專利名稱：制備發(fā)酵人參濃縮物或粉末的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制備發(fā)酵人參濃縮物或粉末的方法。
背景技術(shù)：
人參(Panaxginseng C. A. Meyer (五加科))是在亞洲國(guó)家(包括中國(guó)、韓國(guó)和日本)長(zhǎng)期用來(lái)治療各種疾病的一種藥用植物。特別是，已知人參的主要活性成分人參皂甙(人參皂苷)具有各種生理活性，例如在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)中的抗衰老活性、消炎活性、抗氧化活性((Wu等，J. Immunol.，148 1519-25，1992 ；Lee, Facts about Ginseng, the Elixir of Life. , Hollyn International.新澤西州，1992 ;Huang, The Pharmacology of Chinese Herbs. CRC Press.佛羅里達(dá)州，1999)；抗糖尿病活性 (Chang, Pharmacology and Application of Chinese Material Medica. Vol. 1, World Scientific.新加坡，1986)和抗腫瘤活性(Sato 等，Biol. Pharm. Bull. 17 :635_9，1994 ； Mochizuki 等，Biol. Pharm. Bull. 18 :1197_1202，1995)。此外，在攝入后人參皂甙在人體腸道內(nèi)由細(xì)菌代謝，其代謝產(chǎn)物已知具有各種生理活性(Karikura 等，Chem. Pharm. Bull. ,39 :2357_61，1991 ；Kanaoda 等，J. Tradit. Med. 11 :241-5，1994 ；Akao 等，Biol. Pharm. Bull. ,21 :245_9，1998)。例如，原人參二醇型人參皂甙Rbl、Rb2和Rc通過(guò)人腸道菌代謝為IH-901 (20-0- β -D-吡喃葡糖基-20 (S)-原人 #二酉享)(Hasegawa 等，Planta Medica 63 463-40,1997 ；Tawab 等，Drug Metab. Dispos.， 31 :1065-71，2003)，而原人參三醇型人參皂甙Re和Rgl代謝為人參皂甙Rhl或人參皂甙 Fl (Hasegawa 等，Planta Medica 63 :463_40，1997 ；Tawab 等，Drug Metab. Dispos. ,31 1065-71,2003)，其中代謝物IH_901、Rhl和Fl顯示出各種生理活性。具體而言，IH-901因其抗糖尿病(Choi 等，J. Ginseng Res. 31 (2) =79-85,2007) 和免疫增強(qiáng)活性而眾所周知。此外，已知IH-901通過(guò)抵擋腫瘤入侵或防止染色體突變和腫瘤形成而引起抗轉(zhuǎn)移或抗癌效果(Wakabayashi等，Oncol. Res.，9 -All-T, 1998 ；Lee等， Cancer Lett.，144 39-43,1999)。已有若干研究者嘗試通過(guò)采用如化學(xué)合成、微酸性水解和堿性消化等方法生產(chǎn)純正的原皂甙元或皂甙元(Han 等，Planta Medica 44 146-9,1982 ；Chen 等，Chem. Pharm. Bull. 35 1653-5,1987 ；Elyakov Synthesis of the Ginseng Glycosides and Their Analogs,Proc. 6th Int. Ginseng Symp.，韓國(guó)首爾，74-83，1993)。然而，上述方法已知會(huì)引起各種副反應(yīng)，如差向異構(gòu)、水合和羥基化。因此，已研究了許多采用酶(Ko 等，Biosci. Biotechnol. Biochem. 64 :2739-43， 2000 ；Ko 等，Planta Med. 69 :285_6，2003)或腸道菌(Hasegawa 等，Planta Medica 63 463-40,1997 ；Bae 等，J. Microbial. Biotechnol. 13 :9_14，2003)在溫和條件下轉(zhuǎn)化人參皂甙的方法。具體而言，已開發(fā)了通過(guò)用柚皮苷酶水解二醇型人參皂甙來(lái)制備IH-901的方法，以及通過(guò)讓大鼠口服二醇型人參皂甙然后使其在結(jié)腸中消化來(lái)制備IH-901的方法。然而，發(fā)現(xiàn)上述制備方法具有某些缺陷IH-901的產(chǎn)率極低并且產(chǎn)生了各種二次代謝物，使得難以獲得高純度的 IH-901 (Karikura 等，Chem. Pharm. Bull. 38 :2859，1990)。近來(lái)，已研究了通過(guò)使各種酶與人參皂甙反應(yīng)以制備IH-901的其他方法(韓國(guó)專利申請(qǐng)公報(bào)第2003-94757號(hào)；韓國(guó)專利第418604號(hào)和第377546號(hào))，但發(fā)現(xiàn)采用這些方法生產(chǎn)的IH-901的量過(guò)低而沒有任何顯著效果。而且，上述方法涉及繁雜的步驟，不適合制備具有高含量IH-901的發(fā)酵人參濃縮物。本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的這些缺陷。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種制備發(fā)酵人參濃縮物的方法。