專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種豬肉質(zhì)性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于動(dòng)物分子標(biāo)記制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種與豬肉質(zhì)相關(guān)基因BTG2基因的克隆，分子標(biāo)記的制備及在標(biāo)記輔助選擇上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：豬肉作為中國(guó)人民的傳統(tǒng)肉食品，與人民生活品質(zhì)的提高息息相關(guān)。長(zhǎng)期以來(lái)，豬的育種以提高生長(zhǎng)速度、減少飼料消耗、增加瘦肉率為主要目標(biāo)，并已取得顯著成績(jī)。但伴隨著生產(chǎn)水平的提高，豬肉品質(zhì)卻大幅降低了。隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們飲食觀念發(fā)生從"吃飽"到"吃好"的變化，消費(fèi)者對(duì)豬肉品質(zhì)的要求越來(lái)越高。因此，在提高豬的瘦肉率時(shí)如何兼顧肌肉品質(zhì)成為當(dāng)今豬育種工作的重點(diǎn)。20世紀(jì)80年代以來(lái)，隨著分子生物學(xué)及遺傳學(xué)的發(fā)展，豬的定向育種工作效率大為提高。目前，標(biāo)記輔助選擇(MAS)、影響豬重要數(shù)量性狀的基因組區(qū)域定位(QTL)、用基因組掃描(genomescanning)法和候選基因法(Candidategenea卯roach)研究影響豬重要經(jīng)濟(jì)性狀的主效基因(Economictraitsloci，ETLs)已經(jīng)成功地應(yīng)用到國(guó)內(nèi)外的豬育種實(shí)踐當(dāng)中。其中，通過(guò)對(duì)氟烷(Hal)基因的基因型進(jìn)行直接選擇以降低豬只的應(yīng)激敏感性、提高豬肉品質(zhì)，已經(jīng)在世界范圍內(nèi)得到了成功的應(yīng)用(彭中鎮(zhèn)等，豬數(shù)量性狀基因及其標(biāo)記研究進(jìn)展.國(guó)外畜牧科技，1999,26(1):28-32)。LeRoy等(LeRoy等，Evidenceforanewmajorgeneinfluencingmeatqualityinpigs.GenetRes，1990，55(1):33-40)在漢普夏豬及其雜種中發(fā)現(xiàn)不利等位基因RN—可使肌肉中肌糖原含量升高，終端pH值降低，造成酸肉和烹調(diào)損失，豬肉工藝學(xué)品質(zhì)下降，影響火腿的產(chǎn)量。Milan等(Milan等，AmutationinPRKAG3associatedwithexcessglycogencontentinpigskeletalmuscle.Science,2000,288(5469):1248-51)通過(guò)對(duì)候選區(qū)域進(jìn)行大規(guī)模的測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)單磷酸腺苷活化酶y3亞基基因(AMP-activatedproteinkinase(AMPK)，Y_subunit3，PRKAG3)編碼第200位氨基酸的密碼子的錯(cuò)義突變與漢普夏豬的酸肉表型直接相關(guān)，RN—豬的該位點(diǎn)均為不利的等位基因Q(即谷氨酰胺)。Cioba皿等(Cioba皿等，Evidencefornewallelesintheproteinkinaseadenosinemonophosphate-activatedgamma(3)-subimitgeneassociatedwithlowglycogencontentinpigskeletalmuscleandimprovedmeatquality.Genetics,2001，159(3):1151-62)在1800個(gè)商品豬群中對(duì)該基因進(jìn)行分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了新的等位基因與肌糖原含量相關(guān)并進(jìn)一步影響肉質(zhì)性狀。與Milan等發(fā)現(xiàn)的位點(diǎn)不同的是，這個(gè)位點(diǎn)的不同等位基因不僅僅在漢普夏豬中分離，它在典型的商品豬群中多態(tài)性也比較豐富，對(duì)育種具有更廣泛的適用價(jià)值。我們通過(guò)SAGE文庫(kù)技術(shù)發(fā)現(xiàn)，BTG2基因在中外兩豬種的骨骼肌中表達(dá)差異十分顯著。