專利名稱：與棉花纖維強度主效基因連鎖的ssr標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到來自優(yōu)異纖維品質(zhì)種質(zhì)材料0-153與棉花高強纖維主效基因連鎖的SSR (Simple Sequence Repeats,簡單序列重復(fù))分子標(biāo)記，這些標(biāo)記是通過多環(huán)境下的纖維 品質(zhì)表現(xiàn)與群體分子標(biāo)記遺傳圖譜結(jié)合分析得到的，利用這些與纖維強度緊密連鎖的分 子標(biāo)記進行輔助選擇可以提高棉花纖維品質(zhì)育種效率，屬于生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
棉纖維是棉花最為重要的經(jīng)濟性狀，也是重要的紡織工業(yè)原料。隨著紡織工業(yè)的快速 發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，對棉花纖維品質(zhì)的要求也越來越高。我國棉花育種工 作者在上世紀(jì)80年代前主要集中在產(chǎn)量的提高上，纖維品質(zhì)的提高沒有得到足夠的重 視，使得我國的棉花品種大多表現(xiàn)為產(chǎn)量高，品質(zhì)差。楊偉華等對近20年來我國自育棉 花品種的纖維品質(zhì)的分析得出，我國自育陸地棉品種的纖維主體長度或2. 5%跨距長度 主要集中在27 30mm,斷裂比強度集中在17 23cN/tex，馬克隆值集中在3. 7 4.9。 與美國相比，纖維長度上有優(yōu)勢，但纖維比強度略遜于美國(楊偉華，項時康，唐淑榮 等.2001， 20年來我國自育棉花品種纖維品質(zhì)分析.棉花學(xué)報.13(6):377-384) 。 2001-2005 年農(nóng)業(yè)部對我國主產(chǎn)棉省主栽棉花品種纖維的抽査結(jié)果表明纖維長度主要分布在 28-29mm，比強度處于中等偏上水平，主要分布在27-29 cN/tex，目前我國棉花纖維質(zhì)量 可以滿足紡織工業(yè)中、低檔棉紗的要求(唐淑榮，孟俊婷，褚平等，2007,我國棉花纖 維品質(zhì)現(xiàn)狀分析，江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，19(7):8-10)。雖然纖維長度及比強度等纖維品質(zhì)性狀 有所提高，但可紡高支紗的品種依然缺乏。近兩年來，審定了一些長度在31mm以上， 比強度在30cN/tex以上的陸地棉品種，但品質(zhì)單一，棉纖維品質(zhì)指標(biāo)間的匹配還不理想， 大部分陸地棉栽培品種的纖維比強度仍偏低。因此，需要加速提高我國棉花品種的纖維 品質(zhì)，尤其是纖維比強度。
采用傳統(tǒng)的育種方法提高陸地棉的纖維比強度，首先要通過陸地棉和海島棉或亞洲棉 等雜交，通過多代的回交，獲得具有高強纖維基因漸滲的種質(zhì)材料，與現(xiàn)有的陸地棉栽 培品種雜交，通過多代的回交及自交選擇，以打破纖維品質(zhì)性狀與產(chǎn)量性狀間的負(fù)相關(guān)。 傳統(tǒng)的育種方法主要是根據(jù)表型選擇，需要足夠大的選擇群體，每個選擇世代都要對纖 維品質(zhì)進行測定，成本較高且工作量大，而且纖維品質(zhì)性狀受環(huán)境影響較大，使得纖維品質(zhì)育種進展緩慢。
分子標(biāo)記技術(shù)可以在較短的時間內(nèi)進行大量的個體或家系檢測，由于分子標(biāo)記的基因 型是可以識別的，如果目標(biāo)性狀與某個分子標(biāo)記緊密連鎖，就可以利用分子標(biāo)記對目標(biāo) 性狀進行選擇，可以大大提高檢測及選擇的效率。目前國內(nèi)外對分子標(biāo)記篩選做了大量 的工作，利用不同的群體進行連鎖圖譜的構(gòu)建和重要纖維品質(zhì)性狀的QTL篩選，得到了 大量的與纖維品質(zhì)相關(guān)的QTL。在利用F2及Bd等分離群體上，Shappley等(1998) 、 Jiang 等(1998) 、 Ulloa等(2000)利用RFLP標(biāo)記共檢測到了40多個與纖維品質(zhì)有關(guān)的顯著性 QTL;袁有祿等(2000， 2001)及Zhang等(2003)利用一個異常棉高強纖維漸滲系7235 和陸地棉遺傳標(biāo)準(zhǔn)系TM-1為親本構(gòu)建了F2、F2,3分離群體，鑒定了 一個纖維強度主效QTL， 可解釋30%以上的表型變異；Kohel等(2001)利用海陸種間F2群體鑒定了 13個與纖維品 質(zhì)性狀有關(guān)的QTLs，由這些QTLs解釋單個性狀的表型變異在30-60y。