專利名稱：用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖水體技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體 的微生物制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
"養(yǎng)魚先養(yǎng)水"，水質(zhì)好壞是水產(chǎn)養(yǎng)殖成敗的關(guān)鍵。然而隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖集 約化、規(guī)?；a(chǎn)的發(fā)展，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)面臨著一系列嚴重的問題水質(zhì)惡化、 爆發(fā)性疾病頻發(fā)、有害藻類繁生、化學(xué)藥物濫用、水產(chǎn)品安全性下降等等。其 中水質(zhì)惡化是所有問題中最根本的問題。正是由于水質(zhì)的惡化，引起了水產(chǎn)動 物疾病的頻繁爆發(fā)，進而加劇抗生素等化學(xué)藥物濫用，最終導(dǎo)致水產(chǎn)品安全性下降。如2004年對蝦中磺胺等化學(xué)藥物的殘留問題，美國和日本通過綠色技術(shù)壁壘同時限制我國對蝦產(chǎn)品的出口，致使對蝦價格直線下降，給蝦農(nóng)造成了極 大的經(jīng)濟損失，水產(chǎn)品的安全性問題已成為影響我國水產(chǎn)品質(zhì)量、效益與市場競爭力的關(guān)鍵問題！因此，如何改善和修復(fù)水質(zhì)，進而提高水產(chǎn)品品質(zhì)和養(yǎng)殖 效益，是當前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迫切需要解決的問題。但在一個封閉式的水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中，傳統(tǒng)的物理、化學(xué)或藥物等方法已無 法從根本上控制和消除水質(zhì)污染，恢復(fù)一個失衡水生態(tài)最根本最徹底的方法是 采用生物修復(fù)方法，而在水體的生物修復(fù)過程中，微生物是最基本、最關(guān)鍵、 最活躍的要素，利用微生物高效的降解、轉(zhuǎn)化能力來消除污染水體中的有機物， 凈化底質(zhì)，去除氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫等有毒物質(zhì)，抑制和殺滅致病微生物 和有害藻類，降低發(fā)病率，減少化學(xué)藥物污染，來改善水質(zhì)和修復(fù)養(yǎng)殖水體，也是當前的發(fā)展趨勢。目前市場上用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制劑產(chǎn)品及現(xiàn)有公開的相關(guān)技 術(shù)文獻中，存在著以下問題 一是產(chǎn)品的有效活菌數(shù)偏低，導(dǎo)致使用時用量偏 大，使用成本過高；二是基本上都采用液體發(fā)酵的方法制造，發(fā)酵產(chǎn)品均呈液 體狀，這在產(chǎn)品保藏上存在容易染菌的問題比較難解決，在運輸過程中也不太 方便；三是由于原料和生產(chǎn)方式等原因，致使產(chǎn)品價格較高。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于，針對現(xiàn)有同類菌劑技術(shù)所存在的有效活菌數(shù)偏低，使用 量偏大；液體狀產(chǎn)品保藏容易染菌、運輸也不方便；由于原料和生產(chǎn)方式等原 因致使成本過高、產(chǎn)品價格較高等缺陷，提出一種能快速分解有機物、高效降 解氨氮、亞硝酸鹽、抑制有害藻類生長，達到凈化修復(fù)水質(zhì)、提高水產(chǎn)養(yǎng)殖效 益目的的微生物制劑；本發(fā)明的另一 目的是提供一種該微生物制劑的制備方法。本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)。