專(zhuān)利名稱：一種富銅酵母的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于動(dòng)物飼料的富銅 酵母的制備方法。
背景技術(shù)：
銅是人類(lèi)和動(dòng)物必需的微量元素之一，銅是銅藍(lán)蛋白的重要組分，參 與機(jī)體的造血機(jī)能；銅也是銅酶賴氨酰氧化酶的重要組分，參與血管組織 和骨骼的形成，維持血管的正常彈性和骨骼強(qiáng)度；同時(shí)，銅對(duì)于維持動(dòng)物 正常的妊娠過(guò)程、繁殖率和雞蛋的孵化率有重要影響；此外，銅對(duì)于調(diào)節(jié) 機(jī)體的免疫力方面起著重要作用，它對(duì)細(xì)胞免疫、體液免疫及抗感染都有 不同程度的作用。
目前，國(guó)內(nèi)大多采用高劑量硫酸銅等無(wú)機(jī)銅鹽作為銅營(yíng)養(yǎng)添加劑，但 無(wú)機(jī)銅鹽生物效價(jià)低、添加量大、易造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染；而穩(wěn)定性 好、生物學(xué)效價(jià)較高的氨基酸絡(luò)合銅鹽(蛋氨酸銅、賴氨酸銅等)由于其 生產(chǎn)工藝復(fù)雜、價(jià)格較高限制其應(yīng)用。富銅酵母不僅可以滿足動(dòng)物機(jī)體對(duì) 于銅的需要，而且酵母中有很豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，可以發(fā)揮協(xié)同作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種富銅酵母的制備方法。
本發(fā)明方法首先制備耐高銅的酵母菌種，然后利用耐高銅的酵母菌種 制備富銅酵母。
制備耐高銅的酵母菌種的方法包括以下步驟
步驟a.選取不同生化特性的酵母菌種，將各酵母菌種分別接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)20 45 h，將存活率最大的酵母菌
種作為待誘變菌種；
步驟b.將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變，形成誘
變菌種；
步驟c.將誘變的菌株進(jìn)行分離篩選，接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃 度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)20 45 h，將培養(yǎng)后的菌液收集、過(guò)濾、烘干，稱量并 檢測(cè)其銅含量，將生物量和銅含量同時(shí)具備高于平均值的誘變菌種作為耐 高銅的酵母菌種。
步驟a和步驟c中培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件總糖含量5 20%，銅離子含量 10 200 Jig/ml， pH值4.0 7.0，培養(yǎng)溫度25 36° C，氮源為尿素、硝酸
3銨、硫酸銨和磷酸氫氨中的一種或幾種，磷源為植酸鈣、磷酸氫氨、磷酸
氫二氨、磷酸氫二鉀中的一種或幾種；其中銅離子來(lái)源于硫酸銅、硝酸 銅、醋酸銅或氯化銅。
利用耐高銅的酵母菌種制備富銅酵母的方法是斜面菌種培養(yǎng)一一級(jí) 液體種子培養(yǎng)一二級(jí)液體種子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離干燥一粉碎一富銅 酵母產(chǎn)品。
1) 斜面菌種培養(yǎng)富銅酵母菌種接種于糖含量5 20%，含銅(無(wú)機(jī)銅
鹽)量10 200 Pg/ml， pH值4.0 7.0的麥芽汁固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度 25 36° C，培養(yǎng)20 45 h;
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面酵母菌種接種于50個(gè)裝有250ml糖含 量5 20%，含銅(無(wú)機(jī)銅鹽)量10 200 Pg/ml， pH值4. 0 7. 0的麥芽汁 培養(yǎng)基的三角瓶中，培養(yǎng)溫度25 36。 C，培養(yǎng)20 45 h;
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有50 100L 糖含量5 20%，含銅(無(wú)機(jī)銅鹽)量10 200 Pg/ml， pH值4. 0 7. 0的麥 芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度25 36。 C，培養(yǎng)20 45 h;
4) 發(fā)酵罐培養(yǎng)將二級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有1000 2000L糖含 量5 20%，含銅(無(wú)機(jī)銅鹽)量10 200 Pg/ml， pH值4. 0 7. 0的麥芽汁 培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度25 36° C，銅分批次加入，培養(yǎng)20 45 h;
5) 分離干燥分離機(jī)分離，60 90° C烘干；
6) 粉碎利用粉碎機(jī)粉碎，得到高銅含量富銅酵母。
其中銅離子來(lái)源于硫酸銅、硝酸銅、醋酸銅或氯化銅。 本發(fā)明方法制備的富銅酵母添加劑，可大大提高銅在動(dòng)物機(jī)體吸收利
用率，減少畜禽糞便殘留；同時(shí)酵母菌含有多種生物活性物質(zhì)，可以改善
