專利名稱：一種黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因組學(xué)、生物信息學(xué)和分子生物學(xué)三大領(lǐng)域，是根據(jù)FIASCO法開發(fā) 的一種黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記及其用途。
背景技術(shù)：
自Watson和Crick在1953年提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和60年代末發(fā)現(xiàn)限制性內(nèi)切 酶以來，分子生物學(xué)開始得到發(fā)展。如1980年Botstein等采用DNA限制性片段多態(tài)性 (restrictionfragment length polymorphism,RFLP)作為一禾中新的遺傳標(biāo)記，從而開倉丨J了 直接用DNA的多態(tài)性發(fā)展遺傳標(biāo)記的新階段。接著出現(xiàn)了其他一些直接研究DNA多態(tài)性的 分子遺傳標(biāo)記如微衛(wèi)星、DNA指紋、RAPD等，這些分子標(biāo)記的陸續(xù)出現(xiàn)為遺傳多樣性的研究 開創(chuàng)了新的篇章。分子標(biāo)記直接以DNA的形式表現(xiàn)，而DNA作為遺傳物質(zhì)在進(jìn)行DNA水平 多態(tài)性分析時，標(biāo)記的數(shù)目多，多態(tài)性高，不僅可避免根據(jù)表型標(biāo)記受到環(huán)境影響和數(shù)量有 限的缺點(diǎn)，也可克服細(xì)胞學(xué)、生物化學(xué)等標(biāo)記可能低估遺傳多樣性的不足。其中微衛(wèi)星標(biāo)記(或稱SSR)因其在評估遺傳多樣性、構(gòu)建遺傳連鎖圖譜、繪制系 統(tǒng)發(fā)生樹、疾病診斷和親子鑒定等方面顯示出的巨大優(yōu)勢，在人類和動植物的遺傳研究中 得到了廣泛應(yīng)用。由于微衛(wèi)星的側(cè)翼序列相對保守，很多非模式生物物種可以利用近緣物 種的微衛(wèi)星引物進(jìn)行跨種擴(kuò)增。但是對淡水龜類微衛(wèi)星分子標(biāo)記的開發(fā)還很少，而利用黃 喉擬水龜自身基因組篩選的微衛(wèi)星分子標(biāo)記目前也尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記，其能用于對黃 喉擬水龜進(jìn)行遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位、標(biāo)記輔助選種或標(biāo)記輔助育種。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記，該微衛(wèi)星 分子標(biāo)記的核苷酸序列為SEQ ID N0:1。作為本發(fā)明的黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記的改進(jìn)，該黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記 引物為下列引物對上游5 ‘ -GGACTCACTTCCAAAACAA-3 ‘下游5' -TAACAGACCCTCCCCATC-3 ‘。本發(fā)明還同時提供了上述黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記的用途，用于對黃喉擬水龜 進(jìn)行遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位、標(biāo)記輔助選種或標(biāo)記輔助育種。本發(fā)明是在磁珠富集法的基礎(chǔ)上，利用FIASCO法從黃喉擬水龜核基因組DNA中篩 選出一個穩(wěn)定有效的微衛(wèi)星分子標(biāo)記。本發(fā)明是通過這樣的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的1.微衛(wèi)星富集文庫的構(gòu)建先通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白酶K消化和酚/氯仿抽提的方法從 黃喉擬水龜?shù)奈舶椭泻蟛刻崛』蚪MDNA。