專利名稱：防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種農(nóng)藥，特別是涉及一種防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥。
背景技術(shù)：
蘋果車侖紋病菌(5(9//yos^/7"erz'a f. ^n'co/aJ屬于子囊菌綱，座
囊菌目，囊孢菌屬。蘋果輪紋病俗稱水爛病、爛果病，該病在美國(guó)、加拿大、 日本和我國(guó)均有發(fā)生，我國(guó)尤以遼寧、山東、河北發(fā)病嚴(yán)重。輪紋病寄生范圍 很廣，除蘋果外還能為害梨、桃、李、杏等多種果樹。
蘋果輪紋病菌主要為害果實(shí)。發(fā)病初期在果面部分出現(xiàn)圓形、黑至黑褐色 小斑，逐漸擴(kuò)大成輪紋狀。隨著癥狀的進(jìn)一步發(fā)展，病斑呈淡褐至黑褐色，整 個(gè)果實(shí)即變?yōu)樗疂n狀軟化腐爛。發(fā)病后期在病斑表面形成黑色小粒點(diǎn)狀的分生 孢子器，偶爾從孢子器中溢出白色線頭狀孢子角。
蘋果輪紋病菌不僅侵染田間生長(zhǎng)的蘋果，引起20%-30%的爛果，由于其潛伏 侵染特性，還可引起蘋果采后腐爛，成為貯藏期的重要病害，嚴(yán)重影響果實(shí)的 產(chǎn)質(zhì)量，給果農(nóng)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。
目前蘋果輪紋病在生產(chǎn)上主要以化學(xué)藥劑防治為主，采用化學(xué)藥劑防治容 易造成農(nóng)藥在土壤和作物上的殘留，對(duì)土壤、地下水、河流、湖泊造成污染， 尤其是給人類的生存、發(fā)展和健康帶來危害?；瘜W(xué)農(nóng)藥的廣泛應(yīng)用使公眾越來 越擔(dān)心其安全性和對(duì)環(huán)境造成的污染問題；同時(shí)，化學(xué)農(nóng)藥的大量使用也使病 菌對(duì)常用藥劑產(chǎn)生了一定的抗藥性，使其防效不斷下降。而且，近年來隨著人們生態(tài)意識(shí)觀念的日益增強(qiáng)和生活水平的提高，人們?cè)絹碓阶⒅厣钯|(zhì)量，安 全、優(yōu)質(zhì)、無公害蔬菜受到人們的青睞。所以必須尋找新的途徑以克服化學(xué)藥 劑防治帶來的農(nóng)藥殘留和病菌抗藥性等問題。
隨著人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)和對(duì)綠色無公害農(nóng)產(chǎn)品需求的擴(kuò)大，使得植物病 害的生物防治越來越受到人們的關(guān)注，生物防治因其具有對(duì)環(huán)境、生態(tài)和人類 健康安全的優(yōu)點(diǎn)，在世界各國(guó)得到了廠泛的重視并發(fā)揮著越來越重要的作用。 利用拮抗微生物防治植物病害是當(dāng)今植病界十分活躍的研究領(lǐng)域之一，并已顯 示出良好的應(yīng)用前景。拮抗細(xì)菌是一類歷史悠久的生防微生物，也是公認(rèn)的很 有前途的生防因子。拮抗細(xì)菌以其種類和數(shù)量眾多、分布廣泛、作用方式多樣、 對(duì)非耙標(biāo)生物安全及不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)而倍受重視。在國(guó)內(nèi)外的研究中，利用 拮抗細(xì)菌防治植物病害特別是土傳病害的報(bào)道很多。利用拮抗細(xì)菌防治疫霉菌
(尸/^op/70ra)等的研究都取得了良好的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥。它具有安全、 防治蘋果輪紋病效果好，環(huán)境友好等特點(diǎn)，降低了多菌靈的使用次數(shù)，減少多 菌靈的抗性藥。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥，它是由下述原料按所述重量份數(shù)制備而成: 拮抗細(xì)菌發(fā)酵液10-50份；淀粉10-50份；NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物1-6份； K2C03l-4份；MF甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物3-20份；硅藻土 15-50份。
防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥，它是由下述原料按所述重量份數(shù)制備而成:
拮抗細(xì)菌發(fā)酵液20-40份；淀粉20-40份；NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物2-4份；K2CCM-3份；MF甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物6-15份；硅藻土 20-40份。