所述方法首先涉及用溶劑對(duì)人參進(jìn)行提取從而獲得人參提取物。接下來(lái)，在能夠有效發(fā)酵所述人參提取物的條件下將果膠酶和半乳糖苷酶添加至所述人參提取物中。然后，將發(fā)酵的人參提取物濃縮以制得發(fā)酵人參濃縮物。本發(fā)明還涉及一種制備發(fā)酵人參濃縮物的方法。所述方法首先涉及將人參懸浮在第一溶劑中，從而獲得人參溶液。接下來(lái)，在能夠有效發(fā)酵所述人參溶液的條件下將果膠酶和β-半乳糖苷酶添加至所述人參溶液中。然后，用第二溶劑對(duì)發(fā)酵的所述人參溶液進(jìn)行提取，從而獲得發(fā)酵人參提取物。最后，濃縮所述發(fā)酵人參提取物，從而制得發(fā)酵人參濃縮物。本發(fā)明的另一方面涉及通過(guò)上述方法制備的發(fā)酵人參濃縮物和發(fā)酵人參粉末，以及包含所述發(fā)酵人參濃縮物和粉末的食品組合物或功能食品組合物。本發(fā)明的制備發(fā)酵人參濃縮物和發(fā)酵人參粉末的方法涉及簡(jiǎn)單的步驟并能夠生產(chǎn)具有高ΙΗ-901含量的發(fā)酵人參濃縮物或粉末。因其高ΙΗ-901含量，根據(jù)本發(fā)明的方法制備的發(fā)酵人參濃縮物或粉末可有效用于功能食品組合物中。
圖1是描述本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物的高壓液相色譜分析結(jié)果的圖。圖2是顯示服用本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物的對(duì)象的ΙΗ-901平均血漿濃度隨時(shí)間變化的圖。圖3是顯示各對(duì)象的ΙΗ-901最大血漿濃度(Cmax)的圖。圖4是顯示各對(duì)象達(dá)到ΙΗ-901最大血漿濃度的時(shí)間(Tmax)的圖。圖5是顯示各對(duì)象的血漿濃度時(shí)間曲線(AUC)下的面積的圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及制備發(fā)酵人參濃縮物的方法。本發(fā)明首先涉及用溶劑對(duì)人參進(jìn)行提取，從而獲得人參提取物。人參的實(shí)例可包括但不限于參須、白參、鮮參、干參、紅參、太極參、高麗參、中國(guó)參、日本參、亞洲參、西洋參、它們的提取物、它們的粉末以及它們的混合物。人參提取中所用的溶劑可以是任何溶劑，例如水性溶劑(如水)、有機(jī)溶劑或其混合物，只要其不影響所述方法中所用的酶的活性即可。在一些實(shí)施方式中，有機(jī)溶劑可包括但不限于乙腈、二噁烷、二甲亞砜、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇及其混合物。
在一些實(shí)施方式中，可以使用任何公知的溶劑提取方法用上述溶劑對(duì)人參進(jìn)行提取。在某些實(shí)施方式中，水和有機(jī)溶劑的適當(dāng)混合物可用于提取，其中混合物中的有機(jī)溶劑可增加人參中不溶于水的成分和/或酶促反應(yīng)所產(chǎn)生的中間體的溶解性，使得最終產(chǎn)物 (即，發(fā)酵人參濃縮物或粉末)中的IH-901含量總體增加。接下來(lái)，在能夠有效發(fā)酵所述人參提取物的條件下將果膠酶和β -半乳糖苷酶添加至所述人參提取物中。在一些實(shí)施方式中，可以在添加果膠酶和半乳糖苷酶之前用溶劑稀釋人參提取物。在一些實(shí)施方式中，將果膠酶和半乳糖苷酶一起或同時(shí)添加至人參提取物中。在另一些實(shí)施方式中，將果膠酶和半乳糖苷酶分別或在不同的時(shí)間添加至人參提取物中。在一些實(shí)施方式中，可以將果膠酶和β-半乳糖苷酶以約100 1 約1 100，約 50 1 約 1 50，約 20 1 約 1 20，約 10 1 約 1 10，約 5 1 約 1 5， 約3 1 約1 3或約2 1 約1 2的相對(duì)比例添加至人參提取物中。在另一些實(shí)施方式中，可以將果膠酶和β-半乳糖苷酶以約100 1、約50 1、約20 1、約10 1、 約 5 1、約 3 1、約 2 1、約 1 2、約 1 3、約 1 5、約 1 10、約 1 20、約 1 50 或約1 100的相對(duì)比例添加至人參提取物中。在一些實(shí)施方式中，基于人參提取物或人參的總重量，添加至人參提取物中的果膠酶和β -半乳糖苷酶的總量可以為約0. 01重量％ 約50重量％，約0. 05重量％ 約50 重量％，約0. 1重量％ 約50重量％，約0. 5重量％ 約50重量％，約1重量％ 約50重量％，約2重量％ 約50重量％，約5重量％ 約50重量％，約10重量％ 約50重量％， 約25重量％ 約50重量％，約0. 01重量％ 約0. 05重量％，約0. 01重量％ 約0. 1重量％，約0.01重量％ 約0.5重量％，約0.01重量％ 約1重量％，約0.01重量％ 約2 重量％，約0. 01重量％ 約5重量％，約0. 01重量％ 約10重量％，約0. 01重量％ 約25 重量％，約0. 05重量％ 約0. 1重量％，約0. 1重量％ 約0. 5重量％，約0. 5重量％ 約 1重量％，約1重量％ 約2重量％，約2重量％ 約5重量％，約5重量％ 約10重量％， 約10重量％ 約25重量％。在另外的實(shí)施方式中，基于人參提取物或人參的總重量，添加至人參提取物中的果膠酶和β -半乳糖苷酶的總量可以為約0. 01重量％、約0. 05重量％、 約0. 1重量％、約0. 5重量％、約1重量％、約2重量％、約5重量％、約10重量％、約25重量％或約50重量％。在一些實(shí)施方式中，將果膠酶和半乳糖苷酶添加至人參提取物中，其中反應(yīng)在下述ρΗ進(jìn)行約3 約8，約4 約8，約4. 