專利名稱：：作為用于前列腺癌診斷和分期的非侵入性標(biāo)志物的循環(huán)miRNA的制作方法作為用于前列腺癌診斷和分期的非侵入性標(biāo)志物的循環(huán)miRNA本發(fā)明涉及用于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的方法，所述方法包括(a)在來自所述受試者的樣品中測(cè)定選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者前體分子的量和(b)將如此測(cè)定的量與參考量比較。此外，本發(fā)明涉及用于鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的方法，以及用于診斷前列腺癌的方法。本發(fā)明還涉及適合于實(shí)施本發(fā)明方法的試劑盒和裝置。在西方男性中，前列腺癌是最經(jīng)常被診斷的惡性腫瘤，并占癌癥相關(guān)死亡原因的第二位。因?yàn)榘┌Y的發(fā)展和進(jìn)展由分子改變驅(qū)動(dòng)，分子特征的分析可以最終允許更好的預(yù)測(cè)個(gè)體癌癥的行為。前列腺癌具有較高的發(fā)生率，但腫瘤侵占性和長期結(jié)果是可變的。用于治療決定的高和低風(fēng)險(xiǎn)前列腺腫瘤的分離在臨床情況中仍是未解決的問題。前列腺癌的常見分類基于臨床和病理學(xué)參數(shù)，如術(shù)前前列腺特異性抗原(PSA)、直腸指檢(DRE)、經(jīng)直腸的超聲檢測(cè)，以及前列腺活組織檢查的組織學(xué)分級(jí)(Gleason得分)。然而，所有這些參數(shù)在其預(yù)測(cè)能力方面都具有局限。對(duì)于PCA的檢測(cè)，前列腺特異性抗原(PSA)的廣泛使用導(dǎo)致越來越多的男性診斷為具有器官局限性、低Gleason-得分PCA，所述PCA是可能治愈的。然而，PSA測(cè)試的高靈敏性伴隨著低特異性，造成許多患者經(jīng)歷不必要的活組織檢查。具有正常前列腺病理的男性，在血液中通常具有低于4ng/ml的PSA水平。4ng/ml和10ng/ml之間(‘灰色區(qū)’)的PSA水平具有25%的幾率具有前列腺癌。結(jié)果，在75%的病例中，在該灰色區(qū)內(nèi)具有異常DRE和PSA的男性為陰性，或者似乎不需要進(jìn)行活組織檢查。PSA是前列腺體積的指示物，并因此顯示出在輔助預(yù)測(cè)前列腺癌中的局限性。因此，進(jìn)行前列腺組織活檢以確認(rèn)診斷并評(píng)價(jià)腫瘤侵占性。使用Gleason得分(GS)系統(tǒng)根據(jù)其細(xì)胞分化狀態(tài)分級(jí)腫瘤組織。目前，對(duì)于臨床風(fēng)險(xiǎn)分層，GS是最可靠的預(yù)測(cè)標(biāo)志物。然而，前列腺癌是多病灶疾病。因此，常常在進(jìn)行活組織檢查期間漏掉了腫瘤，并且不知道活組織檢測(cè)內(nèi)的腫瘤病灶是否是驅(qū)動(dòng)癌癥進(jìn)展的腫瘤病灶。因此，不得不在根治性前列腺切除術(shù)后升級(jí)大部分腫瘤。這種升級(jí)可能影響治療決定，因?yàn)榫哂懈逩S的腫瘤與術(shù)后生物化學(xué)復(fù)發(fā)和更差的存活相關(guān)。各個(gè)患者的治療決定與該個(gè)體中存在的前列腺癌的階段聯(lián)系。美國泌尿科學(xué)協(xié)會(huì)(AmericanUrologicalAssociation)(AUA)研發(fā)了前列腺癌擴(kuò)散的常見分類。AUA系統(tǒng)將前列腺腫瘤分成4個(gè)階段，A至D。將階段A(前列腺內(nèi)的微型癌)進(jìn)一步細(xì)分成階段Al和A2。亞階段Al是局限于前列腺內(nèi)一個(gè)位點(diǎn)的較好分化的癌。治療通常是觀察、根治性前列腺切除術(shù)或者放療。亞階段A2是在前列腺內(nèi)多個(gè)位點(diǎn)處的中等至低分化癌。治療是根治性前列腺切除術(shù)或者放療。還將階段B(前列腺內(nèi)可觸知的腫塊)進(jìn)一步細(xì)分成亞階段BI和B2。在亞階段BI中，癌癥在前列腺的一葉中形成了小結(jié)節(jié)。在亞階段B2中，癌癥或者在前列腺的兩葉中都形成或發(fā)生了大的或者多個(gè)結(jié)節(jié)。亞階段BI和B2的治療是根治性前列腺切除術(shù)或者放療。階段C是涉及大部分或者全部前列腺的較大癌癥團(tuán)塊，并且還可以進(jìn)一步細(xì)分成兩個(gè)亞階段。在亞階段Cl中，形成連續(xù)團(tuán)塊的癌癥可能已經(jīng)延伸至前列腺以夕卜。在亞階段C2中，癌癥形成的連續(xù)團(tuán)塊侵入了周圍組織。對(duì)這兩種亞階段的治療都是放療，使用用或不用針對(duì)癌癥的藥物。第四階段，階段D是轉(zhuǎn)移性癌癥，并也可以細(xì)分成兩個(gè)亞階段。在亞階段Dl中，癌癥在骨盆的淋巴結(jié)中存在。在亞階段D2中，癌癥涉及淋巴結(jié)以外的組織。對(duì)這兩種亞階段的治療是針對(duì)癌癥以及疼痛的全身性藥物。然而，當(dāng)前的前列腺癌分期方法是有局限的。多至50%最初分期為A2、B或C的前列腺癌實(shí)際上是轉(zhuǎn)移性的階段D。轉(zhuǎn)移瘤的發(fā)現(xiàn)是意義重大的，因?yàn)榫哂修D(zhuǎn)移性癌癥的患者具有較差的預(yù)后，并需要與那些具有局限性癌癥的患者顯著不同的療法。具有局限性和轉(zhuǎn)移性前列腺癌的患者的五年存活率分別為93%和29%。miRNA是短RNA分子(19-26個(gè)核苷酸)，提示其為生物學(xué)功能的重要調(diào)節(jié)物(BushatiN，CohenSM。microRNAfunctions。AnnuRevCellDevBiol2007；23175-205)oiniRNA表達(dá)的改變可以影響重要的細(xì)胞過程，如細(xì)胞周期、增殖或凋亡，因而提供了與癌癥發(fā)展和進(jìn)展的直接聯(lián)系(CalinGA，CroceCM。MicroRNAsignaturesinhumancancer.NatRevCancer2006；6(11):857-66;RosenfeldN,AharonovR，MeiriE，等人。MicroRNAsaccuratelyidentifycancertissueorigin。NatBiotechnol2008；26(4)462-9)o最近顯示，可以在血清中提取并測(cè)量穩(wěn)定的游離miRNA，并且其作為潛在的生物標(biāo)志物的來源。Lawrie等人首先表明，在患B細(xì)胞淋巴瘤的患者的體液中存在miRNA(LawrieCH,GalS，DunlopHM，等人。Detectionofelevatedlevelsoftumour-associatedmicroRNAsinserumofpatientswithdiffuselargeB—cellIymphoma0BrJHaematol2008；141(5):672-5)0Mitchell等人用小鼠模型闡明，即使當(dāng)起源于上皮癌類型時(shí)，腫瘤來源的miRNA也會(huì)進(jìn)入循環(huán)。在該研究中，他們還顯示，當(dāng)與健康對(duì)照比較時(shí)，循環(huán)miRNA-141在轉(zhuǎn)移性前列腺癌中是升高的(MitchellPSiParkinRKiKrohEM，等人。CirculatingmicroRNAsasstableblood-basedmarkersforcancerdetection。ProcNatlAcadSciUSA2008；105(30):10513-89)。在多種其它癌癥疾病中，循環(huán)miRNA還顯不出在腫瘤患者和健康對(duì)照之間以不冋的水平存在(TanakaM，OikawaK，TakanashiM，等人，Down-regulationofmiR-92inhumanplasmaisanovelmarkerforacuteleukemiapatientsoPLoSONE2009；4(5)e5532；ChenX，BaY，MaL，等人，CharacterizationofmicroRNAsinserumanovelclassofbiomarkersfordiagnosisofcancerandotherdiseases。CellRes2008；18(10):997-1006；TaylorDDiGercel-TaylorC0MicroRNAsignaturesoftumor-derivedexosomesasdiagnosticbiomarkersofovariancancer。Gynecol0ncol2008；110(1):13-21)o然而，在上皮癌中的不同階段之間還沒有發(fā)現(xiàn)以不同水平存在的無細(xì)胞miRNA(ResnickKEiAlderH，HaganJP，RichardsonDL,CroceCM，CohnDE0ThedetectionofdifferentiallyexpressedmicroRNAsfromtheserumofovariancancerpatientsusinganovelreal-timePCRplatform。GynecolOncol2008；NgEK,ChongWW,JinH，等人，DifferentialexpressionofmicroRNAsinplasmaofcolorectalcancerpatientsApotentialmarkerforcolorectalcancerscreening。Gut2009)。因此，存在極大的需求來鑒定反映腫瘤進(jìn)展的新分子標(biāo)記物，以增強(qiáng)前列腺癌的臨床治療。具體而言，需要允許容易且可靠分期前列腺癌的工具和方法，以及允許診斷前列腺癌的工具和方法，以及鑒定對(duì)目的在于治療前列腺癌的療法敏感的受試者。此類可靠的工具和方法還未有描述。本發(fā)明的技術(shù)困難可見為提供前述需求的工具和方法。