然后通過酶切、連接反應(yīng)，PCR預(yù)擴(kuò)增，PCR預(yù) 擴(kuò)增產(chǎn)物與生物素探針(CA) 12進(jìn)行雜交，生物素探針復(fù)合體與磁珠雜交，將單鏈的目標(biāo)SSRDNA序列恢復(fù)成雙鏈等步驟，獲得了富含SSR重復(fù)序列的文庫。2.克隆及測序?qū)⒓兓^的雙鏈產(chǎn)物與PMD18-T Vector載體連接，轉(zhuǎn)化到感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞中。采用菌落PCR法挑選出含有微衛(wèi)星序列的陽性克隆，選取擴(kuò)增產(chǎn)物為 雙帶或三帶的菌液送至上海生工測序，獲得SSR序列。3.序列整理和引物設(shè)計(jì)選取重復(fù)次數(shù)大于5次的序列，并去除序列中的載體部 分。針對微衛(wèi)星側(cè)翼序列的保守區(qū)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。4. PCR法驗(yàn)證引物的可用性利用1-2個種群的30個黃喉擬水龜個體進(jìn)行引物的 穩(wěn)定性和特異性檢測。最終篩選出的微衛(wèi)星標(biāo)記引物由下列核苷酸序列(5' -3')組成上游5 ‘ -GGACTCACTTCCAAAACAA-3 ‘下游5' -TAACAGACCCTCCCCATC-3 ‘本發(fā)明所得到的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)，通過實(shí)驗(yàn)證明具有高度多態(tài)性，可應(yīng)用于遺傳 多樣性和種群遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳圖譜構(gòu)建和基因定位、標(biāo)記輔助選種輔助育種等許多方 面。


下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
圖1是8個種群根據(jù)Nei氏遺傳距離構(gòu)成的UPGMA樹。
具體實(shí)施例方式以下對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1、一、實(shí)驗(yàn)方法首先通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白酶K消化和酚/氯仿抽提的方法，從黃喉擬水龜?shù)奈舶椭泻?部進(jìn)行基因組DNA的提取。接著進(jìn)行微衛(wèi)星富集文庫的構(gòu)建、陽性克隆的篩選、序列整理和 引物設(shè)計(jì)等步驟。1.微衛(wèi)星富集文庫的構(gòu)建微衛(wèi)星富集文庫(CA)n的構(gòu)建主要參考了 Zane等的FIASCO方法(Fast Isolation byAFLP of Sequences Containing r印eats)，具體的實(shí)驗(yàn)操作如下1. 1酶切、連接反應(yīng)取2只黃喉擬水龜?shù)幕蚪MDNA，混合，進(jìn)行酶切連接反應(yīng)。該體系為25ul，包括 0. 8ul 混合的 DNAUul AFLP 接頭受體、0. 5ul MseI 限制性內(nèi)切酶、2. 5ul IXNEB Buffer、 0. 25ul BSA、2ul ATP、0. 2ul T41igation、滅菌的超純水定容至25ul。將其用微量加樣槍加 入到進(jìn)口的PCR小管中，輕搖混勻，并且用進(jìn)口封口膜封口，以防止水浴加熱時受到污染。 將該體系放入事先預(yù)熱好的37°C水浴鍋中，溫育3h。將溫育后所得的消化連接產(chǎn)物保存 到-20°C冰箱中待用，得消化連接液。L2PCR 預(yù)擴(kuò)增先將消化連接液稀釋十倍，然后以該稀釋液為模板，MseI-N 5' -GATGAGTCCTGAGTAAN-3'為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系為20ul，包含5ul稀釋后的消化連接液、lul Msel-N 引物、0. 2ul Taq 聚合酶、2ul Buffer,2ul dNTP、9. 8ul H20。該擴(kuò) 增條件為94°C預(yù)變性5min，然后進(jìn)行26個循環(huán)的94°C變性30s，53°C退火lmin，72°C延伸 lmin ；最后72°C終延伸8min。