BTG2基因是抗增殖基因家族BTG/T0B家族成員之一，該家族成員蛋白質(zhì)N端110個(gè)氨基酸具有高度同源性，這個(gè)同源區(qū)包括兩個(gè)短的、高度保守的同源區(qū)A-box和B-box，A-box具有抗增殖作用，B-box具有同許多靶分子結(jié)合的功能。越來(lái)越多的研究表明，該基因家族成員抑制多種細(xì)胞的增殖并剌激它們的分化(Matsuda等，InsearchofafunctionfortheTIS21/PC3/BTG2/T0Bfamily.FEBSLett,2001，497:67-72)。其中BTG1基因更多次被報(bào)道直接剌激成肌細(xì)胞分化，BTG2基因的過(guò)表達(dá)能減小動(dòng)物身體體積(Matsuda等，Insearchofaf獄tionfortheTIS21/PC3/BTG1/T0Bfamily.FEBSLett,2001，497:67_725Buss0n等，Coactivationofnuclearrec印torsandmyogenicfactorsinducesthemajorBTG1influenceonmuscledifferentiation.Oncogene,2005，24(10):1698-710)。因此，我們推測(cè)BTG2基因有可能在肌纖維的早期發(fā)育過(guò)程中起重要作用。而肌纖維的早期發(fā)育會(huì)直接影響豬瘦肉產(chǎn)量和質(zhì)量(Nissen等，Within-littervariationinmusclefibercharacteristics,pigperformance，andmeatqualitytraits.JAnimSci，2004，82，414-21)，Rehfeld認(rèn)為肌纖維的數(shù)量和體積的遺傳變異與遺傳力很高(Rehfeld等，Myogenesisandpostnatalskeletalmusclecellgrowthasinfluencedbyselection.LivestockProductionScience,2000，66:177-188)，因而利用影響肌纖維早期發(fā)育的基因進(jìn)行育種選擇能定向改造豬的肉質(zhì)和生長(zhǎng)性狀。到目前為止，除申請(qǐng)人之外，仍沒(méi)見(jiàn)到研究豬BTG2基因功能的報(bào)道。研究突變位點(diǎn)在群體中的多態(tài)性，并進(jìn)行性狀關(guān)聯(lián)分析是研究基因功能的有力手段。所以申請(qǐng)人對(duì)這個(gè)基因進(jìn)行了多態(tài)研究和關(guān)聯(lián)分析，以期能夠發(fā)現(xiàn)它對(duì)豬肉質(zhì)性狀的影響。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克隆豬肉質(zhì)相關(guān)基因BTG2，尋找BTG2基因的突變位點(diǎn)以及作為豬肉質(zhì)基因的多態(tài)性檢測(cè)方法，為標(biāo)記輔助育種提供一種有用的分子標(biāo)記。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的—種豬肉質(zhì)性狀基因BTG2作為分子標(biāo)記的應(yīng)用，它的核苷酸序列如序列表SEQIDNO:1所述，PCR擴(kuò)增的BTG2基因的目的片段全長(zhǎng)為229bp。在序列表的第191位有1個(gè)C191-T191堿基突變(或參見(jiàn)附圖5所示的C191-T191處堿基突變，即括號(hào)內(nèi)所顯示的堿基突變)，導(dǎo)至文Mval-RFLP(RestrictionFragmentLengthPolymorphism)多態(tài)性。—種適用于豬生產(chǎn)性狀的分子標(biāo)記的制備方法，按照以下步驟制備用人BTG2基因的mRNA序列為信息探針，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank豬EST數(shù)據(jù)庫(kù)中做同源序列篩選，獲得一系列同源性為90%以上的豬ESTs(片段長(zhǎng)度大于100bp)序列，然后拼接豬EST-重疊群，獲得豬BTG2基因的eDNA序列，在內(nèi)含子兩端設(shè)計(jì)上下游引物擴(kuò)增內(nèi)含子并測(cè)序，最后獲得如序列表SEQIDN0:1所示的核苷酸序列。