專利名稱：用于預(yù)防和治療過(guò)敏的益生菌衍生的無(wú)活力材料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從益生菌菌株鼠李糖乳桿菌Goldin Gorbach (Lactobacillus rhamnosus Goldin Gorbach, LGG)采集無(wú)活力的生物活性材料的方法。特別是，本發(fā)明涉及制備通過(guò)所述采集方法可獲得的抗過(guò)敏益生菌材料的方法和包含所述益生菌材料的飲食或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
乳桿菌GG (乳桿菌G. G.，菌株ATCC 53103)是天然存在于人消化道的細(xì)菌。它是經(jīng)過(guò)許多研究的細(xì)菌，一般認(rèn)為有保健益處。它被公認(rèn)是益生菌，因此摻入許多營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品內(nèi)，比如乳制品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物、嬰兒配方等。在本領(lǐng)域目前限定益生菌是活的微生物，當(dāng)適量給予時(shí)對(duì)宿主提供保健益處。但是，當(dāng)將其摻入營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品時(shí)益生菌的活的性質(zhì)帶來(lái)挑戰(zhàn)。這些挑戰(zhàn)在數(shù)量級(jí)方面可不同，尤其取決于所用益生菌株的類型，接受產(chǎn)品的個(gè)體的健康狀態(tài)，或兩者皆有。而且從加工技術(shù)方面來(lái)看，將活的微生物摻入產(chǎn)品內(nèi)時(shí)需要克服相當(dāng)大的障礙。如果要將益生菌摻入長(zhǎng)期保存產(chǎn)品例如粉狀產(chǎn)品如嬰兒配方，這特別起作用。而且，隨著營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品基質(zhì)的復(fù)雜性增加，挑戰(zhàn)增加。特別是關(guān)于孕婦、嬰兒和兒童的飲食產(chǎn)品，使用益生菌細(xì)菌的安全和功效受到進(jìn)一步評(píng)估。具體安全問(wèn)題涉及對(duì)營(yíng)養(yǎng)利用的可能效果、排除抗生素耐藥性的轉(zhuǎn)移，和對(duì)腸道定殖、免疫反應(yīng)和感染的短期和長(zhǎng)期效果。雖然這并非意味益生菌不可用于此類產(chǎn)品中，但增加了使用活的或活力細(xì)菌的操作復(fù)雜性。另一方面，尤其是在嬰兒和兒童飲食產(chǎn)品的情況下，存在提供益生菌有益效果的重要需求。而且，特別有挑戰(zhàn)性的是確保在通過(guò)零售或醫(yī)院渠道可獲得且暴露于環(huán)境溫度的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中活力細(xì)菌的穩(wěn)定性和活力。在這方面通過(guò)應(yīng)用(加工的)培養(yǎng)上清液使用細(xì)菌產(chǎn)品將提供相當(dāng)大的優(yōu)點(diǎn)。已知嬰兒的腸道微生物群發(fā)育遠(yuǎn)不如成人。雖然成人的微生物群由大于IO13接近500種微生物組成，一些有害和一些有益，而嬰兒的微生物群僅含有那些微生物中的一部分，不僅在絕對(duì)數(shù)上而且在種類多樣性上均如此。嬰兒出生時(shí)腸道是無(wú)菌的，但從產(chǎn)道、 他們最初的環(huán)境和他們的攝入物獲得腸道菌群。因?yàn)樵谛律鷥涸缙谀c道微生物群非常不穩(wěn)定，嬰兒腸道經(jīng)常難以維持有害與有益細(xì)菌之間的脆弱平衡，所以降低了免疫系統(tǒng)正常發(fā)揮功能的能力。配方喂養(yǎng)的嬰兒維持這種平衡尤其困難，因?yàn)榕浞轿桂B(yǎng)與母乳喂養(yǎng)嬰兒腸道的細(xì)菌種類不同。母乳喂養(yǎng)嬰兒的糞便主要含有雙歧桿菌，通常較少見(jiàn)鏈球菌和乳桿菌。相反，配方喂養(yǎng)嬰兒的微生物群更多樣化，含有雙歧桿菌和擬桿菌以及更多致病物種、葡萄球菌、大腸桿菌和梭狀芽孢桿菌。母乳喂養(yǎng)與配方喂養(yǎng)嬰兒糞便中雙歧桿菌的各種物種也不同。已提出多種因素作為母乳喂養(yǎng)與配方喂養(yǎng)嬰兒不同糞便菌群的原因，包括母乳蛋白含量較低和組成不同，母乳磷含量較低，母乳低聚糖種類多，和母乳中有許多免疫功能的體液禾口細(xì)胞介質(zhì)。Agostoni 等，Probiotic Bacteria in Dietetic Products for Infants A Commentary by the ESPGHAN Committee on Nutrition (嬰兒飲食產(chǎn)品中的益生菌 ESPGHAN 營(yíng)養(yǎng)委員會(huì)的評(píng)論)，J. Pediatr. Gastro. Nutr. 38 :365-374 (2004 年 4 月)。正常腸道菌群的建立對(duì)于健康和疾病具有重要意義。腸道微生物群的主要功能， 從宿主方面來(lái)看，是預(yù)防病原生物腸內(nèi)定殖和抑制潛在的病原微生物的增殖，增加腸道對(duì)傳染性疾病的天然抵抗力。益生菌通過(guò)預(yù)防病原菌與腸細(xì)胞的結(jié)合而發(fā)揮這種作用，這通過(guò)產(chǎn)生抗微生物化合物直接預(yù)防或通過(guò)合成短鏈揮發(fā)性脂肪酸改變腸腔的PH間接預(yù)防。此外，正常菌群可刺激胃腸免疫，提高黏膜IgA產(chǎn)生，刺激抗炎細(xì)胞因子的局部產(chǎn)生和減少過(guò)敏性炎癥的特征性促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生。關(guān)于益生菌在食物過(guò)敏、特應(yīng)性皮炎和特應(yīng)性一級(jí)預(yù)防中用途的大多數(shù)相關(guān)研究的綜述已顯示益生菌療法緩解過(guò)敏性炎癥，如通過(guò)臨床癥狀的控制和局部和全身炎性標(biāo)志的減少證明(Miraglia del Giudice Μ, De Luca MG. The role of probiotics in the clinical management of food allergy and atopic dermatitis (益生菌在食物過(guò)敏和特應(yīng)性皮炎的臨床管理中的作用).J Clin Gastroenterol 2004 ；38 (±曾干Ij 6) :S84-5 ；Prescott S, Bjorksten B, Probiotics for the prevention or treatment of allergic disease (用于予頁(yè)防或治療過(guò)敏性疾病的益生菌).J· Allergy Clin. Immunol. 