專利名稱：一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藍(lán)靛果花色苷制備方法。
背景技術(shù)：
花色苷在自然界中廣泛存在，人們對它的研究己有30多年歷史，特別是 自.20世紀(jì)80年代以來，全世界對花色苷的研究日益廣泛和深入，德、法、意、 美、日、韓等國的研究人員都針對植物的花色苷進(jìn)行了研究。黑龍江省是我國 最大的花色苷植物生產(chǎn)基地，主要有紅豆越桔、篤斯越桔、藍(lán)靛果、黑加侖、 山葡萄、樹梅等品種，擁有非常豐富的花色苷食用色素資源。這類色素是食物 的天然成份，不僅不存在安全性問題，而且具有類黃酮物質(zhì)降脂、抗衰老、美 容、養(yǎng)顏、減肥等重要的生理功能，可應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域。
藍(lán)靛果是黑龍江的重要資源之一，并且也是天然花色苷的主要來源。雖 然目前對藍(lán)靛果花色苷的研究很多，但是藍(lán)靛果花色苷的提取方法主要以化學(xué) 提取法、化學(xué)一物理提取法為主，提取率都偏低，化學(xué)法的提取率只有40 50%左右，化學(xué)一物理提取法的提取率最高也不超過60%，使藍(lán)靛果花色苷的 生產(chǎn)和利用都沒有發(fā)揮其應(yīng)有的價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決藍(lán)靛果花色苷提取率低，純度不高的問題，本發(fā)明提供了一種固 態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝，能有效提高藍(lán)靛果花色苷的提取率和
產(chǎn)品純度。本發(fā)明中，固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝的步驟如下 一、藍(lán)靛果花色苷的提取先將藍(lán)靛果果渣篩選，除去腐爛及雜質(zhì)，用液氮和
攪拌珠研磨法將藍(lán)靛果殘?jiān)鬯槌?0目粉末，按質(zhì)量百分比將91~95%藍(lán)靛 果粉末和5 9%水混合均勻制成固態(tài)生物反應(yīng)底物，然后添加固態(tài)反應(yīng)底物質(zhì) 量百分比1.0~1.5%的綠色木霉進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，再以料液比為lg: 20mL lg: 40mL的比例加入質(zhì)量濃度為70%的乙醇水溶液，用超聲波萃取25 35分鐘， 得到藍(lán)靛果一乙醇水溶液，最后用離心機(jī)以3000~5000r/min的速度離心藍(lán)靛 果一乙醇水溶液5 10min，倒出上層提取液，以料液比為lg: 20mL lg: 40mL的比例將質(zhì)量濃度為70%的乙醇水溶液加入到下層沉淀中繼續(xù)進(jìn)行超聲提取
和離心分離，連續(xù)提取3次，除去下層沉淀，合并上層提取液并濃縮至花色苷
濃度為8 10g/L，得到藍(lán)靛果花色苷濃縮液；二、藍(lán)靛果花色苷的純化用
X-5大孔樹脂層析柱對藍(lán)靛果花色苷濃縮液進(jìn)行吸附，然后用解吸液解吸得到
純化的藍(lán)靛果花色苷提取液；三、濃縮將純化的藍(lán)靛果花色苷提取液采用真
空刮板式薄膜濃縮，濃縮條件為溫度30 4(TC，真空度為0.1 0.15mbar，得到 藍(lán)靛果花色苷粘稠液；四、干燥及粉碎用真空凍干機(jī)在0.4 0.7mbar、溫度 —40 5(TC條件下將藍(lán)靛果花色苷粘稠液真空凍干24小時(shí)并粉碎成60目粉 末，即得藍(lán)靛果花色苷粉末。