動(dòng)物胃腸道微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收，減少發(fā)病，提 高經(jīng)濟(jì)效益，可作為飼料添加劑應(yīng)用于畜禽、水產(chǎn)動(dòng)物等的補(bǔ)銅。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
富銅酵母的制備方法，首先制備耐高銅的酵母菌種，然后利用耐高銅 的酵母菌種制備富銅酵母。
1、制備耐高銅的酵母菌種的具體實(shí)施例如下
實(shí)施例1-1
步驟a.選取不同生化特性的酵母菌種，將各酵母菌種分別接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 50 Pg/ml、 150 Pg/ml、200 Pg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)20 h，將存活率最大的酵母菌種作為待誘變菌 種；
步驟b.將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變，形成誘 變菌種；
步驟c.將誘變的菌株進(jìn)行分離篩選，接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃 度(銅濃度分別為10 lVml、 50 Pg/ml、 150 Pg/ml、 200 l^g/ml)的培養(yǎng) 基中培養(yǎng)36 h，將培養(yǎng)后的菌液收集、過(guò)濾、烘干，稱量并檢測(cè)其銅含 量，將生物量和銅含量同時(shí)具備高于平均值的誘變菌種作為耐高銅的酵母 菌種。
培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件總糖含量5%， pH值4.0，培養(yǎng)溫度25。 C，氮源 為尿素，磷源為植酸鈣，銅離子來(lái)源于硫酸銅。
實(shí)施例1-2
步驟a.選取不同生化特性的酵母菌種，將各酵母菌種分別接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 40 Pg/ml、 80 Pg/ml、 120 Pg/ml、 160 Pg/ml、 200 Pg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)36 h，將存活率最大 的酵母菌種作為待誘變菌種；
步驟b.將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變，形成誘 變菌種；
步驟c.將誘變的菌株進(jìn)行分離篩選，接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃 度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 40 ixg/ml、 80 Pg/ml 、 120 Pg/ml 、 160 Pg/ml、 200 Pg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)36 h，將培養(yǎng)后的菌液收集、過(guò)濾、 烘干，稱量并檢測(cè)其銅含量，將生物量和銅含量同時(shí)具備高于平均值的誘 變菌種作為耐高銅的酵母菌種。
培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件總糖含量10%, pH值5.0，培養(yǎng)溫度30° C，氮 源為硝酸銨，磷源為磷酸氫氨，銅離子來(lái)源于硝酸銅。
實(shí)施例卜3
步驟a.選取不同生化特性的酵母菌種，將各酵母菌種分別接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 50 Pg/ml、 90 |ig/ml、 120 Pg/ml、 200Pg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)45 h，將存活率最大的酵母菌種作 為待誘變菌種；
步驟b.將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變，形成誘 變菌種；
5步驟c.將誘變的菌株進(jìn)行分離篩選，接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃 度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 50 l^g/ml、 90 Mg/ml 、 120 f^/ml 、 200Pg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)45 h，將培養(yǎng)后的菌液收集、過(guò)濾、烘干，稱 量并檢測(cè)其銅含量，將生物量和銅含量同時(shí)具備高于平均值的誘變菌種作 為耐高銅的酵母菌種。
培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件總糖含量15%， pH值6.0，培養(yǎng)溫度30° C，氮 源為硫酸銨，磷源為磷酸氫二氨，銅離子來(lái)源于醋酸銅。
實(shí)施例1-4
步驟a.選取不同生化特性的酵母菌種，將各酵母菌種分別接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 50 |ig/ml、 150 Mg/ml、 200 Pg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)20 h，將存活率最大的酵母菌種作為待誘變菌 種；
步驟b.將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變，形成誘 變菌種；