5 約8，約5 約8，約6 約8，約3 約 4，約3 約4. 5，約3 約5，約3 約6，約4 約4. 5，約4. 5 約5或約5 約6。在另外的實(shí)施方式中，反應(yīng)在約3、約4、約4. 5、約5、約6或約8的ρΗ進(jìn)行。然而，只要果膠酶和半乳糖苷酶的活性能保持，反應(yīng)可以在任何PH進(jìn)行?？赏ㄟ^(guò)向人參提取物溶液中添加例如但不限于磷酸鹽溶液、檸檬酸溶液和檸檬酸鈉緩沖溶液來(lái)調(diào)節(jié)ρΗ。將果膠酶和β -半乳糖苷酶添加至人參提取物中的反應(yīng)溫度可以是任何溫度，只要果膠酶和半乳糖苷酶的活性能保持即可。在一些實(shí)施方式中，反應(yīng)溫度可以為約 10°C 約70°C，約30"C 約70V，約40V 約70V，約50V 約70V，約60V 約70V，約 10°C 約30°C，約10°C 約40°C，約10°C 約50°C，約10°C 約60 V，約30 V 約40 V， 約40°C 約50°C或約50°C 約60°C。在另一些實(shí)施方式中，反應(yīng)溫度可以是約10°C、約30°C、約 40°C、約 50°C、約 60°C或約 70°C。此外，反應(yīng)時(shí)間可以是任何長(zhǎng)度的時(shí)間，只要果膠酶和β -半乳糖苷酶的活性能保持即可。在一些實(shí)施方式中，反應(yīng)時(shí)間可以是約1小時(shí) 約72小時(shí)，約12小時(shí) 約72 小時(shí)，約24小時(shí) 約72小時(shí)，約48小時(shí) 約72小時(shí)，約60小時(shí) 約72小時(shí)，約1小時(shí) 約12小時(shí)，約1小時(shí) 約24小時(shí)，約1小時(shí) 約48小時(shí)，約1小時(shí) 約60小時(shí)，約12小時(shí) 約24小時(shí)，約24小時(shí) 約48小時(shí)或約48小時(shí) 約60小時(shí)。在另外的實(shí)施方式中， 反應(yīng)時(shí)間可以是約1小時(shí)、約12小時(shí)、約24小時(shí)、約48小時(shí)、約60小時(shí)或約72小時(shí)。最后，將發(fā)酵的人參提取物濃縮以制得發(fā)酵人參濃縮物。在一些實(shí)施方式中，發(fā)酵人參提取物的濃縮可涉及首先進(jìn)行發(fā)酵人參提取物的離心，然后僅對(duì)分離出的上清液進(jìn)行濃縮。在另外的實(shí)施方式中，發(fā)酵人參提取物的濃縮可涉及不進(jìn)行任何前處理步驟而對(duì)發(fā)酵人參提取物進(jìn)行濃縮。可使用常用的設(shè)備對(duì)發(fā)酵人參提取物進(jìn)行濃縮，所述設(shè)備例如但不限于真空減壓濃縮器。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法還可包括干燥所制備的發(fā)酵人參濃縮物(可能是液體形式)從而生產(chǎn)發(fā)酵人參粉末。干燥可以通過(guò)任何常規(guī)的干燥方法進(jìn)行，例如但不限于減壓干燥、熱風(fēng)干燥、噴霧干燥、流化床干燥、流化床造粒和冷凍干燥或凍干。本發(fā)明還涉及一種制備發(fā)酵人參濃縮物的方法。所述方法首先涉及將人參懸浮在第一溶劑中，從而獲得人參溶液。接下來(lái)，在能夠有效發(fā)酵所述人參溶液的條件下將果膠酶和半乳糖苷酶添加至所述人參溶液中。然后，用第二溶劑對(duì)發(fā)酵的人參溶液進(jìn)行提取， 從而獲得發(fā)酵人參提取物。在一些實(shí)施方式中，第一溶劑和第二溶劑可以是水性溶劑(例如水)、有機(jī)溶劑或其混合物。最后，將發(fā)酵人參提取物濃縮，從而制得發(fā)酵人參濃縮物。關(guān)于本方法中所用的各種條件(例如關(guān)于果膠酶和半乳糖苷酶的添加、提取和濃縮)的說(shuō)明已在上文進(jìn)行了描述，在此不必贅述。本發(fā)明的另一方面涉及通過(guò)上述方法制備的發(fā)酵人參濃縮物和發(fā)酵人參粉末。本發(fā)明的上述方法涉及在能夠有效發(fā)酵人參提取物或人參溶液的條件下將果膠酶和半乳糖苷酶直接添加至人參提取物或人參溶液中，因此是制備具有高ΙΗ-901含量的發(fā)酵人參濃縮物或粉末的簡(jiǎn)單方法。由于通過(guò)本發(fā)明的上述方法制備的發(fā)酵人參濃縮物和粉末具有高ΙΗ-901含量，因此它們可有效用作功能食品組合物。本發(fā)明的另一方面涉及包含上述發(fā)酵人參濃縮物或粉末的食品組合物，以及包含治療有效量的上述發(fā)酵人參濃縮物或粉末的功能食品組合物。本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物和粉末可包含大量ΙΗ-901，ΙΗ-901已知具有免疫增強(qiáng)、 抗糖尿病、抗癌、抗衰老和抗氧化活性。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)使用功能食品組合物的目的來(lái)適當(dāng)確定本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物或粉末的添加量。通常，基于功能食品組合物的總重量，添加至功能食品組合物中的本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物或粉末的量可以是約0. 1重量％ 約100重量％。