2007 ；120 :255-26 。鑒于上文所述，將理解普遍期望提供具有益生菌的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品、飲食產(chǎn)品，特別是嬰兒配方。術(shù)語(yǔ)“嬰兒配方”指作為母乳代用品的滿足嬰兒營(yíng)養(yǎng)需求的組合物。還將理解特別是在嬰兒配方中，期望在不必?fù)饺牖畹幕蚧盍?xì)菌的情況下?lián)饺胍嫔?。事?shí)上，這稱為“無(wú)活力益生菌”。關(guān)于此類無(wú)活力益生菌的研究正在進(jìn)行。但是，正如Tao等的文章(Am J. Physiol Cell Physiol. 290 :C1018-C1030 (2006)所指出，雖然益生菌似乎改善許多疾病的過(guò)程，但很少了解它們的作用機(jī)制。僅在最近才嘗試了解它們作用后面的機(jī)制和與宿主細(xì)胞的相互作用。已提出許多不同的可能機(jī)制，包括上調(diào)黏液產(chǎn)生，改善上皮屏障功能，增加IgA產(chǎn)生和增加對(duì)腸上皮粘附部位的競(jìng)爭(zhēng)，以及產(chǎn)生有機(jī)酸、氨、過(guò)氧化氫和細(xì)菌素，其抑制病原菌的生長(zhǎng)。在這方面Tao等提出對(duì)LGG可溶性因子某些作用的研究。推斷某些生物活性存在于LGG-CM超濾液的低分子量部分(MW < IOkDa)。類似的教導(dǎo)是US 2007/123460。其中將無(wú)細(xì)菌、益生菌衍生的化合物，特別是低分子量部分(MW < IOkDa)代替活細(xì)菌用于治療特別是炎性腸病(IBD)。觸及無(wú)活力益生菌的其它參考文獻(xiàn)是例如US 2004/208863，其主要涉及細(xì)菌的抗炎作用，及由其分泌的產(chǎn)物，和US 7052896，其涉及由鼠李糖乳桿菌物種產(chǎn)生的肽的抗炎和抗過(guò)敏性質(zhì)。US 6，506，389描述從非病原微生物可獲得的蛋白，所述蛋白具有黏膜結(jié)合活性和 20-40kD、優(yōu)選20-30kD的分子量，或其同等多肽。該公開(kāi)的要旨是提供鑒定能夠與黏膜特異性結(jié)合的蛋白和多肽的篩選方法。無(wú)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)提出適當(dāng)?shù)闹苯亓水?dāng)?shù)陌l(fā)酵和采集方法，以便從LGG獲得支持抗過(guò)敏活性的無(wú)活力益生菌材料。而且，采集分泌的細(xì)菌產(chǎn)物帶來(lái)問(wèn)題，不能很容易地從培養(yǎng)基剝離不期望的組分。 這特別涉及用于相對(duì)脆弱受試者的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品，比如嬰兒配方或臨床營(yíng)養(yǎng)物。如果將培養(yǎng)上清液的特殊組分首先分離、純化，然后應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中，則不產(chǎn)生該問(wèn)題。但是，期望使用更完全(complete)的培養(yǎng)上清液。這將用于提供更好地反映益生菌(即LGG)天然作用的組合物。但是，目前不能只將培養(yǎng)上清液本身用作特別用于嬰兒配方等的無(wú)活力益生菌材料的基礎(chǔ)。因此更期望提供解決該問(wèn)題的方法。發(fā)明概述為了更好地滿足上述一項(xiàng)或多項(xiàng)期望，本發(fā)明一方面提出包含蛋白質(zhì)混合物的組合物，所述組合物在LGG分批培養(yǎng)法后指數(shù)期從培養(yǎng)上清液可獲得，用于治療或預(yù)防過(guò)敏性疾病。另一方面，本發(fā)明涉及從LGG培養(yǎng)基采集具有抗過(guò)敏活性的組合物的方法，該方法包含使LGG在合適培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，確定LGG群生長(zhǎng)的后指數(shù)期，在所述后指數(shù)期從細(xì)菌培養(yǎng)物分離培養(yǎng)上清液。又一方面，本發(fā)明提供飲食產(chǎn)品，其包含在LGG分批培養(yǎng)法后指數(shù)期從培養(yǎng)上清液可獲得的無(wú)活力益生菌組合物，以及上述組合物作為添加劑在營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中的用途。再一方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防受試者過(guò)敏性疾病的方法，該方法包含給予所述受試者有效量的組合物，所述組合物包含在LGG分批培養(yǎng)法后指數(shù)期從培養(yǎng)上清液可獲得的無(wú)活力益生菌材料。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示在培養(yǎng)后LGG群隨著時(shí)間推移增加的曲線圖；其中圖Ia根據(jù)培養(yǎng)基的光密度(0D600)以及pH改變而描繪，圖Ib呈現(xiàn)通過(guò)平皿培養(yǎng)技術(shù)確定的細(xì)菌計(jì)數(shù)。圖2顯示LGG培養(yǎng)采集的不同期(MJ1，MJ2，MJ3)細(xì)胞因子IL-10的產(chǎn)生；圖3描繪體內(nèi)卵白蛋白(OVA)致敏的時(shí)間線；用于測(cè)試本發(fā)明組合物的新生小鼠模型；圖4描繪接受OVA模型和用包括活力LGG和LGG上清液在內(nèi)的不同組合物口服處理的小鼠的染色肺組織的顯微鏡圖像；圖5顯示代表在OVA過(guò)敏動(dòng)物的肺中過(guò)敏細(xì)胞浸潤(rùn)的圖；揭示在LGG和LGG上清液處理的小鼠的肺灌洗液中都存在過(guò)敏(嗜酸性)細(xì)胞減少。圖6(a_c)展示代表與過(guò)敏性疾病中炎性過(guò)程相關(guān)的3種不同細(xì)胞因子的體外響應(yīng)的圖；數(shù)據(jù)顯示LGG上清液出眾地刺激抑制性(IL-10)細(xì)胞因子產(chǎn)生。