設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，從豬血液基因組提取DNA，PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物純化和克隆測(cè)序，應(yīng)用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序的方法檢測(cè)豬BTG2基因擴(kuò)增目的片段第191位的多態(tài)性，并進(jìn)行其基因型與豬的部分生產(chǎn)性狀之間的關(guān)聯(lián)分析。本發(fā)明為豬的分子育種提供了一個(gè)新的遺傳標(biāo)記。擴(kuò)增豬肉質(zhì)性狀基因BTG2基因的引物，它的核苷酸序列如下所示正向引物5'-GAGCCTCTCACTGATTCCC-3'反向引物5'-AGGACCCTCTTCAAGTGCT-3'依照本發(fā)明，本發(fā)明克隆與豬肉質(zhì)相關(guān)基因BTG2可以用于豬標(biāo)記輔助選擇中。本發(fā)明的效果是1、豬BTG2基因部分DNA序列的克隆PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果顯示均為特異的PCR產(chǎn)物。將PCR產(chǎn)物回收純化后克隆測(cè)序，測(cè)序結(jié)果顯示PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度為229bp，為BTG2基因DNA5'UTR到內(nèi)含子間序列(主要是第一外顯子部分，如序列表SEQIDNO:l中所示)。測(cè)序結(jié)果表明在該片段的191bp處存在C、T兩個(gè)等位基因突變(見(jiàn)附圖5)，測(cè)序峰圖見(jiàn)圖3。2、PCR-RFLP診斷方法建立用B2P0LF和B2P0LR擴(kuò)增豬基因組DNA得到229bp特異擴(kuò)增片段(詳見(jiàn)圖2)。測(cè)序的結(jié)果發(fā)現(xiàn)在該229bp片段中存在Mval限制性?xún)?nèi)切酶的酶切位點(diǎn)(5'CCIA/TGG3')，其中第192-193bp間為Mval酶的多態(tài)性切點(diǎn)，在該片段60bp處還存在一個(gè)該酶的固定切點(diǎn)。擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物經(jīng)Mval酶切產(chǎn)生三種基因型，CC基因型有60bp，132bp和37bp三條帶，雜合子CT型有60bp，169bp，132bp和37bp四條帶，TT型只有60bp和169bp兩條帶，用2.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)能明顯的判別帶型(見(jiàn)圖4)。更詳細(xì)的技術(shù)方案見(jiàn)《具體實(shí)施方式》所。序列表SEQIDNO:1是本發(fā)明克隆的豬生長(zhǎng)性狀相關(guān)基因BTG2的部分核苷酸序列。圖1:是本發(fā)明的技術(shù)流程圖。圖2:是本發(fā)明中豬BTG2基因第一外顯子和內(nèi)含子區(qū)擴(kuò)增序列的電泳圖譜，片段大小為229bp(瓊脂糖膠濃度為2.5%)。圖中M:DNA分子量標(biāo)記(DL2000ladder)。圖3:是本發(fā)明中豬BTG2基因測(cè)序發(fā)現(xiàn)的191bp處存在C、T兩個(gè)等位基因的突變。圖4:是本發(fā)明中豬BTG2基因第一外顯子和內(nèi)含子區(qū)的Mval-RFLP三種基因型電泳圖譜。圖中M:DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(DL2000ladder).圖5:是本發(fā)明所擴(kuò)增得到的豬BTG2基因第一外顯子和內(nèi)含子區(qū)序列，片段大小為229bp，圖中下劃線(xiàn)分別為正、反向引物序列。括號(hào)內(nèi)所顯示的是堿基突變。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(制備實(shí)施例)1、BTG2基因的cDNA3'UTR部分序列的克隆(1)引物設(shè)計(jì)用人BTG2基因的mRNA序列(GenBank登錄號(hào)NM_005310)為信息探針，利用NCBI中的BLAST工具在GenBank豬EST數(shù)據(jù)庫(kù)中做同源序列篩選，獲得一系列同源性為90%以上的豬ESTs(片段長(zhǎng)度大于100bp)序列，然后用DNAstar中的SeqMan程序構(gòu)建豬EST-重疊群，并獲得由重疊群拼接構(gòu)成的一致序列(consensus)，將獲得的一致序列與人的mRNA作同源性比對(duì)以確認(rèn)序列的正確性。