在某些實(shí)施方式中，例如當(dāng)長(zhǎng)期服用功能食品組合物以進(jìn)行健康管理時(shí)，添加至功能食品組合物中的本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物或粉末的量可低于上述范圍。 不過(guò)，由于沒有安全問題，本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物或粉末可以非常大量地使用。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的食品組合物或功能食品組合物可通過(guò)不進(jìn)行任何前處理而添加本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物或粉末、或其混合物來(lái)制備。在另外的實(shí)施方式中，本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物或粉末可首先通過(guò)公知方法處理，然后可添加其他食品成分?？商砑又帘景l(fā)明的食品組合物或功能食品組合物中的食品成分可以根據(jù)食品組合物或功能食品組合物的類型而不同且沒有任何限制，只要當(dāng)其與本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物或粉末混合時(shí)不引起任何副作用即可。本發(fā)明的食品組合物或功能食品組合物可以是適合口服的形式，例如通過(guò)常規(guī)方法制成的軟膠囊或硬膠囊、片劑、錠劑、飛散性散劑或顆粒、乳劑、懸浮劑以及由干粉組成的茶包。在一些實(shí)施方式中，可將功能食品組合物添加至各種食品中，例如但不限于飲料、口香糖、糖果、點(diǎn)心、維生素復(fù)合物、健康功能食品等，以提供免疫增強(qiáng)、抗糖尿病、抗癌、抗氧化和/或抗衰老效果。實(shí)施例提供下述實(shí)施例以說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，但并非旨在限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1-采用果膠酶和β -半乳糖苷酶制備發(fā)酵人參濃縮物<1-1>采用參須和白參制備發(fā)酵人參濃縮物在80°C、以3小時(shí)時(shí)間間隔用水和乙醇的混合物(混合比1 1，與原料相比相當(dāng)于500%的量)提取5g參須和5g白參四次，從而獲得7g人參提取物。向人參提取物中添加IOOml水，然后添加0. 3. g果膠酶和Ig β -半乳糖苷酶，反應(yīng)混合物在50°C、ρΗ 4 5 保持48小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)物并在80°C減壓濃縮，從而獲得6. 3g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-2>采用參須和白參制備發(fā)酵人參濃縮物如上述實(shí)施例<1_1>所述制備7g人參提取物。向人參提取物中添加IOOml水，然后添加Ig β _半乳糖苷酶，反應(yīng)混合物在50°C保持24小時(shí)，然后通過(guò)將混合物在80°C保持3小時(shí)使酶失活。冷卻反應(yīng)物并用檸檬酸將pH調(diào)節(jié)至4 5。然后，向其中添加0. 3g果膠酶，并使混合物反應(yīng)24小時(shí)。隨后，過(guò)濾反應(yīng)混合物并在80°C減壓濃縮，從而獲得5. 9g 本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-3>采用參須和白參制備發(fā)酵人參濃縮物用水和乙醇的混合物(混合比1 1，與原料相比相當(dāng)于500%的量)提取5g參須和5g白參，從而獲得7g人參提取物。向人參提取物中添加IOOml水，然后添加0. 5g果膠酶和0. 7g β -半乳糖苷酶，反應(yīng)混合物在50°C、pH 4 5保持48小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)物并在80°C減壓濃縮，從而獲得6. 2g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-4>采用參須和白參制備發(fā)酵人參濃縮物用水和乙醇的混合物(混合比1 1，與原料相比相當(dāng)于500%的量)提取5g參須和5g白參，從而獲得7g人參提取物。向人參提取物中添加IOOml水，然后添加0.9g果膠酶和0. 6g β -半乳糖苷酶，反應(yīng)混合物在50°C、pH 4 5保持48小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)物并在80°C減壓濃縮，從而獲得5. 9g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-5〉采用參須和白參制備發(fā)酵人參濃縮物用水和乙醇的混合物(混合比1 1，與原料相比相當(dāng)于500%的量)提取5g參須和5g白參，從而獲得7g人參提取物。向人參提取物中添加IOOml水，然后添加1. 2g果膠酶和0. 2g β -半乳糖苷酶，反應(yīng)混合物在50°C、pH 4 5保持48小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)物并在80°C減壓濃縮，從而獲得6. 3g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-6>采用參須制備發(fā)酵人參濃縮物用IOOml水提取IOg參須，從而獲得7g人參提取物。用檸檬酸將提取物的pH調(diào)節(jié)至3 4。向人參提取物中添加0. 