上述防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥可濕性粉劑的制備工藝，取符合所述重量份數(shù)的淀粉、NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物、K2C03、 MF甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再將符合所述重量份數(shù)的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
所述的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液的制備方法如下取固體培養(yǎng)基，將拮抗細(xì)菌接種于固體培養(yǎng)基中，在25-3(TC下培養(yǎng)60-80小時(shí)得菌落；取單菌落，接種于培養(yǎng)液內(nèi)在25-3(TC下在搖床中培養(yǎng)20-30小時(shí)，制成種子液；將種子液接種到垮養(yǎng)液內(nèi)，25-3(TC下在搖床中60-80小時(shí)得拮抗細(xì)菌發(fā)酵液；種子液與培養(yǎng)液的重量份數(shù)比為1: 8-12。
所述的固體培養(yǎng)基是由下述制備方法制得取牛肉浸膏3-4份、蛋白胨8-12份、NaCL 5-6份、瓊脂17-20份、水0.5-1.5份加入到沸水浴鍋中混合加熱熔化，加入NaOH調(diào)pH至7-7.5，過濾，裝瓶封口后進(jìn)行濕熱滅菌，冷卻至室溫得固體培養(yǎng)基，其中接種拮抗細(xì)菌為0.001-0.005份。
所述的培養(yǎng)液是由下述制備方法制得取淀粉10-30份，蛋白胨10-30份，NaCL4-8份，水0.5-1.5份；加入到沸水浴鍋中混合加熱熔化，加入NaOH調(diào)pH至7-7.5，過濾，裝瓶封口后進(jìn)行濕熱滅菌，冷卻至室溫得液體培養(yǎng)液。
所述的濕熱滅菌是裝瓶封口的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，0.8-1.2kg/cm2壓力，115-130°C， 15-30min濕熱滅菌。
本發(fā)明的使用方法如下果實(shí)幼果期噴施，使用濃度100倍，具有保護(hù)作用。果實(shí)生長(zhǎng)期和其他防治措施結(jié)合使用，使用濃度100倍，減少化學(xué)藥劑抗性藥，減少農(nóng)藥殘留。 ，本發(fā)明的積極效果是將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液與助劑按一定比例制成微生物農(nóng)藥，具有防效好、安全、環(huán)境友好等特點(diǎn)，降低了多菌靈的使用次數(shù)，減少多菌靈的抗性藥，是生產(chǎn)綠色食品所必須的生物農(nóng)藥。
為了證明本發(fā)明對(duì)蘋果輪紋病的效果進(jìn)行了多次試驗(yàn)，并與生產(chǎn)上的常用藥劑作了對(duì)比試驗(yàn)，防治效果效好，下述實(shí)驗(yàn)中所用蘋果輪紋病拮抗細(xì)菌可濕性粉劑是采用實(shí)施例1的方法制備的；實(shí)驗(yàn)做所用拮抗細(xì)菌發(fā)酵液也是按照實(shí)施例的方法制備的；試驗(yàn)結(jié)果如下
1.抗菌物質(zhì)對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用的測(cè)定
將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液在3000-4000r/min下離心10min，取上清液分別稀釋濃度為5、 10、 20、 30、 40、 50、 100、 200、 400倍待用。分別量取O. 25mL上述上清液液和O. 5mL上述分生孢子懸浮液加入指形管(lX7. 5cm)中，將指形管放入25。C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每個(gè)處理重復(fù)3次。對(duì)照加相同體積的無菌水。分別在24h日《測(cè)定孢子的萌發(fā)率。孢子的萌發(fā)是以芽管的長(zhǎng)度約超過孢子寬度一倍時(shí)做為標(biāo)準(zhǔn)。觀察時(shí)于載玻片上蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，每個(gè)處理及對(duì)照觀察計(jì)數(shù)時(shí)計(jì)3-5個(gè)視野的總孢子數(shù)，孢子總數(shù)應(yīng)在200左右，計(jì)算萌發(fā)率和抑制率。
萌發(fā)率,調(diào)查孢^m對(duì)包子x則
調(diào)査孢子忍數(shù)
抑制率,調(diào)査孢^g』g孢子數(shù)x謂