對(duì)該序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析后，分別在第一外顯子和第二外顯子中設(shè)計(jì)上下游引物擴(kuò)增內(nèi)含子并測(cè)序，再將一致序列與內(nèi)含子序列按順序拼接得到BTG2基因的DNA序列，如序列表SEQIDN0:1所示。然后用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增BTG2基因第一外顯子到內(nèi)含子間長(zhǎng)度為229bp的片段。引物序列如下B2P0LF:5'-GAGCCTCTCACTGATTCCC—3，(正向)，B2P0LR:5，-AGGACCCTCTTCAAGTGCT-3，(反向)(2)PCR產(chǎn)物的純化、克隆和測(cè)序PCR產(chǎn)物的純化在紫外燈下從低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠上切下含目的片段的凝膠，放入l.5mLEpendorff管中，然后用PCR產(chǎn)物純化試劑盒(購(gòu)自Promega公司)純化PCR產(chǎn)物，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，具體步驟是每lOOmg的凝膠中300iiL的Sl液，于65。C溫育10min至凝膠完全融化，將S1/DNA混合物轉(zhuǎn)入回收柱，9200g離心30s，使?jié){液通過(guò)Minicolumn擠出。將下面管子中的廢液倒掉，再加入500iiL的Wl液至管中，9200g離心15s，倒掉管中的廢液。再加入500iiL的W1液，靜置lmin，9200g離心30s，取下Minicolumn裝入1.5mlEpendorff管中，加入25yL的滅菌水或者TE液，靜置lmin之后，9200g離心lmin，以洗脫DNA存于Ependorff管中。連接反應(yīng)將純化的PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體(購(gòu)自TAKARA公司)連接，連接反應(yīng)總體積是5iiL，其中包括2.5ii12Xligationbuffer，O.5iil載體，lii1純化PCR產(chǎn)物，最后加入1y1滅菌水置4t:水浴過(guò)夜。感受態(tài)細(xì)胞的制備從37t:培養(yǎng)了1620h的新鮮平板上挑取一個(gè)DH5a單菌落接種于2mlLB中，于37t:振蕩培養(yǎng)3h，轉(zhuǎn)接lml菌液于含有30mlLB的鹽水瓶中，繼續(xù)在37t:振蕩培養(yǎng)約4h，待0D600達(dá)到0.30.4時(shí)將鹽水瓶從搖床取出置冰浴冷卻1015min，然后將菌液轉(zhuǎn)入離心管中于4t:4，OOOg離心10min以收集細(xì)胞，將離心管倒置以棄凈培養(yǎng)液，用10ml冰預(yù)冷的0.lmol/L的CaC12重懸沉淀，冰浴30min，重復(fù)4°C4，OOOg離心10min—次，用4ml冰預(yù)冷的0.lmol/L的CaC12重懸沉淀，置fC保存?zhèn)溆?。轉(zhuǎn)化無(wú)菌狀態(tài)下取100120iil感受態(tài)細(xì)胞于1.5mlEpendorff管中，將5iU的連接產(chǎn)物加入混勻，在冰上放置30min后42t:熱激90s，其間不要搖動(dòng)Ependorff管，取出后冰浴34min，加入400y1無(wú)抗生素的LB液體養(yǎng)基，37。C振蕩培養(yǎng)45min。取100yl涂布于已提前4h涂布了IPTG(Isopropylthio-P-D-galactoside，異丙基硫代-P_D_半乳糖苷)和X-gal的含Amp的瓊脂平板上，37t:平放lh后倒置培養(yǎng)?？寺∽油ㄟ^(guò)PCR鑒定為陽(yáng)性的用于送上海英駿生物技術(shù)有限公司測(cè)序。將大白、杜洛克和梅山三個(gè)品種的各一個(gè)克隆子分別測(cè)序或混合測(cè)序，測(cè)序結(jié)果用SeqmanTM軟件比對(duì)尋找可能的SNP。2.標(biāo)記性狀關(guān)聯(lián)分析利用申請(qǐng)人與中國(guó)湖北省通城縣畜牧局種畜場(chǎng)合作組建的試驗(yàn)群體(含純種通城豬、長(zhǎng)白豬、大白豬、大白X長(zhǎng)白X通城、長(zhǎng)白X大白X通城)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行性狀關(guān)聯(lián)分析。所分析的性狀有部分生長(zhǎng)性狀，部分胴體性狀和部分肉質(zhì)性狀。