一種枯草芽孢桿菌(Bac/〃wswto'to) BJ菌株該菌株于2001年從浙江杭州、金華、紹興、余姚、蕭山、海寧等地的不同 水產(chǎn)養(yǎng)殖池塘中采集底泥和水樣，利用不同的富集培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)基從中定 向富集分離出各類微生物菌株共71株，并進行了菌株純化；接著以COD去除率 為指標，從分離得到的菌株中篩選到降COD效果較好的菌株8株；在此基礎(chǔ)上 又進行了氨氮、亞硝酸鹽的降解實驗，最終確定一株能同時高效降COD、氨氮、 亞硝酸鹽的產(chǎn)芽孢菌株為目標菌株，編號為Bj;然后根據(jù)菌株的形態(tài)特征、培 養(yǎng)特征和生理生化特征，參照伯杰氏細菌鑒定手冊，對篩選分離得到的目標菌 株進行鑒定，初步確認為屬枯草芽孢桿菌，該菌株取樣分離自浙江海寧的一個南美白對蝦養(yǎng)殖場。保藏菌株的形態(tài)、培養(yǎng)、生理、生化等特征枯草芽孢桿菌Bj菌株屬枯草芽孢桿菌(5ad〃ww&///s);在肉湯液體培 養(yǎng)基中生長良好，菌體大小在1.5 2.0umX0.6 1.0，細胞桿狀，有芽孢；在肉 湯瓊脂平板上培養(yǎng)時菌落圓形，邊緣整齊，規(guī)則，灰白色，表面有光澤。該菌株已于2007年12月07日，在北京，中國微生物菌種保藏管理委員會 普通微生物中心保藏，保藏編號CGMCC No. 2288。用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制劑，該制劑可按以下方法獲得以馬鈴薯 蔗糖固體培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基；以馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基為搖瓶菌種培養(yǎng)基；按 重量淀粉1一3%，酵母膏O. 5—1%，蛋白胨1一3%，牛肉膏0.5—1.5%，水補足至 100%配制成種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基；按重量麩皮80—90 %，礱糠3—15%，葡萄糖2 一5 %，膨潤土 l一5 %， K2HP04 1-3 %， D生物素0.01—0. 10 %，加等量水后配 制成固體培養(yǎng)基；以保藏編號為CGMCCNo.2288的枯草芽孢桿菌(fi腦7/w ^to'fc) BJ菌株為菌種，經(jīng)各級發(fā)酵后制備而成。用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑的制備方法，按以下步驟進行-(1) 各級培養(yǎng)基的配制，其中a) 斜面培養(yǎng)基馬鈴薯蔗糖固體培養(yǎng)基，備用；b) 搖瓶菌種培養(yǎng)基馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基，備用；c) 種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基按重量淀粉1一3%，酵母膏0.5—1%,蛋白胨1—3%， 牛肉膏0. 5—1. 5%，水補足至100%;d) 固體培養(yǎng)基麩皮80—90 %，礱糠3—15 %，葡萄糖2—5 %，膨潤土 1—5 %， K2HP04 1—3 %， D生物素0.01—0. 10 %，加按料水比1 : 1的水分；(2) 斜面菌種的培養(yǎng)將保藏菌種CGMCC No. 2288枯草芽孢桿菌BJ菌株接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上，在28—37。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18—24小時，取 出后直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(3) 搖瓶菌種擴增在無菌操作下，取一環(huán)斜面菌種接入60ml步驟(1) 搖瓶菌種培養(yǎng)基中，于28—37。