3g果膠酶和Ig β -半乳糖苷酶，使混合物在50°C反應(yīng)48小時(shí)。然后，以與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法過(guò)濾反應(yīng)物并進(jìn)行濃縮，從而獲得6. 5g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物(I)。作為替代，采用與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法用水和乙醇的混合物提取 IOg參須，從而獲得7. 2g人參提取物。用檸檬酸將提取物的PH調(diào)節(jié)至3 4。向人參提取物中添加0. 3g果膠酶和Ig β -半乳糖苷酶，以與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法過(guò)濾混合物并進(jìn)行濃縮，從而獲得6. 8g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物(II)。<1-7>采用參須制備發(fā)酵人參濃縮物用IOOml水提取IOg參須，從而獲得7g人參提取物。向人參提取物中添加IOOml 水，然后添加Ig β-半乳糖苷酶，反應(yīng)混合物在50°C保持24小時(shí)，然后通過(guò)將混合物在 80°C保持3小時(shí)使酶失活。冷卻反應(yīng)物并用檸檬酸將pH調(diào)節(jié)至4 5。然后，向其中添加 0. 3g果膠酶，并在50°C反應(yīng)24小時(shí)。隨后，過(guò)濾反應(yīng)物并在80°C減壓濃縮，從而獲得6. 5g 本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-8>采用白參制備發(fā)酵人參濃縮物用5L乙醇提取Ikg白參，從而獲得540g人參提取物。將7g提取物濃縮，然后懸浮在水中。向其中添加0.3g果膠酶和Ig β-半乳糖苷酶，以與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法使混合物反應(yīng)、過(guò)濾并濃縮，從而獲得5. 2g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-9>采用白參制備發(fā)酵人參濃縮物用5L乙醇提取Ikg白參，從而獲得540g人參提取物。將7g提取物濃縮，然后懸浮在水中。向其中添加0.5g果膠酶和0.5g β-半乳糖苷酶，以與上述實(shí)施例<1-1>所述相同的方法使混合物反應(yīng)、過(guò)濾并濃縮，從而獲得5. Ig本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-10>采用白參制備發(fā)酵人參濃縮物用5L乙醇提取Ikg白參，從而獲得540g人參提取物。將7g提取物濃縮，然后懸浮在水中。向其中添加1.5g果膠酶和0.2g β-半乳糖苷酶，以與上述實(shí)施例<1-1>所述相同的方法使混合物反應(yīng)、過(guò)濾并濃縮，從而獲得6. 2g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1_11>采用鮮參制備發(fā)酵人參濃縮物將6g鮮參切片并滅菌。在將參片懸浮在水中后，用檸檬酸將PH調(diào)節(jié)至3 4. 5， 并向其中添加0.3g果膠酶和Ig β-半乳糖苷酶，使混合物在50°C反應(yīng)72小時(shí)。用通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物將反應(yīng)物在80°C提取4小時(shí)， 提取四次。然后，將提取物過(guò)濾并濃縮，從而獲得3. 5g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1_12>采用鮮參制備發(fā)酵人參濃縮物將6g鮮參切片并滅菌。在將參片懸浮在水中后，向其中添加Ig β-半乳糖苷酶， 混合物在50°C反應(yīng)24小時(shí)，并在80°C保持3小時(shí)使其滅活。冷卻反應(yīng)物并用檸檬酸將pH 調(diào)節(jié)至4 5。然后，向其中添加0.3g果膠酶，并在50°C反應(yīng)24小時(shí)。隨后，過(guò)濾反應(yīng)物， 然后用通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取4小時(shí)，提取四次。然后，在80°C減壓濃縮提取物，從而獲得2. 9g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1_13>采用鮮參制備發(fā)酵人參濃縮物將6g鮮參切片并滅菌。在將參片懸浮在水中后，用檸檬酸將pH調(diào)節(jié)至3 4。然后，向其中添加0.7g果膠酶和0.6g β-半乳糖苷酶，使混合物在50°C反應(yīng)72小時(shí)。隨后，