本發(fā)明中，所采用的原料為藍(lán)靛果加工廢棄物——藍(lán)靛果果渣，對藍(lán)靛果 果渣進(jìn)行再利用，既降低了生產(chǎn)成本、創(chuàng)造了高附加值產(chǎn)品，又防止其對環(huán)境 的污染。在藍(lán)靛果花色苷提取方法中，采用固態(tài)生物反應(yīng)一超聲波雙效萃取花 色苷工藝，用液氮超低溫處理配合攪拌珠研磨方法對藍(lán)靛果殘?jiān)M(jìn)行超微粉 碎，再通過固態(tài)生物反應(yīng)對藍(lán)靛果果粉體進(jìn)行降解，然后通過超聲波輔助萃取， 使花色苷得以充分釋放，使藍(lán)靛果花色苷的提取率可達(dá)到70 80%，比化學(xué) 提取法或化學(xué)一物理提取法的提取率分別高了 40 100%和15 30%。采用 X-5大孔樹脂層析柱對藍(lán)靛果花色苷進(jìn)行純化，使藍(lán)靛果花色苷中花色苷含量 達(dá)到40 50%，比化學(xué)提取法中花色苷的含量高了 50%，大大提高了藍(lán)靛果 花色苷的附加經(jīng)濟(jì)價(jià)值。同時(shí)本發(fā)明中采用真空凍干技術(shù)，操作在低溫下運(yùn)行， 極大的保留了藍(lán)靛果中的有效活性成分，更好的保留了藍(lán)靛果花色苷結(jié)構(gòu)和生 物活性。本發(fā)明工藝簡單，提取率高，十一推廣和應(yīng)用。本發(fā)明制備的藍(lán)靛果 花色苷色價(jià)高，純度高，可作為天然食用紅色素、解酒保肝飲品、明目制劑、 抗輻射制劑及美容內(nèi)服劑。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施方式
一本具體實(shí)施方式
中， 一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花 色苷的工藝的步驟如下 一、藍(lán)靛果花色苷的提取先將藍(lán)靛果果渣篩選，除 去腐爛及雜質(zhì)，用液氮和攪拌珠研磨法將藍(lán)靛果殘?jiān)鬯槌?0目粉末，按質(zhì)
量百分比將91 95%藍(lán)靛果粉末和5~9°/。水混合均勻制成固態(tài)生物反應(yīng)底物， 然后添加固態(tài)反應(yīng)底物質(zhì)量百分比1.0 1.5%的綠色木霉進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，再以料液比為lg: 20 mL lg: 40mL的比例加入質(zhì)量濃度為70%的乙醇水溶液， 用超聲波萃取25 35分鐘，得到藍(lán)靛果一乙醇水溶液，最后用離心機(jī)以 3000 5000r/min的速度離心藍(lán)靛果一乙醇水溶液5 10min，倒出上層提取液， 以料液比為lg: 20 mL lg: 40mL的比例將質(zhì)量濃度為70%的乙醇水溶液加 入到下層沉淀中繼續(xù)進(jìn)行超聲提取和離心分離，連續(xù)提取3次，除去下層沉淀， 合并上層提取液并濃縮至花色苷濃度為8~10g/L，得到藍(lán)靛果花色苷濃縮液； 二、藍(lán)靛果花色苷的純化用X-5大孔樹脂層析柱對藍(lán)靛果花色苷濃縮液進(jìn)行 吸附，然后用解吸液解吸得到純化的藍(lán)靛果花色苷提取液；三、濃縮將純化 后的藍(lán)靛果花色苷提取液采用真空刮板式薄膜^^縮，濃縮條件為溫度30 40 °C，真空度為0.1 0.15mbar，得到藍(lán)靛果花色苷粘稠液;四、干燥及粉碎用 真空凍干機(jī)在0.4 0.7mbar、溫度一40 5(TC條件下將藍(lán)靛果花色苷粘稠液真 空凍干24小時(shí)并粉碎成60目粉末，即得藍(lán)靛果花色苷粉末。
具體實(shí)施方式
二本具體實(shí)施方式
與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中 固態(tài)發(fā)酵的工藝條件為固態(tài)生物反應(yīng)底物的pH值為5.0 6.5，溫度為28 35 °C，發(fā)酵時(shí)間為24 48小時(shí)，每10 15分鐘通氣時(shí)間20 30秒，通氣壓力 1.0 1.5Mpa。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本具體實(shí)施方式
與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中
超聲波的功率為300 400W。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本具體實(shí)施方式
與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中
