專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)l-苯丙氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種苯丙氨酸的制備方法，尤其涉及一種利用枯草芽孢桿菌(^^7^s發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，屬于氨基酸發(fā)酵制備領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：L-苯丙氨酸又名L-苯基-a-氨基丙酸，英文名稱(chēng)L-Phenylalanine，分子式為C9HuN02，分子量為165.19，白色結(jié)晶粉末，略有特殊氣味，味苦，熔點(diǎn)283'C(分解)，水中溶解度為3%，微溶于乙醇，不溶于醚。苯丙氨酸有外消旋DL-型、L-型和D-型，其中最重要的是L-苯丙氨酸，在自然界中主要存在于卵、乳和動(dòng)物蛋白中，含量5%-6%，植物性蛋白質(zhì)中約含1%。L-苯丙氨酸是人體所需8種必需氨基酸之一，人和動(dòng)物自身不能合成，必須從外界攝取，也是生物體內(nèi)合成酪氨酸的重要原料，在人體的代謝過(guò)程中具有重要作用。精制藥典級(jí)L-苯丙氨酸可用于配制復(fù)合氨基酸輸液，還可用于氨基酸類(lèi)抗癌藥物、營(yíng)養(yǎng)保健品開(kāi)發(fā)應(yīng)用，目前我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)每年需消耗L-苯丙氨酸500噸左右。L-苯丙氨酸最主要的一個(gè)用途是合成甜味劑阿斯巴甜(Aspartame,簡(jiǎn)稱(chēng)APM)。阿斯巴甜又稱(chēng)天冬甜素、蛋白糖，化學(xué)名為N-L-a-天冬氨酰基-L-苯丙氨酸-l-甲脂，是一種由L-天門(mén)冬氨酸與L-苯丙氨酸(人體必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì))合成的二肽，可完全被人體吸收代謝，無(wú)毒無(wú)害，安全可靠，口味純正清涼爽口酷似蔗糖，但甜度為蔗糖的200倍，熱量?jī)H為蔗糖1/200，常食不產(chǎn)生齬齒，不影響血糖，不引起肥胖、高血壓、冠心病。阿斯巴甜進(jìn)入人體后快速分解成天門(mén)冬氨酸和苯丙氨酸，不會(huì)積存于人體組織中，因此被世界衛(wèi)生組織(WHO)和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)確定為A(1)級(jí)甜味劑，已經(jīng)在世界上130多個(gè)國(guó)家地區(qū)批準(zhǔn)使用，廣泛添加在各種食品、副食品及各種軟硬飲料中，目前使用阿斯巴甜的品種已達(dá)4000余種。阿斯巴甜國(guó)際市場(chǎng)需求量以年均15%20%的速度增長(zhǎng)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他人工甜味劑年均5%的增長(zhǎng)速度。當(dāng)前，全球L-苯丙氨酸的需求量在1.8萬(wàn)t以上，主要生產(chǎn)企業(yè)有美國(guó)孟山都、日本味之素、韓國(guó)大象公司等。美國(guó)是世界上L-苯丙氨酸的主要消費(fèi)國(guó)，消費(fèi)量約占世界需求量的一半，其次是西歐和日本。西歐的L-苯丙氨酸主要供Euro-Aspartame公司生產(chǎn)阿斯巴甜。2005年我國(guó)L-苯丙氨酸的生產(chǎn)能力約為400t/a，主要企業(yè)有浙江亞美生物化工股份有限公司、南昌化工有限責(zé)任公司、安徽科苑股份有限公司、平頂山易元制藥有限公司、新疆伊寧復(fù)祥生化公司、江蘇武進(jìn)市牛塘化工廠等。2005年我國(guó)L-苯丙氨酸的需求量約為3500t，其中醫(yī)藥行業(yè)約需500t，合成阿斯巴甜約需3000t，絕大部分依賴(lài)進(jìn)□。L-苯丙氨酸工業(yè)化生產(chǎn)工藝有兩種酶法和直接發(fā)酵法。酶法工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，但酶活性易受影響，需要特殊的氨基酸做氨基供體，并需要添加前體化學(xué)物，生產(chǎn)成本較高，這些因素限制了產(chǎn)酸率的提高和大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，國(guó)外從20世紀(jì)80年代中期逐步淘汰了酶法生產(chǎn)，而改用直接發(fā)酵法。直接發(fā)酵法就是用特殊微生物發(fā)酵葡萄糖等碳源，在微生物體內(nèi)代謝合成L-苯丙氨酸并分泌到發(fā)酵液中。復(fù)旦大學(xué)采用誘變育種和基因工程技術(shù)相結(jié)合的方法選育獲得了高產(chǎn)苯丙氨酸菌種；中國(guó)科學(xué)院成都生化所研究出了用紅酵母轉(zhuǎn)化肉桂酸制備L-苯丙氨酸的工藝；華東理工大學(xué)研究了直接發(fā)酵法生產(chǎn)工藝；南京工業(yè)大學(xué)開(kāi)發(fā)了海因酶法工藝。直接發(fā)酵法省略了酶法生產(chǎn)中的酶促反應(yīng)工藝，節(jié)省設(shè)備和原料投資，便于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。然而，經(jīng)檢索在現(xiàn)有的直接發(fā)酵法制備L-苯丙氨酸的方法中，目前國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵家禽羽毛大規(guī)模生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法。