9過(guò)濾反應(yīng)物并進(jìn)行濃縮，從而獲得2. 9g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1_14>采用鮮參制備發(fā)酵人參濃縮物將6g鮮參切片并滅菌。在將參片懸浮在水中后，向其中添加0.7g β-半乳糖苷酶，混合物在50°C反應(yīng)24小時(shí)，并在80°C保持3小時(shí)使其失活。冷卻反應(yīng)物并用檸檬酸將 pH調(diào)節(jié)至4 5。然后，向其中添加0.6g果膠酶，并在50°C反應(yīng)24小時(shí)。隨后，過(guò)濾反應(yīng)物，然后用通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取 4小時(shí)，提取四次。然后，在80°C減壓濃縮提取物，從而獲得2. 3g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1_15>采用鮮參制備發(fā)酵人參濃縮物將6g鮮參切片并滅菌。在將參片懸浮在水中后，用檸檬酸將PH調(diào)節(jié)至3 4. 5。 然后，向其中添加0. 9g果膠酶和0. 5g β -半乳糖苷酶，使混合物在50°C反應(yīng)72小時(shí)。隨后，過(guò)濾反應(yīng)物并進(jìn)行濃縮，從而獲得2. 5g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1_16>采用鮮參制備發(fā)酵人參濃縮物將6g鮮參切片并滅菌。在將參片懸浮在水中后，用檸檬酸將PH調(diào)節(jié)至3 4. 5。 然后，向其中添加2g果膠酶和0.2g β-半乳糖苷酶，使混合物在50°C反應(yīng)72小時(shí)。隨后， 過(guò)濾反應(yīng)物并進(jìn)行濃縮，從而獲得3. 3g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1_17>采用鮮參制備發(fā)酵人參濃縮物將6g鮮參切片并滅菌。在將參片懸浮在水中后，向其中添加0.5g β-半乳糖苷酶，混合物在50°C反應(yīng)24小時(shí)，并在80°C保持3小時(shí)使其失活。冷卻反應(yīng)物并用檸檬酸將 pH調(diào)節(jié)至4 5。然后，向其中添加1.5g果膠酶，并在50°C反應(yīng)24小時(shí)。隨后，過(guò)濾反應(yīng)物，然后用通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取 4小時(shí)，提取四次。然后，在80°C減壓濃縮提取物，從而獲得3. Ig本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。<1-18>采用人參粉末制備發(fā)酵人參濃縮物將7g人參粉末懸浮在水中。用檸檬酸將pH調(diào)節(jié)至3 4. 5。通過(guò)與上述實(shí)施例 <1-1>所述相同的方法使懸浮的人參粉末與0. 3g果膠酶和Ig β -半乳糖苷酶反應(yīng)并進(jìn)行提取，然后過(guò)濾并濃縮，從而獲得3. 7g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。比較例1——僅采用果膠酶制備發(fā)酵人參濃縮物將IOOml水添加至通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法制備的7g人參提取物中。然后，向提取物中添加1.3g果膠酶，隨后通過(guò)與上述實(shí)施例<1-1>所述相同的方法進(jìn)行反應(yīng)和減壓濃縮，從而獲得5. 6g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。比較例2——僅采用β -半乳糖苷酶制備發(fā)酵人參濃縮物將IOOml水添加至通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法制備的7g人參提取物中。然后，向提取物中添加1. 3g β -半乳糖苷酶，隨后通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法進(jìn)行反應(yīng)和減壓濃縮，從而獲得5. 4g本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物。實(shí)驗(yàn)例1—本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物中的IH-901含量為了分析通過(guò)上述實(shí)施例<1_1>所述的方法制備的發(fā)酵人參濃縮物中的 IH-901 (20-0-β-D-吡喃葡糖基-20 (S)-原人參二醇)的含量，取Ig所獲得的發(fā)酵人參濃縮物并用60ml水飽和丁醇提取四次。濃縮丁醇流分，從而獲得120mg濃縮物，并將濃縮物溶解在甲醇中以通過(guò)超高效液相色譜(UPLC)分析IH-901含量。UPLC分析的結(jié)果示于圖1 中。也以上述同樣方式測(cè)量上述實(shí)施例<1_1>中所制備的人參提取物中的IH-901含量。
此外，以上述同樣方式分析上述比較例1或比較例2中所述方法制備的發(fā)酵人參濃縮物中的IH-901含量。上述分析結(jié)果總結(jié)于下表1中。表 1
Im 各成分含量~ 實(shí)施例"""實(shí)施例1-1 I比較例1 ~比較例2的 1-1的人的發(fā)酵人的發(fā)酵人發(fā)酵人參 __參提取物參濃縮物參濃縮物濃縮物人參皂甙 Rbl 17.6 mg/g 1.2mg/g 6.3 mg/g3.2 mg/g ‘人參皂甙 Rb2~~ 14.6 mg/g “ 1.1 mg/g ‘ 7.1 mg/g5.7 mg/g
人參皂甙 Re— 18.9 mg/g_ 0.1 mg/g _ 9.3 mg/g6.3 mg/g “
—人參皂甙 Rd “ 7.9 mg/g .4 mg/g ~2.2 mg/g4.2 mg/g