花色苷濃縮液的流速為1.0ml/min，解吸液流速為1.0~2.0ml/min。其它與具體 實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施方式
五本具體實(shí)施方式
與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中
解吸液為質(zhì)量百分比濃度為60% 80°/。的乙醇水溶液。其它與具體實(shí)施方式
一 相同。
具體實(shí)施方式
六本具體實(shí)施方式
中，固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷 的工藝的步驟如下 一、藍(lán)靛果花色苷的提取先將藍(lán)靛果果渣篩選，除去腐 爛及雜質(zhì)，用液氮和攪拌珠研磨法將藍(lán)靛果殘?jiān)鬯槌?0目粉末，按質(zhì)量百
分比將91 95%藍(lán)靛果粉末和5~9%水混合均勻制成固態(tài)生物反應(yīng)底物，然后 添加固態(tài)反應(yīng)底物質(zhì)量百分比1.0~1.5%的綠色木霉，在固態(tài)生物反應(yīng)底物的pH值為5.0 6.5，溫度為28 35。C，發(fā)酵時(shí)間為24 48小時(shí)，每10 15分鐘通 氣時(shí)間20 30秒，通氣壓力1.0 1.5Mpa的條件下進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，再以料液比 為lg: 20 mL lg: 40mL的比例加入質(zhì)量濃度為70%的乙醇水溶液，用功率 300 400W的超聲波萃取25 35分鐘，得到藍(lán)靛果一乙醇水溶液，最后用離 心機(jī)以3000~5000r/min的速度離心藍(lán)靛果一 乙醇水溶液5 10min，倒出上層提 取液，以料液比為lg: 20 mL lg: 40mL的比例將質(zhì)量濃度為70%的乙醇水 溶液加入到下層沉淀中繼續(xù)進(jìn)行超聲提取和離心分離，連續(xù)提取3次，除去下 層沉淀，合并上層提取液并濃縮至花色苷濃度為8~10g/L，得到藍(lán)靛果花色苷 濃縮液；二、藍(lán)靛果花色苷的純化用X-5大孔樹脂層析柱對藍(lán)靛果花色苷濃 縮液進(jìn)行吸附，然后用解吸液解吸得到純化的藍(lán)靛果花色苷提取液其中，花色 苷濃縮液的流速為1.0ml/min，解吸液流速為1.0~2.0ml/min，解吸液為質(zhì)量百 分比濃度為60% 80%的乙醇水溶液；三、濃縮將純化的藍(lán)靛果花色苷提取 液采用真空刮板式薄膜濃縮，濃縮條件為溫度30~40°C，真空度為0.1~0.15 mbar，得到藍(lán)靛果花色苷粘稠液；四、干燥及粉碎用真空凍干機(jī)在 0.4 0.7mbar、溫度一40 5(TC條件下將藍(lán)靛果花色苷粘稠液真空凍干24小時(shí) 并粉碎成60目粉末，即得藍(lán)靛果花色苷粉末。
本具體實(shí)施方式
中藍(lán)靛果花色苷的提取率為70 80。％，藍(lán)靛果花色苷中 花色苷的含量為40 50%。所得藍(lán)靛果花色苷粉末的色價(jià)高，品質(zhì)好。
具體實(shí)施方式
七本具體實(shí)施方式
與具體實(shí)施方式
六不同的是步驟一中 超聲波的功率為350W，超聲時(shí)間為30分鐘。其它與具體實(shí)施方式
六相同。
本具體實(shí)施方式
中藍(lán)靛果花色苷的提取率為70 80%，藍(lán)靛果花色苷中 花色苷的含量為40 50%。所得藍(lán)靛果花色苷粉末的色價(jià)高，品質(zhì)好。
具體實(shí)施方式
八本具體實(shí)施方式
與具體實(shí)施方式
六不同的是步驟一中
固態(tài)發(fā)酵的工藝條件為固態(tài)生物反應(yīng)底物的pH值為6.0，溫度為3(TC，發(fā) 酵時(shí)間為36小時(shí)，每15分鐘通氣時(shí)間30秒，通氣壓力1.0-1.5Mpa。其它與具體實(shí)施方式
六相同。
本具體實(shí)施方式
中藍(lán)靛果花色苷的提取率為70 80%，藍(lán)靛果花色苷中 花色苷的含量為40 50%。所得藍(lán)靛果花色苷粉末的色價(jià)高，品質(zhì)好。
權(quán)利要求