調(diào)查孢子總數(shù)
從表1可以看出，拮抗菌無菌液隨著稀釋倍數(shù)的增加，抑菌率逐漸降f串。
稀釋5倍時(shí)，抑制率為93%，稀釋400倍時(shí)，抑制率為25%。此外，當(dāng)抑制率為50%時(shí)，無菌液的稀釋倍數(shù)為IOO倍，因此可初步斷定其EC5。為IOO倍。
表1 No. 1無菌液抑菌測(cè)定稀釋倍 數(shù)孢子萌發(fā) 率抑制率稀釋倍數(shù)孢子萌發(fā) 率抑制率
ck1000403565
5793504060
1017831005050
2022782006931
3028724007525
2蘋果輪紋病拮抗細(xì)菌可濕性粉劑離體果控病試驗(yàn)
在田間選取大小、成熟度基本一致的蘋果果實(shí)，按下述3種方式處理(l)先 噴布lX10MVmL菌株可濕性菌劑200倍液，24h后剌傷接種輪紋病菌l X 106個(gè) /mL孢子懸液。(2)先噴布輪紋病菌lX10MVmL孢子懸液，24h后刺傷噴布l X 108 個(gè)/mL菌株可濕性菌劑200倍液(3)先噴無菌水，24h后刺傷接種輪紋病菌l X 106 個(gè)/mL孢子懸液。以上處理每個(gè)果面剌傷4處，放到27t:下保溫保濕，5d后觀察 刺傷點(diǎn)發(fā)病情況，調(diào)査病情指數(shù)，計(jì)算防治效果。
防治效果⑨,照區(qū)病gg;tS病情指數(shù)x層
對(duì)照區(qū)病情指數(shù)
試驗(yàn)結(jié)果見2.先噴拮抗細(xì)菌菌株菌液后刺傷接種輪紋病菌的防治效果為 73.5%，而先接種輪紋病菌后刺傷噴拮抗細(xì)菌菌株菌液的防治效果為38.02%，前 者防效顯著高于后者，說明先噴拮抗細(xì)菌菌株菌液可優(yōu)先利用傷口的外滲營(yíng)養(yǎng)， 阻止病菌孢子的侵入，并可殺死病菌，從而達(dá)到防治病害的目的。
表2菌株的離體果防治試驗(yàn)結(jié)果
調(diào)査總發(fā)病率(％)
防效(％ )
處理I4052. 538. 02b
II4022. 573. 5a
in4085
I接種輪紋病菌后刺傷噴No. 1 II噴No. l后刺傷接種輪紋病菌m先噴無菌水
后刺傷接種輪紋病菌
3蘋果輪紋病拮抗細(xì)菌可濕性粉劑菌劑田間防治試驗(yàn)
試驗(yàn)在遼寧省果樹所優(yōu)質(zhì)果園12年生富士蘋果樹上進(jìn)行。土壤為棕壤,pH 7,水肥條件中等，株產(chǎn)40 kg左右。共設(shè)8個(gè)處理1)菌劑100倍與1 : 3 : 240波爾多液交替；2)菌劑200倍與1 : 3 : 240波爾多液交替；3)菌劑300倍 液與1 : 3 : 240波爾多液交替；4) 50%多菌靈800倍液與1 : 3 : 240波爾多 液交替;5)常規(guī)噴藥;6)清水;7)花后噴多菌靈套袋。8)花后噴菌劑100倍套袋.單 株小區(qū)，重復(fù)5次，順序排列,對(duì)照樹兩邊設(shè)保護(hù)行。全年噴5次藥，噴藥日期 為5月26日，6月9、24日，7月22日，8月7日.常規(guī)噴藥處理各次分別為 6月9日多菌靈800倍、21日中生菌素200倍，7月8日大生M-45 800倍，7 月22日多菌靈800倍、8月7日1 : 3 : 240波爾多液。果實(shí)采收期每處理調(diào) 查500個(gè)輪紋病發(fā)病果實(shí)，計(jì)算防效；果實(shí)采收時(shí)每處理采500個(gè)未發(fā)病果實(shí) 貯藏1個(gè)月后調(diào)查發(fā)病果數(shù)，計(jì)算防效。
田間病果率(%)=$|§><100
總果數(shù)
貯藏期病果率(%) =^f|ix 100
入貯總果數(shù)
防治效果(%)=對(duì)照，g;:^病果率x蘭
對(duì)照病果率
結(jié)果見表5. 2.常規(guī)噴藥和50%多菌靈800倍液與1 : 3 : 240波爾多液交替防效明顯，都在90%以上，但菌劑100倍與1 : 3 : 240波爾多液交替的防效也 接近90%，與常規(guī)噴藥的效果差異不顯著；菌劑200倍與1 : 3 : 240波爾多液交 替和菌劑300倍與1 : 3 : 240波爾多液交替的防效稍差一些，顯著低于常規(guī)噴 藥和50%多菌靈800倍液與1 : 3 : 240波爾多液交替防效，但也在80%以上， 花后一周噴殺菌劑(多菌靈和菌劑)套袋的，果實(shí)輪紋病防效均為100%。果實(shí)采
收貯藏一個(gè)月后防效結(jié)果與果實(shí)采收時(shí)表現(xiàn)趨勢(shì)一致。
表3菌株田間防治試驗(yàn)結(jié)果
采收期picking period貯藏期storageperiod
處理調(diào)查爛果率防效(％)調(diào)査爛果率防效(％)
數(shù)(%)數(shù)(%)
I5001. 389. 6b4941. 590. 25b
II4981.885. 6c4972. 385. lc
III4972. 183. 2d4953. 577. 3d