通過權(quán)利要求和下文中所述的實(shí)施方案解決了技術(shù)問題。因此，本發(fā)明涉及患前列腺癌的受試者中前列腺癌分期的方法，包括a)測(cè)定來自所述受試者的樣品中選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA_200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量,或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，b)將如在步驟a)中測(cè)定的所述至少一種miRNA或者所述前體分子的量與參考量(或多個(gè)參考量)比較，并c)基于在步驟b)中獲得的信息對(duì)所述受試者中前列腺癌分期。本發(fā)明方法優(yōu)選地是體外方法。此外，除上文明確描述的那些步驟外，其還可以包含另外的步驟。例如，另外的步驟可以涉及樣品預(yù)處理或者評(píng)價(jià)通過該方法獲得的結(jié)果。本發(fā)明方法優(yōu)選地用于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌。然而，本發(fā)明方法還可以用于監(jiān)測(cè)、確證和亞分類所述受試者。該方法可以手工實(shí)施或者通過自動(dòng)化輔助實(shí)施。優(yōu)選地，步驟(a)和(b)可以全部或者部分通過自動(dòng)化輔助，例如，通過機(jī)器人和傳感器設(shè)備用于步驟(a)中的測(cè)定，或者在步驟(b)中應(yīng)用計(jì)算機(jī)實(shí)現(xiàn)的比較。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解，前述分期通常并非意圖對(duì)100%待分析的受試者都是正確的。然而，該術(shù)語要求該評(píng)估對(duì)于待分析受試者的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著部分是有效的?？梢允褂枚喾N熟知的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)工具，例如，置信區(qū)間測(cè)定、P值測(cè)定、斯氏t檢驗(yàn)、Mann-Whitney檢驗(yàn)等等，在不再另外費(fèi)力的情況下，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員測(cè)定該部分是否統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。詳細(xì)說明見于Dowdy和Wearden,StatisticsforResearch,JohnWiley&Sons,NewYork1983。優(yōu)選的置信區(qū)間為至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或者至少99%。p值優(yōu)選地為O.1,0.05,0.01,0.005或者O.001。優(yōu)選地，本發(fā)明所考慮的概率允許該分期對(duì)于給定群組的受試者的至少60%、至少70%、至少80%或者至少90%是正確的。如本文中所用，術(shù)語“受試者”指雄性動(dòng)物，優(yōu)選地雄性哺乳動(dòng)物和，更優(yōu)選地，男性人類。然而，設(shè)想根據(jù)本發(fā)明的前述方法，其涉及的受試者應(yīng)當(dāng)患前列腺癌。術(shù)語“前列腺癌”在本領(lǐng)域是已知的。如本文中所用，該術(shù)語優(yōu)選地涉及前列腺的任意增殖性病變或者異常。因此，該術(shù)語優(yōu)選地包括惡變前的病變、惡性病變以及實(shí)體腫瘤和轉(zhuǎn)移性疾病(局限性轉(zhuǎn)移和更廣泛的轉(zhuǎn)移二者)。如何評(píng)估受試者是否患前列腺癌是本領(lǐng)域熟知的。具有PCA的升高風(fēng)險(xiǎn)的男性的臨床決定制定過程基于臨床準(zhǔn)則的證據(jù)確定。(HeidenreichA,AusG,BollaM,等人,EAUguidelinesonprostatecancer。EurUrol2008；53:68-80)。如本文中所用，術(shù)語“分期前列腺癌”優(yōu)選地指區(qū)分前列腺癌的多種階段。前列腺腫瘤階段的一般分類是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。簡言之，最通常使用的分期方法是腫瘤，結(jié)節(jié)，轉(zhuǎn)移(Tumour,Nodes,Metastasis)(TNM)系統(tǒng),其考慮了局部腫瘤生長的4個(gè)階段,從Tl(偶發(fā)的)至T4(浸潤?quán)徑鞴?。每一階段都描述了腫瘤病理學(xué)發(fā)展的狀態(tài)。Tl表示“偶發(fā)”狀態(tài)，其中腫瘤經(jīng)尿道切除后由于偶然性檢測(cè)到或者PSA測(cè)試后通過活組織檢查檢測(cè)至IJ。在該階段，通過觸診(DRE)或者超聲不能檢測(cè)到腫瘤，但可以通過本發(fā)明方法診斷。T4表示晚期疾病，其中腫瘤已經(jīng)浸潤了鄰近器官。淋巴結(jié)階段(NO-Nl)和轉(zhuǎn)移階段(MO-MlC)分別反映疾病至淋巴結(jié)和遠(yuǎn)端位點(diǎn)(轉(zhuǎn)移)的臨床擴(kuò)散。分級(jí)系統(tǒng)可以評(píng)估腫瘤中細(xì)胞間變(大小、形態(tài)和染色特性的變化)和分化(細(xì)胞如何高度分化)的程度。Gleason分級(jí)系統(tǒng)基于腫瘤細(xì)胞排列成可識(shí)別的腺狀結(jié)構(gòu)的程度以及細(xì)胞分化的水平。Gleason系統(tǒng)鑒定了5種以上水平的增加的疾病侵占性，級(jí)別I是侵占性最低的癌和級(jí)別5以上是侵占性最聞的癌。如本文中所用，術(shù)語“分期前列腺癌”，優(yōu)選地指區(qū)分前列腺癌的輕微和嚴(yán)重形式。在本發(fā)明的上下文中，前列腺癌的輕微形式優(yōu)選地是原發(fā)性前列腺癌。前列腺癌的嚴(yán)重形式優(yōu)選地是轉(zhuǎn)移性前列腺癌。因此，本發(fā)明的前述方法優(yōu)選地允許區(qū)分原發(fā)性前列腺癌和轉(zhuǎn)移性前列腺癌。在本發(fā)明方法的上下文中，術(shù)語“原發(fā)性前列腺癌”優(yōu)選地涉及局限性前列腺癌(例如PT2或更低)。在本發(fā)明方法的上下文中，術(shù)語“轉(zhuǎn)移性前列腺癌”優(yōu)選地涉及具有轉(zhuǎn)移性腫瘤，優(yōu)選地骨轉(zhuǎn)移腫瘤的前列腺癌(例如前列腺癌ρΝ+、Μ+、全身性階段)。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，區(qū)分了高風(fēng)險(xiǎn)、中等風(fēng)險(xiǎn)和低風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明方法的上下文中，處于“低風(fēng)險(xiǎn)”的受試者指患具有Gleason得分為6或者低于6的前列腺癌的受試者。本發(fā)明方法的上下文中，處于“中等風(fēng)險(xiǎn)”的受試者指患具有Gleason得分為7的前列腺癌的受試者。本發(fā)明方法的上下文中，處于“高風(fēng)險(xiǎn)”的受試者指患具有Gleason得分為8或者大于8的前列腺癌的受試者。術(shù)語“樣品”指體液樣品、分離的細(xì)胞樣品或者來自組織或器官的樣品。體液樣品可以通過熟知的技術(shù)獲得，并優(yōu)選地包括血液、血漿、血清或者尿樣品，更優(yōu)選地，血液、血漿或血清樣品。組織或器官樣品可以通過例如，活組織檢查獲自任一組織或器官。優(yōu)選的組織和器官樣品獲自前列腺，其可以通過熟知的方法獲得，優(yōu)選地通過針吸活組織檢查。分離的細(xì)胞可以通過分離技術(shù)例如離心或細(xì)胞分選，獲自體液或組織或者器官。在本發(fā)明方法的上下文中，優(yōu)選的細(xì)胞是前列腺細(xì)胞。在本發(fā)明的上下文中，最優(yōu)選的樣品是血液、血清或者血衆(zhòng)樣品。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，通過熟知的方法進(jìn)一步處理樣品，以進(jìn)一步富集和/或純化如本文中所述的miRNA分子或其前體分子。進(jìn)一步處理取決于標(biāo)志物的性質(zhì)，即待測(cè)定的標(biāo)志物是miRNA還是前體分子。優(yōu)選地，如果標(biāo)志物是miRNA，那么(獲得樣品后)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法富集和/或純化小RNA(例如18至24nt長度)。優(yōu)選地，如果生物標(biāo)志物是前體分子，(獲得樣品后)可以通過本領(lǐng)域熟知的方法富集和/或純化所述總RNA。對(duì)于從樣品中g(shù)集miRNA分子，可以在弟一步從樣品中純化總RNA。在弟_■步中，可以通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離總RNA。在第三步中，可以從聚丙烯酰胺凝膠中純化小RNA部分(例如18-24個(gè)核苷酸長度)。在本發(fā)明的上下文中，還考慮從樣品中分離miRNA。具體而言，可以將基于苯酚/胍的裂解和基于硅膠膜的純化組合用于從血清樣品中分離無細(xì)胞的RNA。此外,可以將多種miRNA模擬物(例如,來自線蟲(c.elegans)的cel-miRNA_39、cel-miRNA-54、cel-miRNA-238，參見實(shí)施例)加入到樣品中作為純化效率的spike_in對(duì)照(MitchellPS,ParkinRK,KrohEM,等人,CirculatingmicroRNAsasstableblood-basedmarkersforcancerdetection。