之間，其中有4個纖 維強度性狀的QTLs; Paterson等(2003)利用一個種間F2:3群體獲得了68個與纖維品質(zhì)性 狀有關(guān)的QTLs，其中纖維強度性狀21個；Wu等(2003)利用陸海雜種F2群體檢測到2 個強度QTLs ，解釋表型變異的13.86%和34.15%; Mei (2004)利用海陸種間F2群體及RFLP 、 AFLP和SSR三種標(biāo)記，定位了5個纖維品質(zhì)的QTLs，均解釋較大的表型變異。沈新蓮等 (2004)利用復(fù)合區(qū)間作圖法共篩選到38個與纖維品質(zhì)有關(guān)的QTLs，其中10個為纖維強 度性狀QTLs; Lacape等(2005)利用回交群體篩選到了 11個纖維品質(zhì)性狀的80個QTLs， 其中纖維強度12個QTLs，在一個或多個世代中都能檢測到。Lin等(2005)利用陸海F2群體 采用SRAP、 SSR、 RAPD三種標(biāo)記檢測到13個與纖維品質(zhì)相關(guān)的QTLs，其中纖維強度2 個，能解釋21.18%~21.66%的表型變異；Zhang等(2005)利用陸地棉種內(nèi)F2和F2:3群體鑒 定了12個纖維品質(zhì)性狀相關(guān)的QTLs，其中纖維強度3個；He等(2007)采用SSR、 SRAP、 RAPD、 REMAP四種不同標(biāo)記在陸海F2:3群體中發(fā)現(xiàn)了 16個纖維品質(zhì)性狀的QTLs，其中 纖維強度的3個，能解釋15.26-37.12%的表型變異；Qin等(2008)利用四個陸地棉親本構(gòu) 建的F2群體定位了20個纖維品質(zhì)性狀的QTL，其中9個為顯著性QTL， ll個為可能存在的 QTL，共解釋表型變異的5.1%-25.8%，有5個為纖維強度性狀的QTLs。
利用RIL群體中，James等(2006)檢測到了25個與棉花纖維品質(zhì)相關(guān)的QTL，其中控 制纖維強度的6個，可解釋5.4-6.5%的表型變異；Wang等(2006)利用SSR標(biāo)記檢測到了 48個QTLs，其中4個纖維強度性狀的QTLs; Shen等(2007)利用陸地棉種內(nèi)RIL群體篩 選到27個纖維品質(zhì)相關(guān)的QTLs，其中纖維強度性狀5個，l個能在不冋的環(huán)境下表達(dá)，能 解釋表型變異的10.52%; Wu等(2009)利用陸地棉種內(nèi)RIL群體，共定位34個纖維品質(zhì) 性狀的QTL，其中6個纖維強度QTLs; Zhang等(2009)利用陸地棉種內(nèi)的RIL群體檢測到 13個纖維品質(zhì)性狀的QTL,其中2個纖維強度QTLs能在兩個環(huán)境下檢測到，解釋表型變
4異的10.2%~31.8%。
這些研究結(jié)果為纖維品質(zhì)性狀的分子標(biāo)記輔助選擇打下了良好的基礎(chǔ)。但是，前人 的研究中較多的是利用分離群體，或只在單個環(huán)境下檢測得到的結(jié)果，因此缺乏可靠性 和穩(wěn)定性，且有些研究最初的目的只是為了進行目標(biāo)基因的定位，在實驗材料的選擇上 沒有考慮和育種材料相結(jié)合，還很難應(yīng)用到育種中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過篩選來自優(yōu)異纖維品質(zhì)材料中與棉花高強纖維主效基因連鎖的SSR (Simple Sequence Repeats,簡單序列重復(fù))分子標(biāo)記，利用這些與纖維強度緊密連鎖的 分子標(biāo)記進行DNA水平上的早期輔助選擇可以提高棉花纖維強度的選擇效率。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是來自優(yōu)質(zhì)纖維品質(zhì)材料0-153的棉花纖維強度主效基因 位點FS1、 FS2、 FS4、 FS5相關(guān)的分子標(biāo)記，其中，F(xiàn)S1、 FS2位于染色體c25上，F(xiàn)S3、 FS4位于染色體c7上，F(xiàn)S5位于染色體c13上，與FS1連鎖的標(biāo)記為NAU211933o;與 FS2連鎖的標(biāo)記為BNL2572125 、 BNL106411Q、 DPL087421G;與FS4連鎖的標(biāo)記為 NAU104 825Q、 NAU26 2 7350;與FS5連鎖的標(biāo)記為BNL1421細(xì)、NAU27 3 0450。