IH-901 0 mg/g 36 mg/g 24 mg/g10 mg/g如上表1所示，本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物與人參提取物相比含有大量IH-901。而且，本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物中的IH-901含量是僅采用β _半乳糖苷酶制備的發(fā)酵人參濃縮物的3. 6倍，是僅采用果膠酶制備的發(fā)酵人參濃縮物的1. 5倍。實(shí)驗(yàn)例2-本發(fā)明的發(fā)酵人參濃縮物的ΙΗ-901的身體吸收研究用24名年齡為20歲 45歲、體重在理想體重20%內(nèi)的健康男性志愿者作為研究對(duì)象(隨機(jī)選取，2 X 2交叉設(shè)計(jì))。每個(gè)志愿者接受發(fā)酵人參提取物或人參提取物以進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)特征評(píng)價(jià)。在施用發(fā)酵人參提取物或人參提取物后的第0、0. 5、1、1. 5、2、3、4、5、6、7、8、10、12和24小時(shí)取血樣并通過(guò)LC-MS/MS進(jìn)行分析。ΙΗ-901的平均血漿濃度隨時(shí)間的變化示于圖2。測(cè)得的平均最大血漿濃度(Cmax)、達(dá)到最大血漿濃度的平均時(shí)間(Tmax)和血漿濃度時(shí)間曲線(AUC) 下的面積值示于下表2中，其中Cmax是與時(shí)間無(wú)關(guān)的各對(duì)象的最大血漿濃度平均值，Tfflax是各對(duì)象的對(duì)應(yīng)于Cmax值的時(shí)間平均值。各對(duì)象的Cmax、Tfflax和AUC值示于圖3 圖5。表 2
CmaxTmaxAUC
發(fā)酵人參濃縮物 325. 00 + 91. 97ng/ml 3. 29 小時(shí) 2083. 09 + 524. 68ng/ml
人參濃縮物13. 88 + 7. 24ng/ml12. 04 小時(shí) 134. 5 + 63. 10ng/ml如上表2所示，發(fā)酵人參提取物中的IH-901的Cmax、AUC和Tmax分別是人參提取物的約24倍高、約15倍高和約1/3. 7。因此，發(fā)現(xiàn)當(dāng)服用人參濃縮物時(shí)，各個(gè)個(gè)體對(duì)于將人參皂甙代謝為IH-901具有不同的能力，并且人體僅吸收了少量的IH-901。另外，服用人參濃縮物時(shí)，各個(gè)個(gè)體顯示出達(dá)到最大血漿濃度的平均時(shí)間不同。相反，當(dāng)服用發(fā)酵人參濃縮物時(shí)，各個(gè)個(gè)體吸收的IH-901的量和達(dá)到最大血漿水平的平均時(shí)間是恒定的。另外，當(dāng)服用發(fā)酵人參濃縮物時(shí)，人體吸收了大量的IH-901。因此，上述結(jié)果表明當(dāng)對(duì)象服用發(fā)酵人參濃縮物時(shí)，可預(yù)期獲得穩(wěn)定、恒定的效果 (個(gè)體差異很小)。實(shí)施例2——根據(jù)本發(fā)明制備發(fā)酵人參粉末<2_1>采用參須和白參制備發(fā)酵人參粉末將IOOml水添加至通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1>所述相同的方法制備的7g人參提取物。然后，向提取物中添加0.3g果膠酶和Ig β-半乳糖苷酶，隨后在50°C、pH 4 5反應(yīng) 24小時(shí)。在80°C減壓干燥反應(yīng)過(guò)的提取物，從而獲得4. 23g本發(fā)明的發(fā)酵人參粉末。<2-2>采用人參粉末制備發(fā)酵人參粉末將7g人參粉末懸浮在水中，然后將pH調(diào)節(jié)至3 4. 5。接下來(lái)，向懸浮液中添加 0. 3g果膠酶和Ig β -半乳糖苷酶，隨后在50°C反應(yīng)24小時(shí)，并用通過(guò)與上述實(shí)施例<1_1> 所述相同的方法配制的水和乙醇的混合物在80°C提取4小時(shí)，提取四次。然后減壓干燥提取物，從而獲得2. 6g本發(fā)明的發(fā)酵人參粉末。雖然出于說(shuō)明的目的詳細(xì)描述了本發(fā)明，但應(yīng)當(dāng)理解，這些細(xì)節(jié)僅為此目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員在不背離下述權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍的情況下可對(duì)本發(fā)明做出變化。
權(quán)利要求
1.一種制備發(fā)酵人參濃縮物的方法，所述方法包括用溶劑對(duì)人參進(jìn)行提取從而獲得人參提取物；在能夠有效發(fā)酵所述人參提取物的條件下將果膠酶和β“半乳糖苷酶添加至所述人參提取物中；和將發(fā)酵的所述人參提取物濃縮以制得發(fā)酵人參濃縮物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述人參是參須、白參、鮮參、干參、紅參、太極參、 高麗參、中國(guó)參、日本參、亞洲參、西洋參、它們的提取物、它們的粉末以及它們的混合物中的一種或多種。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述溶劑是水性溶劑、有機(jī)溶劑及其混合物中的一種或多種。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述半乳糖苷酶一起添加。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述半乳糖苷酶分別添加。