ProcNatlAcadSciUSA2008；105(30):10513-89)。還考慮在獲得RNA樣品后實(shí)施反轉(zhuǎn)錄(特別地通過定量RT-PCR，以定量RNA，參見下文)。微RNA(miRNA)是大約21_23個(gè)核苷酸長度的單鏈RNA分子，其調(diào)節(jié)基因表達(dá)。通常還將所述miRNA稱為成熟miRNA。miRNA是非編碼RNA并，因此并不翻譯成蛋白質(zhì)。它們來源于初級(jí)轉(zhuǎn)錄物(pri-miRNA),所述初級(jí)轉(zhuǎn)錄物在第一步中被加工成短莖-環(huán)(發(fā)夾)結(jié)構(gòu)(pre-miRNA)，并然后成為功能性miRNA。成熟miRNA分子與對(duì)應(yīng)的靶mRNA部分互補(bǔ)，并且該結(jié)合導(dǎo)致翻譯抑制或者mRNA降解。在本發(fā)明的上下文中，應(yīng)當(dāng)在來自受試者的樣品中測(cè)定選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*或者它們的前體分子的至少一種miRNA的量。前述miRNA是單鏈RNA分子。miRNA-375的序列顯示于SEQIDNO:1中，miRNA-141的序列顯示于SEQIDNO:2中，miRNA-200b的序列顯示于SEQIDNO:3中，miRNA-516a_3p的序列顯示于SEQIDNO4中，miRNA9*顯示于SEQIDNO:5中。如本文中所用，短語“至少一種”優(yōu)選地指“一種miRNA”或者“一種以上”，特別地，兩種、三種、四種或者五種miRNA或者它們的前體。因此，考慮通過測(cè)定多種miRNA或者它們的前體的量分期前列腺癌。前述miRNA的前體分子優(yōu)選地是對(duì)應(yīng)的pri_miRNA和，更優(yōu)選地對(duì)應(yīng)的pre-miRNA。miRNA-375的pre-miRNA前體的序列顯示于SEQIDNO:6中，miRNA-141的pre-miRNA前體的序列顯不于SEQIDNO7中，miRNA-200b的pre-miRNA前體的序列顯不于SEQIDNO:8中，和miRNA-516a-3p的pre-miRNA前體的序列顯示于SEQIDN0:9中，和miRNA9*的pre-miRNA前體的序列顯示于SEQIDNO:10中。還考慮測(cè)定受試者的樣品中任一多種前述SEQIDNo的量。優(yōu)選地，此類變體具有與SEQIDNO:1至10的任意一種至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或者至少99%同一性的核酸序列。優(yōu)選地通過Needleman和Wunsch或者Smith和Waterman算法測(cè)定兩個(gè)或者多個(gè)核酸序列之間的同一性程度(百分比，％)。為了實(shí)施序列比對(duì)，使用為GCG軟件包(GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,Wisconsin,USA5371,1991年版)的一部分的程序PileUp(J.Mol.Evolution.，25,351-360,1987,Higgins1989，CABI0S，5:151-153)或者程序Gap和BestFit(Needleman1970，J.Mol.Biol.48；443-453和Smith1981，Adv.AppI.Math.2；482-489)。優(yōu)選地，使用程序GAP在整個(gè)序列區(qū)域用以下設(shè)定空位權(quán)重(GapWeight):50,長度權(quán)重(LengthWeight):3,平均匹配(AverageMatch):10.000和平均錯(cuò)配(AverageMismatch):0.000測(cè)定上文所列舉的以百分比)表示的序列同一性值，除非另外說明，所述設(shè)定應(yīng)當(dāng)始終用作為序列比對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定。應(yīng)當(dāng)理解，在本發(fā)明的上下文中，還可以通過測(cè)定一部分pre-miRNA的量來實(shí)施診斷/區(qū)分。例如，可以通過測(cè)定來自受試者的樣品中，對(duì)應(yīng)的miRNA*分子的miRNA前體分子的環(huán)，即加工自相對(duì)于成熟miRNA的發(fā)夾臂的小RNA的量來實(shí)施診斷。測(cè)定miRNA分子或者其前體分子的量可以通過任一認(rèn)為合適的方法進(jìn)行。在實(shí)施例中描述了用于測(cè)定所述量的優(yōu)選方法。Mitchell等人也描述了優(yōu)選的方法，所述文獻(xiàn)就其全部公開內(nèi)容而言引入本文作為參考(MitchellPS,ParkinRK，KrohEM，等人，CirculatingmicroRNAsasstableblood-basedmarkersforcancerdetection。ProcNatlAcadSciUSA2008；105(30):10513-89)?？梢酝ㄟ^使用特異性檢測(cè)待分析的miRNA或前體分子或者所述miRNA或所述前體的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針寡核苷酸，測(cè)定miRNA或者其前體分子的量(對(duì)于術(shù)語“擴(kuò)增產(chǎn)物”的解釋，參見下文)。通過特異性探針寡聚核苷酸來測(cè)定miRNA或者其前體分子的量，優(yōu)選地包括用與轉(zhuǎn)錄物或者其擴(kuò)增產(chǎn)物特異結(jié)合的探針寡核苷酸與miRNA或者其前體分子或者其擴(kuò)增產(chǎn)物雜交。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選地，探針寡核苷酸是對(duì)所述miRNA或其前體分子特異的單鏈核酸分子，并優(yōu)選地包含與靶特異性雜交的一段核苷酸，并因此與靶多核苷酸互補(bǔ)。所述一段核苷酸與靶多核苷酸包含的序列區(qū)優(yōu)選地具有85%、90%、95%、99%或者更優(yōu)選地具有100%的同一性。如果靶分子是miRNA，那么探針寡核苷酸與所述miRNA優(yōu)選地具有85%、90%、95%、99%或者更優(yōu)選地具有100%的同一性。優(yōu)選地，通過Needleman和Wunsch或者Smith和Waterman的算法確定兩個(gè)或多個(gè)核酸序列之間的同一性程度(百分比，％)。為了實(shí)施序列比對(duì)，使用為GCG軟件包(GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,Wisconsin,USA5371,1991年版)的一部分的程序PileUp(J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higgins1989，CABI0S，5:151-153)或者程序Gap和BestFit(Needleman1970,J.Mol.Biol.48；443-453和Smith1981,Adv.AppI.Math.2；482-489)。優(yōu)選地，使用程序GAP在整個(gè)序列區(qū)域用以下設(shè)定空位權(quán)重(GapWeight):50，長度權(quán)重(LengthWeight):3,平均匹配(AverageMatch):10.000和平均錯(cuò)配(AverageMismatch):0.000確定上文所列舉的以百分比(％)表示的序列同一性值，除非另外說明，所述設(shè)定應(yīng)當(dāng)始終用作為序列比對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定。探針寡核苷酸可以是經(jīng)標(biāo)記的或者含有其他修飾,包括允許測(cè)定miRNA或者其前體分子(或者其擴(kuò)增產(chǎn)物)的量的酶。標(biāo)記可以通過本領(lǐng)域熟知的多種技術(shù)進(jìn)行，并且取決于所使用的標(biāo)記。優(yōu)選的標(biāo)記描述于本說明書的其他地方。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，miRNA(或者其前體分子)的量的測(cè)定包括步驟擴(kuò)增樣品所包含的miRNA(或者其前體分子)和測(cè)定因此產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物的量。通過測(cè)定所述擴(kuò)增產(chǎn)物的量，可以估計(jì)miRNA分子(或者其前體分子)的量。優(yōu)選地，通過使用如上文中所述的探針寡核苷酸測(cè)定擴(kuò)增產(chǎn)物的量。如果應(yīng)當(dāng)測(cè)定樣品中miRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物的量,那么可以如由Mitchell等人所述擴(kuò)增miRNA(同前文獻(xiàn)，參見例如文件Mitchell的圖la)。在3’和5’端連接miRNA到單鏈寡核苷酸，該單鏈寡核苷酸含有用于反轉(zhuǎn)錄和PCR的通用序列。實(shí)施連接產(chǎn)物的反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄后，通過PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物。在本發(fā)明方法更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述PCR是實(shí)時(shí)PCR(RT-PCR)。因此，優(yōu)選地通過定量實(shí)時(shí)PCR測(cè)定miRNA的量。