一種與棉花纖維強度主效基因位點連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于是通過以下方法獲 得的
1)利用大田推廣的陸地棉栽培品種中棉所41選系sGK9708和具有亞洲棉高強纖維 基因漸滲的陸地棉優(yōu)質(zhì)品系0-153為親本構(gòu)建F2、 F2, 3群體；
2) F2: 3群體家系內(nèi)每世代自交，直至F2,6代，在F2"代進行一次家系內(nèi)單株選擇， 用以家系提純，再種植兩代至Fsj;
3) 選用已公布的5742對SSR引物進行親本間多態(tài)性篩選，分子標(biāo)記初步篩選結(jié)果 表明有191對SSR引物在親本間有差異，用多態(tài)性引物對196個F。8家系群體進行擴增， 獲得了 217個多態(tài)性位點，構(gòu)建RIL群體連鎖圖譜；
4) 進行多環(huán)境下的纖維強度主效QTL篩選，共篩選出6個來自0-153的棉花纖維 強度性狀的QTLs，其中5個為多環(huán)境穩(wěn)定的QTLs，即FS1、 FS2位于染色體c25上， FS3、 FS4位于染色體c7上，F(xiàn)S5位于染色體c13上，與FS1連鎖的標(biāo)記為NAU21 19330; 與FS2連鎖的標(biāo)記為BNL2572125、 BNL1064Uo、 DPL087421o;與FS4連鎖的標(biāo)記為 NAU104 8250、 NAU2627350;與FS5連鎖的標(biāo)記為BNL1421扁、NAU27 3 0450。
上述第3)步選用已公布的5742對SSR引物進行親本間多態(tài)性篩選，PCR反應(yīng)體系 為lO(xl，其中超純水6.40^1， lOxBuffer l.Opl， 10mM dNTPs 0.50(^1， 10pM正向引物0.50|il， lO(xM反向引物0.50|il， 30ng/pl模板DNA1.0|al ， 5U/|alTaq DNA聚合酶0.10^1， PCR反應(yīng)程序為94。C預(yù)變性45s; 94。C變性30s， 57。C退火45s， 72。C延伸lmin, 29個 循環(huán)；94。C變性60s, 57。C退火45s， 72。C延伸2min， PCR反應(yīng)在TGRADIENT及PTC-200
上進行，擴增產(chǎn)物在8%的聚丙烯凝膠中進行電泳，記錄結(jié)果。
本發(fā)明的具有如下有益效果
本發(fā)明所涉及的與棉花纖維強度主效基因有關(guān)的4個位點(FS1、 FS2、 FS4、 FS5)， 增效基因均來自優(yōu)異纖維親本材料0-153，而且在所檢測的多個環(huán)境中效應(yīng)穩(wěn)定，可以用 于棉花纖維強度的分子標(biāo)記輔助選擇。FS1在四個環(huán)境下解釋表型變異均較大，分別為 19.12%、 14.25%、 15.38°/。、 18.43%，加性效應(yīng)也較大，分別為1.0510、 0.8067、 0.9823、 1.1026 cN/tex; FS2在四環(huán)境下解釋表型變異也較大，分別為21.36%、 18.05%、 14.69%、 17.47%,加性效應(yīng)也較大，分別為1.1216、 0，3、 0.9646、 1.0785 cN/tex; FS4在四個 環(huán)境下分別解釋表型變異的2.79%、4.87%、6.54%、5.66%，加性效應(yīng)分別為0.4037、0.4737、 0.6341、 0.5982 cN/tex; FS5在兩個環(huán)境下檢測到，分別解釋表型變異的6.87%、 3.80%， 加性效應(yīng)分別為0.5338、 0.4741 cN/tex。


圖1為本發(fā)明RIL群體部分分子標(biāo)記連鎖圖譜。
其中，F(xiàn)S1位于染色體c25的標(biāo)記區(qū)間BNL380619()-CM067145內(nèi)，與之相連鎖的標(biāo)記 為BNL3806190、 TMK19180、 BNL3 8 0 6230、 NAU105 4220、 N AU21 19330、 NAU1054320、 CM067145; FS2位于染色體c25的標(biāo)記區(qū)間BNL2572125-BNL144024o內(nèi)，與之想連鎖的標(biāo) 記為BNL2572125、 JESPR215140、 BNL1064110、 DPL0874210、 BNL1440240; FS3位于染 色體c7的標(biāo)記區(qū)間NAU10 8 5 26(rTMB161818()內(nèi)，與之相連鎖的標(biāo)記為NAU108 5260、 TMB161818o; FS4位于標(biāo)記區(qū)間NAU104823o-NAU26 2 735q內(nèi)，與之相連鎖的標(biāo)記為 NAU104 825o、 NAU262735o; FS5位于標(biāo)記區(qū)間BNL14212oo-NAU2 7 3 045o，與之連鎖的標(biāo) 記為BNL1421扁、NAU27 3 0450。