圖7呈現(xiàn)對(duì)本發(fā)明LGG培養(yǎng)上清液圍產(chǎn)期給藥的體內(nèi)研究流程；圖8展示過(guò)敏反應(yīng)性的結(jié)果，顯示為在圍產(chǎn)期給予本發(fā)明的LGG培養(yǎng)上清液后，肺灌洗液中存在過(guò)敏(嗜酸性)細(xì)胞減少。實(shí)施方案詳述從廣義上講，本發(fā)明基于領(lǐng)悟到從LGG分批培養(yǎng)可采集具備抗過(guò)敏活性的培養(yǎng)上清液(還可將其稱為“廢培養(yǎng)基”)。在本發(fā)明上下文中，術(shù)語(yǔ)“抗過(guò)敏”包括“過(guò)敏預(yù)防活性以及抗過(guò)敏治療活性”。盡管不希望受理論的約束，但本發(fā)明人相信這種活性可歸因于組分(包括蛋白質(zhì)材料，可能包括(表)多糖材料)的混合物，如發(fā)現(xiàn)在LGG分批培養(yǎng)指數(shù)(或“對(duì)數(shù)”)期的后期釋放入培養(yǎng)基內(nèi)。在下文將組合物稱為“本發(fā)明的培養(yǎng)上清液”。LGG是從健康人腸道菌群分離的益生菌株。它公開(kāi)于授予Gorbach等的美國(guó)專利號(hào)5，032，399，其通過(guò)引用全部結(jié)合到本文中。LGG對(duì)大多數(shù)抗生素耐藥，在酸和膽汁的存在下穩(wěn)定，熱切地附著于人腸道的黏膜細(xì)胞。它在大多數(shù)個(gè)體中存活1-3天，在30%受試者中存活多達(dá)7天。除了它的定殖能力以外，LGG對(duì)粘膜免疫反應(yīng)也產(chǎn)生有益影響。LGG保存在保存權(quán)威美國(guó)模式培養(yǎng)物收集中心(American Type Culture Collection)，登錄號(hào)ATCC 53103。技術(shù)人員已知公認(rèn)的細(xì)菌分批培養(yǎng)各期。這些是“滯后”、“對(duì)數(shù)”(“對(duì)數(shù)”或“指數(shù)”)、“靜止”和“死亡”(或“對(duì)數(shù)衰退”)期。在存在活細(xì)菌的所有各期，細(xì)菌使來(lái)自培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物代謝，分泌(排出、釋放)材料進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)。一般不可預(yù)測(cè)在生長(zhǎng)期給定時(shí)間點(diǎn)分泌的材料的組成。在本發(fā)明中，從后指數(shù)期采集分泌的材料。后指數(shù)期出現(xiàn)在中指數(shù)期之后的時(shí)間(中指數(shù)期是指數(shù)期期間的一半時(shí)間，因此后指數(shù)期指滯后期與靜止期之間的后半段時(shí)間)。特別是，術(shù)語(yǔ)“后指數(shù)期，，用于本文指LGG分批培養(yǎng)法滯后期與靜止期之間的后四分之一段時(shí)間。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選在指數(shù)期期間75% -85%時(shí)間點(diǎn)，最優(yōu)選在指數(shù)期經(jīng)過(guò)約5/6 的時(shí)間時(shí)采集培養(yǎng)上清液。術(shù)語(yǔ)“培養(yǎng)(cultivation)”或“培養(yǎng)(culturing) ”指將微生物(在這種情況下是LGG)在合適培養(yǎng)基上或在其中繁殖。此類培養(yǎng)基可以是多種類型，特別是液體肉湯，如本領(lǐng)域常規(guī)的。例如，優(yōu)選肉湯是一般用于培養(yǎng)乳桿菌的MRS肉湯。MRS肉湯一般包含聚山梨醇酯、乙酸鹽、鎂和錳，已知其發(fā)揮乳桿菌特殊生長(zhǎng)因子以及富營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的作用。典型的組合物包含(以g/升的量)酪蛋白胨10. 0 ；肉提取物8. 0 ；酵母提取物4. 0 ；D(+)_葡萄糖20. ο ；磷酸氫二鉀2. ο ；Tween 801. ο ；檸檬酸三銨2. ο ；乙酸鈉5. ο ；硫酸鎂0. 2 ；硫酸錳 0. 04。本發(fā)明培養(yǎng)上清液的優(yōu)選用途是嬰兒配方。這里為了充分使用本發(fā)明，期望確保從LGG培養(yǎng)物采集的組合物不含有不期望或法律上不允許存在于此類配方中的組分(如可存在于培養(yǎng)基中)。關(guān)于通常存在于MRS肉湯中的聚山梨醇酯，用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基可包括乳化非離子表面活性劑，如基于聚乙氧基化脫水山梨醇和油酸(典型地作為T(mén)ween 聚山梨醇酯比如Tween 80獲得)。雖然這些表面活性劑經(jīng)常見(jiàn)于食品如冰淇淋中且一般公認(rèn)是安全的，但在司法上它們并不都被視為可取，或者用作相對(duì)脆弱受試者的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品比如嬰兒配方或臨床營(yíng)養(yǎng)物甚至是不可接受的。本發(fā)明因此在優(yōu)選實(shí)施方案中還涉及使用其中可避免上述聚山梨醇酯的培養(yǎng)基。 為了這個(gè)目的，本發(fā)明的優(yōu)選培養(yǎng)基不含吐溫80，可包含選自油酸、亞麻籽油、橄欖油、菜籽油、葵花籽油及其混合物的油性成分。將理解如果基本或完全避免聚山梨醇酯表面活性劑的存在則實(shí)現(xiàn)油性成分的全部益處。最優(yōu)選MRS培養(yǎng)基不含吐溫(Tween) 80，除了一種或多種上述油以外，包含胨(典型地為10g/L)、肉提取物(典型地為8g/L)、酵母提取物(典型地為4g/L)、D (+)葡萄糖(典型地為20g/L)、磷酸氫二鉀(典型地為2g/L)、乙酸鈉三水合物(典型地為5g/L)、檸檬酸三銨(典型地為2g/L)、硫酸鎂七水合物(典型地為0. 2g/L)和硫酸錳四水合物(典型地為 0. 05g/L)。 培養(yǎng)一般在20 V -45 V，優(yōu)選35 °C -40 V，最優(yōu)選在37 °C的溫度進(jìn)行。
可確定培養(yǎng)期間采集培養(yǎng)上清液的優(yōu)選時(shí)間點(diǎn)，即在上述后指數(shù)期，如基于 0D600nm和葡萄糖濃度。0D600指在600nm的光密度，這是與培養(yǎng)基中細(xì)菌濃度直接相關(guān)的已知密度測(cè)量。