術(shù)語“實(shí)時(shí)PCR”是本領(lǐng)域已知的。當(dāng)實(shí)施實(shí)時(shí)PCR時(shí)，將在PCR反應(yīng)期間監(jiān)測(cè)的從PCR測(cè)定中發(fā)出的信號(hào)作為每一PCR擴(kuò)增循環(huán)期間擴(kuò)增產(chǎn)物的量的指標(biāo)，與常規(guī)PCR方法相反，其中在常規(guī)PCR方法中在PCR反應(yīng)的終點(diǎn)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。實(shí)時(shí)PCR通常基于熒光報(bào)道分子的檢測(cè)和定量。反應(yīng)中，信號(hào)與PCR產(chǎn)物的量成比例增加。當(dāng)實(shí)施實(shí)時(shí)PCR時(shí)，可以通過將結(jié)果與由連續(xù)稀釋(例如未稀釋的、I4、116、I64、1128)所述標(biāo)志物的預(yù)定量的實(shí)時(shí)PCR產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，來測(cè)定miRNA或者其前體分子的量。此外，為了準(zhǔn)確測(cè)定所述量，可以將所測(cè)量的量除以歸一化RNA(或者DNA)的量，其允許歸一化不同樣品之間RNA量的可能變化。歸一化RNA可以優(yōu)選地是加入到樣品中的RNA(或者DNA)(spike-in,參見實(shí)施例)。此外，考慮通過原位雜交，優(yōu)選地在前列腺組織樣品中測(cè)定本發(fā)明標(biāo)志物的量。如本文中所用，術(shù)語“量”包括miRNA或者前體分子(或者其擴(kuò)增產(chǎn)物)的絕對(duì)量、相對(duì)量或者其濃度，以及與其相關(guān)的任意值或參數(shù)。此類值或者參數(shù)包括通過直接測(cè)量獲得的全部特定物理或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度信號(hào)值，例如強(qiáng)度值。此外，還包括通過本說明書中其他地方說明的間接測(cè)量獲得的全部值或者參數(shù)，例如，從生物讀出系統(tǒng)中測(cè)定的表達(dá)水平。應(yīng)當(dāng)理解，與前述量或參數(shù)相關(guān)的值還可以通過全部的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)運(yùn)算獲得。如果實(shí)施實(shí)時(shí)PCR，那么特別優(yōu)選地是測(cè)定Ct值(Ct:循環(huán)閾值)，其指出樣品中待分析的標(biāo)志物的相對(duì)量。如何測(cè)定Ct值是本領(lǐng)域熟知的。通常，樣品中標(biāo)志物的量越大，Ct值越低。如本文中所用，術(shù)語“比較”包括將待分析的樣品中包含的miRNA、其前體分子(或者所述miRNA或者前體分子的擴(kuò)增產(chǎn)物)的量與在本說明書中其他地方所述的合適參考源的量比較。應(yīng)當(dāng)理解，如本文中所用，比較指對(duì)應(yīng)的參數(shù)或者值的比較，例如，將絕對(duì)量與絕對(duì)參考量比較，而將濃度與參考濃度比較，或者將獲自測(cè)試樣品的強(qiáng)度信號(hào)與參考樣品的相同類型強(qiáng)度信號(hào)比較。可以通過手工或者計(jì)算機(jī)輔助實(shí)施本發(fā)明方法的步驟(b)中提及的比較。對(duì)于計(jì)算機(jī)輔助的比較，可以通過計(jì)算機(jī)程序，將測(cè)定量的值與存儲(chǔ)在數(shù)據(jù)庫中的對(duì)應(yīng)的合適參考的值比較。計(jì)算機(jī)程序可以進(jìn)一步評(píng)價(jià)比較的結(jié)果，即以合適的輸出格式自動(dòng)提供想要的評(píng)估?；诓襟Ea)中測(cè)定的量與參考量的比較，可以在來自患前列腺癌的受試者的樣品中分期前列腺癌。術(shù)語“參考量”指允許在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的量。參考量可以來源于患不同階段的前列腺癌的受試者的樣品。例如，如果要區(qū)分原發(fā)性前列腺癌和轉(zhuǎn)移性前列腺癌，那么參考量可以來源于(i)患原發(fā)性前列腺癌的受試者和/或(ii)患轉(zhuǎn)移性前列腺癌的受試者的樣品。例如，如果要區(qū)分低風(fēng)險(xiǎn)、中等風(fēng)險(xiǎn)和高風(fēng)險(xiǎn)，那么參考量可以來源于(i)處于低風(fēng)險(xiǎn)的受試者，(ii)處于中等風(fēng)險(xiǎn)的受試者，和/或(iii)處于高風(fēng)險(xiǎn)的受試者的樣品。參考值還可以是獲自一組此類樣品的平均值或均值。優(yōu)選地，所述參考值來自血液、血漿或血清樣品。如果參考值獲自活組織檢查的組織樣品，那么所述樣品應(yīng)當(dāng)包含前列腺癌組織或者基本上由前列腺癌組織組成?？梢酝ㄟ^應(yīng)用本發(fā)明的方法獲得參考結(jié)果。參考值還可以是獲自一組前述樣品的平均值或者中值。此外，還優(yōu)選地，參考值可以是計(jì)算的參考值，最優(yōu)選地，處于前列腺癌的多種階段(優(yōu)選地前述階段)的個(gè)體的代表性群體，優(yōu)選地，美國、亞洲或歐洲群體的本發(fā)明方法上下文中所述標(biāo)志物的相對(duì)量或絕對(duì)量的平均值或中值。可以如在本文中其他地方所述，測(cè)定所述群體的個(gè)體的所述標(biāo)志物的絕對(duì)量或相對(duì)量。如何計(jì)算合適的參考值，優(yōu)選地平均值或中值是本領(lǐng)域熟知的。上文提及的受試者的群體應(yīng)當(dāng)包含多個(gè)受試者，優(yōu)選地，至少5、10、50、100、1,000或10，OOO個(gè)受試者。應(yīng)當(dāng)理解，通過本發(fā)明方法診斷的受試者與所述多個(gè)受試者的受試者是同一物種。更優(yōu)選地，“參考值”可以這樣獲得，通過測(cè)定一組參考受試者，例如一組患原發(fā)前列腺癌的受試者、一組患轉(zhuǎn)移性前列腺癌的受試者、包含待研究的受試者的群體的至少一種特征性特性的值；并通過合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，包括那些在本文中其他地方提及的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，例如中值、平均值、分位數(shù)、PLS-DA、邏輯回歸方法、隨機(jī)森林分類(randomforestclassification)或者其他給出閾值的方法計(jì)算參考值。閾值應(yīng)當(dāng)考慮診斷和預(yù)后測(cè)試的靈敏性和特異性的希望的臨床設(shè)定?？蓱?yīng)用于個(gè)體受試者的參考量可以依據(jù)多種生理學(xué)參數(shù)，例如年齡或者亞群，以及用于測(cè)定本文中所提及的標(biāo)志物的方法而改變。通過本發(fā)明方法，可以從待分析的參考樣品與(即同時(shí)地或者順次地)測(cè)試樣品一起測(cè)定合適的參考量?？梢越⒈疚闹刑峒暗脑\斷標(biāo)志物的參考量，并且可以將來自受試者的樣品中的標(biāo)志物的量簡單地與參考量比較。診斷和/或預(yù)后測(cè)試的靈敏性和特異性不僅僅取決于測(cè)試的分析“質(zhì)量它們還取決于對(duì)什么組成異常結(jié)果的定義。實(shí)際上，通常通過將變量的值對(duì)其在“正常”和“疾病”群體中的相對(duì)頻率作圖，來計(jì)算接受者操作特征曲線(ReceiverOperatingCharacteristiccurve)或者“ROC”曲線。對(duì)于任一具體的標(biāo)志物，處于多種階段前列腺癌的受試者的標(biāo)志物水平的分布可以重疊。在該條件下，測(cè)試不能在100%準(zhǔn)確的情況下絕對(duì)區(qū)分，并且重疊的面積表示測(cè)試不能區(qū)分正常和疾病。選定閾值，高于所述閾值(或者低于所述閾值，取決于標(biāo)志物如何隨疾病改變)認(rèn)為該測(cè)試是異常的，并且低于所述閾值，認(rèn)為該測(cè)試是正常的。ROC曲線下的面積是所理解的測(cè)量將允許正確鑒定疾病的概率的度量。甚至當(dāng)測(cè)試結(jié)果并不需要給出準(zhǔn)確數(shù)值時(shí)，也可以使用ROC曲線。只要可以排列結(jié)果，就可以創(chuàng)建ROC曲線。優(yōu)選地，如果要區(qū)分原發(fā)性前列腺癌和轉(zhuǎn)移性前列腺癌，并且如果參考結(jié)果獲自(i)患原發(fā)性前列腺癌的受試者和(ii)患轉(zhuǎn)移性前列腺癌的受試者，可以基于獲自測(cè)試樣品的測(cè)試結(jié)果與前述參考結(jié)果之間的同一性或相似性的程度，即基于至少一種miRNA標(biāo)志物或者其前體分子的相同或相似的定性或定量組成，實(shí)施前列腺癌的分期。在定量測(cè)定的情況下，如果特征性特性的值和強(qiáng)度值是相同的，那么測(cè)試樣品的結(jié)果和參考結(jié)果是相同的。如果特征性特性的值是相同的，但強(qiáng)度值是不同的，那么所述結(jié)果是類似的。優(yōu)選地，該差異是不顯著的，并且其特征在于強(qiáng)度的值至少在參考值的1%-99%,5%-95%,10%-90%,20%-80%,30%-70%,40%-60%之間的區(qū)間內(nèi)，參考值的50%、60%、70%、80%、90%或者95%。優(yōu)選地，如果要區(qū)分低風(fēng)險(xiǎn)、中等風(fēng)險(xiǎn)和高風(fēng)險(xiǎn)，并且參考結(jié)果獲自(i)處于低風(fēng)險(xiǎn)的受試者，(ii)處于中等風(fēng)險(xiǎn)的受試者和(iii)處于高風(fēng)險(xiǎn)的受試者，那么應(yīng)用相同的方法。