C， 110—220轉(zhuǎn)/分的搖床中，培養(yǎng)18_24小時， 取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4) 種子罐發(fā)酵將步驟(1)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基放入種子罐中，在種子罐 內(nèi)溫度121。C保持30分鐘后，保壓至0. 02_0. 18MPa之間，進行蒸汽高溫滅菌后 冷卻至28—37°C;在火焰保護下迅速通過接種閥門向種子罐內(nèi)接入步驟(3)搖 瓶菌種，接種量為5—10%;開動攪拌機在轉(zhuǎn)速110—220轉(zhuǎn)/分，溫度28—37。C， 通氣量4mVh，罐壓0. 02—0. l腦Pa， pH自然，培養(yǎng)18—24小時，備用；(5) 批量產(chǎn)品的制備將步驟(1)固體培養(yǎng)基滅菌并冷卻；按制備菌劑重量2—3%的比例稱取歩驟(4)種子罐液體菌種，按菌種與水1 : 5比例放入無菌 水中活化1小時后接入固體培養(yǎng)基中、拌勻；移入培養(yǎng)間，關(guān)閉門窗，料厚1. 5-2 厘米，前期室溫控制在28"—3(TC，待料溫上升至4(TC以上后，打開門窗、地 上灑水或利用電風扇把料溫控制在4(TC至50°C，培養(yǎng)72小時后放入45°C_50 'C的烘房中烘干、粉碎、裝袋、封口后，即成用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制 劑。凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑的應(yīng)用方法以100—300克/畝.每米水深的用量使用，按照水面的大小和水深計算好微 生物水質(zhì)凈化劑的總用量，稱好倒入大桶，并加入20倍左右的干凈水(海水、 淡水均可)進行攪拌，養(yǎng)殖池內(nèi)放入增氧泵開啟1小時后，進行全池均勻潑撒； 每隔7—IO天使用一次；大雨過后天氣轉(zhuǎn)晴馬上補用一次，用量可增至500克/ 畝.每米水深；最好在晴天上午十點左右使用；陰雨天氣盡量不使用；使用本微生物制劑前后3—5天避免使用消毒劑、殺菌劑及抗生素類藥物。 本發(fā)明的有益效果1、 本發(fā)明采用了液體和固體發(fā)酵相結(jié)合的發(fā)酵模式，以保藏的枯草芽孢桿 菌BJ菌株為培養(yǎng)菌種，并通過對該菌的習(xí)性研究與各因素的影響試驗，確定適 合的C、 N比，生長溫度、接種量和培養(yǎng)基的配方，輔以最適宜的制備工藝與方 法，所制菌劑產(chǎn)品具較好分解有機物、高效降解氨氮、亞硝酸鹽、抑制有害藻 類的生長等性能，結(jié)合其它輔助劑(如紅糖、乙醇等)的使用，采用有效的應(yīng) 用方法投放到水產(chǎn)養(yǎng)殖水體中，達到凈化修復(fù)水質(zhì)、提高養(yǎng)殖效益、保持養(yǎng)殖 池微生態(tài)系平衡的目的；2、 經(jīng)本產(chǎn)品對南美白對蝦養(yǎng)殖應(yīng)用試驗結(jié)果表明整個養(yǎng)殖期水體的透明度基本上維持在30—40厘米，pH值穩(wěn)定在8.02-8.60之間；氨氮在使用微生物 凈水劑5_7天之后就降至安全水平，并能一直維持在安全水平線以下；亞硝酸鹽在一般情況下均能維持在安全濃度之內(nèi)(見試驗例4);同時使用微生物水質(zhì)凈化劑之后，化學(xué)藥劑使用量可減少一半以上；使用微生物水質(zhì)凈化劑可大幅 度提高養(yǎng)殖成功率，大大增強了養(yǎng)蝦業(yè)的抗風險能力；3、 本發(fā)明產(chǎn)品所用原料豐富，價格低廉， 一噸產(chǎn)品價格在5000元上下，較 進口產(chǎn)品便宜一半左右；同時產(chǎn)品菌數(shù)含量較高， 一般都在300億個/克以上， 而其它產(chǎn)品的菌數(shù)一般都在幾億到幾十億個/克左右，產(chǎn)品的質(zhì)量也較穩(wěn)定，有 效保質(zhì)期一年半以上。4、 本發(fā)明菌劑產(chǎn)品為粉狀，包裝成本低，運輸、使用較為安全。說明書附1.微生物制劑對對蝦池水體亞硝酸鹽含量影響變化曲線2.微生物制劑對對蝦池水體氨氮含量影響變化曲線圖 圖3.微生物制劑對對蝦池水體H2S含量影響變化曲線4.微生物制劑對對蝦池水體COD含量影響變化曲線圖 圖5.微生物制劑對對蝦池水體pH值影響變化曲線圖具體實施方式