除了上述以外，應(yīng)指出乳桿菌包括LGG的分批培養(yǎng)，是本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的一般普通知識(shí)。因此這里不需要進(jìn)一步闡明這些方法。優(yōu)選本發(fā)明的組合物通過(guò)大規(guī)模發(fā)酵(如在大于100L，優(yōu)選約200L或更大的發(fā)酵器中)制備。本發(fā)明的組合物可通過(guò)將培養(yǎng)上清液與細(xì)菌培養(yǎng)物分離的任何已知技術(shù)采集。此類技術(shù)在本領(lǐng)域眾所周知，包括例如離心、過(guò)濾、沉降等。上清液可以立即使用，或者貯存用于未來(lái)使用。在后一種情況下，一般將上清液冷藏、冷凍或凍干。根據(jù)期望，可將上清液濃縮或稀釋。根據(jù)本發(fā)明采集的組合物，據(jù)信包含蛋白質(zhì)組合物。術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”為技術(shù)人員已知，表明該組合物包含一種或多種肽、蛋白或其它包含氨基酸殘基的化合物。關(guān)于化學(xué)物質(zhì)，本發(fā)明培養(yǎng)上清液的組合物據(jù)信是各種分子量的多種氨基酸、寡肽和多肽和蛋白的混合物。組合物進(jìn)一步據(jù)信包含多糖結(jié)構(gòu)。與現(xiàn)有技術(shù)不同，強(qiáng)調(diào)本發(fā)明優(yōu)選涉及完整，即未分餾(imfractionate)的培養(yǎng)上清液。在上述后指數(shù)期采集的明智選擇，和保留上清液的實(shí)際上所有組分，據(jù)信促成隨之獲得的驚人結(jié)果，特別是在抗過(guò)敏活性方面，更特別是在嬰兒和新生兒，和圍產(chǎn)期分別給予孕婦和哺乳婦女后此類活性方面。完整的培養(yǎng)上清液更特別限定為基本排除一般低于6kDa的低分子量組分。這涉及組合物優(yōu)選不包括乳酸和/或乳酸鹽的事實(shí)。本發(fā)明的優(yōu)選上清液因此具有大于6kDa的分子量，因?yàn)檫@是除去乳酸和乳酸鹽后獲得的典型上清液。這通常涉及過(guò)濾或柱層析。事實(shí)上，這種過(guò)濾的保留物代表大于6kDa的分子量范圍(換句話說(shuō)，濾出低于6kDa的成分)。本發(fā)明上清液的組合物一般將不僅是蛋白質(zhì)的，還包含多糖，特別是表多糖(如由LGG產(chǎn)生的由糖殘基組成的高分子量聚合物)。盡管不希望受理論的約束，本發(fā)明人相信，如上文討論從后指數(shù)期采集的蛋白質(zhì)材料的量與碳水化合物材料的量之間的比率，與從其它階段如中指數(shù)期或靜止期采集的組合物相比，促成抗過(guò)敏性質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明采集的培養(yǎng)上清液，可按各種方式使用，以便得益于發(fā)現(xiàn)的抗過(guò)敏活性。此類用途將一般涉及將本發(fā)明組合物給予有需要的受試者的一些形式。在這方面，可以這樣使用培養(yǎng)上清液，如摻入膠囊內(nèi)用于口服給藥，或者在液體營(yíng)養(yǎng)組合物比如飲料中， 或者可將其在進(jìn)一步使用之前加工。優(yōu)選后者。此類加工一般涉及將蛋白質(zhì)組合物從上清液的一般液體連續(xù)相分離。這優(yōu)選通過(guò)干燥法比如噴霧干燥或冷凍干燥(凍干)進(jìn)行。優(yōu)選噴霧干燥。在噴霧干燥法的優(yōu)選實(shí)施方案中，可在噴霧干燥之前加入載體材料，如麥芽糊精DE^。據(jù)信這是有利的，考慮到在乳酸(由LGG產(chǎn)生且存在于廢培養(yǎng)基中)是液體的條件下還產(chǎn)生干燥粉末。已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的組合物具備抗過(guò)敏(預(yù)防和/或治療)活性?？纱_定抗過(guò)敏活性， 如在新近發(fā)展的變應(yīng)性致敏和肺炎癥的新生小鼠模型中。該模型事實(shí)上是所謂OVA模型的改變，OVA模型廣泛用于研究過(guò)敏性疾病和哮喘的免疫病理學(xué)以及用于鑒定具有抗過(guò)敏活性的化合物。過(guò)敏性疾病包括，但不限于哮喘(可能基于過(guò)敏)、特應(yīng)性濕疹(也可能基于過(guò)敏)、食物過(guò)敏和過(guò)敏性鼻炎/結(jié)膜炎。為了使本發(fā)明組合物發(fā)揮其有益的抗過(guò)敏作用，將其由受試者，優(yōu)選人受試者消化。特別是，在優(yōu)選實(shí)施方案中，受試者是孕婦、哺乳期婦女、新生兒、嬰兒或兒童。如上所述，使用可被視為“無(wú)活力益生菌”的材料的優(yōu)點(diǎn)大多數(shù)將得益于嬰兒的飲食產(chǎn)品。術(shù)語(yǔ)“嬰兒”指出生后的小于約1歲的人。將理解由受試者消化將需要口服給予本發(fā)明的組合物。本發(fā)明組合物的給藥形式不是關(guān)鍵。在一些實(shí)施方案中，將組合物經(jīng)片劑、丸劑、包囊、囊片、軟膠囊(gel cap)、膠囊、 油滴或扁囊劑給予受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將組合物包裹在糖、脂肪或多糖中。在又一個(gè)實(shí)施方案中，將組合物加入食品或飲品中消費(fèi)。食品或飲品可以是兒童營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品比如后續(xù)(follow-on)配方、成長(zhǎng)奶、飲料、奶、酸奶、果汁、水果基飲料、咀嚼片、 小甜點(diǎn)、餅干或奶粉。在其它實(shí)施方案中，產(chǎn)品可以是嬰兒營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品，比如嬰兒配方或母乳增強(qiáng)劑。本發(fā)明的組合物，無(wú)論是以單獨(dú)劑型或經(jīng)營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品加入，一般以有效治療或預(yù)防過(guò)敏的量給予。有效量?jī)?yōu)選等于IX IO4-約IX IO12個(gè)細(xì)胞當(dāng)量的活益生菌每公斤體重每天，更優(yōu)選108-109。