專利名稱：一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)藥分析領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法。
背景技術(shù)：
氰烯菌酯屬于氰基丙烯酸酯類，化學(xué)名稱為2-氰基-3-氨基丙烯酸乙酯，實(shí)驗(yàn)式 C12H12N2O2，是一種結(jié)構(gòu)新穎，作用方式獨(dú)特的新型殺菌劑。氰烯菌酯作為一種新型農(nóng)藥，可以被廣泛用于多種田間病害，對(duì)于已經(jīng)產(chǎn)生抗性水平的病菌有良好抑菌效果。氰烯菌酯對(duì)鐮刀屬病菌引起的病害防效突出，在赤霉病、枯萎病和惡苗病的防治上效果非常好，目前無(wú)任何抗性產(chǎn)生，對(duì)被病菌侵染的作物具有保護(hù)和治療的功效，且使用后不影響作物的正常生長(zhǎng)，高效、微毒、低殘留，可大幅改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)，因此具有極高的推廣價(jià)值和市場(chǎng)前景。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法和應(yīng)用， 用于實(shí)現(xiàn)對(duì)氰烯菌酯或含有氰烯菌酯的農(nóng)藥進(jìn)行更安全、快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的定量分析。技術(shù)方案為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法，包括如下步驟(1)將氰烯菌酯用有機(jī)溶劑溶解并定容；(2)以步驟(1)的有機(jī)溶劑和水作為流動(dòng)相，流速為lml/min，色譜柱為Cw柱，柱箱溫度25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 300nm，進(jìn)樣體積10 μ 1，采用紫外線檢測(cè)器進(jìn)行定量分析。本發(fā)明經(jīng)過(guò)實(shí)際測(cè)試，用反相高效液相色譜法對(duì)氰烯菌酯的含量進(jìn)行分析，通過(guò)對(duì)氰烯菌酯進(jìn)行紫外掃描，得到紫外吸收曲線，在檢測(cè)波長(zhǎng)為^Onm附近有較好的吸收，雜質(zhì)影響最小，流動(dòng)相無(wú)吸收。所述步驟(1)中的氰烯菌酯包括氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品以及需要進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析的含有氰烯菌酯的農(nóng)藥，經(jīng)過(guò)溶解、定容后，分別得到氰烯菌酯的標(biāo)樣溶液和試樣溶液。氰烯菌酯原藥為白色固體粉末，所述步驟(1)中的有機(jī)溶劑包括甲醇或乙腈或二者的組合。本發(fā)明利用上述有機(jī)溶劑和水作為高效液相色譜的流動(dòng)相。所述步驟( 中有機(jī)溶劑和水的體積比為2 3 4 1。作為本發(fā)明的優(yōu)化方案，所述步驟( 中有機(jī)溶劑和水的體積比為3 2。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行至穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1.5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，用外標(biāo)法計(jì)算含量，以質(zhì)量百分比計(jì)算氰烯菌酯的含量。計(jì)算公式如下X1 = ^2Xm1 X P)/^1Xm2) ；(1)rr標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；
Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。本發(fā)明采用高效液相色譜法對(duì)氰烯菌酯農(nóng)藥進(jìn)行定量分析，對(duì)氰烯菌酯農(nóng)藥的劑型并無(wú)嚴(yán)格要求。所述的氰烯菌酯農(nóng)藥可以是水分散粒劑、可濕性粉劑、水乳劑、懸浮劑、乳油、種子處理劑的任意一種。有益效果本發(fā)明的一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法對(duì)氰烯菌酯農(nóng)藥的液相色譜檢測(cè)方法進(jìn)行了探索和歸納，得到了以290nm為檢測(cè)波長(zhǎng)的最優(yōu)方案，該方法對(duì)氰烯菌酯類農(nóng)藥的檢測(cè)非常方便、精確，對(duì)該類農(nóng)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)和質(zhì)量檢測(cè)具有重要意義。


圖1是氰烯菌酯的紫外吸收曲線；圖2是98%氰烯菌酯標(biāo)樣的液相色譜圖；圖3是氰烯菌酯懸浮劑的液相色譜圖；圖4是氰烯菌酯進(jìn)樣量和峰面積的線性關(guān)系。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法的分析步驟如下稱取0. 12g(精確至0.0002g)98%的氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容；稱取含有0. 12g (精確至0. 0002g)氰烯菌酯的懸浮劑作為試樣，于IOOmL容
量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色譜儀為Agilent 1200系列，具有可變波長(zhǎng)的紫外線檢測(cè)器，色譜柱選用安捷倫公司生產(chǎn)的C18不銹鋼柱(150mmX4. 6mm)。流動(dòng)相為甲醇+水=60+40ml (V/V)， 流量為lml/min ；柱溫為25°C，進(jìn)樣體積為10μ 1。通過(guò)對(duì)氰烯菌酯進(jìn)行紫外掃描，得到氰烯菌酯的紫外吸收曲線(如圖1所示)，在280 300nm波長(zhǎng)附近的吸收較好，雜質(zhì)響應(yīng)小， 流動(dòng)相無(wú)吸收，其中以290nm為最優(yōu)，因此檢測(cè)波長(zhǎng)為^Onm。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1. 5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，得到標(biāo)樣、試樣的液相色譜圖如圖2、圖3所示，可見(jiàn)保留時(shí)間在3. OlOmin的色譜峰，即為氰烯菌酯色譜峰。根據(jù)公式(r2XHi1XP)/^ Xm2)計(jì)算氰烯菌酯試樣中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。實(shí)施例2本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法的分析步驟如下