通過以下實施例對本發(fā)明作更詳細說明，但以下實施例僅是說明性的，本 發(fā)明并不受這些實施例的限制。對所涉材料的說明 葡萄糖分析純，國產(chǎn)； 蛋白胨生化制劑，國產(chǎn)； K2HP04:分析純，國產(chǎn)； 牛肉膏生化制劑，國產(chǎn)； D生物素生化制劑，國產(chǎn)； 實施例h (本發(fā)明產(chǎn)品的配方與制備方法1)一種用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制劑，按以下方法步驟制備(1)各級培養(yǎng)基的配制，其中a) PDA斜面固體培養(yǎng)基馬鈴薯200g、葡萄糖2g、瓊脂2g、水1升，備用;b) 搖瓶液體培養(yǎng)基馬鈴薯200g、葡萄糖2g、水1升，備用；c) 種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基淀粉12克、酵母膏7克、蛋白胨28克、牛肉膏8 克、水945克，備用；d) 固體培養(yǎng)基的配制麩皮800克、礱糠85克、葡萄糖50克、膨潤土 49. 5克、K2HP04 15克、D生物素O. 5克、水1000克，備用；(2) 斜面菌種的培養(yǎng)將保藏編號CGMCC No. 2288枯草芽孢桿菌BJ菌株 接種于步驟(1) PDA斜面固體培養(yǎng)基上于28"C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，取出直 接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(3) 搖瓶液體菌種的制備在無菌操作下，取一環(huán)芽孢桿菌菌株BJ斜面菌 種接入60ml步驟(1)搖瓶液體菌種培養(yǎng)基中，于28"C，轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分的搖床 中，培養(yǎng)24小時，取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4) 種子罐發(fā)酵配制步驟(1)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基并放入種子罐中，和相 關(guān)管道一并在種子罐內(nèi)溫度12rC保持30分鐘后停止，并保壓至0. lMPa之間進 行蒸汽高溫滅菌后，冷卻到3(TC;在火焰保護下迅速通過接種閥門向種子罐內(nèi) 接入經(jīng)檢驗培養(yǎng)合格的步驟(3)搖瓶液體種子菌種，接種量為6%;開動攪拌機 轉(zhuǎn)速110轉(zhuǎn)/分，溫度保持在30。C，通氣量4m7h，罐壓O. lMPa， pH自然，培養(yǎng) 時間為24小時；(5) 批量產(chǎn)品的制備按步驟(1)中固體培養(yǎng)基的相應(yīng)物料配比拌勻、滅 菌至冷卻；按制備菌劑重量的2—3%移取步驟(4)的液體菌種，按菌種與水l:5放入無菌水中活化菌種1小時后接入固體培養(yǎng)基中，拌勻；放入培養(yǎng)間，關(guān) 閉門窗，料厚1.5-2厘米，前期室溫控制在28。C一3(TC，待料溫上升至40。C以 上后，打開門窗、地上灑水或利用電風扇把料溫控制在4(rC至5(TC，培養(yǎng)72小 時后放入45'C—5(TC的烘房中烘干，粉碎，裝袋、封口后制成水產(chǎn)養(yǎng)殖水體凈 化用微生物制劑。實施例2:(本發(fā)明產(chǎn)品的配方與制備方法2)本實施例種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基的配制淀粉20克、酵母膏10克、蛋白胨15 克、牛肉膏15克、水940克，備用；固體培養(yǎng)基的配制麩皮820克、礱糠130克、葡萄糖25克、膨潤土14. 9克、K2HP04 10克、D生物素O. l克、水1000克，備用； 其余制備方法均同于實施例l。實施例3:(本發(fā)明產(chǎn)品的配方與制備方法3)本實施例種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基的配制淀粉28克、酵母膏5克、蛋白胨11 克、牛肉膏5克、水951克，備用；固體培養(yǎng)基的配制麩皮900克、礱糠30克、葡萄糖20克、膨潤土 19克、K2HP04 30克、D生物素l克、水1000克，備用； 其余制備方法均同于實施例1。