細(xì)胞當(dāng)量的反算充分地在技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)。如果經(jīng)嬰兒配方給予本發(fā)明組合物，嬰兒配方可能在營(yíng)養(yǎng)上是全面的，含有合適類型和量的脂質(zhì)、碳水化合物、蛋白、維生素和礦物質(zhì)。脂質(zhì)或脂肪的量典型地可在約3-約 7g/100kcal變化。脂質(zhì)來(lái)源可以是本領(lǐng)域任何已知或使用的來(lái)源，如植物油比如棕櫚油、大豆油、棕櫚油精(palmolein)、椰子油、中鏈甘油三酯油、高油酸葵花籽油、高油酸紅花油等。 蛋白的量典型地可在約1-約5g/100kcal變化。蛋白來(lái)源可以是本領(lǐng)域任何已知或使用的來(lái)源，如脫脂乳、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、(部分或廣泛地)水解蛋白、氨基酸等。碳水化合物的量典型地可在約8-約12g/100kcal變化。碳水化合物來(lái)源可以是本領(lǐng)域任何已知或使用的來(lái)源，如乳糖、葡萄糖、玉米糖漿固體、麥芽糊精、蔗糖、淀粉、米糖漿固體等。方便地，可使用市售獲得的產(chǎn)前、早產(chǎn)兒、嬰兒和兒童的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品。例如，可將 Expecta Enfamil , Enfamil 早產(chǎn)兒配方，Lactofree
Nutramigen ’ Gentlea^ ，Pregestimil , ProSobee ，Enfakid ， Enfaschool , EnfagroW , Kindercal (可得自 Mead Johnson &Company， Evansville, Ind.，U. S. A.)用合適水平的本發(fā)明組合物補(bǔ)充并用于實(shí)施本發(fā)明的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，可將本發(fā)明組合物與一種或多種活力益生菌組合。在該實(shí)施方案中本領(lǐng)域已知的任何活力益生菌都可接受，前提是獲得預(yù)期結(jié)果。如果活力益生菌與本發(fā)明組合物組合給藥，活力益生菌的量可相當(dāng)于約 IX IO4-I X IO12菌落形成單位(Cfu)每公斤體重每天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，活力益生菌可包含約IX IO6-I X IO12Cfu每公斤體重每天。在又一個(gè)實(shí)施方案中，活力益生菌可包含約 IX IO9Cfu每公斤體重每天。在又一個(gè)實(shí)施方案中，活力益生菌可包含約IX IOltlCfu每公斤體重每天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物可與一種或多種益生元組合?！耙嫔敝复碳ひ嫔L(zhǎng)和/或活性的不可消化的食物成分。在該實(shí)施方案中本領(lǐng)域已知的任何益生元都可接受，前提是獲得期望的結(jié)果?？捎糜诒景l(fā)明的益生元可包括乳果糖、葡萄糖-低聚糖、菊粉、聚葡萄糖、半乳糖-低聚糖、果糖-低聚糖、異麥芽糖-低聚糖、大豆低聚糖、低聚乳果糖(lactosucrose)、木糖低聚糖和龍膽糖低聚糖。在本發(fā)明又一個(gè)實(shí)施方案中，嬰兒配方可含有其它活性劑比如LCPUFA。合適的LCPUFA包括，但不限于，[α]-亞油酸，[Y]-亞油酸，亞油酸，亞麻酸，二十碳五烯酸(EPA)， 二十碳四烯酸(ARA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)。在實(shí)施方案中，聯(lián)合給予本發(fā)明組合物和DHA。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聯(lián)合給予本發(fā)明組合物和ARA。在又一個(gè)實(shí)施方案中，聯(lián)合給予本發(fā)明組合物與DHA和ARA兩者?？蓪⒑蠨HA、ARA或其組合的市售獲得的嬰兒配方用本發(fā)明組合物補(bǔ)充，用于本發(fā)明。例如，Enfamil LIPIL ，其含有有效水平的DHA和 ARA，可市售獲得，可用本發(fā)明組合物補(bǔ)充，用于本發(fā)明。如果包括，在本發(fā)明實(shí)施方案中ARA 的有效量典型地為約5mg每公斤體重每天-約150mg每公斤體重每天。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，該量在約IOmg每公斤體重每天-約120mg每公斤體重每天變化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，量在約15mg每公斤體重每天-約90mg每公斤體重每天變化。在又一個(gè)實(shí)施方案中， 量在約20mg每公斤體重每天-約60mg每公斤體重每天變化。如果使用嬰兒配方，DHA在嬰兒配方中的量可在約5mg/100kcal-約80mg/100kcal變化。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，DHA 在約10mg/100kcal-約50mg/100kcal變化；在另一個(gè)實(shí)施方案中，在約15mg/100kcal_約 20mg/100kcal變化。在本發(fā)明特定實(shí)施方案中，DHA的量為約17mg/100kCal。如果使用嬰兒配方，ARA在嬰兒配方中的量可在約10mg/100kcal-約100mg/100kcal變化。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，ARA的量在約15mg/100kCal-約70mg/100kCal變化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，ARA的量在約20mg/100kcal-約40mg/100kcal變化。在本發(fā)明特定實(shí)施方案中，ARA的量為約3%ig/100kCal。如果使用嬰兒配方，可將嬰兒配方以含有DHA和ARA的油用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)補(bǔ)充。例如，可將DHA和ARA通過(guò)替換等量的正常存在于配方中的油比如高油酸葵花籽油而加入配方中。