在本發(fā)明方法的上下文中，還考慮分期基于獲自測(cè)試樣品的測(cè)試結(jié)果和前述參考結(jié)果之間的差異，即至少一種標(biāo)志物的定量組成的差異。如果使用上文所述的計(jì)算的參考值，那么應(yīng)用相同的方法。優(yōu)選地，差異應(yīng)當(dāng)是根據(jù)本發(fā)明的診斷標(biāo)志物的絕對(duì)量或者相對(duì)量的增加。優(yōu)選地，相對(duì)量或者絕對(duì)量的增加是顯著的，即在參考值的45%-55%,40%-60%,30%-70%,20%-80%,10%-90%,5%-95%,1%-99%之間的區(qū)間之外。此外，還考慮將閾值量用作為參考量?？梢詫⒏哂陂撝盗康臏y(cè)試樣品中如本文中所提及的標(biāo)志物的量用于指示前列腺癌的嚴(yán)重形式，其中將低于閾值量的量用于指示前列腺癌的輕微形式。有利地，在本發(fā)明上下文中實(shí)施的研究顯示，測(cè)定來自所述受試者的血漿樣品中選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，并因此將測(cè)定的量與參考量比較，允許在患前列腺癌的受試者中可靠地分期前列腺癌。特別地，進(jìn)行了篩選研究，以通過在兩個(gè)臨床風(fēng)險(xiǎn)組中監(jiān)測(cè)667個(gè)人類miRNA，鑒定在血清中與前列腺腫瘤進(jìn)展相關(guān)的循環(huán)miRNA。當(dāng)與原發(fā)性前列腺癌比較時(shí)，在來自患轉(zhuǎn)移性前列腺癌的患者的血清中，miRNA-375,miRNA-9*、miRNA-141、miRNA-200b和miRNA-516a_3p鑒定為高豐度的。此外，使用獨(dú)立患者群組的血清樣品，在前瞻性確認(rèn)研究中分析鑒定的miRNA(miRNA-375,miRNA-9*,miRNA-14UmiRNA-200b和HiiRNA-5I6a-3P)(參見實(shí)施例)。確認(rèn)研究證實(shí)，選定的循環(huán)miRNA與腫瘤進(jìn)展顯著相關(guān)。因此，已經(jīng)顯示，在前列腺癌中，循環(huán)miRNA與臨床病理學(xué)終點(diǎn)相關(guān)。鑒定的miRNA與腫瘤進(jìn)展相關(guān)，特別是miRNA-375，其與Gleason得分、淋巴結(jié)狀態(tài)和PT階段相關(guān)。在本發(fā)明的研究中，將循環(huán)miRNA-375與術(shù)前PSA值比較。顯示與較低風(fēng)險(xiǎn)腫瘤比較，miRNA-375在患高風(fēng)險(xiǎn)腫瘤的患者(Gleason得分>=8或者具有轉(zhuǎn)移性前列腺癌的患者)的血清中顯示出明顯更高的水平。相反，對(duì)于Gleason7和Gleason>=8腫瘤以及淋巴結(jié)狀態(tài)之間的PSA水平的比較，沒有檢測(cè)到顯著性差異。因此，相比PSA，miRNA-375允許更可靠的前列腺癌分期。miRNA-375在低、中等和高風(fēng)險(xiǎn)之間的三個(gè)逐組比較中表現(xiàn)出顯著的差異。此外，miRNA-375在具有淋巴結(jié)陽性狀態(tài)或者病理學(xué)階段pT3的患者的血清中具有顯著更高的豐度。為了評(píng)估PSA和miRNA-375對(duì)病理學(xué)終點(diǎn)的臨床預(yù)后的影響，應(yīng)用了ANOVA分析(參見實(shí)施例)?？偟膩碚f，ANOVA分析顯示，miRNA-375是前列腺癌的另外的非侵入性標(biāo)志物，如果應(yīng)用，其有助于在臨床背景中改進(jìn)治療決定。本發(fā)明方法是特別有利的，因?yàn)槠淇梢杂幂^小體積的血液、血清或血漿樣品實(shí)施。因此，可以避免活組織檢查。可以將上文給出的說明和定義就實(shí)際的情形應(yīng)用于以下方法(除非另外指明)。此外，本發(fā)明涉及在患前列腺癌的受試者中診斷前列腺癌的方法，所述方法包括a)在來自所述受試者的血液、血清或者血衆(zhòng)樣品中，測(cè)定選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA_200b、miRNA-516a_3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，b)將如在步驟a)中測(cè)定的所述至少一種miRNA或者所述前體分子的量與參考量比較，和c)基于步驟b)中獲得的信息診斷所述受試者中的前列腺癌。在前述方法的上下文中的受試者應(yīng)當(dāng)疑似患前列腺癌。此外，還考慮，該受試者可能具有前列腺癌的傾向。如本文中所用，懷疑患前列腺癌或者具有其傾向的受試者指優(yōu)選地，表現(xiàn)出指示前列腺癌的癥狀或者臨床病征或者參數(shù)的受試者。然而，該術(shù)語還指明顯的健康受試者，即并不表現(xiàn)出任一前述癥狀、臨床病征或者參數(shù)的受試者。明顯健康的受試者可以通過本發(fā)明方法研究作為預(yù)防性護(hù)理的度量或者用于群體篩查目的。如在前述方法中所用，術(shù)語“參考量”指允許在疑似患前列腺癌的受試者中診斷前列腺癌的量。參考量可以來源于(i)患前列腺癌的受試者或者(ii)來自已知未患前列腺癌的受試者的樣品。參考值還可以是獲自一組此類樣品的平均值或者中值?？梢詰?yīng)用本發(fā)明方法獲得參考結(jié)果。備選地，但然而也是優(yōu)選地，參考結(jié)果可以獲自來自已知未患前列腺癌的受試者或者已知不具有其傾向的受試者的樣品，即對(duì)于前列腺癌和更優(yōu)選地，對(duì)于其他疾病，特別是癌癥疾病而言健康的受試者。同樣，如果參考值獲自活組織檢查組織樣品，所述樣品應(yīng)當(dāng)基本上由明顯健康的前列腺組織組成。參考值還可以是獲自一組此類樣品的平均值或者中值。優(yōu)選地，如果涉及活組織檢查組織樣品，參考樣品和測(cè)試樣品可以獲自相同的受試者，即來自受前列腺癌明顯影響的區(qū)域或者來自疑似受前列腺癌影響的區(qū)域。此外，參考值還優(yōu)選地，可以是計(jì)算的參考值，更優(yōu)選地，明顯健康或者患前列腺癌的個(gè)體的代表性群體的如本文中所提及的標(biāo)志物的相對(duì)論或絕對(duì)量的平均值或者中值，其中患前列腺癌的受試者在流行該疾病的給定群體內(nèi)，優(yōu)選地，美國、亞洲或者歐洲群體內(nèi)。可以如本文中其他地方所述測(cè)定所述群體的個(gè)體的所述標(biāo)志物的絕對(duì)量或相對(duì)量。如何計(jì)算合適的參考值，優(yōu)選地，平均值或者中值是本領(lǐng)域熟知的。上文所提及的受試者的群體應(yīng)當(dāng)包括多個(gè)受試者，優(yōu)選地，至少5、10、50、100、1，000或者10，000個(gè)受試者。應(yīng)當(dāng)理解，待通過本發(fā)明方法診斷的受試者與所述多個(gè)受試者的受試者是同一物種。更優(yōu)選地，“參考值”可以這樣獲得，通過測(cè)定一組參考受試者，即一組已知患前列腺癌的受試者、一組已知未患前列腺癌的受試者、包含待研究的受試者的群體或者一組前列腺癌組織或明顯健康的組織的活組織檢查樣品的至少一種特征性特性的值，并通過合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，包括那些在本文中其他地方所述的方法計(jì)算參考值。可應(yīng)用于個(gè)體受試者的參考量可以依據(jù)多種生理學(xué)參數(shù)，例如年齡或者亞群，以及用于測(cè)定本文中所提及的標(biāo)志物的方法而改變。通過本發(fā)明方法，可以從待分析的參考樣品與(即同時(shí)地或者順次地)測(cè)試樣品一起測(cè)定合適的參考量?？梢越⒈疚闹刑峒暗脑\斷標(biāo)志物的參考量，并且可以將來自受試者的樣品中的標(biāo)志物的量簡單地與參考量比較。診斷和/或預(yù)后測(cè)試的靈敏性和特異性不僅僅取決于測(cè)試的分析“質(zhì)量它們還取決于對(duì)什么組成異常結(jié)果的定義。實(shí)際上，通常通過將變量的值對(duì)其在“正常”和“疾病”群體中的相對(duì)頻率作圖，來計(jì)算接受者操作特征曲線(ReceiverOperatingCharacteristiccurve)或者“ROC”曲線(還參見上文)。在參考結(jié)果獲自已知患前列腺癌的受試者或者群組的情況下，可以基于獲自測(cè)試樣品的測(cè)試結(jié)果與前述參考結(jié)果之間的同一性或者類似性的程度，即基于本文中所提及的至少一種標(biāo)志物的相同或相似定性或定量組成，來診斷所述疾病。在定量測(cè)定的情況下，如果特征性特性的值和強(qiáng)度值是相同的，那么測(cè)試樣品的結(jié)果和參考結(jié)果是相同的。如果特征性特性的值是相同的，但強(qiáng)度值是不同的，那么所述結(jié)果是類似的。優(yōu)選地，該差異是不顯著的，并且其特征在于強(qiáng)度的值至少在參考值的1%_99%、5%-95%,10%-90%,20%-80%,30%-70%,40%-60%之間的區(qū)間內(nèi)，參考值的50%、60%、70%、80%、90%或者95%。在參考結(jié)果獲自已知未患前列腺癌的受試者或群組的情況下，可以基于獲自測(cè)試樣品的測(cè)試結(jié)果與前述參考結(jié)果之間的差異，即本文中所提及的至少一種標(biāo)志物的定性或定量組成的差異，來診斷所述疾病。如果使用如上文所述的計(jì)算參考值，那么應(yīng)用相同的方法。優(yōu)選地，差異應(yīng)當(dāng)是根據(jù)本發(fā)明的診斷標(biāo)志物的絕對(duì)量或者相對(duì)量的增加。優(yōu)選地，相對(duì)量或者絕對(duì)量的增加是顯著的，即在參考值的45%-55%,40%-60%,30%-70%,20%-80%U0%-90%,5%-95%U%-99%之間的區(qū)間之外。