試驗例4:(本發(fā)明產(chǎn)品在南美白對蝦養(yǎng)殖上的應(yīng)用效果試驗)為了檢驗凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑在南美白對蝦養(yǎng)殖上的實際應(yīng)用效 果，明確對氨氮、亞硝酸鹽等有毒物質(zhì)的降解效果，進行了本試驗。1材料與管理 1. l材料1. 1. 1凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑為實施例1所制產(chǎn)品菌數(shù)為3.76X1010cfu/g;1. 1. 2. 1凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑的使用與管理2006年5月30日下午15: 30，以300克/畝.米水深的用量稱取凈化水產(chǎn) 養(yǎng)殖水體微生物制劑，用20倍的池水稀釋、活化1個小時后均勻潑入池中；此 后，間隔7天再使用一次，使用量及方法同上。 1. 1. 2. 2池塘系統(tǒng)和養(yǎng)殖管理養(yǎng)殖池的進水用水泵直接從邊上的河道打入，并在進水渠與奸池進口處安裝100目的過濾網(wǎng)，出水時用水泵直接從養(yǎng)殖場往外進行打水；奸池為長方形泥池，面積為10畝，最深水面1.2米，最淺水面0.8米；增氧系統(tǒng)主要是由增氧機和電力系統(tǒng)組成，每池設(shè)置2臺水浮式增氧機，不定時打開為水池增氧， 改善水質(zhì)。1. 2方法1. 2. 2. 1亞硝酸鹽測定可見分光光度法(比色法) 1. 2. 2. 2氨氮測定納氏試劑比色法1. 2. 2. 3 C0D含量測定COD分析儀進行測定 1. 2. 2. 4 pH測定便攜式PH計測定1. 2. 2. 5養(yǎng)殖場水樣取樣用取水器在池塘中間水面(離岸約20米處)定 點采集距水面0.5米處水樣500毫升左右，裝滿至瓶口，塞緊，避光保存；所 采水樣在2小時內(nèi)檢測分析。2. 試驗時間與地點試驗于2006年5月30日到2006年6月9日于浙江海寧市長山河水產(chǎn)生態(tài) 養(yǎng)殖場進行。挑選2個鄰近的、水質(zhì)及面積相當?shù)哪厦腊讓ξr養(yǎng)殖池進行實驗， 編號為1號、2號位池(1號池為對照池，2號為處理池)。2006年5月20日 放苗，放苗前先用次氯酸鈉、生石灰對養(yǎng)殖池進行消毒。3. 結(jié)果與討論1.凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑對亞硝酸鹽的降解效果 近幾年我國南美白對蝦淡水養(yǎng)殖實踐證明，亞硝酸鹽中毒一直是養(yǎng)殖過程 中碰到的比較棘手的問題，往往給養(yǎng)殖戶帶來比較慘重的損失；亞硝酸鹽含量 較低，表現(xiàn)為慢性破壞南美白對蝦的免疫系統(tǒng)，從而容易誘發(fā)其他疾病，生長 效率下降；含量突然升高會直接導(dǎo)致南美白對蟲下的死亡。因此，亞硝酸鹽的濃 度在很大程度上能反映養(yǎng)殖環(huán)境的健康狀況；是否能有效快速地降解養(yǎng)殖水體中的亞硝酸鹽也是檢驗一種微生物制劑凈水作用的一個衡量標準。從

圖1中我們可以看出，投放了枯草芽孢桿菌BJ菌株制劑的2號池中亞硝酸鹽濃度一直呈下降趨勢(從0.0753mg/L下降到0.0299mg/L)，而同期對照池 中亞硝酸鹽濃度整體呈上升趨勢(從0. 0731mg/L上升到0. 0783mg/L.)。2、 凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑對氨氮的降解效果從圖2中我們可以看出，對照池在試驗期間氨氮含量總體上是呈一種上升 趨勢，而同期處理池中的氨氮含量呈下降趨勢，特別是從第三到第五天氨氮含 量由0. 159下降到了 0. 0828mg/L，效果極為顯著。3、 凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑對硫化氫的降解效果硫化物特別是H2S對水生生物有強烈的毒性，含量高時可直接造成南美白 對蝦的死亡。