作為另一個(gè)實(shí)例，可將含有DHA和ARA的油通過(guò)替換等量的正常存在于無(wú)DHA和ARA配方中的總脂肪共混物的其余部分加入配方中。如果使用，DHA 和ARA的來(lái)源可以是本領(lǐng)域已知的任何來(lái)源比如海產(chǎn)油(marine oil)、魚(yú)油、單細(xì)胞油、蛋黃脂、腦脂等。在一些實(shí)施方案中，DHA和ARA源自單細(xì)胞Martek油，DHASCO ，或其變體。DHA和ARA可采用天然形式，前提是LCPUFA來(lái)源的殘余物對(duì)嬰兒不產(chǎn)生任何實(shí)質(zhì)性有害作用?；蛘?，可使用精煉形式的DHA和ARA。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，DHA和ARA來(lái)源是單細(xì)胞油，如在美國(guó)專利號(hào)5，374，567 ；5, 550，156 ；和5，397，591中所教導(dǎo)，其公開(kāi)通過(guò)引用完全結(jié)合到本文中。但是，本發(fā)明并非只限于此類油。在一個(gè)實(shí)施方案中，含有EPA 的LCPUFA來(lái)源與至少一種本發(fā)明組合物組合使用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，基本不含EPA的 LCPUFA來(lái)源與至少一種本發(fā)明組合物組合使用。例如，在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，將含有小于約16mg EPA/100kcal的嬰兒配方用本發(fā)明組合物補(bǔ)充。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將含有小于約IOmg EPA/100kcal的嬰兒配方用本發(fā)明組合物補(bǔ)充。在又一個(gè)實(shí)施方案中，將含有小于約5mg EPA/100kcal的嬰兒配方用本發(fā)明組合物補(bǔ)充。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案包括甚至不含有痕量EPA、用本發(fā)明組合物補(bǔ)充的嬰兒配方。據(jù)信提供本發(fā)明組合物與DHA和/或ARA的組合在含有這些劑的制劑的抗過(guò)敏性質(zhì)方面提供互補(bǔ)或協(xié)同作用。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的飲食產(chǎn)品包含一種或多種正常存在于人母乳中的生物活性材料，比如蛋白或多糖。本發(fā)明的組合物優(yōu)選用于預(yù)防、減輕、改善或治療過(guò)敏和/或其癥狀。將過(guò)敏限定為“對(duì)正常耐受且一般視為無(wú)害的物質(zhì)的異常超敏反應(yīng)”。過(guò)敏的癥狀范圍可從流鼻涕至過(guò)敏性休克。接近5千萬(wàn)美國(guó)人患過(guò)敏性疾病，并且這些疾病的發(fā)病率正在增加。過(guò)敏反應(yīng)涉及兩個(gè)基本階段。第一階段涉及對(duì)過(guò)敏原的速發(fā)型超敏反應(yīng)的早期發(fā)展。過(guò)敏原首次到達(dá)免疫系統(tǒng)，不發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。取而代之的是，免疫系統(tǒng)本身準(zhǔn)備與過(guò)敏原的未來(lái)相遇。作為清除細(xì)胞的巨噬細(xì)胞，和所謂樹(shù)突狀細(xì)胞包圍和破壞入侵的過(guò)敏原。然后細(xì)胞在其細(xì)胞壁上將過(guò)敏原片段向T淋巴細(xì)胞展示，所述T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫反應(yīng)的主要協(xié)調(diào)者(orchestrator)。這種認(rèn)知信號(hào)加幾種非認(rèn)知信號(hào)(如細(xì)胞因子)激活原初T 細(xì)胞，指示T細(xì)胞分化為T(mén)細(xì)胞效應(yīng)亞群。在過(guò)敏級(jí)聯(lián)中發(fā)揮關(guān)鍵作用的是Th-2表型的T 細(xì)胞(TH-2)。TH-2型T細(xì)胞的特征在于分泌幾種細(xì)胞因子包括白介素-4(IL-4)、IL-5和 IL-13。然后細(xì)胞因子IL-4和IL-13激活B淋巴細(xì)胞以產(chǎn)生指向抗特定過(guò)敏原的亞類E的抗體(IgE)。效應(yīng)細(xì)胞(肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)表面上特異性IgE抗體與過(guò)敏原的相互作用觸發(fā)速發(fā)型超敏反應(yīng)的早期。這種肥大細(xì)胞活化通常發(fā)生在第二次或另外暴露于過(guò)敏原后幾分鐘內(nèi)。肥大細(xì)胞上的IgE抗體，在致敏期間構(gòu)成，識(shí)別過(guò)敏原并與該入侵物結(jié)合。一旦過(guò)敏原與受體結(jié)合， 肥大細(xì)胞中的顆粒即釋放其內(nèi)容物。這些內(nèi)容物，或介質(zhì)，是促炎癥物質(zhì)比如組胺、血小板活化因子、前列腺素、細(xì)胞因子和白三烯。這些介質(zhì)實(shí)際上觸發(fā)過(guò)敏發(fā)作。組胺刺激粘液產(chǎn)生和引起發(fā)紅、腫脹和炎癥。前列腺素收縮氣道和擴(kuò)張血管。過(guò)敏免疫反應(yīng)第二階段的特征在于在過(guò)敏原暴露后炎性細(xì)胞比如嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)入氣道內(nèi)。致敏與炎癥之間的重要鏈接由T細(xì)胞表示，其分泌不僅參與IgE合成，還負(fù)責(zé)嗜酸性粒細(xì)胞募集、活化和存活的介質(zhì)。組織肥大細(xì)胞和鄰近的細(xì)胞產(chǎn)生化學(xué)信使，其向循環(huán)的嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及其它細(xì)胞發(fā)出信號(hào)以移行入該組織內(nèi)并幫助對(duì)抗外來(lái)物。嗜酸性粒細(xì)胞分泌其自身的化學(xué)物以維持炎癥，引起組織損傷，和募集更多免疫細(xì)胞。該階段可發(fā)生在過(guò)敏原暴露后幾小時(shí)至幾天內(nèi)任何時(shí)間，可持續(xù)幾小時(shí)甚至幾天。