因此，參考值可以來源于已知患前列腺癌的受試者。優(yōu)選地，測(cè)試樣品和參考樣品的相同或相似結(jié)果指示患者患前列腺癌。如上所述，參考值還可以來源于已知未患前列腺癌的受試者。根據(jù)本發(fā)明的診斷標(biāo)志物的量大于所述參考值優(yōu)選地指示患者患前列腺癌。此外，還考慮將閾值量用作為參考量?？梢詫⒏哂陂撝盗康臏y(cè)試樣品中如本文中所提及的標(biāo)志物的量用于指示受試者患前列腺癌，其中將低于閾值量的量用于指示患者未患前列腺癌。有利地，已經(jīng)顯示，與來自未患前列腺癌的受試者的樣品比較，本文中所提及的標(biāo)志物在來自患前列腺癌的受試者的樣品中是增加的。因此，測(cè)定所述標(biāo)志物允許在疑似患前列腺癌的受試者中可靠的診斷前列腺癌。如果在血液、血漿或血清樣品中測(cè)定所述標(biāo)志物的量，那么前述方法是特別有利的，因?yàn)榭梢匀菀椎孬@得這些樣品。如已在本文中其他地方所述，進(jìn)展的分類和測(cè)定是重要的，以允許進(jìn)行有效的和合適的治療性干預(yù)。具體而言，希望在前列腺癌進(jìn)展到轉(zhuǎn)移發(fā)生階段，例如階段3a和3b之前，開始治療性干預(yù)。多種miRNA(或者其前體分子)的測(cè)定允許可靠地分期前列腺癌(參見上文)。因?yàn)榍傲邢侔┑闹委熑Q于前列腺癌的階段，所以這些標(biāo)志物的測(cè)定允許對(duì)患前列腺癌的患者的治療做出決定。因此，本發(fā)明涉及鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的方法，所述方法包括a)測(cè)定在來自患前列腺癌的受試者的樣品中選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，b)將如在步驟a)中測(cè)定的所述至少一種miRNA或者所述前體分子的量與參考量比較，和c)鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者。就實(shí)際的情況，可以將上文中做出的定義和說明應(yīng)用于前述方法(除非另外指明)。前述方法允許鑒定受試者是否對(duì)前列腺癌治療敏感，并因此測(cè)定患前列腺癌的受試者是否會(huì)受益于前列腺癌治療。合適的前列腺癌治療包括手術(shù)、放療和更優(yōu)選地，全身化療。所述治療是本領(lǐng)域熟知的，并例如描述于HeidenreichA,AusG,BollaM，等人，EAUguidelinesonprostatecancer。EurUrol2008;53:68-80中或者NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncologtProstateCancer,第一版2008年中。應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選地，用于鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的前述方法的參考應(yīng)當(dāng)來源于已知經(jīng)受患局限性晚期前列腺癌(PT2)或者全身性階段前列腺癌(ρΝ+、Μ+)的受試者的受試者。更優(yōu)選地，測(cè)試樣品和參考樣品的相同或相似結(jié)果指示受試者在該情況下對(duì)前列腺癌治療是敏感的。備選地，參考物優(yōu)選地可以來源于已知未患局限性晚期前列腺癌(ρΤ2)或者全身性階段前列腺癌(ρΝ+、Μ+)的受試者，并因此，例如來源于患局限性前列腺癌(ρΤ2)的受試者。更優(yōu)選地,與所述參考物比較,miRNA或者其前體的量增加(優(yōu)選統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加)，表明受試者對(duì)前列腺癌治療是敏感的?？梢栽跓o需另外費(fèi)力的情況下，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員測(cè)定增加是否是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。本發(fā)明還涉及診斷前列腺癌的進(jìn)展的方法，包括a)測(cè)定在來自患前列腺癌的受試者的第一樣品中，選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，和b)測(cè)定在所述受試者的第二樣品中至少一種miRNA或者所述至少一種miRNA的所述前體分子的量，和c)將所述第一樣品中的量與所述第二樣品中的所述量比較。與第一樣品中的量比較，在第二樣品中標(biāo)志物的量優(yōu)選增加，更優(yōu)選地，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的增加，指示了進(jìn)展性前列腺癌。術(shù)語“前列腺癌的進(jìn)展”和“進(jìn)展性前列腺癌”指前列腺癌從一個(gè)階段轉(zhuǎn)變到另一個(gè)階段，優(yōu)選地，轉(zhuǎn)變到更晚期。優(yōu)選地，由本發(fā)明方法所涉及的前列腺癌的進(jìn)展是從局限性(PT2)進(jìn)展到局限性晚期(ρΤ3)或者全身性階段(ρΝ+、Μ+)。如已在本文中其他地方所述，進(jìn)展的分類和測(cè)定是重要的，以允許進(jìn)行有效的和合適的治療性干預(yù)。優(yōu)選地，第二樣品在所述第一樣品后4-6個(gè)月內(nèi)、6-12個(gè)月內(nèi)、12-24個(gè)月內(nèi)，和更優(yōu)選地，24-48個(gè)月內(nèi)獲得。如上所述，與所述第一樣品中所述標(biāo)志物的量比較，所述第二樣品中標(biāo)志物的量的增加指示了前列腺癌的進(jìn)展。優(yōu)選地，所述增加是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。可以在無需另外費(fèi)力的情況下，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員測(cè)定增加是否統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。指示前列腺癌進(jìn)展的優(yōu)選的增加為20%、30%40%、50%和更優(yōu)選地100%。此外，本發(fā)明考慮用于監(jiān)測(cè)前列腺癌治療或者針對(duì)進(jìn)展性前列腺癌的治療的成功的方法。該方法也包括本發(fā)明前述方法和基于診斷結(jié)果鑒定成功的治療的步驟。應(yīng)當(dāng)理解，成功的治療應(yīng)當(dāng)導(dǎo)致至少一種生物標(biāo)志物從患病或者晚期階段到健康或者更早期的疾病階段的減少(優(yōu)選地，顯著減少)。此外，本發(fā)明還涉及適合于實(shí)施本發(fā)明方法的試劑盒和裝置。因此，本發(fā)明涉及適合于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的裝置，包括a)分析單位，其包含用于選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子的檢測(cè)試劑，其中所述分析單位適合于測(cè)定在由檢測(cè)試劑檢測(cè)的樣品中所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量，和b)包含計(jì)算機(jī)的評(píng)價(jià)單位，其包含確定植入的計(jì)算機(jī)程序，所述程序編碼用于實(shí)施獲自分析單位的測(cè)定量與參考量的比較。此外，本發(fā)明涉及適合于在疑似患前列腺癌的受試者中診斷前列腺癌的裝置，包括a)分析單位，其包含用于選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子的檢測(cè)試劑，其中所述分析單位適合于在由檢測(cè)試劑檢測(cè)的樣品中測(cè)定所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量，和b)包含計(jì)算機(jī)的評(píng)價(jià)單位，其包含確定植入的計(jì)算機(jī)程序，所述程序編碼用于實(shí)施獲自分析單位的測(cè)定量與參考量的比較。此外，本發(fā)明涉及適合于鑒定對(duì)前列腺治療敏感的受試者的裝置，包括a)分析單位，其包含選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子的檢測(cè)試劑，其中所述分析單位適合于在由檢測(cè)試劑檢測(cè)的樣品中測(cè)定所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量，和b)包含計(jì)算機(jī)的評(píng)價(jià)單位，其包含確定植入的計(jì)算機(jī)程序，所述程序編碼用于實(shí)施獲自分析單位的測(cè)定量與參考量的比較。如本文中所用，術(shù)語“裝置”指至少包含相互有效連接以允許預(yù)測(cè)的前述工具的工具的系統(tǒng)。在本發(fā)明方法的情況下，上文公開了用于測(cè)定本文中所提及的標(biāo)志物的量的優(yōu)選工具和用于實(shí)施比較的工具。如何以有效方式連接工具取決于裝置中包含的工具的類型。例如，如果應(yīng)用自動(dòng)測(cè)定所述標(biāo)志物的量的工具，那么可以通過例如，計(jì)算機(jī)程序處理由所述自動(dòng)運(yùn)行工具獲得的數(shù)據(jù)，以診斷或者區(qū)分本文中所提及的疾病。優(yōu)選地，在該情況下，工具由單一裝置包含。所述裝置可以因此包含用于測(cè)量樣品中標(biāo)志物的量的分析單位和用于處理用于差別診斷的結(jié)果數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)單位。