1、一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝，其特征在于固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝的步驟如下一、藍(lán)靛果花色苷的提取先將藍(lán)靛果果渣篩選，除去腐爛及雜質(zhì)，用液氮和攪拌珠研磨法將藍(lán)靛果殘?jiān)鬯槌?0目粉末，按質(zhì)量百分比將91～95％藍(lán)靛果粉末和5～9％水混合均勻制成固態(tài)生物反應(yīng)底物，然后添加固態(tài)反應(yīng)底物質(zhì)量百分比1.0～1.5％的綠色木霉進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，再以料液比為1g20mL～1g40mL的比例加入質(zhì)量濃度為70％的乙醇水溶液，用超聲波萃取25～35分鐘，得到藍(lán)靛果—乙醇水溶液，最后用離心機(jī)以3000～5000r/min的速度離心藍(lán)靛果—乙醇水溶液5～10min，倒出上層提取液，以料液比為1g20mL～1g40mL的比例將質(zhì)量濃度為70％的乙醇水溶液加入到下層沉淀中繼續(xù)進(jìn)行超聲提取和離心分離，連續(xù)提取3次，除去下層沉淀，合并上層提取液并濃縮至花色苷濃度為8～10g/L，得到藍(lán)靛果花色苷濃縮液；二、藍(lán)靛果花色苷的純化用X-5大孔樹脂層析柱對藍(lán)靛果花色苷濃縮液進(jìn)行吸附，然后用解吸液解吸得到純化的藍(lán)靛果花色苷提取液；三、濃縮將純化后的藍(lán)靛果花色苷提取液采用真空刮板式薄膜濃縮，濃縮條件為溫度30～40℃，真空度為0.1～0.15mbar，得到藍(lán)靛果花色苷粘稠液；四、干燥及粉碎用真空凍干機(jī)在0.4～0.7mbar、溫度—40～50℃條件下將藍(lán)靛果花色苷粘稠液真空凍干24小時(shí)并粉碎成60目粉末，即得藍(lán)靛果花色苷粉末。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝， 其特征在于步驟一中固態(tài)發(fā)酵的工藝條件為固態(tài)生物反應(yīng)底物的pH值為 5.0~6.5，溫度為28 35。C，發(fā)酵時(shí)間為24~48小時(shí)，每10 15分鐘通氣時(shí)間 20 30秒，通氣壓力1.0 1.5Mpa。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝， 其特征在于步驟一中超聲波的功率為300 400W。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝， 其特征在于步驟二中花色苷濃縮液的流速為1.0ml/min，解吸液流速為 1.0 2.0ml/min。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝， 其特征在于步驟二中解吸液為質(zhì)量百分比濃度為60% 80%的乙醇水溶液。
全文摘要
一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝，涉及一種天然花色苷制備方法。本發(fā)明解決了現(xiàn)有化學(xué)法提取天然花色苷提取率低、純度不高、生產(chǎn)工藝繁瑣的問題。一種固態(tài)生物反應(yīng)法制備藍(lán)靛果花色苷的工藝的步驟為先固定化生物反應(yīng)法提取藍(lán)靛果花色苷，然后用大孔樹脂進(jìn)行純化，再用真空刮板式薄膜濃縮純化液，最后真空干燥粉碎，即得藍(lán)靛果花色苷粉末。本發(fā)明制備的藍(lán)靛果花色苷由藥食兩用的植物藍(lán)靛果提取物組成，對人體無副作用，有良好的抗體內(nèi)氧化效果，具有抗衰老和抗輻射作用，可應(yīng)用于食品、保健品、化妝品、醫(yī)藥、生物化工等領(lǐng)域。
文檔編號C12R1/885GK101434972SQ200810209669
公開日2009年5月20日 申請日期2008年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月12日
發(fā)明者巖 焦, 王振宇, 馬鳳鳴 申請人:東北林業(yè)大學(xué)