在這一過程中，我們對循環(huán)次數(shù)進(jìn)行過多次的摸索，最終選擇 擴(kuò)增效果較好的26次循環(huán)。PCR預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物用1. 5%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)條帶清 晰且彌散好，產(chǎn)物長度> 200bp。1. 3PCR預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物與生物素探針進(jìn)行雜交通過上海生工合成的化幻12探針，我們根據(jù)引物分子量計(jì)算后加入適量超純水 配置成濃度為lOOmmol/L的溶液。雜交反應(yīng)體系為50ul，包含10ul PCR預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物、 lul(CA)12 探針溶液、15ul 20XSSC、0.5ul 10% (質(zhì)量濃度)SDS、23. 5ul dd H20。雜交反 應(yīng)在PCR儀中進(jìn)行，條件為95°C下變性5min，然后在68°C下雜交lh ；得雜交反應(yīng)體系。1. 4生物素探針復(fù)合體與磁珠雜交平衡磁珠，形成懸液。用磁力架捕獲磁珠，將管置于磁力架上，使磁珠集中于管的 一側(cè)，小心移除上清液。用0. 5XSSC(每次300 u 1)洗滌磁珠3次。每次洗滌后，用磁力架 捕獲磁珠并小心移除上清液。重懸磁珠于lOOyl的0.5XSSC中。捕獲并洗滌探針-目的 片段的雜交液，獲得富含SSR重復(fù)的單核苷酸序列，具體操作過程如下(1)將雜交反應(yīng)體系(50ul)加入重懸的磁珠中，25°C溫育lOmin，伴以每l-2min 的翻轉(zhuǎn)；(2)用磁力架捕獲磁珠并小心移除上清液。加入300iU的6XSSC(含0. SDS) 于磁珠中，室溫下洗脫lOmin;(3)用磁力架捕獲磁珠并小心移除上清液，加入300 ill的6XSSC(含0. SDS)68°C下洗脫 lOmin ；重復(fù)一次步驟(3)；(4) 300 ill 6 X SSC 室溫洗脫 lOmin ；重復(fù)一次步驟(4)；(5) 300 ill 3 X SSC 室溫下洗脫 lOmin ；重復(fù)一次步驟(5)；這時向磁珠所在的離心管中加入50 ill 0. 15mol/L的NaoH，室溫下洗脫20min， 使DNA從磁珠表面分離下來，然后取上清液于一個滅菌過的離心管中，加入5. 5 yl TE和 3. 25u 11. 25mol/L的乙酸中和NaOH，此時即可得到單鏈的目標(biāo)SSR DNA序列，最后用純化 試劑盒清潔中和后的上清液。最終得清潔后的磁珠洗脫液。1. 5將單鏈的目標(biāo)SSR DNA序列恢復(fù)成雙鏈以捕獲的單鏈DNA為模板，Msel-N為引物，建立25iU DNA雙鏈恢復(fù)PCR體 系。反應(yīng)物包括2. 5ul清潔后的磁珠洗脫液、lul Msel-N引物、12. 5ul 2XEasyTaq PCR SuperMix,9ul ddH20。循環(huán)程序設(shè)置為95°C預(yù)變性3分鐘，接著5個循環(huán)包括95°C變性 30s，53°C退火30s，72°C延伸45s，然后進(jìn)行另外30個循環(huán)的92°C變性30s，53°C退火30s， 72°C延伸55s，最后于72°C下延伸30分鐘。用1. 5%的瓊脂糖凝膠檢測PCR產(chǎn)物，產(chǎn)物為> 200bp的彌散帶。產(chǎn)物用純化試劑盒純化，置于-20°C冰箱中備用。雙鏈產(chǎn)物可以在-20°C 的條件下保存幾個月。若后續(xù)的藍(lán)白斑克隆失敗，可以從這一步接著往下做，節(jié)省了前面的 很多繁瑣步驟。
5