在涉及以上本發(fā)明方法的實(shí)施方案的情況下，公開了用于檢測(cè)的優(yōu)選工具。在該情況下，工具是有效連接的，因?yàn)橛捎谟脩羰謨?cè)給出的說明和解釋，系統(tǒng)的使用者會(huì)將量和其診斷值的測(cè)定結(jié)果放在一起。在該實(shí)施方案中，工具可以表現(xiàn)為分離的裝置，并優(yōu)選地包裝在一起作為試劑盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道如何在不需另外費(fèi)力的情況下連接工具。優(yōu)選的裝置是那些不需要應(yīng)用專業(yè)醫(yī)師的具體知識(shí)的裝置，例如，電子裝置，其僅需要裝載樣品。結(jié)果可以給出為參數(shù)性診斷原始數(shù)據(jù)的輸出，優(yōu)選地，作為絕對(duì)量或者相對(duì)量。應(yīng)當(dāng)理解，這些數(shù)據(jù)需要由醫(yī)師解釋。然而，還設(shè)想專家系統(tǒng)裝置，其中輸出包括經(jīng)處理的診斷原始數(shù)據(jù)，所述經(jīng)處理的診斷原始數(shù)據(jù)的解釋不需要專業(yè)醫(yī)師。另外優(yōu)選的裝置包括根據(jù)本發(fā)明方法的上文所提及的分析單位/裝置或者評(píng)價(jià)單位/裝置。此外，本發(fā)明涉及適合于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的試劑盒，包括a)用于選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA_200b、miRNA-516a_3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子的檢測(cè)試劑，和b)適合于測(cè)定由所述檢測(cè)試劑檢測(cè)的所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量的裝置，其中所述裝置還適合于實(shí)施所述量與參考量的比較。此外，本發(fā)明涉及適合于在疑似患前列腺癌的受試者中診斷前列腺癌的試劑盒，包括a)用于選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子的檢測(cè)試劑，和b)適合于測(cè)定由所述檢測(cè)試劑檢測(cè)的所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量的裝置，其中所述裝置還適合于實(shí)施所述量與參考量的比較。此外，本發(fā)明涉及用于鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的試劑盒，包括a)用于選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子的檢測(cè)試劑，和b)適合于測(cè)定由所述檢測(cè)試劑檢測(cè)的所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量的裝置，其中所述裝置還適合于實(shí)施所述量與參考量的比較。如本文中所用，術(shù)語“試劑盒”指優(yōu)選地，以分離的或者在單一容器內(nèi)提供的前述工具的集合。該容器還優(yōu)選地包含用于實(shí)施本發(fā)明方法的說明書。因此，本發(fā)明涉及包含用于測(cè)量本文中所提及的標(biāo)志物的工具或者試劑的試劑盒。已經(jīng)在該說明書中給出了此類工具或者試劑及其使用方法的實(shí)例。該試劑盒優(yōu)選地含有立即可用方式的前述工具或者試齊U。優(yōu)選地，該試劑盒可以額外包含說明書，例如，用于解釋有關(guān)由本發(fā)明方法所提供的診斷的任一測(cè)定結(jié)果的用戶手冊(cè)。特別地，該手冊(cè)可以包括將測(cè)定的標(biāo)志物的量分配給診斷類型的信息。在該說明書中其他地方可以發(fā)現(xiàn)詳細(xì)說明。另外地，該用戶手冊(cè)可以提供有關(guān)正確使用試劑盒的組分用于測(cè)定各個(gè)生物標(biāo)志物的量的說明。用戶手冊(cè)可以以紙質(zhì)或者電子形式提供，例如存儲(chǔ)在CD或者CDROM上。本發(fā)明還涉及所述試劑盒在根據(jù)本發(fā)明的任一方法中的用途。最后，本發(fā)明涉及來自患前列腺癌的受試者的樣品中的選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA_200b、miRNA-516a_3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子用于分期前列腺癌的用途。本發(fā)明還設(shè)想來自患前列腺癌的受試者的樣品的選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a_3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子用于鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的用途。最后，本發(fā)明涉及來自疑似患前列腺癌的受試者的血液、血清或者血漿樣品的選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子在診斷前列腺癌中的用途。以上提及的全部參考文獻(xiàn)就其全部公開內(nèi)容以及在以上說明書中所明確提及的其特定公開內(nèi)容并入本文作為參考。附圖顯示了圖I:在來自前列腺癌患者的血清中的循環(huán)miRNA水平。368種循環(huán)miRNA的MA圖。紅色，用Limma分析鑒定的69種miRNA(p<O.05，沒有多重檢驗(yàn))。圖2:在取自患轉(zhuǎn)移性PCa(η=7)和原發(fā)性PCa(η=13)的患者的血清樣品中，循環(huán)miRNA-375的Ct值。fdr=O.036(差異表達(dá)的檢驗(yàn)；在多重檢驗(yàn)調(diào)整后)。圖3:基于5種循環(huán)miRNA的表達(dá)水平的45個(gè)血清樣品的聚類。表達(dá)水平在熱圖(heatmap)用顏色標(biāo)示。Gleason得分:黑色,彡8或者M(jìn)+;深灰色,Gleason7;淺灰色，Gleason6;NM(淋巴結(jié)狀態(tài)或者轉(zhuǎn)移)黑色，NI或者M(jìn)+;淺灰色，NO;白色，NX;M(轉(zhuǎn)移)黑色，M+;淺灰色，MX。圖4:miRNA_375在45個(gè)樣品中的前驗(yàn)證。通過a)風(fēng)險(xiǎn)[9個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason>8或者M(jìn)+),21個(gè)中等風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason7)和15個(gè)低風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason6)];和b)淋巴結(jié)狀態(tài)(12個(gè)腫瘤NI或者M(jìn)+對(duì)21個(gè)腫瘤NO)分組血清樣品中的miRNA-375Ct值。使用Wilcoxon檢驗(yàn)測(cè)定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。圖5:循環(huán)miRNA的確認(rèn)。通過a)風(fēng)險(xiǎn)組[9個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason彡8或者M(jìn)+),21個(gè)中等風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason7)和15個(gè)低風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason6)]分組血清樣品中的miRNACt值。現(xiàn)通過以下實(shí)施例說明本發(fā)明，其并不意圖限定或者限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I:為了篩選與前列腺癌進(jìn)展相關(guān)的循環(huán)miRNA，分析了21個(gè)血清樣品。純化RNA，并用低密度Taq-Man陣列測(cè)量667種miRNA。由于大量未測(cè)定值(768個(gè)中的610個(gè))，將一個(gè)樣品(IGPS-20)舍棄為異常值。當(dāng)與那些具有原發(fā)性前列腺癌的患者比較時(shí)，在取自具有轉(zhuǎn)移性腫瘤的患者的血清樣品中，循環(huán)miRNA的整體豐度顯示出顯著更高水平的無細(xì)胞miRNA(P=O.02,Wilcoxon檢驗(yàn))。Limma分析在該組中鑒定了69種具有更高豐度的miRNA(P<O.05，在沒有調(diào)整進(jìn)行多重檢驗(yàn)的情況下；圖I)。miRNA-375是頂端的標(biāo)志物，并且是在具有遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的患者的血清中具有顯著更高的豐度的唯一循環(huán)miRNA(fdr=O.036;圖2)。具有轉(zhuǎn)移性前列腺癌的患者和具有原發(fā)性癌的患者的血清之間的對(duì)數(shù)倍數(shù)改變相當(dāng)高(4Ct值)。全部樣品都在可測(cè)量的范圍內(nèi)(Ct<40;圖I和2)。實(shí)施例2從篩選研究中挑選了miRNA-375和4個(gè)另外的循環(huán)miRNA(miRNA_9'miRNA-141、miRNA-200b和miRNA-516a_3p)，用于在獨(dú)立患者群組的45個(gè)血清樣品中進(jìn)行確認(rèn)。