IV4930.6194. 3a4940.994. 2a
V4931. 2290. 4b4941. 292. 2a
VI49612. 549615.4
vn493100,0457100
VII498100, 0500100
備注I:菌劑ioo倍與i : 3: 240波爾多液交替II:菌劑200倍與l:3:
240波爾多液交替III:菌劑300倍與1 : 3 : 240波爾多液交替IV: 50%多菌靈 800倍液與1 : 3 : 240波爾多液交替V:常規(guī)噴藥VI:清水(對(duì)照)Water(CK) VII:花后噴多菌靈套袋Wh花后噴菌劑100倍套袋。
具體實(shí)施例方式
以下通過具體實(shí)施方式
的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并不能用 于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以 做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的
范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1:
取淀粉30g、 NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物2g、 K2C031.5g、 MF甲基萘磺酸鹽 甲醛縮合物10g混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液30g 與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
所述的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液是采用下述方法制得
制作拮抗細(xì)菌固體培養(yǎng)基取牛肉浸膏3-4g，蛋白胨10g，NaCL5.3g，瓊 脂17-20g，水lg加入到沸水浴鍋中加熱熔化，調(diào)lmol/L NaOH調(diào)pH至7.2; 趁熱用多層紗布過濾，分裝至250mg的三角瓶中，并在三角瓶口塞上棉塞，然 后包扎一層牛皮紙；然后將三角瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，1、 05kg/cn^壓力， 121.3°C， 20min濕熱滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至5(TC左右時(shí)，在潔凈工作臺(tái)上將 培養(yǎng)基倒在培養(yǎng)皿中，冷卻至室溫得到固體培養(yǎng)基；
菌落的制備將拮抗細(xì)菌l-5mg接種于上述固體培養(yǎng)基中在28。C下培養(yǎng) 72小時(shí)，得菌落；
制作培養(yǎng)液取取淀粉20g、蛋白胨20g、 NaCL5.0g、水lg加入到沸水 浴鍋中加熱熔化，調(diào)lmol/LNaOH調(diào)pH至7.2;趁熱用多層紗布過濾，分裝至 250mg的三角瓶中，并在三角瓶口塞上棉塞，然后包扎一層牛皮紙；然后將三 角瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，1、 05kg/cn^壓力，121.3°C， 20min濕熱滅菌;待培養(yǎng)基溫度降至5(TC左右時(shí)，在潔凈工作臺(tái)上將培養(yǎng)基倒在培養(yǎng)皿中，冷卻至
室溫得培養(yǎng)液；
種子液的制備取單菌落,接種于培養(yǎng)液內(nèi)，在28'C下140r'min"的速度在 搖床中培養(yǎng)24小，制成種子液；
拮抗細(xì)菌發(fā)酵液的制備取上述方法制得的種子液16mg接種于按上述方法 制得的培養(yǎng)液中，在28"下140"11^11'1的搖床中培養(yǎng)72小時(shí)，制成發(fā)酵液。
實(shí)施例2:
取淀粉30g、 NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物4g、 K2C031.5g、 MF甲基萘磺酸鹽 甲醛縮合物8g混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液30g 與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
其中細(xì)菌發(fā)酵液的制備方法同實(shí)施例1。 實(shí)施例3:
取淀粉20g、 NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物2g、 K2C03lg、 MF甲基萘磺酸鹽 甲醛縮合物6g混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液40g 與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