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述半乳糖苷酶以約100 1 約1 100的相對(duì)比例添加，其中，基于所述人參提取物或人參的總量，所述果膠酶和β -半乳糖苷酶的量為約0. 01重量％ 約50重量％。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述添加步驟包括在約10°C 約70°C的溫度將所述果膠酶和所述β“半乳糖苷酶添加至所述人參提取物中。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述半乳糖苷酶添加至所述人參提取物中約1小時(shí) 約72小時(shí)的時(shí)間。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括在所述濃縮步驟后干燥所述發(fā)酵人參濃縮物以制得發(fā)酵人參粉末。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述干燥步驟通過(guò)減壓干燥、熱風(fēng)干燥、噴霧干燥、流化床干燥、流化床造粒或冷凍干燥進(jìn)行。
11.一種通過(guò)權(quán)利要求1所述的方法制備的發(fā)酵人參濃縮物。
12.一種包含權(quán)利要求11所述的發(fā)酵人參濃縮物的食品組合物。
13.一種包含治療有效量的權(quán)利要求11所述的發(fā)酵人參濃縮物的功能食品組合物。
14.一種通過(guò)權(quán)利要求9所述的方法制備的發(fā)酵人參粉末。
15.一種包含權(quán)利要求14所述的發(fā)酵人參粉末的食品組合物。
16.一種包含治療有效量的權(quán)利要求14所述的發(fā)酵人參粉末的功能食品組合物。
17.一種制備發(fā)酵人參濃縮物的方法，所述方法包括將人參懸浮在第一溶劑中，從而獲得人參溶液；在能夠有效發(fā)酵所述人參溶液的條件下將果膠酶和β“半乳糖苷酶添加至所述人參溶液中；用第二溶劑對(duì)發(fā)酵的所述人參溶液進(jìn)行提取，從而獲得發(fā)酵人參提取物；和濃縮所述發(fā)酵人參提取物，從而制得發(fā)酵人參濃縮物。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述人參是參須、白參、鮮參、干參、紅參、太極參、高麗參、中國(guó)參、日本參、亞洲參、西洋參、它們的提取物、它們的粉末以及它們的混合物中的一種或多種。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述β-半乳糖苷酶一起添加。
20.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述β-半乳糖苷酶分別添加。
21.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述β-半乳糖苷酶以約100 1 約1 100的相對(duì)比例添加，其中，基于所述人參溶液或人參的總量，所述果膠酶和β-半乳糖苷酶的量為約0.01重量％ 約50重量％。
22.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述添加步驟包括在約10°C 約70°C的溫度將所述果膠酶和所述β“半乳糖苷酶添加至所述人參溶液中。
23.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述添加步驟包括將所述果膠酶和所述β-半乳糖苷酶添加至所述人參溶液中約1小時(shí) 約72小時(shí)的時(shí)間。
24.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述第一溶劑和第二溶劑是水性溶劑、有機(jī)溶劑及其混合物中的一種或多種。
25.如權(quán)利要求17所述的方法，所述方法還包括在所述濃縮步驟后干燥所述發(fā)酵人參濃縮物以制得發(fā)酵人參粉末。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述干燥步驟通過(guò)減壓干燥、熱風(fēng)干燥、噴霧干燥、流化床干燥、流化床造粒或冷凍干燥進(jìn)行。
27.一種通過(guò)權(quán)利要求17所述的方法制備的發(fā)酵人參濃縮物。
28.一種包含權(quán)利要求27所述的發(fā)酵人參濃縮物的食品組合物。
29.一種包含治療有效量的權(quán)利要求27所述的發(fā)酵人參濃縮物的功能食品組合物。
30.一種通過(guò)權(quán)利要求25所述的方法制備的發(fā)酵人參粉末。
31.一種包含權(quán)利要求30所述的發(fā)酵人參粉末的食品組合物。
32.一種包含治療有效量的權(quán)利要求30所述的發(fā)酵人參粉末的功能食品組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備發(fā)酵人參濃縮物的方法。所述方法首先涉及用溶劑對(duì)人參進(jìn)行提取從而獲得人參提取物。接下來(lái)，在能夠有效發(fā)酵所述人參提取物的條件下將果膠酶和β-半乳糖苷酶添加至所述人參提取物中。然后將發(fā)酵的提取物濃縮以制得發(fā)酵人參濃縮物。所述方法還可以包括將所述發(fā)酵人參濃縮物干燥以獲得發(fā)酵人參粉末。
文檔編號(hào)A23L1/212GK102459623SQ200980160042
公開日2012年5月16日 申請(qǐng)日期2009年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月19日
發(fā)明者成鐘煥, 李承勸, 沈大根, 趙旻九 申請(qǐng)人:株式會(huì)社一和