稱取0. 12g(精確至0.0002g)98%的氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容；稱取含有0. 12g(精確至0. 0002g)氰烯菌酯的可濕性粉劑作為試樣，于 IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色譜儀為Agilent 1200系列，具有可變波長(zhǎng)的紫外線檢測(cè)器，色譜柱選用安捷倫公司生產(chǎn)的C18不銹鋼柱(150mmX4. 6mm)。流動(dòng)相為甲醇+水=40+60ml (V/V)， 流量為lml/min ；柱溫為25°C，進(jìn)樣體積為10 μ 1，檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行至穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1. 5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，根據(jù)公式(r2XHi1XP)/^Xm2)計(jì)算氰烯菌酯試樣中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。實(shí)施例3本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法的分析步驟如下稱取0. 12g(精確至0.0002g)98%的氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容；稱取含有0. 12g (精確至0. 0002g)氰烯菌酯的水乳劑作為試樣，于IOOmL容
量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色譜儀為Agilent 1200系列，具有可變波長(zhǎng)的紫外線檢測(cè)器，色譜柱選用安捷倫公司生產(chǎn)的C18不銹鋼柱(150mmX4. 6mm)。流動(dòng)相為甲醇+水=80+20ml (V/V)， 流量為lml/min ；柱溫為25°C，進(jìn)樣體積為10 μ 1，檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行至穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1. 5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，根據(jù)公式(r2XHi1XP)/^Xm2)計(jì)算氰烯菌酯試樣中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；
Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。實(shí)施例4本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法的分析步驟如下稱取0. 12g(精確至0.0002g)98%的氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容；稱取含有0. 12g(精確至0. 0002g)氰烯菌酯的水分散粒劑作為試樣，于 IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容。高效液相色譜儀為Agilent 1200系列，具有可變波長(zhǎng)的紫外線檢測(cè)器，色譜柱選用安捷倫公司生產(chǎn)的C18不銹鋼柱(150mmX4. 6mm)。流動(dòng)相為乙腈+水=60+40ml (V/V)， 流量為lml/min ；柱溫為25°C，進(jìn)樣體積為10 μ 1，檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行至穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1. 5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，根據(jù)公式(r2XHi1XP)/^Xm2)計(jì)算氰烯菌酯試樣中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。實(shí)施例5本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法的分析步驟如下稱取0. 12g(精確至0.0002g)98%的氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容；稱取含有0. 12g (精確至0. 0002g)氰烯菌酯的乳油作為試樣，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容。高效液相色譜儀為Agilent 1200系列，具有可變波長(zhǎng)的紫外線檢測(cè)器，色譜柱選用安捷倫公司生產(chǎn)的C18不銹鋼柱(150mmX4. 6mm)。流動(dòng)相為乙腈+水=40+60ml (V/V)， 流量為lml/min ；柱溫為25°C，進(jìn)樣體積為10 μ 1，檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行至穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1. 5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，根據(jù)公式(r2XHi1XP)/^Xm2)計(jì)算氰烯菌酯試樣中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。實(shí)施例6本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法的分析步驟如下稱取0. 12g(精確至0.0002g)98%的氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，于IOOmL容量瓶中，用乙腈溶解，定容；稱取含有0. 12g (精確至0. 0002g)氰烯菌酯的浸種劑作為試樣，于IOOmL容