具體實施例方式
下面通過具體實施方式
的詳細(xì)描述來進一步闡明本發(fā)明，與棉花高強纖維主效基因 連鎖的分子標(biāo)記是通過以下方法得出的
(1)以中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所培育的陸地棉品種中棉所41選系sGK9708為母 本，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)選育的具有亞洲棉漸滲的高強纖維種質(zhì)系0-153為父本，2001年于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所試驗地配置雜交組合，2002年種植Fp自交產(chǎn)生F2。 2003年 在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所試驗地種植F2，同時種植親本及F,各兩行，收獲250個單 株，將所有的單株自交，獲得F2.3種子。分單株收花，并稱取12-15g纖維樣品進行纖維 品質(zhì)測定。2004年選取196個單株種成F2:3株行，每家系自交獲得F^ 4種子，按家系收 花，并選取12-15g纖維樣品進行纖維品質(zhì)測定。2004年冬，于海南加代繁殖，種植Fi
4種子，家系內(nèi)自交獲得F2: 5種子。2005年于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所種植F2: 5種子，
每家系自交獲得F^ 6種子。2005年冬于海南種植F2, 6家系，進行一次單株選擇，進行家 系內(nèi)提純。2006年于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所種植F6: 7種子，收獲F^代種子。2007 年于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所種植F6:8種子，并采用不完全隨機區(qū)組設(shè)計，設(shè)置兩重復(fù)， 收獲F6,9種子，后期按家系收花，取12-15g纖維樣品用于纖維品質(zhì)的測定。2008年于 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所、山東棉花研究中心臨清試驗站、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)河北曲周實 驗站種植F&9種子，采用不完全隨機區(qū)組設(shè)計，種植兩重復(fù)，按家系收花，取12-15g纖 維樣品進行纖維品質(zhì)的測定。
(2) 取F^ 8代RIL群體的葉片，采用CTAB法提取196個家系和兩親本的DNA。
(3) 采用SSR標(biāo)記進行高強纖維標(biāo)記的篩選，首先選用5742對SSR引物對兩親本 間的多態(tài)性進行篩選，這些SSR引物中，其中以BNL編號的引物為布魯克海文國家實驗 室(美國)開發(fā)，以NAU編號的為南京農(nóng)業(yè)大學(xué)(中國)開發(fā)，CIR編號的為國際農(nóng)業(yè) 研究發(fā)展中心(法國)開發(fā)，以CM和JESPR編號的為德州農(nóng)工大學(xué)(美國)開發(fā)，以 TMB和MGHES編號的為美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究服務(wù)署開發(fā)，MUCS和MUSS編號的為加 州大學(xué)戴維斯分校(美國)開發(fā)等，DPL編號的為Delta and Pine Land公司(美國)開 發(fā)。引物由上海生工和Bioasia公司合成。SSR擴增反應(yīng)體系為10|il，其中超純水6.40^1， 10xBuffer 1.0|al， 10mM dNTPs 0.50^1,正向引物(10pM) 0.50(il，反向引物(10pM) 0.50jnl， 模板DNA (30ng4il) 1.0^1 ， Taq DNA聚合酶(5U/nl) O.lOpl 。 SSR擴增反應(yīng)程序94°C 預(yù)變性45s; 94'C變性30s， 57'C退火45s， 72'C延伸lmin， 29個循環(huán)。94。C變性60s, 57。C退火45s， 72。C延伸2min。擴增反應(yīng)在BIOMETRA公司TGRADIENT及BIO-RAD 公司PTC-200上進行，擴增產(chǎn)物在8%的聚丙烯凝膠中進行電泳，按照張軍(2000)的方 法進行凝膠銀染，記錄結(jié)果。分子標(biāo)記篩選結(jié)果表明，有191對SSR引物在親本間表現(xiàn) 多態(tài)性。