所述的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液是釆用常規(guī)方法制備的。 實(shí)施例4:
取淀粉40g、 NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物4g、 K2C033g、 MF甲基萘磺酸鹽 甲醛縮合物4g混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液20g 與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
所述的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液是采用常規(guī)方法制備的。 實(shí)施例5:取淀粉50g、 NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物6g、 K2C034g、 MF甲基萘磺酸鹽 甲醛縮合物20g混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液50g 與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
所述的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液是采用下述方法制得-
制作拮抗細(xì)菌固體培養(yǎng)基取牛肉浸膏3g,蛋白胨8-12g， NaCL5-6g ,瓊 脂17-20g，水0.5或1.5g加入到沸水浴鍋中加熱熔化，調(diào)lmol/L NaOH調(diào)pH 至7或7.5;趁熱用多層紗布過濾，分裝至250mg的三角瓶中，并在三角瓶口塞 上棉塞，然后包扎一層牛皮紙；然后將三角瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)， 800-1200kg/cm2壓力，115-125°C， 15-30min濕熱滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至50°C 左右時(shí)，在潔凈工作臺(tái)上將培養(yǎng)基倒在培養(yǎng)皿中，冷卻至室溫得到固體培養(yǎng)基；
菌落的制備將拮抗細(xì)菌l-5mg接種于上述固體培養(yǎng)基中在3(TC下培養(yǎng) 72小時(shí)，得菌落；
制作培養(yǎng)液取取淀粉20g、蛋白胨20g、 NaCL5.0g、水lg加入到沸水 浴鍋中加熱熔化，調(diào)lmol/LNaOH調(diào)pH至7.2;趁熱用多層紗布過濾，分裝至 250mg的三角瓶中，并在三角瓶口塞上棉塞，然后包扎一層牛皮紙；然后將三 角瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，800-1200kg/cm2壓力，115-125°C， 15-30min濕熱 滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至5(TC左右時(shí)，在潔凈工作臺(tái)上將培養(yǎng)基倒在培養(yǎng)皿中， 冷卻至室溫得培養(yǎng)液；
種子液的制備取單菌落，接種于培養(yǎng)液內(nèi)，在25或3(TC下140r min'1的 速度在搖床中培養(yǎng)30小，制成種子液；
拮抗細(xì)菌發(fā)酵液的制備取上述方法制得的種子液16mg接種于按上述方法 制得的培養(yǎng)液中，在25或3(TC下140r'min—'的搖床中培養(yǎng)60或80小時(shí)，制成發(fā)酵液。
實(shí)施例6:
取淀粉10g、 NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物lg、 K2C03lg、 MF甲基萘磺酸鹽 甲醛縮合物3g混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液10g 與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
所述的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液是采用常規(guī)方法制備的。
權(quán)利要求