因此，H2S也是衡量蝦池水質(zhì)的主要指標。從圖3可以看出，兩池的H2S濃度都在規(guī)定范圍之內(nèi)，對照池硫化氫濃度在 0.0415-0.0338mg/l的范圍內(nèi)波動，而處理池硫化氫濃度從5月30日的 0. 0396mg/l降到6月9曰的0. 0119mg/l，下降幅度較大，降解效果明顯。4、 凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑對COD的降解效果在南美白對蝦的養(yǎng)成過程中，由于養(yǎng)殖密度很高，長期大量投喂飼料，使 很多剩余殘餌、對蝦糞便等沉積到池底，使有機質(zhì)含量偏高，從而造成對蟲下池 中COD濃度過高，溶氧降低。而在COD濃度高的蝦池中，對蟲下死亡率顯著提高。 因此，COD值的高低是衡量水質(zhì)狀況和對蝦健康狀況的重要指標之一。從實驗結(jié)果來看，由于兩池起始的COD都處于較低水平， 一直比較平穩(wěn)， 因此處理效果對比并不明顯。但是從圖4可以很明顯的看出，投放了枯草芽孢 桿菌BJ菌株制劑的2號池，COD值從投放前的9. 504下降到試驗結(jié)束時的8. 222。 而對照的COD值一般都高于處理池，且呈上升趨勢。5. 凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體微生物制劑對穩(wěn)定PH值的效果pH值是反映水環(huán)境生態(tài)平衡的一個綜合指標，在人工養(yǎng)殖過程中，pH值最 好控制在7. 8-8. 6之間。PH值升高至9以上時，則會使水中氨氮含量比例增高。 PH值太低，則會加大貼的毒性造成南美白對蝦的死亡。從圖5可以看出，1號池和2號池的pH值變化曲線基本比較穩(wěn)定，均在警 戒范圍之內(nèi)，但1號池在6月3日時pH值達到了8.64。4.小結(jié)4. 1枯草芽孢桿菌菌株BJ制劑施入南美白對蝦養(yǎng)殖池后，能夠快速有效地降 解養(yǎng)殖水體中的亞硝酸鹽、氨氮及硫化氫的含量，減少此類有害物質(zhì)對南美白 對蝦的毒害作用；4. 2施用枯草芽孢桿菌菌株BJ制劑后，能維持化學(xué)耗氧量C0D值在較低水平 上；pH值維持在適宜對蝦生長的安全水平；4. 3從整個試驗過程來看，施用枯草芽孢桿菌菌株BJ制劑能夠達到一定的凈 化水質(zhì)，修復(fù)水體，優(yōu)化養(yǎng)殖環(huán)境，保持養(yǎng)殖池安全生產(chǎn)的作用。
權(quán)利要求
1、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)BJ菌株，其菌株保藏號為CGMCC NO.2288。
2、 用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制劑，其特征在于該制劑可按以下方法 獲得以馬鈴薯蔗糖固體培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基；以馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基為搖瓶 菌種培養(yǎng)基；按重量淀粉1一3%，酵母膏0.5—1%，蛋白胨1一3%，牛肉膏0.5 一1.5%，水補足至100%配制成種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基；按重量麩皮80—90 %，礱糠 3—15 %，葡萄糖2—5 %，膨潤土 1—5 %， K2HP04 1-3 %， D生物素0. Ol—O. 10 %，加等量水后配制成固體培養(yǎng)基；以保藏編號為CGMCC No.2288的枯草芽孢 桿菌(6腦'〃^^^7/5) BJ菌株為菌種，經(jīng)各級發(fā)酵后制備而成。