步驟c.將誘變的菌株進(jìn)行分離篩選，接種到10 200 Pg/inl梯度銅濃 度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 50 Pg/ml、 150 Pg/ml、 200 Pg/ml)的培養(yǎng) 基中培養(yǎng)20h，將培養(yǎng)后的菌液收集、過(guò)濾、烘干，稱量并檢測(cè)其銅含量， 將生物量和銅含量同時(shí)具備高于平均值的誘變菌種作為耐高銅的酵母菌 種。
培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件總糖含量20%， pH值7.0，培養(yǎng)溫度36° C，氮 源為磷酸氫氨，磷源為植酸鈣和磷酸氫氨，銅離子來(lái)源于硫酸銅。
實(shí)施例1-5
步驟a.選取不同生化特性的酵母菌種，將各酵母菌種分別接種到10 200 Pg/ml梯度銅濃度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 60 Pg/ml、 120 Pg/ml、 200 ^g/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 h，將存活率最大的酵母菌種作為待誘變菌 種；
步驟b.將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變，形成誘 變菌種；
步驟c.將誘變的菌株進(jìn)行分離篩選，接種到10 200 lig/ml梯度銅濃 度(銅濃度分別為10 Pg/ml、 60 Pg/ml、 120 Pg/ml、 200 Pg/ml)的培養(yǎng) 基中培養(yǎng)30 h，將培養(yǎng)后的菌液收集、過(guò)濾、烘干，稱量并檢測(cè)其銅含 量，將生物量和銅含量同時(shí)具備高于平均值的誘變菌種作為耐高銅的酵母 菌種。培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件總糖含量18%， pH值4.5，培養(yǎng)溫度25° C，氮 源為硫酸銨和磷酸氫氨，磷源為磷酸氫二鉀，銅離子來(lái)源于氯化銅。
2、利用以上任何一實(shí)施例制備的耐高銅的酵母菌種，制備富銅酵母的 具體實(shí)施例如下 實(shí)施例2-1
富銅酵母生產(chǎn)工藝斜面菌種培養(yǎng)一一級(jí)液體種子培養(yǎng)一二級(jí)液體種子
培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離干燥一粉碎一富銅酵母產(chǎn)品。
1) 斜面菌種培養(yǎng)富銅酵母菌種接種于糖含量5%，含銅(硫酸銅)量
10 Pg/ml， pH值4.5的麥芽汁固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度25° C，培養(yǎng)20 hc
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面酵母菌種接種于50個(gè)裝有250ml糖含 量5%，含銅(硫酸銅)量10 Pg/ml， pH值4.5的麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶 中，培養(yǎng)溫度25。 C，培養(yǎng)20 h。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有100 L糖含 量5%，含銅(硫酸銅)量10 Pg/ml， pH值4.5的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度25。 C，培養(yǎng)20 h。
4) 發(fā)酵罐培養(yǎng)將二級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有1000 L糖含量 5%，含銅(硫酸銅)量10 Pg/ml， pH值4.5的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中， 培養(yǎng)溫度25。 C，銅分批次加入，培養(yǎng)20 h。
5) 分離干燥分離機(jī)分離，60° C烘干。
6) 粉碎粉碎機(jī)粉碎后既得到高銅含量富銅酵母，銅含量為每千克酵 母1052毫克。
實(shí)施例2-2
富銅酵母生產(chǎn)工藝斜面菌種培養(yǎng)一一級(jí)液體種子培養(yǎng)一二級(jí)液體種 子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離干燥一粉碎一富銅酵母產(chǎn)品。
1) 斜面菌種培養(yǎng)富銅酵母菌種接種于糖含量10%，含銅(硝酸銅) 量200 Pg/ml， pH值6.0的麥芽汁固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度36° C，培養(yǎng) 45 h。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面酵母菌種接種于50個(gè)裝有250ml糖含 量10%，含銅(硝酸銅)量200 Pg/ml， pH值6.0的麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶 中，培養(yǎng)溫度36。 C，培養(yǎng)45 h。
73) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有50L糖含量 10%，含銅(硝酸銅)量200 Pg/ml， pH值6.0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度36。 C，培養(yǎng)45 h。
4) 發(fā)酵罐培養(yǎng)將二級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有1000L糖含量 10%，含銅(硝酸銅)量200 Pg/ml， pH值6.0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度36。 C，銅分批次加入，培養(yǎng)45 h。