1、防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥，其特征在于它是由下述原料按所述重量份數(shù)制備而成拮抗細(xì)菌發(fā)酵液10-50份；淀粉10-50份；NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物1-6份；K2CO31-4份；MF甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物3-20份；硅藻土15-50份。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥，其特征在于它是 山下述原料按所述重量份數(shù)制備而成拮抗細(xì)菌發(fā)酵液20-40份；淀粉20-40份； NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物2-4份；&0331-3份；MF甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物 6-15份;硅藻土 20-40份。
3、 一種權(quán)利要求1或2所述防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥可濕性粉劑的制 備工藝，其特征在于取符合所述重量份數(shù)的淀粉、NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物、 K2C03、 MF甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物混合均勻，經(jīng)粉碎后過篩得助劑填料，再 將符合所述重量份數(shù)的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液與粉碎后的助劑填料混合均勻，既得。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥可濕性粉劑的制備 工藝，其特征在于所述的拮抗細(xì)菌發(fā)酵液的制備方法如下取固體培養(yǎng)基，將 拮抗細(xì)菌接種于固體培養(yǎng)基，在25-3(TC下培養(yǎng)60-80小時(shí)得菌落；取單菌落， 接種于培養(yǎng)液內(nèi)在25-3(TC下在搖床中培養(yǎng)20-30小時(shí)，制成種子液；將種子液 接種到培養(yǎng)液內(nèi)，25-3(TC下在搖床中60-80小時(shí)得拮抗細(xì)菌發(fā)酵液；種子液與 培養(yǎng)液的重量份數(shù)比為h 8-12。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥可濕性粉劑的制備 工藝，其特征在于所述的固體培養(yǎng)基是由下述制備方法制得取牛肉浸膏3-4 份、蛋白胨8-12份、NaCL5-6份、瓊脂17-20份、水0.5-1.5份加入到沸水浴鍋中混合加熱熔化，加入NaOH調(diào)pH至7-7.5，過濾，裝瓶封口后進(jìn)行濕熱滅 菌，冷卻至室溫得固體培養(yǎng)基，其中接種拮抗細(xì)菌為0.001-0.005份。
6、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥可濕性粉劑的制備 工藝，其特征在于所述的培養(yǎng)液是由下述制備方法制得取淀粉10-30份，蛋白 胨10-30份，NaCL4-8份，水0.5-1.5份；加入到沸水浴鍋中混合加熱熔化，加 入NaOH調(diào)pH至7-7.5，過濾，裝瓶封口后進(jìn)行濕熱滅菌，冷卻至室溫得液體 培養(yǎng)液。 '
7、 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥可濕性粉劑的 制備工藝，其特征在于所述的濕熱滅菌是裝瓶封口的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌 鍋內(nèi)，0.8-1.2kg/cm2壓力，115-130°C， 15-30min濕熱滅菌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種農(nóng)藥，特別是涉及一種防治蘋果輪紋病的微生物農(nóng)藥。它是由下述原料按所述重量份數(shù)制備而成拮抗細(xì)菌發(fā)酵液10-50份；淀粉10-50份；NNO萘磺酸鹽甲醛縮合物1-6份；K₂CO₃ 1-4份；MF甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物3-20份；硅藻土15-50份。本發(fā)明的積極效果是將拮抗細(xì)菌發(fā)酵液與助劑按一定比例制成微生物農(nóng)藥，具有防效好、安全、環(huán)境友好等特點(diǎn)，降低了多菌靈的使用次數(shù)，減少了多菌靈的抗藥性，是生產(chǎn)綠色食品所需的生物農(nóng)藥。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101578998SQ200910012048
公開日2009年11月18日 申請(qǐng)日期2009年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月16日
發(fā)明者張廣仁, 李廣旭, 華 楊, 紀(jì)明山 申請(qǐng)人:遼寧省果樹科學(xué)研究所