專利名稱：便于乳腺腺泡體模型體外構(gòu)建的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種試驗(yàn)中使用的試劑盒。
背景技術(shù)：
體外構(gòu)建的乳腺腺泡模型是一種新型的研究乳腺發(fā)育與功能的研究載體。以往在 體外研究乳腺的泌乳功能時(shí)均以乳腺上皮細(xì)胞作為研究載體。但是乳腺上皮細(xì)胞一旦從乳 腺組織中分離出來，進(jìn)行常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)，隨著傳代次數(shù)的增加，其組織特異性功能逐漸消 失，大大降低了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)M體內(nèi)環(huán)境的真實(shí)性。而在基質(zhì)上培養(yǎng)構(gòu)建的乳腺腺泡模型是 最小的泌乳功能單位，其三維極性結(jié)構(gòu)使腺泡具有完整的乳汁合成和分泌能力，保證了其 與體內(nèi)腺泡在結(jié)構(gòu)和功能上的一致性。這種三維腺泡結(jié)構(gòu)能真實(shí)地模擬體內(nèi)情況，因此可 以取代二維條件下培養(yǎng)的單層乳腺上皮細(xì)胞，作為泌乳生物學(xué)與乳腺功能調(diào)控的新型研究 載體。以此乳腺腺泡模型為載體開展研究，大大增加了乳腺生物學(xué)研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果的直觀性、 準(zhǔn)確性和科學(xué)性。但在現(xiàn)階段進(jìn)行乳腺腺泡體模型外構(gòu)建時(shí)，需要進(jìn)行試劑的配制和準(zhǔn)備， 對(duì)于實(shí)驗(yàn)人員來說配制和準(zhǔn)備試劑增加了實(shí)驗(yàn)過程中的復(fù)雜性。并且因?yàn)橹谱鲗?shí)驗(yàn)試劑的 過程中熟練程度和認(rèn)知水平的不同，可能配制出的試劑也并不相同，從而最終得到的結(jié)果 穩(wěn)定性和可靠性也不同。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型為了解決在進(jìn)行乳腺腺泡模型體外構(gòu)建的過程中配制和準(zhǔn)備試劑所 帶來的實(shí)驗(yàn)過程復(fù)雜化的問題，以及所制備出的試劑本身給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來的穩(wěn)定性和可靠 性不高的缺點(diǎn)，而提出了一種便于乳腺腺泡模型體外構(gòu)建的試劑盒。便于乳腺腺泡模型體外構(gòu)建的試劑盒由外包裝盒6和五個(gè)試劑瓶組成，所述的五 個(gè)試劑瓶分別為Growth factor-reduced Matrigel 試劑瓶1、腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶2、 胰酶-EDTA溶液試劑瓶3、EGTA溶液試劑瓶4和Cell recovery solution試劑瓶5，外包 裝盒6內(nèi)部設(shè)置有兩個(gè)保溫區(qū)，所述的兩個(gè)保溫區(qū)是有垂直于盒體底面的平板進(jìn)行分割形 成的，Growth factor-reduced Matrigel 試劑瓶1和胰酶-EDTA溶液試劑瓶3位于一個(gè) 保溫區(qū)中，腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶2、EGTA溶液試劑瓶4和Cell recovery solution試劑 瓶5位于另一個(gè)保溫區(qū)中。本實(shí)用新型較傳統(tǒng)方法有效率高、結(jié)果穩(wěn)定可靠等優(yōu)勢(shì)。體外構(gòu)建乳腺腺泡模型 操作簡(jiǎn)便和價(jià)格低廉，可充分滿足泌乳生物學(xué)與乳腺功能調(diào)控研究需求的試劑盒。

圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
具體實(shí)施方式
一 結(jié)合圖1說明本實(shí)施方式，本實(shí)施方式由外包裝盒6和五
3個(gè)試劑瓶組成，所述的五個(gè)試劑瓶分別為Growth factor-reduced Matrigel 試劑瓶1、腺 泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶2、胰酶-EDTA溶液試劑瓶3、EGTA溶液試劑瓶4和Cell recovery solution試劑瓶5，外包裝盒6內(nèi)部設(shè)置有兩個(gè)保溫區(qū)，所述的兩個(gè)保溫區(qū)是有垂直于盒體 底面的平板進(jìn)行分割形成的，Growth factor-reduced Matrigel 試劑瓶1和胰酶-EDTA 溶液試劑瓶3位于一個(gè)保溫區(qū)中，腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶2、EGTA溶液試劑瓶4和Cell recovery solution試劑瓶5位于另一個(gè)保溫區(qū)中。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同點(diǎn)在于每一個(gè)溫區(qū)是 由六塊保溫板組成的立方體區(qū)域。其它組成和連接方式與具體實(shí)施方式
一相同。保溫板能 夠?qū)⒕哂?20°C的Growth factor-reduced Matrigel 試劑瓶1和胰酶-EDTA溶液試劑瓶 3保持在_20°C，具有4°C的腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶2、EGTA溶液試劑瓶4和Cell recovery solution試劑瓶5保持在4°C。
具體實(shí)施方式
三 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