5) 分離干燥分離機(jī)分離，90° C烘干。
6) 粉碎粉碎機(jī)粉碎后既得到高銅含量富銅酵母，銅含量為每千克酵 母5080毫克。
實(shí)施例2-3
富銅酵母生產(chǎn)工藝斜面菌種培養(yǎng)一一級(jí)液體種子培養(yǎng)一二級(jí)液體種
子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離干燥一粉碎一富銅酵母產(chǎn)品。
1) 斜面菌種培養(yǎng)富銅酵母菌種接種于糖含量20%，含銅(氯化銅) 量50 Pg/ml， pH值7.0的麥芽汁固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度28。 C，培養(yǎng)24 h。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面酵母菌種接種于50個(gè)裝有250ml糖含 量20%，含銅(氯化銅)量50 Pg/ml， pH值7.0的麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶 中，培養(yǎng)溫度28。 C，培養(yǎng)24 h。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有100 L糖含 量20%,含銅(氯化銅)量50 Pg/ml， pH值7.0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度28。 C，培養(yǎng)24 h。
4) 發(fā)酵罐培養(yǎng)將二級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有1000 L糖含量 20%，含銅(氯化銅)量50 1^g/ml， pH值7.0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度28° C，銅分批次加入，培養(yǎng)24 h。
5) 分離干燥分離機(jī)分離，60° C烘干。
6) 粉碎粉碎機(jī)粉碎后既得到高銅含量富銅酵母，銅含量為每千克酵 母1944毫克。
實(shí)施例2-4
富銅酵母生產(chǎn)工藝斜面菌種培養(yǎng)一一級(jí)液體種子培養(yǎng)一二級(jí)液體種 子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離干燥一粉碎一富銅酵母產(chǎn)品。
1)斜面菌種培養(yǎng)富銅酵母菌種接種于糖含量15%，含銅(醋酸銅)
量100 Pg/ml， pH值5.0的麥芽汁固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度30° C，培養(yǎng) 40 h。
82) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面酵母菌種接種于50個(gè)裝有250ml糖含 量15%，含銅(醋酸銅)量100 (ig/ml， pH值5.0的麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶 中，培養(yǎng)溫度30。 C，培養(yǎng)40 h。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有100 L糖含 量15%，含銅(醋酸銅)量IOO Pg/ml， pH值5. 0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度30。 C，培養(yǎng)40 h。
4) 發(fā)酵罐培養(yǎng)將二級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有2000 L糖含量 15%，含銅(醋酸銅)量100化/ml， pH值5.0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度30。 C，銅分批次加入，培養(yǎng)40 h。
5) 分離干燥分離機(jī)分離，70° C烘干。
6) 粉碎粉碎機(jī)粉碎后既得到高銅含量富銅酵母，銅含量為每千克酵 母2906毫克。
實(shí)施例2-5
富銅酵母生產(chǎn)工藝斜面菌種培養(yǎng)一一級(jí)液體種子培養(yǎng)一二級(jí)液體種
子培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一分離干燥一粉碎一富銅酵母產(chǎn)品。
1) 斜面菌種培養(yǎng)富銅酵母菌種接種于糖含量12%，含銅(硝酸銅)
量150 Pg/inl， pH值5.5的麥芽汁固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度28° C，培養(yǎng) 36 h。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面酵母菌種接種于50個(gè)裝有250ml糖含 量12%，含銅(硝酸銅)量150 Pg/ml， pH值5.5的麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶 中，培養(yǎng)溫度28。 C，培養(yǎng)36 h。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有100 L糖含 量12%,含銅(硝酸銅)量150 Pg/ml， pH值5.5的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度28。 C，培養(yǎng)36 h。