對(duì)基因型資料用如下模型進(jìn)行性狀關(guān)聯(lián)分析<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>Yijkl表示觀測(cè)值，y表示均值，Gi表示基因型效應(yīng)，Bj表示組合效應(yīng)，Sk表示性別效應(yīng)，eijkl表示殘差，假定服從N(O，Io2)分布。標(biāo)記性狀關(guān)聯(lián)分析的結(jié)果對(duì)豬BTG2基因第一外顯子Mval-RFLP多態(tài)性位點(diǎn)與部分生產(chǎn)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，基因型檢測(cè)結(jié)果表明在通城試驗(yàn)豬群131個(gè)個(gè)體中，CC基因型有105個(gè)，CT基因型有21個(gè)，TT基因型有5個(gè)。不同基因型與性狀之間顯著差異的結(jié)果(最小二乘均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)誤分析)見(jiàn)表l，其它性狀在不同的基因型之間沒(méi)有顯著的差異。分析結(jié)果表明，該位點(diǎn)的基因型與肩部膘厚、肉色評(píng)分及肌肉剪切力存在顯著關(guān)聯(lián)，TT基因型的肩部膘厚及肌肉剪切力顯著高于CC和CT基因型，TT基因型的肉色評(píng)分顯著高于CC基因型。TT基因型是有利于提高膘厚、肌肉剪切力和肉色的選擇標(biāo)記。C等位基因是肉質(zhì)性狀的有利標(biāo)記。見(jiàn)表l所示。表1豬BTG2基因Mval-酶切基因型與幾個(gè)生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析基鵬f沐教身繊屋應(yīng)經(jīng)伊々雄詹力CC1054.347±0.0543.025±0.02941.893±0.945CT214.227±0.1223.157±0.06742.712±2.154TT54.842±0.2403.338±0.13352.078±4.235CC-CT0.3160.1340.737CC—TT0.042'0.026*0.018*CT—TT0.019*0.1810.043'*表示差異顯著(p<0.05)，**表示差異極顯著(p<0.01)。實(shí)施例2(應(yīng)用實(shí)施例1)(1)PCR-RFLP-Mval多態(tài)性在各豬品種中的分布情況在BTG2基因擴(kuò)增片段利用PCR-Mval-RFLP檢測(cè)了大白、長(zhǎng)白、杜洛克、通城、二花臉、清平和江西玉山七個(gè)豬品種。該酶切基因型在各豬品種的基因頻率分布如表2所示，發(fā)現(xiàn)各豬品種中都是C等位基因占優(yōu)勢(shì)，其中三個(gè)國(guó)外豬品種C等位基因占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。表2豬BTG2基因在七個(gè)豬品種中的基因型頻率與等位基因頻率品種動(dòng)物數(shù)量基因型等位基因頻率ccCTTTCT幾個(gè)品種間基因型頻率的卡方檢驗(yàn)結(jié)果如表3。xs檢驗(yàn)表明，大白和杜洛克與四個(gè)國(guó)內(nèi)品種豬之間存在顯著或極顯著差異，清平豬長(zhǎng)白之間差異不顯著，與其它豬品種之間差異顯著或及顯著。表3豬BTG2基因PCR-RFLP-Mval基因型分布x2檢驗(yàn)結(jié)果26260251863431328125191043322103414801010.840.1600.9558820.044118110.5178570.48214350.6315790.36842110.8181820.181818120.5294120.470588大白豬玉山豬豬克豬臉p白洛城花平長(zhǎng)杜通清<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>肩注氺表示P<0.05;肩注材表示P<0.01;df=2，x2。。5(2)=5.99，x2。01(2)=9.21實(shí)施例3(應(yīng)用實(shí)施例2)豬標(biāo)記-性狀關(guān)聯(lián)分析用BTG2基因檢測(cè)了通城試驗(yàn)豬群131頭豬，對(duì)BTG2基因的該位點(diǎn)Mval-RFLP多態(tài)檢測(cè)的三種基因型與通城試驗(yàn)豬群部分生產(chǎn)性能進(jìn)行了初步相關(guān)分析?；蛐蜋z測(cè)結(jié)果表明在131個(gè)個(gè)體中CC基因型有105個(gè)，CT基因型有21個(gè)，TT基因型有5個(gè)。分析結(jié)果表明，該位點(diǎn)的基因型與肩部膘厚、肉色評(píng)分及肌肉剪切力存在顯著關(guān)聯(lián)，TT基因型的肩部膘厚及肌肉剪切力顯著高于CC和CT基因型，TT基因型的肉色評(píng)分顯著高于CC基因型。