3、 一種制備權(quán)利要求2所述微生物制劑的方法，其特征在于按以下步驟進行(1) 各級培養(yǎng)基的配制，其中a) 斜面培養(yǎng)基馬鈴薯蔗糖固體培養(yǎng)基，備用；b) 搖瓶菌種培養(yǎng)基馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基，備用；C)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基按重量淀粉1—3%，酵母膏0.5—1%，蛋白胨1—3%，牛肉膏0. 5—1. 5%，水補足至100%;d)固體培養(yǎng)基麩皮80—90 %，礱糠3—15 %，葡萄糖2—5 %，膨潤土 1—5 %， K2HP04 1—3 %， D生物素0.01—0. 10 %，加按料水比1 : 1的水分；(2) 斜面菌種的培養(yǎng)將保藏菌種CGMCC No. 2288枯草芽孢桿菌BJ菌株 接種于步驟(1)斜面培養(yǎng)基上，在28—37。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18—24小時，取 出后直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(3) 搖瓶菌種擴增在無菌操作下，取一環(huán)斜面菌種接入60ml步驟(1) 搖瓶菌種培養(yǎng)基中，于28—37。C， 110—220轉(zhuǎn)/分的搖床中，培養(yǎng)18—24小時， 取出直接應(yīng)用或放入冰箱中冷藏，備用；(4) 種子罐發(fā)酵將步驟(1)種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基放入種子罐中，在種子罐內(nèi)溫度12rC保持30分鐘后，保壓至0. 02—0. 18MPa之間，進行蒸汽高溫滅菌后 冷卻至28—37"C;在火焰保護下迅速通過接種閥門向種子罐內(nèi)接入步驟(3)搖 瓶菌種，接種量為5—10%;開動攪拌機在轉(zhuǎn)速110_220轉(zhuǎn)/分，溫度28—37°C， 通氣量4m7h，罐壓0. 02—0. 18MPa， pH自然，培養(yǎng)18_24小時，備用；(5) 批量產(chǎn)品的制備將步驟(1)固體培養(yǎng)基滅菌并冷卻；按制備菌劑重量2—3%的比例稱取步驟(4)種子罐液體菌種，按菌種與水1 : 5比例放入無菌 水中活化1小時后接入固體培養(yǎng)基中、拌勻；移入培養(yǎng)間，關(guān)閉門窗，料厚L 5-2 厘米，前期室溫控制在28°C—30°C，待料溫上升至4(TC以上后，打開門窗、地 上灑水或利用電風扇把料溫控制在4CTC至50°C，培養(yǎng)72小時后放入45°C—50 "C的烘房中烘干、粉碎、裝袋、封口后，即成用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制 劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了用于凈化水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的微生物制劑及其制備方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的技術(shù)領(lǐng)域。該制劑按重量麩皮80-90％，礱糠3-15％，葡萄糖2-5％，膨潤土1-5％，K₂HPO₄ 1-3％，D生物素0.01-0.10％，加等量水后配制成固體培養(yǎng)基，以保藏編號為CGMCC No.2288的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)BJ菌株為菌種，經(jīng)各級發(fā)酵后制備而成。該制劑價格低廉，菌數(shù)含量高，保質(zhì)期一年半以上，應(yīng)用后養(yǎng)殖期水體pH值穩(wěn)定在8.02-8.60之間；氨氮在5-7天之后就降至安全水平；亞硝酸鹽能維持在安全濃度之內(nèi)；能大幅度提高養(yǎng)殖成功率；可在水產(chǎn)養(yǎng)殖場推廣使用。
文檔編號C12N1/20GK101215540SQ20081005910
公開日2008年7月9日 申請日期2008年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月14日
發(fā)明者吳逸飛, 姚曉紅, 李浙烽, 湯江武, 新 王 申請人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院