呼吸道過(guò)敏是影響呼吸道的特定過(guò)敏類型。從鼻至肺的氣道內(nèi)層在結(jié)構(gòu)上相似， 經(jīng)常相似地受過(guò)敏過(guò)程影響。因此，影響鼻或鼻竇的過(guò)敏原還可影響肺。例如，過(guò)敏性鼻炎，也稱為枯草熱，是由鼻和氣道中的黏膜對(duì)空氣中過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)引起。過(guò)敏性鼻炎的癥狀經(jīng)常包括鼻癢、咽癢和眼癢和過(guò)多噴嚏。經(jīng)常接著是鼻塞或流涕。因?yàn)樵诤粑酪粋€(gè)區(qū)域的過(guò)敏原可影響呼吸道其它區(qū)域，所以在鼻道中的鼻炎可導(dǎo)致哮喘，這是發(fā)生在肺下氣道的嚴(yán)重得多的疾病。哮喘的特征在于發(fā)生氣道高反應(yīng)性，氣促，呼氣喘鳴，干咳和胸部緊縮感。反復(fù)過(guò)敏原暴露可維持氣道中的炎性免疫反應(yīng)，導(dǎo)致氣道重塑，通常稱為慢性哮喘。并非每個(gè)有過(guò)敏性鼻炎的人都發(fā)生哮喘癥狀，但相當(dāng)數(shù)量，尤其是有復(fù)發(fā)、未治療過(guò)敏的人將顯示肺部炎癥變化。大約40%有過(guò)敏性鼻炎的人將確實(shí)發(fā)生充分發(fā)展的哮喘。如果伴隨過(guò)敏性鼻炎的鼻部炎癥到達(dá)鼻竇，結(jié)果可能是不舒服的感染稱為鼻竇炎，或者鼻-鼻竇炎，其中鼻竇本身不能排空細(xì)菌。癥狀包括鼻充血、流涕、咽痛、發(fā)熱、頭痛、疲勞和咳嗽，以及前額、頰后疼痛，和甚至牙痛和下巴痛。呼吸道過(guò)敏是兒童期最常見(jiàn)的病痛之一。至于成人，在兒重中的呼吸道過(guò)敏最可能表現(xiàn)為過(guò)敏性鼻炎和哮喘的形式。嬰兒和幼兒預(yù)防呼吸道過(guò)敏尤其重要，因?yàn)樗坪鯇?duì)過(guò)敏原的早期變應(yīng)性致敏與正常免疫反應(yīng)的成熟延遲有關(guān)。另外，變應(yīng)性致敏一般被視為發(fā)生特應(yīng)性疾病的第一步。 Baena-Cagnani, Role of Food Allergy in Asthma in Childhood( M^l311 AmSJ 哮喘中的作用)，Allergy. Clin. Immun. 1 (2) =145-149 (2001) 0經(jīng)常地，幼年開(kāi)始的哮喘與特應(yīng)性關(guān)聯(lián)，因此早期變應(yīng)性致敏看來(lái)在持續(xù)哮喘中也發(fā)揮重要作用。Martinez，F(xiàn).， Development of Wheezing Disorders and Asthma in Preschool Children(喘鳴疾病禾口哮喘在學(xué)齡前兒童中的發(fā)展)，Pediatr. 109 :362-367 Q002)。不僅變應(yīng)性致敏與哮喘之間有強(qiáng)關(guān)聯(lián)，而且該關(guān)聯(lián)似乎呈年齡依賴性。雖然在生命前幾年期間很少兒童被過(guò)敏原致敏，但在此期間被致敏的絕大多數(shù)在以后的生命中逐漸形成哮喘樣癥狀° Martinez, F. , Viruses and Atopic Sensitization in the First Years of Life (在生命前幾年中病毒和特應(yīng)性致敏)，Am. J. Respir. Crit. Care Med.，162 S95-S99(2000)。因此，重要的是發(fā)現(xiàn)預(yù)防早期過(guò)敏原致敏、過(guò)敏反應(yīng)性和預(yù)防以后的生命中呼吸道過(guò)敏的方法。越來(lái)越多證據(jù)顯示健康和疾病的許多方面不僅在嬰兒期決定，而且也在懷孕期決定。過(guò)敏性疾病尤其如此，其中出生時(shí)的免疫反應(yīng)牽涉子宮內(nèi)暴露作為初次致敏事件。例如，過(guò)敏原特異性T細(xì)胞在出生時(shí)已存在，并且對(duì)食物過(guò)敏原的早期致敏被識(shí)別為以后發(fā)生呼吸道過(guò)敏的預(yù)報(bào)因子。IHi 等，The Natural Course of Atopic Dermatitis from Birth to Age 7 Years and the Association with Asthma( /Aiij7 ^'WM'H^.^t^i 自然過(guò)程和與哮喘的關(guān)聯(lián))，Clin. Exp. Allergy 27:28-35(1997)。此外，在受精后很早肺就開(kāi)始發(fā)育并在出生后持續(xù)至少2或3年。因此，產(chǎn)前和產(chǎn)后氣道發(fā)育都對(duì)嬰兒和兒童呼吸道過(guò)敏的發(fā)病很重要。也已顯示在妊娠早期人的胎兒逐漸形成產(chǎn)生IgE的B細(xì)胞，能夠響應(yīng)適當(dāng)?shù)目乖碳ぎa(chǎn)生IgE抗體，其方式類似于在各種產(chǎn)前感染中看到的公認(rèn)的IgM反應(yīng)。Weil， G.等，Prenatal Allergic Sensitization to Helminth Antigens in Offspring of Parasite-Infected Mothers (在感染寄生蟲(chóng)的母親的子代中對(duì)蠕蟲(chóng)抗原的產(chǎn)前變應(yīng)性致敏)，J. Clin. Invest. 71 :1124-1129 (1983) 0這還說(shuō)明預(yù)防對(duì)呼吸道過(guò)敏原的產(chǎn)前和產(chǎn)后變應(yīng)性致敏的重要性。對(duì)呼吸道過(guò)敏的傳統(tǒng)藥物包括抗組胺藥、局部鼻類固醇、減充血?jiǎng)┖蜕仕崛芤骸?作為傳統(tǒng)藥物的替代，已出現(xiàn)益生菌作為某些類型過(guò)敏的可能治療物。關(guān)于使用活的或活力益生菌的上述缺點(diǎn)，本發(fā)明特別有利于在用于預(yù)防、減輕、改善或治療過(guò)敏性疾病和/或其癥狀的產(chǎn)品中替代此類益生菌。為達(dá)到該目的，優(yōu)選將組合物經(jīng)飲食或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品給藥，更優(yōu)選產(chǎn)前、嬰兒或兒童配方或營(yíng)養(yǎng)組合物，醫(yī)療食品，或用于特殊醫(yī)療目的的食品(即標(biāo)記限定醫(yī)療目的的食品)，最優(yōu)選嬰兒配方，或用于孕婦或哺乳婦女的圍產(chǎn)期營(yíng)養(yǎng)物，基本如上文討論。此外，本發(fā)明還能夠以改良方式提供益生菌。因?yàn)?，本發(fā)明無(wú)活力益生菌衍生的材料可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化和可再生產(chǎn)的方式在工業(yè)環(huán)境中制備，避免活益生菌固有的那些問(wèn)題。 而且，因?yàn)闊o(wú)活力的性質(zhì)且特別是當(dāng)作為干粉提供時(shí)，可將其充分地?fù)饺氩⑴渌幍綘I(yíng)養(yǎng)組合物中，用于預(yù)防或治療過(guò)敏反應(yīng)性或疾病。下文將參考以下非限制性實(shí)施例和