檢測(cè)效果見(jiàn)表4所示。表4豬BTG2基因Mval-酶切基因型與幾個(gè)生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析基因型個(gè)體數(shù)肩部膘厚(厘米)肉色評(píng)分肌肉剪切力CC1054.347±0.0543.025±0.02941.893±0.945CT214.227±0.1223.157±0.06742.712±2.154TT54.842±0.2403.338±0.13352.078±4.235CC—CT0.3160.1340.737CC—TT0.042*0.026*0.018*CT—TT0.019*0.1810.043**表示差異顯著(p<0.05)，**表示差異極顯著(p<0.01)。序列表〈110〉華中農(nóng)業(yè)大學(xué)〈120〉一種豬肉質(zhì)性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及應(yīng)用〈130〉〈141>2009-11-17〈160>1〈170>PatentInversion3.1〈210>1〈211>229〈212>DNA〈213〉豬(Susscrofa)〈220〉〈221>gene〈222〉(1).(229)豬豬克豬臉F白白洛城花^大長(zhǎng)杜通二清8〈223〉〈220〉〈221〉mutation〈222>(191)..(191)<223>〈400>1gagcctctcactgattccccaggcccgctgg3CCggg朋gtcctctccagcctcctcagggcggggctctccaggaggcagccgccaccaccgttccctgagccgcga肌gacatgagcc60agaacagatatgctcccggagatcgctgccgctgtaggtt120acccggggctgcgtgagcgagcagcgactcaaggttttca180ctgacaggtgagcacttgfiagagggtcct229權(quán)利要求一種作為豬標(biāo)記輔助選擇應(yīng)用的與豬肉質(zhì)性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，它的核苷酸序列如序列表SEQIDNO1所述，在序列表的第191位有1個(gè)C191-T191堿基突變，導(dǎo)致Mva1-RFLP多態(tài)性。2.—種豬肉質(zhì)性狀基因BTG2作為分子標(biāo)記的制備方法，按照以下步驟用人BTG2基因的mRNA序列為信息探針，做同源序列篩選，獲得同源性為90%以上的豬ESTs序列，該序列長(zhǎng)度大于lOObp，構(gòu)建豬EST-重疊群，獲得由重疊群拼接構(gòu)成的一致序列，將獲得的一致序列與人的mRNA比對(duì)同源性以確證序列的正確性；根據(jù)EST-重疊群設(shè)計(jì)引物用于PCR擴(kuò)增，對(duì)獲得的PCR產(chǎn)物純化、克隆和測(cè)序，進(jìn)行序列分析，獲得如序列表SEQIDNO:l所述的核苷酸序列。3.擴(kuò)增豬肉質(zhì)性狀BTG2基因片段的引物對(duì)，它的核苷酸序列如下所示正向引物5'-GAGCCTCTCACTGATTCCC-3',反向引物5'-AGGACCCTCTTCAAGTGCT-3'。4.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記在豬標(biāo)記輔助選擇中的應(yīng)用。5.權(quán)利要求3所述的引物對(duì)在豬標(biāo)記輔助選擇中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明屬于動(dòng)物分子標(biāo)記制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及豬BTG2基因片段的克隆及作為分子標(biāo)記的應(yīng)用。所述的分子標(biāo)記的核苷酸序列如序列表SEQIDNO1所述，在序列表的第191位有1個(gè)C191-T191堿基突變，導(dǎo)致Mval-RFLP多態(tài)性。本發(fā)明還公開(kāi)了制備該分子標(biāo)記的方法。文檔編號(hào)C12P19/34GK101701262SQ20091027276公開(kāi)日2010年5月5日申請(qǐng)日期2009年11月17日優(yōu)先權(quán)日2009年11月17日發(fā)明者馮政,劉貴生,梅書(shū)棋,武華玉,趙書(shū)紅,黃京書(shū)申請(qǐng)人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)