(4) 選用191對在親本間有多態(tài)性的引物，對196個RIL家系群體進行擴增分析， SSR反應(yīng)體系及SSR擴增反應(yīng)程序以及擴增反應(yīng)，凝膠電泳均參照(3)完成，共獲得 了 217個多態(tài)性位點。(5)利用Joinmap3.0軟件構(gòu)建遺傳連鎖圖譜，作圖采用Kosambi函數(shù)，設(shè)定LOD 值7.0，構(gòu)建了含有190個位點，34個連鎖群，覆蓋基因組700.9cM，約占基因組15.75% 的RIL群體分子連鎖圖譜，25個連鎖群定位到了染色體上。
(6)結(jié)合RIL群體纖維品質(zhì)的測定結(jié)果，利用Windows QTL Cartographer2.5進行 QTLs作圖，設(shè)定LOD值為2.5,進行1000次排序測驗，篩選與多環(huán)境下穩(wěn)定表達(dá)的纖 維強度主效QTL，篩選到6個纖維強度性狀的QTLs，其中5個為多環(huán)境穩(wěn)定的主效QTLs， 分別位于染色體c25 (2個)、c7 (2個)及cl3上。FS1、 FS2位于染色體c25上，F(xiàn)S3、 FS4位于染色體c7上，F(xiàn)S5位于染色體c13上。與FS1連鎖的標(biāo)記為NAU21 1933Q，附近 的其它標(biāo)記BNL3806!卯、TMK19180、 BNL3 8 06230、 NAU105 4220、 NAU105 432o CM67145 在Shen (2005) 、 Lacape (2005) 、 Shen (2007)及本實驗室張建宏(2007)的研究中 已報道；與FS2連鎖的標(biāo)記為BNL2572125、 BNL1064 0、 DPL08 742H)，附近的其它標(biāo)記 JESPR215140、 BNL144 0240在張建宏(2007)的研究中已報道；與FS4連鎖的標(biāo)記為 NAU104 825o、 NAU26 2 735o;與FS5連鎖的標(biāo)記為BNL14212q。、 NAU27 3 045q。在具有亞 洲棉漸滲的高強纖維種質(zhì)0-153及中棉所41選系sGK9708雜交構(gòu)建的RIL群體中，F(xiàn)S1 在四個環(huán)境下分別解釋表型變異的19.12%、 14.25%、 15.38%、 18.43%，加性效應(yīng)分別為 1.0510、 0.8067、 0.9823、 1.1026 cN/tex; FS2在四環(huán)境下分別解釋表型變異的21.36%、 18.05%、 14.69%、 17.47%，加性效應(yīng)分別為1.1216、 0.9083、 0.9646、 1.0785 cN/tex; FS4 在四個環(huán)境下分別解釋表型變異的2.79%、4.87%、6.54%、5.66%，加性效應(yīng)分別為0.4037、 0.4737、 0.6341、 0.5982 cN/tex; FS5在兩個環(huán)境下檢測到，分別解釋表型變異的6.87%、 3.80%，加性效應(yīng)分別為0.5338、 0.4741 cN/tex。
另外，我們構(gòu)建了 一套陸地棉雙交F2群體，利用與FS1相連鎖的標(biāo)記TMK19和CM067 對纖維強度性狀進行輔助聚合育種研究(董章輝，2008)，發(fā)現(xiàn)聚合有該QTL的材料纖 維強度的差異達(dá)到了顯著或極顯著差異，說明利用與這些QTL相連鎖的標(biāo)記進行纖維品 質(zhì)性狀的標(biāo)記輔助選擇，可以大大提高陸地棉的纖維品質(zhì)。
權(quán)利要求