1. 6連接T載體，進(jìn)行克隆轉(zhuǎn)化將純化過的雙鏈產(chǎn)物與pMDIS-T Vector載體連接，根據(jù)載體試劑盒說明書建立了 8 μ 1 的連接體系，包括4· 7ul 雙鏈產(chǎn)物、0. 3ul pMD18_T Vector,3ul Ligation solution I，在16°C水浴中連接12h-16h。連接產(chǎn)物可以通過連接PCR來檢測目的片段是否和載 體連接上。該P(yáng)CR體系為20ul，包括0. 7ul連接產(chǎn)物、0. 4ul M13 (F/R各0. 4ul)、IOul 2 XEasyTaq PCRSuperMix,8. 5ul ddH20。擴(kuò)增條件為95°C預(yù)變性 5min，30 個循環(huán)的 95°C 變性30s，52°C退火30s，72°C延伸30s ；最后進(jìn)行IOmin的72°C延伸。通過1. 5%的瓊脂糖 凝膠檢測發(fā)現(xiàn)產(chǎn)物為> 200bp的彌散帶，確認(rèn)目的片段和載體已連接上。連接成功率很高，一般情況下也可以省去PCR檢測的過程，直接做下一步。 連接產(chǎn)物準(zhǔn)備好之后，我們做轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作。首先把槍、槍頭、LB液體培養(yǎng)基、消毒用的酒精棉等放入超凈工作臺，打開超凈工 作臺的紫外燈滅菌20min。打開37°C搖床、42°C水浴鍋備用。轉(zhuǎn)化的具體操作如下(1)取一只1. 5ml滅菌過的進(jìn)口離心管，加入IOOul感受態(tài)細(xì)胞(從_70°C冰箱中 取出，取出后馬上置于手掌心使其升溫，有利于增強(qiáng)活性)，再將8ul的連接產(chǎn)物加入到管 中。輕輕旋動、搖勻。(2)將該混合液置于冰上，靜置30min。(3)42°C水浴90s，拿出后馬上置于冰上，驟冷3min。這一過程很關(guān)鍵，一定要做到 時間準(zhǔn)、速度快。(4)驟冷之后，加入200ul LB (Amp-)液體培養(yǎng)基，顛倒混勻。(5) 37°C搖床，180r/min, Ih ；得轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液。(6)涂平板。(倒平板之前，先在LB固體培養(yǎng)基中加入Amp+、X-gal、IPTG。以100ml 培養(yǎng)基為例，加入 60-100ul Amp+(0. lmg/ml)、200ul X_gal、250ul IPTG)。吸取 IOOul 轉(zhuǎn)化
培養(yǎng)液到平板上，涂勻。(7)37°C烘箱培養(yǎng)12_16h，視菌落的大小決定。溫育后將平板置于4°C冰箱中4h 以上，這將有助于藍(lán)白斑的表達(dá)。該過程的注意事項(xiàng)如下涂平板時，推棒在酒精燈上燒過之后，去掉冷凝水的同時 使推棒冷卻。推時朝一個方向，不可來回反復(fù)，同時轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿。涂好平板之后，先在37°C 恒溫烘箱中正放20min，待菌液干后，反放培養(yǎng)。經(jīng)過藍(lán)白斑篩選，挑選白色菌落于200μ 1 LB (Amp+)液體培養(yǎng)基中，37 °C搖床， 250r/h,大約5h，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，理想狀態(tài)菌液呈發(fā)煙狀。2.陽性克隆的PCR法篩選我們采用菌落PCR法來挑選出含有微衛(wèi)星序列的陽性克隆。擴(kuò)增體系為0. 5 μ L 菌液，0. 25ul M13(上下游各 0. 25ul)、0. 25ul 不加生物素的(CA) 12探針、7. 5ul 2 XEasyTaq PCRSuperMixJn ddH20至15μ L。擴(kuò)增程序95°C預(yù)變性5分鐘，23個循環(huán)的95°C變性30s， 53°C退火30s，72°C延伸30s ；最后于72°C下延伸10分min。選取擴(kuò)增產(chǎn)物為雙帶或三帶的菌液送至上海生工測序。3.序列整理和引物設(shè)計(jì)由生工測序回來的序列，經(jīng)過整理后發(fā)現(xiàn)，有的序列不含有重復(fù)片段，有的序列 重復(fù)次數(shù)過少(< 5次)，并且有兩兩序列間發(fā)生重復(fù)的可能。在該實(shí)驗(yàn)中，我們先利用DNA star軟件(http//www. dnastar. com/)編輯序列，去除序列中的載體部分然后再利 用SSRHimter軟件找出含有多次重復(fù)的微衛(wèi)星序列(重復(fù)次數(shù)> 5)。挑選出的微衛(wèi)星序 列，其兩側(cè)翼區(qū)都應(yīng)該足夠長，這樣有利于后續(xù)的引物設(shè)計(jì)。引物設(shè)計(jì)的軟件采用primer premier5. 