量瓶中，用乙腈溶解，定容。高效液相色譜儀為Agilent 1200系列，具有可變波長(zhǎng)的紫外線檢測(cè)器，色譜柱選用安捷倫公司生產(chǎn)的C18不銹鋼柱(150mmX4. 6mm)。流動(dòng)相為乙腈+水=80+20ml (V/V)， 流量為lml/min ；柱溫為25°C，進(jìn)樣體積為10 μ 1，檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行至穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1. 5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，根據(jù)公式(r2XHi1XP)/^Xm2)計(jì)算氰烯菌酯試樣中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。
實(shí)施例7本發(fā)明的氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法的分析步驟如下稱取0. 12g(精確至0.0002g)98%的氰烯菌酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解，定容；稱取含有0. 12g(精確至0. 0002g)氰烯菌酯的種衣劑作為試樣，于IOOmL容
量瓶中，用甲醇溶解，定容。高效液相色譜儀為Agilent 1200系列，具有可變波長(zhǎng)的紫外線檢測(cè)器，色譜柱選用安捷倫公司生產(chǎn)的Cw不銹鋼柱(150mmX4.6mm)。流動(dòng)相為甲醇+乙腈+水= 40ml+20ml+40ml，流量為lml/min ；柱溫為25°C，進(jìn)樣體積為10 μ 1，檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm。當(dāng)高效液相色譜儀運(yùn)行至穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，當(dāng)相鄰兩針的有效成分峰面積的相對(duì)偏差< 1. 5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣分析，根據(jù)公式(r2XHi1XP)/^Xm2)計(jì)算氰烯菌酯試樣中氰烯菌酯的含量。式中，Γι_標(biāo)準(zhǔn)溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；r2-試樣溶液中氰烯菌酯峰面積的平均值；Hi1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g;m2-試樣的質(zhì)量，g。P-標(biāo)樣中氰烯菌酯的質(zhì)量百分含量，％。實(shí)施例8稱取氰烯菌酯標(biāo)樣0. 3g(精確至0. 0002g)置于IOOml容量瓶中，用甲醇溶解，定容。用移液管依次準(zhǔn)確移取5ml、10ml、15ml、20ml、25ml于100ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按實(shí)施例1中的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以氰烯菌酯進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得到氰烯菌酯線性方程為Y = 2042. 3X+6，相關(guān)系數(shù)R為0. 9997，如圖4 所示。在實(shí)施例1中的色譜操作條件下，對(duì)實(shí)施例1中的待測(cè)樣品進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定，結(jié)果為25. 4，25. 7，25. 4，25. 6,25. 3, 25. 8，平均含量為25. 53，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0. 019，變異系數(shù)為 0. 077%，可見(jiàn)該方法測(cè)定的精密度很高。再稱取一定量的樣品準(zhǔn)確加入不同量的氰烯菌酯標(biāo)樣測(cè)定其含量，計(jì)算平均回收率(回收率=實(shí)測(cè)值/配置值χ 100% )為100.4%，說(shuō)明該方法的準(zhǔn)確度良好。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法，其特征在于包括如下步驟(1)將氰烯菌酯用有機(jī)溶劑溶解并定容；(2)以步驟(1)的有機(jī)溶劑和水作為流動(dòng)相，流速為lml/min，色譜柱為C18柱，柱溫為 25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為^(T300nm，進(jìn)樣體積10 μ 1，采用可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器進(jìn)行定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法，其特征在于所述步驟(1)中的有機(jī)溶劑包括甲醇或乙腈或二者的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法，其特征在于所述步驟(2)中有機(jī)溶劑和水的體積比為2:3 4:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法，其特征在于所述步驟(2)中有機(jī)溶劑和水的體積比為3:2。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種氰烯菌酯的高效液相色譜分析方法，屬于農(nóng)藥分析領(lǐng)域。該方法將氰烯菌酯用有機(jī)溶劑溶解并定容，以有機(jī)溶劑和水作為流動(dòng)相，流速為1ml/min，色譜柱為C18柱，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為280~300nm，進(jìn)樣體積10μl，采用可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器進(jìn)行定量分析。本發(fā)明對(duì)氰烯菌酯農(nóng)藥的液相色譜檢測(cè)方法進(jìn)行了探索和歸納，得到了以290nm為檢測(cè)波長(zhǎng)的最優(yōu)方案，該方法對(duì)氰烯菌酯類農(nóng)藥的檢測(cè)非常方便、精確，對(duì)該類農(nóng)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)和質(zhì)量檢測(cè)具有重要意義。
文檔編號(hào)G01N30/89GK102435704SQ20111039326
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者吉沐祥, 吳祥, 莊桂花, 束兆林, 王莉莉, 繆康, 費(fèi)子華, 趙來(lái)成, 陳源 申請(qǐng)人:江蘇省綠盾植保農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)有限公司