分級(jí)聚類分析顯示，5個(gè)患者表現(xiàn)出高水平的所選定的循環(huán)miRNA(圖3)。這些患者的腫瘤以至少一個(gè)不利的風(fēng)險(xiǎn)因子(高Gleason得分、淋巴結(jié)侵犯或者遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移)為特征。相反，具有低風(fēng)險(xiǎn)譜(低等級(jí)的腫瘤、局限于器官的腫瘤)的患者顯示出低水平的5種所選定的miRNAο在樣品集合中，miRNA-141和miRNA_200b是高度相關(guān)的(Pearson；r=O.8；95%Cl=O.66)。對(duì)于分析，根據(jù)患者的Gleason得分、淋巴結(jié)和pT狀態(tài)分組全部血清樣品。將來自具有遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的患者的血清樣品包含在Gleason得分>8腫瘤和淋巴結(jié)陽性患者組中。在具有Gleason得分6(低風(fēng)險(xiǎn))、7(中等風(fēng)險(xiǎn))和>8(聞風(fēng)險(xiǎn)；圖5)腫瘤的患者中檢測(cè)循環(huán)miRNA的不同水平。然而，在全部3個(gè)逐組比較中，只有miRNA-375顯示出顯著的差異(圖4a)。此外，在具有淋巴結(jié)陽性狀態(tài)(P=O.034;圖4b)或者病理學(xué)階段pT3的患者的血清中，miRNA-375具有顯著更高的豐度(P=O.021)。具有骨轉(zhuǎn)移的3個(gè)患者在那些在血清中具有4個(gè)最高豐度值的miRNA-375的患者中。在確認(rèn)研究中，與PSA組合分析循環(huán)miRNA-375。在具有高風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason得分彡8或者具有轉(zhuǎn)移性前列腺癌的患者)的患者的血清中miRNA-375水平顯著更高(圖4a)。與此相比，PSA水平不能區(qū)分Gleason7和Gleason^8腫瘤或者不同的淋巴結(jié)狀態(tài)。然而，當(dāng)與那些具有Gleason得分為7的腫瘤的患者比較，PSA水平在具有低風(fēng)險(xiǎn)腫瘤(Gleason得分3+3)的患者中顯著更低。為了評(píng)估兩種(miRNA-375和PSA)標(biāo)志物對(duì)臨床-病理學(xué)終點(diǎn)預(yù)測(cè)的影響，應(yīng)用了ANOVA分析。PSA顯著區(qū)分了Gleason6和Gleason7腫瘤(表I)，并且miRNA-375的添加進(jìn)一步顯著改進(jìn)了預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性。與此相反，Gleason7和Gleason^8之間基于PSA的比較在ANOVA分析中并沒有顯示出顯著的差異。然而，將miRNA-375引入到模型中導(dǎo)致預(yù)測(cè)能力的改進(jìn)。此外，當(dāng)加入到PSA預(yù)測(cè)模型時(shí)，miRNA-375改進(jìn)了淋巴結(jié)和病理學(xué)狀態(tài)的預(yù)測(cè)。表1:AN0VA分析在ANOVA模型中有助于顯著性影響的參數(shù)的P值。第一行PSA單獨(dú)對(duì)區(qū)分不同病理學(xué)參數(shù)的影響。第二行miRNA-375對(duì)已含PSA的模型的額外影響權(quán)利要求1.用于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的方法，包括a)測(cè)定來自所述受試者的樣品中選自miRNA-375、miRNA_141、miRNA_200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，b)將如在步驟a)中測(cè)定的所述至少一種miRNA或者所述前體分子的量與一種或多種參考量比較,并c)基于在步驟b)中獲得的信息對(duì)所述受試者中前列腺癌分期。2.權(quán)利要求I的方法，其中所述樣品是血液、血漿或血清樣品。3.權(quán)利要求I和2的方法，其中所述量通過定量實(shí)時(shí)PCR測(cè)定。4.權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的方法，其中所述分期包括區(qū)分原發(fā)性前列腺癌和轉(zhuǎn)移性前列腺癌。5.權(quán)利要求I至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述至少一種miRNA或者其前體分子的量大于參考量表明所述受試者患轉(zhuǎn)移性前列腺癌，并且其中所述至少一種miRNA或者其前體分子的量低于參考量表明所述受試者患原發(fā)性前列腺癌。6.權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的方法，其中所述分期包括區(qū)分高風(fēng)險(xiǎn)、中等風(fēng)險(xiǎn)和低風(fēng)險(xiǎn)。7.用于診斷前列腺癌的進(jìn)展的方法，包括a)測(cè)定來自患前列腺癌的受試者的第一樣品中選自miRNA-375、miRNA_141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，和b)測(cè)定所述受試者的第二樣品中至少一種miRNA或者所述至少一種miRNA的所述前體分子的量，和c)將所述第一樣品中的量與所述第二樣品中的所述量比較。8.用于鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的方法，所述方法包括a)測(cè)定來自患前列腺癌的受試者的樣品中選自miRNA-375、miRNA_141、miRNA_200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，b)將如在步驟a)中測(cè)定的所述至少一種miRNA或者所述前體分子的量與一種或多種參考量比較，和c)鑒定對(duì)如列腺癌治療敏感的受試者。9.用于在患前列腺癌的受試者中診斷前列腺癌的方法，所述方法包括a)測(cè)定來自所述受試者的樣品中選自miRNA-375、miRNA_141、miRNA_200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA的量或者所述至少一種miRNA的前體分子的量，b)將如在步驟a)中測(cè)定的所述至少一種miRNA或者所述前體分子的量與一種或多種參考量比較，和c)基于步驟b)中獲得的信息診斷所述受試者中的前列腺癌。10.適合于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的裝置，其包含a)分析單位，其包含如在權(quán)利要求I中所定義的至少一種miRNA分子或者其前體分子的檢測(cè)試劑，其中所述分析單位適合于測(cè)定由所述檢測(cè)試劑檢測(cè)的樣品中所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量，和b)包含計(jì)算機(jī)的評(píng)價(jià)單位，其包含確實(shí)嵌入的計(jì)算機(jī)程序代碼，所述程序代碼用于執(zhí)行獲自所述分析單位的測(cè)定量的比較。11.適合于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的試劑盒，其包含a)如在權(quán)利要求I中所定義的至少一種miRNA分子或者其前體分子的檢測(cè)試劑，和b)適合于測(cè)定由所述檢測(cè)試劑檢測(cè)的所述至少一種miRNA分子或者其前體分子的量的裝置，其中所述裝置還適合于實(shí)施如在權(quán)利要求I至6中所定義的所述量的比較。12.來自患前列腺癌的受試者的樣品中選自miRNA-375、miRNA_141、miRNA_200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子用于分期前列腺癌的用途。13.來自患前列腺癌的受試者的樣品中的選自miRNA-375、miRNA_141、miRNA_200b、miRNA-516a-3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子用于鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的用途。14.來自患疑似患前列腺癌的受試者的樣品中選自miRNA-375、miRNA_141、miRNA-200b、miRNA-516a_3p和miRNA9*的至少一種miRNA或者其前體分子用于診斷前列腺癌的用途。全文摘要本發(fā)明涉及用于在患前列腺癌的受試者中分期前列腺癌的方法，所述方法包括(a)測(cè)定在來自所述患者的樣品中選自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9＊的至少一種miRNA的量或者前體分子的量和(b)將如此測(cè)定的量與參考量比較。此外，本發(fā)明涉及用于鑒定對(duì)前列腺癌治療敏感的受試者的方法，以及用于診斷前列腺癌的方法。本發(fā)明還涉及適合于實(shí)施本發(fā)明方法的試劑盒和裝置。文檔編號(hào)C12Q1/68GK102782151SQ201080049408公開日2012年11月14日申請(qǐng)日期2010年10月29日優(yōu)先權(quán)日2009年10月29日發(fā)明者A·黑澤,H·舒爾特曼,J·C·布拉澤,M·約翰內(nèi)斯,M·費(fèi)爾特,R·庫納,T·拜斯巴爾特,T·施托伊貝爾,T·施洛姆申請(qǐng)人:德國癌癥研究中心,漢堡-艾蓬多夫大學(xué)門診