡后用電爐煎熬，取藥汁過濾后濃縮，加入茶樹菇發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行深層發(fā)酵，能夠提高茶樹菇菌絲體和多糖的產(chǎn)量?？蓱?yīng)用于具有較高活性的新型發(fā)酵制劑生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P19/04GK102559800SQ20111041990
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者滕麗萍, 程詠梅, 鄧超, 陳敬華, 陳荊曉 申請(qǐng)人:江南大學(xué)