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問(wèn)題是提供一種利用枯草芽孢桿菌(feci'"^幼6""s)發(fā)酵家禽羽毛大規(guī)模生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法。概括地說(shuō)，本發(fā)明制備L-苯丙氨酸的方法是利用枯草芽孢桿菌(few77wYYW-1發(fā)酵家禽羽毛，通過(guò)一系列代謝過(guò)程，合成L-苯丙氨酸，然后通過(guò)732銨型樹(shù)脂吸附和洗脫而制得L-苯丙氨酸。具體地說(shuō)，本發(fā)明利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，步驟順序如下(1)菌種選擇選用枯草芽孢桿菌(Aao7A^仰6z^7A)YYW-1CGMCCNO.2396;(2)種子培養(yǎng)將步驟(1)所述菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接12環(huán)于3040mL液體羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基中，354(TC震蕩培養(yǎng)2436小時(shí)，得種子液；(3)發(fā)酵培養(yǎng)搖瓶發(fā)酵以37%的體積比的接種量，將種子液接種于裝有瓶體積40%60%羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，354(TC，以150180轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速搖瓶發(fā)酵48—60小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；發(fā)酵罐發(fā)酵以310%的體積比的接種量，將種子液接種于裝有罐體積65%70%羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，354(TC進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng)，其中攪拌轉(zhuǎn)速為180220r/min，通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積m3分鐘計(jì)為11.11.2，罐內(nèi)壓力0.1±0.02MPa，發(fā)酵4872小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；(4)發(fā)酵產(chǎn)物分離提純待步驟(3)所述發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至1.2士0.1，然后加入732銨型樹(shù)脂，吸附2430小時(shí)；用純水將吸附后的樹(shù)脂洗至無(wú)銨離子，再將樹(shù)脂放入陽(yáng)離子交換柱中，用氨水解析，即得純度為95%以上的L-苯丙氨酸濃溶液；上述羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.01-0.2份、氯化鎂0.005-0.2份、氯化轉(zhuǎn)0.001-0.2份、磷酸二氫鉀0.01-0.2份、磷酸氫二鉀0.02-0.5份、硫酸錳0.01-0.5份、酵母粉0.01-0.5份、廢棄羽毛0,1-5.0份混合，加純凈水1-94份溶解，調(diào)節(jié)pH值至6-8，蒸汽滅菌后備用；上述羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.01-0.2份、氯化鎂0.005-0.2份、氯化鈣0.001-0.2份、磷酸二氫鉀0.01-0.2份、磷酸氫二鉀0.01-0.5份、酵母粉0.01-0.3份、廢棄羽毛0.5-5.0份混合，加純凈水1-94份溶解，調(diào)節(jié)pH值至6-8，蒸汽滅菌后備用。上述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法中，步驟(1)所述菌種選用枯草芽孢桿菌(^ac/W^幼&j7A)YYW-1，而且該菌己于2008年3月10日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.2396。上述枯草芽孢桿菌(^3W7"SW力"7A)YYW-1為發(fā)明人從廢棄羽毛中分離篩選并鑒定的，該菌革蘭氏陽(yáng)性，直桿狀，培養(yǎng)36小時(shí)形成大量芽孢，孢子囊柱狀，中生到次端生，孢子囊基本不膨脹，菌體大小O.70.8WnX2.03.0m，芽孢大小約為0.9mX1.5Mffl，可以在15。C55i:溫度下生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度范圍為30°C40°C;該菌可以在NaCl濃度為0.1%7%范圍內(nèi)生長(zhǎng)，而其最適的生長(zhǎng)濃度范圍為0.1%2%，當(dāng)NaCl濃度為10%時(shí)，生長(zhǎng)被抑制；最適生長(zhǎng)pH范圍為7.08.0，在pH5.7的沙氏葡萄糖培養(yǎng)液中可以生長(zhǎng)；該菌的生理生化特征與伯杰鑒定手冊(cè)中的典型特征完全一致。