0 ；最終確定的黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記，其核苷酸序列為SEQ ID NO :1。4.多態(tài)性檢測設(shè)計(jì)黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物為下列引物上游5 ‘ -GGACTCACTTCCAAAACAA-3 ‘下游5' -TAACAGACCCTCCCCATC-3 ‘。用設(shè)計(jì)好的引物對30個黃喉擬水龜個體進(jìn)行多態(tài)性檢測。值得注意的是，我們在 送生工合成引物的時候，要在其中一條引物的5'端或者3'端加上一段沒有遠(yuǎn)紅外熒光 標(biāo)記的M13序列。15iU的PCR反應(yīng)體系包括如下試劑0. 5ul基因組DNA、0. 2ul引物(上 下游各 0. 2ul)、lul Mg+、lul dNTP、1.5ul Buffer,0. lul rTaq、0. 4ul 熒光標(biāo)記的 M13 引物 [eitherIRD700or IRD800 (LI-COR) ]，10. lul ddH20。PCR 循環(huán)條件如下95°C預(yù)變性 5min， 接著32個循環(huán)的95°C變性30s，位點(diǎn)特異性退火溫度(52°C ) 30s, 72°C延伸30s ；最后72°C 延伸lOmin。PCR產(chǎn)物在LI-C0R4300遺傳自動分析儀上進(jìn)行基因分型，配合使用內(nèi)置的STR 分子量標(biāo)準(zhǔn)(STR Marker, LI-COR Bioseienee)和軟件SAGAGT自動判讀條帶，輔以人工校 正。二、數(shù)據(jù)分析用CERVUS 2. 0計(jì)算等位基因數(shù)目(number of alleles，NA)，多態(tài)信息含 量(PIC)，觀測雜合度(observed heterozygosities, H0)和期望雜合度(expeeted heterozygosities, HE)。三、結(jié)果通過上述軟件的分析，得到了該對引物在30個黃喉擬水龜個體中的遺傳信息包 括Na，H0, He，PIC值。具體如表1所示。表 1、
位點(diǎn)名稱樣本量NaHoHePICMmul30110.6220.7250.608多態(tài)信息含量(PIC)是衡量基因變異程度高低的指標(biāo)，當(dāng)PIC> 0.5時，該基因座 位為高度多態(tài)性；0. 25 < PIC < 0. 5時，為中度多態(tài)；PIC < 0. 25時為低度多態(tài)性。該發(fā)明 得到的這個微衛(wèi)星標(biāo)記其PIC值為0. 608，說明該標(biāo)記具有高度多態(tài)性，可作為有效的遺傳 標(biāo)記應(yīng)用于黃喉擬水龜?shù)倪z傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)分析，并為種質(zhì)資源調(diào)查和輔助育種提供 有利的分子工具。實(shí)施例2、用上述這對微衛(wèi)星引物擴(kuò)增來自8個采樣點(diǎn)的120個個體，檢測其遺傳多樣性。具 體操作如下(1)用于遺傳分析的黃喉擬水龜樣本120只。采樣點(diǎn)及代號見表2。表2、黃喉擬水龜樣本信息 (2)黃喉擬水龜DNA的提取通過標(biāo)準(zhǔn)的蛋白酶K消化和酚/氯仿抽提的方法，從尾部提取基因組DNA。(3)微衛(wèi)星DNA的PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)在15ul的體系中進(jìn)行，包括大約50_100ng基因組DNA，7. 5ul Ex Taqpremix buffer，本發(fā)明的上下游引物各0. 4ul，0. 4pmol熒光標(biāo)記的M13引物[either IRD700or IRD800 (LI-COR)]，加 ddH20 補(bǔ)齊到 15ul。PCR 擴(kuò)增條件為95°C預(yù)變性 5min，緊 接著32個循環(huán)的95°C變性30s，位點(diǎn)特異性退火溫度(52°C ) 30s, 72°C延伸30s ；最后72°C 終延伸8min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在LI-C0R4300遺傳自動分析儀上進(jìn)行基因分型，配合使用內(nèi)置 STR分子量標(biāo)準(zhǔn)(STR Marker,LI-C0R Bioseienee)和軟件SAGAgt自動判讀條帶，輔以人工 校正。