本發(fā)明。實(shí)施例1在分批發(fā)酵法中，使LGG在生理?xiàng)l件下生長(zhǎng)。通過(guò)加入33% NaOH保持pH恒定為PH6，溫度保持在37°C。攪拌器速度是50rpm，頂空用隊(duì)沖洗。提供以下培養(yǎng)基(經(jīng)改變的 MRS肉湯)(表1)。表 權(quán)利要求
1.一種包含蛋白質(zhì)混合物的組合物，所述組合物在LGG分批培養(yǎng)法的后指數(shù)期從培養(yǎng)上清液可獲得，用于治療或預(yù)防過(guò)敏性疾病。
2.權(quán)利要求1用于治療或預(yù)防過(guò)敏性疾病的組合物，其通過(guò)包含以下步驟的方法可獲得(a)用分批法使LGG在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(b)在培養(yǎng)步驟的后指數(shù)期采集培養(yǎng)上清液，將該期限定為L(zhǎng)GG分批培養(yǎng)法滯后期與靜止期之間的后半段時(shí)間；(c)任選從上清液除去低分子量成分以保留高于6kDa分子量的成分；(d)從培養(yǎng)上清液除去液體內(nèi)容物以獲得組合物。
3.權(quán)利要求1或2的組合物，其中將后指數(shù)期限定為L(zhǎng)GG分批培養(yǎng)法滯后期與靜止期之間的后四分之一段時(shí)間，優(yōu)選指數(shù)期中經(jīng)過(guò)0. 75-0. 85的時(shí)間。
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其中LGG分批培養(yǎng)在不含吐溫80的培養(yǎng)基中進(jìn)行，培養(yǎng)基優(yōu)選含有選自油酸、亞麻籽油、橄欖油、菜籽油、葵花籽油及其混合物的油性成分。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其中LGG分批培養(yǎng)在中性pH優(yōu)選pH6進(jìn)行，在生理溫度優(yōu)選37 °C進(jìn)行。
6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其為干燥形式，優(yōu)選噴霧干燥或冷凍干燥。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中將藥學(xué)上可接受的載體材料，比如麥芽糊精DE^jHAi 清液內(nèi)，接著噴霧干燥。
8.一種嬰兒或兒童配方，其在脂質(zhì)、碳水化合物、蛋白、維生素和礦物質(zhì)的存在方面營(yíng)養(yǎng)全面，進(jìn)一步包含權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的組合物。
9.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的組合物，其為飲食產(chǎn)品優(yōu)選營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品的形式，或者為此類產(chǎn)品優(yōu)選營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品的添加劑形式。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中飲食產(chǎn)品進(jìn)一步包含一種或多種多不飽和脂肪酸 (PUFA)，優(yōu)選長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)比如花生四烯酸(ARA)或二十二碳六烯酸 (DHA)。
11.權(quán)利要求9或10的組合物，其中飲食產(chǎn)品進(jìn)一步包含一種或多種正常存在于人母乳中的生物活性成分，比如蛋白或多糖。
12.權(quán)利要求9-11中任一項(xiàng)的組合物，其中飲食產(chǎn)品進(jìn)一步包含一種或多種益生元， 優(yōu)選選自不可消化的低聚糖、不可消化的多糖，及其混合物。
13.權(quán)利要求9-12中任一項(xiàng)的組合物，其中飲食產(chǎn)品是產(chǎn)前、嬰兒或兒童配方或者營(yíng)養(yǎng)組合物或補(bǔ)充物、醫(yī)療食品或用于特殊醫(yī)療目的的食品。
全文摘要
公開(kāi)了用于制備具有抗過(guò)敏(即預(yù)防過(guò)敏和/或治療意義上的抗過(guò)敏)性質(zhì)的無(wú)活力益生菌組合物的方法，該方法包含以下步驟(a)用分批法將LGG在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(b)在培養(yǎng)步驟的后指數(shù)期采集培養(yǎng)上清液；(c)從培養(yǎng)上清液除去液體內(nèi)容物以獲得組合物。還公開(kāi)包含蛋白質(zhì)混合物的組合物，所述組合物通過(guò)以上方法可獲得，及其在優(yōu)選靶向懷孕的母親、嬰兒或兒童的飲食產(chǎn)品中的用途，以及在用于特殊醫(yī)療目的的食品中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12R1/225GK102575224SQ201080040659
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月11日
發(fā)明者E·A·F·范托爾, H·倫斯, H·加恩, K·M·奧弗坎普, M·J·范德維爾夫, M·布拉克斯馬, U·赫爾斯, W·M·拉塞爾 申請(qǐng)人:美贊臣營(yíng)養(yǎng)品公司