1、與棉花纖維強度主效基因位點FS1、FS2、FS4、FS5相關(guān)的分子標(biāo)記，其特征在于FS1、FS2位于染色體c25上，F(xiàn)S3、FS4位于染色體c7上，F(xiàn)S5位于染色體c13上，與FS1連鎖的標(biāo)記為NAU2119330；與FS2連鎖的標(biāo)記為BNL2572125、BNL1064110、DPL0874210；與FS4連鎖的標(biāo)記為NAU1048250、NAU2627350；與FS5連鎖的標(biāo)記為BNL1421200、NAU2730450。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的與棉花纖維強度主效基因位點FS1、 FS2、 FS4、 FS5相關(guān) 的分子標(biāo)記，其特征在于是通過以下方法獲得的1)利用大田推廣的陸地棉栽培品種中棉所41選系sGK9708和具有亞洲棉高強纖維基 因漸滲的陸地棉優(yōu)質(zhì)品系0-153為親本構(gòu)建F2、 F2: 3群體；2) F2: 3群體家系內(nèi)每世代自交，直至F2:6代，在F2: 6代進行一次家系內(nèi)單株選擇， 用以家系提純，再種植兩代至^8;3) 選用己公布的5742對SSR引物進行親本間多態(tài)性篩選，分子標(biāo)記初步篩選結(jié)果 表明有191對SSR引物在親本間有差異，用多態(tài)性引物對196個Fe: 8家系群體進行擴增， 獲得了 217個多態(tài)性位點，構(gòu)建RIL群體連鎖圖譜；4) 進行多環(huán)境下的纖維強度主效QTL篩選，共篩選出6個來自0-153的棉花纖維強 度性狀的QTLs，其中5個為多環(huán)境穩(wěn)定的QTLs,即FS1、 FS2位于染色體c25上，F(xiàn)S3、 FS4位于染色體c7上，F(xiàn)S5位于染色體cl3上，與FS1連鎖的標(biāo)記為NAU21 1933。；與FS2 連鎖的標(biāo)記為BNL2572125、 BNL1064 。、 DPL087421。；與FS4連鎖的標(biāo)記為NAU1048250、 NAU262735。；與FS5連鎖的標(biāo)記為BNL14212。。、 NAU2730柳。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的與棉花纖維強度主效基因位點FS1、 FS2、 FS4、 FS5相關(guān) 的分子標(biāo)記，其特征在于第3)步選用已公布的5742對SSR引物進行親本間多態(tài)性篩 選，PCR反應(yīng)體系為10 u 1，其中超純水6. 40 u 1， 10xBuffer 1. Op 1， lOmM dNTPs 0. 50y 1， 10uM正向引物0. 50u 1，10uM反向引物0. 50u l，30ng/u 1模板DNA1.0n 1 ， 5U/u lTaq DNA聚合酶0. 10ii 1， PCR反應(yīng)程序為94。C預(yù)變性45s; 94'C變性30s， 57'C退火45s， 72。C延伸lmin， 29個循環(huán)；94。C變性60s， 57'C退火45s， 72'C延伸2min, PCR反應(yīng)在 TGRADIENT及PTC-200上進行，擴增產(chǎn)物在8%的聚丙烯凝膠中進行電泳，記錄結(jié)果。
全文摘要
與棉花纖維強度主效基因位點相關(guān)的分子標(biāo)記，用以下方法獲得的利用陸地棉栽培品種中棉所41選系sGK9708和陸地棉優(yōu)質(zhì)品系0-153為親本構(gòu)建F₂、F_2:3群體；F_2:3群體家系內(nèi)每世代自交，直至F_2:6代，在F_2:6代進行一次家系內(nèi)單株選擇，再種植兩代至F_6:8；用SSR引物進行親本間多態(tài)性篩選，構(gòu)建RIL群體連鎖圖譜；進行多環(huán)境下的纖維強度主效QTL篩選，篩選出6個來自0-153的棉花纖維強度性狀的QTLs，5個為多環(huán)境穩(wěn)定的QTLs，F(xiàn)S1連鎖標(biāo)記NAU2119₃₃₀；FS2連鎖標(biāo)記BNL2572₁₂₅、BNL1064₁₁₀、DPL0874₂₁₀；FS4連鎖標(biāo)記NAU1048₂₅₀、NAU2627₃₅₀；FS5連鎖標(biāo)記BNL1421₂₀₀、NAU2730₄₅₀。本發(fā)明通過篩選來自優(yōu)異纖維品質(zhì)材料中與棉花高強纖維主效基因連鎖的SSR分子標(biāo)記，利用這些分子標(biāo)記進行DNA水平上的早期輔助選擇可以提高棉花纖維強度的選擇效率。
文檔編號C12Q1/68GK101613761SQ20091016273
公開日2009年12月30日 申請日期2009年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月12日
發(fā)明者劉愛英, 商海紅, 孫福鼎, 鞏萬奎, 張建宏, 李俊文, 濤 王, 王淑芳, 石玉真, 袁有祿, 龔舉武 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所