4) 發(fā)酵罐培養(yǎng)將二級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有2000L糖含量 12%，含銅(硝酸銅)量150化/ml， pH值5.5的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)溫度28。 C，銅分批次加入，培養(yǎng)36 h。
5) 分離干燥分離機(jī)分離，60° C烘干。
6) 粉碎粉碎機(jī)粉碎后既得到高銅含量富銅酵母，銅含量為每千克酵 母4130毫克。
權(quán)利要求
1、一種富銅酵母的制備方法，首先制備耐高銅的酵母菌種，然后利用耐高銅的酵母菌種制備富銅酵母，其特征在于制備耐高銅的酵母菌種的方法包括以下步驟步驟a. 選取不同生化特性的酵母菌種，將各酵母菌種分別接種到10～200μg/ml梯度銅濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～45h，將存活率最大的酵母菌種作為待誘變菌種；步驟b. 將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變，形成誘變菌種；步驟c. 將誘變的菌株進(jìn)行分離篩選，接種到10～200μg/ml梯度銅濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～45h，將培養(yǎng)后的菌液收集、過(guò)濾、烘干，稱量并檢測(cè)其銅含量，將生物量和銅含量同時(shí)具備高于平均值的誘變菌種作為耐高銅的酵母菌種；步驟a和c中培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件總糖含量5～20％，銅離子含量10～200μg/ml，pH值4.0～7.0，培養(yǎng)溫度25～36°C，氮源為尿素、硝酸銨、硫酸銨和磷酸氫氨中的一種或幾種，磷源為植酸鈣、磷酸氫氨、磷酸氫二氨、磷酸氫二鉀中的一種或幾種，銅離子來(lái)源于硫酸銅、硝酸銅、醋酸銅或氯化銅；利用耐高銅的酵母菌種制備富銅酵母的方法是斜面菌種培養(yǎng)→一級(jí)液體種子培養(yǎng)→二級(jí)液體種子培養(yǎng)→發(fā)酵罐培養(yǎng)→分離干燥→粉碎→富銅酵母產(chǎn)品；1)斜面菌種培養(yǎng)富銅酵母菌種接種于糖含量5～20％，含銅量10～200μg/ml，pH值4.0～7.0的麥芽汁固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度25～36°C，培養(yǎng)20～45h；2)一級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面酵母菌種接種于50個(gè)裝有250ml糖含量5～20％，含銅量10～200μg/ml，pH值4.0～7.0的麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶中，培養(yǎng)溫度25～36°C，培養(yǎng)20～45h；3)二級(jí)液體種子培養(yǎng)將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有50～100L糖含量5～20％，含銅量10～200μg/ml，pH值4.0～7.0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度25～36°C，培養(yǎng)20～45h；4)發(fā)酵罐培養(yǎng)將二級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種于裝有1000～2000L糖含量5～20％，含銅量10～200μg/ml，pH值4.0～7.0的麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，培養(yǎng)溫度25～36°C，銅分批次加入，培養(yǎng)20～45h；5)分離干燥分離機(jī)分離，60～90°C烘干；6)粉碎利用粉碎機(jī)粉碎，得到高銅含量富銅酵母；其中銅離子來(lái)源于硫酸銅、硝酸銅、醋酸銅或氯化銅。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種富銅酵母的制備方法。本發(fā)明首先制備耐高銅的酵母菌種將不同生化特性酵母菌種在梯度銅濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，存活率最大的作為待誘變菌種；將待誘變菌種接種到硫酸二乙脂的培養(yǎng)基上進(jìn)行誘變；將誘變的菌株接種到梯度銅濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收集菌液、過(guò)濾、烘干，將生物量和銅含量同時(shí)高于平均值的誘變菌種作為耐高銅的酵母菌種。然后利用耐高銅的酵母菌種制備富銅酵母斜面菌種培養(yǎng)→一級(jí)液體種子培養(yǎng)→二級(jí)液體種子培養(yǎng)→發(fā)酵罐培養(yǎng)→分離干燥→粉碎→富銅酵母產(chǎn)品。本發(fā)明方法制備的富銅酵母添加劑，大大提高銅在動(dòng)物機(jī)體吸收利用率，提高經(jīng)濟(jì)效益，可作為飼料添加劑應(yīng)用于畜禽、水產(chǎn)動(dòng)物等的補(bǔ)銅。
文檔編號(hào)C12R1/645GK101508961SQ20091009674
公開(kāi)日2009年8月19日 申請(qǐng)日期2009年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月16日
發(fā)明者杰 馮, 馬文強(qiáng) 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)