(4)數(shù)據(jù)分析用CERVUS 2. 0計(jì)算等位基因數(shù)目(number of alleles，ΝΑ)，多態(tài)信息含 量(PIC)，觀測雜合度(observed heterozygosities, H0)和期望雜合度(expeeted heterozygosities, He)。哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium, HWE)偏離測 試和位點(diǎn)間的連鎖不平衡檢驗(yàn)(linkage disequilibrium, LD)使用GENEP0P version3. 4 軟件完成。(5)結(jié)果如下表3 表3、8個黃喉擬水龜種群在Mmul位點(diǎn)的多態(tài)信息情況 注表中帶*表示該種群顯著偏離哈迪_溫伯格平衡。由表3可以看出，8個種群在Mmul位點(diǎn)的等位基因范圍在9_16之間，平均每個種 群12. 5個，含量豐富。PIC值最小為0.52，最大為0.91，均大于0.5，表明多態(tài)性豐富。另 外經(jīng)過哈迪-溫伯格平衡檢測發(fā)現(xiàn)，8個種群中有2個種群偏離了平衡，一方面可能是樣本 量不足所引起；另一方面微衛(wèi)星位點(diǎn)數(shù)較少也是一個影響因素。從圖1看出，該8個種群聚為2大支系，其中浙江金華、浙江麗水、浙江海寧、江蘇 蘇州、安徽南陵聚為一支；湖北荊州、湖南漢壽、湖南益陽聚為一支。實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明得到的Mmul微衛(wèi)星位點(diǎn)體現(xiàn)出了高度的種群遺傳多樣性，聚類 分析結(jié)果能很好的反映這8個種群的實(shí)際狀況。由此可見，該微衛(wèi)星標(biāo)記能很好的用于黃 喉擬水龜遺傳多樣性分析和遺傳結(jié)構(gòu)的檢測，并用于種質(zhì)資源的調(diào)查和輔助育種。最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實(shí)施例。顯然，本發(fā) 明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容 直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記，其特征是該微衛(wèi)星分子標(biāo)記的核苷酸序列為SEQID NO1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記，其特征是所述黃喉擬水龜微衛(wèi) 星分子標(biāo)記引物為下列引物對上游 5 ‘ -GGACTCACTTCCAAAACAA-3 ‘ 下游 5 ‘ -TAACAGACCCTCCCCATC-3 ‘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記的用途，其特征是用于對 黃喉擬水龜進(jìn)行遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位、標(biāo)記輔助選種或標(biāo)記輔助育種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記，該微衛(wèi)星分子標(biāo)記的核苷酸序列為SEQ ID NO1。本發(fā)明還同時公開了該黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記的引物。該黃喉擬水龜微衛(wèi)星分子標(biāo)記能用于對黃喉擬水龜進(jìn)行遺傳結(jié)構(gòu)分析、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位、標(biāo)記輔助選種或標(biāo)記輔助育種。
文檔編號C12Q1/68GK101880659SQ20101015355
公開日2010年11月10日 申請日期2010年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月22日
發(fā)明者俞丹娜, 李濤, 章蕓, 鄭榮泉 申請人:浙江師范大學(xué)