二不同點(diǎn)在于保溫板為硬質(zhì) 泡沫塑料板，其它組成和連接方式與具體實(shí)施方式
二相同。便于乳腺腺泡模型體外構(gòu)建的試劑盒的操作步驟1.將 Growth factor-reduced MatrigelTM 在 4°C條件下融解，均勻鋪在 4°C預(yù)冷 的細(xì)胞培養(yǎng)板上，注意避免產(chǎn)生氣泡，每孔基質(zhì)厚度0. 5mm ；將鋪好基質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)板置于 37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱中，使液態(tài)基質(zhì)成為基質(zhì)凝膠。2.采用胰酶-EDTA溶液消化原代培養(yǎng)的乳腺上皮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞。3.將收集到的乳腺上皮細(xì)胞懸浮于腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液中，用1000μ1的加樣槍輕 輕將細(xì)胞團(tuán)吹散，獲得均勻的細(xì)胞懸液。用細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后用腺 泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液將細(xì)胞稀釋。4.在鋪好基質(zhì)凝膠的細(xì)胞培養(yǎng)板中加入細(xì)胞懸液，相差顯微鏡觀察。5.將接種后的細(xì)胞培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；每4日更換一次分析培養(yǎng)基；培養(yǎng) 15日可獲得具有泌乳能力的乳腺腺泡。6.乳腺腺泡的收集，棄去培養(yǎng)皿中的腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液。在培養(yǎng)皿中加入Iml cell recovery solution，4°C處理75min，溶解基質(zhì)成分。離心棄上清，沉淀即為乳腺腺泡。7.乳腺腺泡腔內(nèi)容物的收集，在沉淀收集的乳腺腺泡中加入EGTA溶液，室溫孵 育lOmin。離心棄沉淀，上清即為乳腺腺泡腔內(nèi)容物。本實(shí)用新型內(nèi)容不僅限于上述各實(shí)施方式的內(nèi)容，其中一個(gè)或幾個(gè)具體實(shí)施方式的組合同樣也可以實(shí)現(xiàn)發(fā)明的目的。
權(quán)利要求便于乳腺腺泡模型體外構(gòu)建的試劑盒，其特征在于它由外包裝盒(6)和五個(gè)試劑瓶組成，所述的五個(gè)試劑瓶分別為Growth factor reduced MatrigelTM試劑瓶(1)、腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶(2)、 胰酶 EDTA溶液試劑瓶(3)、EGTA溶液試劑瓶(4)和Cell recovery solution試劑瓶(5)，外包裝盒(6)內(nèi)部設(shè)置有兩個(gè)保溫區(qū)，所述的兩個(gè)保溫區(qū)是有垂直于盒體底面的平板進(jìn)行分割形成的，Growth factor reduced MatrigelTM試劑瓶(1)和胰酶 EDTA溶液試劑瓶(3)位于一個(gè)保溫區(qū)中，腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶(2)、EGTA溶液試劑瓶(4)和Cell recovery solution試劑瓶(5)位于另一個(gè)保溫區(qū)中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的便于乳腺腺泡模型體外構(gòu)建的試劑盒，其特征在于每一個(gè)溫 區(qū)是由六塊保溫板組成的立方體區(qū)域。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的便于乳腺腺泡模型體外構(gòu)建的試劑盒，其特征在于保溫板為 硬質(zhì)泡沫塑料板。
專利摘要便于乳腺腺泡體模型體外構(gòu)建的試劑盒，它涉及試驗(yàn)中使用的試劑盒。它解決了在進(jìn)行乳腺腺泡模型構(gòu)建試驗(yàn)的過程中配制和準(zhǔn)備試劑所帶來的實(shí)驗(yàn)過程復(fù)雜化的問題，以及所制備出的試劑本身給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來的穩(wěn)定性和可靠性不高的缺點(diǎn)。它外包裝盒和五個(gè)試劑瓶組成，所述的五個(gè)試劑瓶分別為Growthfactor-reducedMatrigelTM試劑瓶、腺泡生長(zhǎng)培養(yǎng)液試劑瓶、胰酶-EDTA溶液試劑瓶、EGTA溶液試劑瓶和Cellrecoverysolution試劑瓶，外包裝盒內(nèi)部設(shè)置有兩個(gè)保溫區(qū)，兩個(gè)保溫區(qū)是有垂直于盒體底面的平板進(jìn)行分割形成的，Growthfactor-reducedMatrigelTM試劑瓶和胰酶-EDTA溶液試劑瓶位于一個(gè)保溫區(qū)中，其他試劑瓶位于另一個(gè)保溫區(qū)中。體外構(gòu)建乳腺腺泡模型操作簡(jiǎn)便，可充分滿足泌乳生物學(xué)與乳腺功能調(diào)控研究需求的試劑盒。
文檔編號(hào)C12N5/071GK201762336SQ2010202093
公開日2011年3月16日 申請(qǐng)日期2010年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月31日
發(fā)明者侯曉明, 李慶章, 林葉 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)