本發(fā)明所述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法中，步驟(2)、(3)所述培養(yǎng)溫度優(yōu)選為37'C;步驟(2)所述培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為24小時(shí)；步驟(3)所述培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為48小時(shí)；步驟(4)所述吸附時(shí)間優(yōu)選是24小時(shí)；所述的廢棄羽毛優(yōu)選是雞毛；所述雞毛是以常規(guī)方式粉碎為粒徑約2mm的雞毛粉。利用本發(fā)明方法制備的L-苯丙氨酸為光學(xué)純度95%以上的L-苯丙氨酸濃溶液。本發(fā)明首次選用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛大規(guī)模制備高純度L-苯丙氨酸。經(jīng)檢測(cè)，所用的枯草芽孢桿菌YYW-1發(fā)酵羽毛粉48小時(shí)，發(fā)酵液中L-苯丙氨酸含量達(dá)1.5克/升。本發(fā)明方法生產(chǎn)L-苯丙氨酸的原料成本低廉，實(shí)現(xiàn)了廢棄物高值化利用，而且生產(chǎn)的L-苯丙氨酸光學(xué)純度高，質(zhì)量好，能夠滿足工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)的需要。具體實(shí)施方式實(shí)施例1:將枯草芽孢桿菌YYW-1種子液按照5%比例接入500mL羽毛粉發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)。(1)菌種選擇選用枯草芽孢桿菌(fec277"ss"6ti7/s)YYW-1CGMCCN0.2396;(2)種子培養(yǎng)將步驟(1)所述菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接12環(huán)于3040mL液體羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基中，37'C震蕩培養(yǎng)24小時(shí)，得種子液；(3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)以5%的體積比的接種量，將種子液接種于裝有500mL羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，37°C，以180轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速搖瓶發(fā)酵48小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；取發(fā)酵液測(cè)定各種游離氨基酸含量，結(jié)果表明發(fā)酵后發(fā)酵液中游離氨基酸總量為2872.lmg/L，其中苯丙氨酸1869.7mg/L，占游離氨基酸總量的65.1%(結(jié)果見(jiàn)表1)。表1:YYW-1菌發(fā)酵雞毛粉48h后發(fā)酵液中各種游離氨基酸含量(mg/L)名稱(chēng)含量(mg/L)名稱(chēng)含量(mg/L)Asp14.0Tyr450.4Thr12.0Phe1869.7Ser21.9Lys33.5Glu214.6lie16.5Gly25.9His5.6Ala23.6Arg9.3Cys51.7Pro1.3<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>上述羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.1份、氯化鎂0.1份、氯化鈣0.06份、磷酸二氫鉀0.02份、磷酸氫二鉀0.02份、硫酸錳0.05份、酵母粉0.02份、廢棄羽毛2份混合，加純凈水80份溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌后備用；上述羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基配方為氯化鈉O.1%,氯化鎂0.1%，氯化鈣0.005%,磷酸二氫鉀0.02%,磷酸氫二鉀0.02%，酵母粉0.01%,廢棄雞毛2%，加余量的純凈水溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌。所述雞毛是以常規(guī)方式粉碎為粒徑約2rara的雞毛粉。實(shí)施例2:(1)菌種選擇選用枯草芽孢桿菌(few'77Ms"A"7is)YYW-1CGMCCNO.2396;(2)種子培養(yǎng)將步驟(1)所述菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接12環(huán)于3040mL液體羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基中，37'C震蕩培養(yǎng)30小時(shí)，得種子液；(3)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)以5%的體積比的接種量，將種子液接種于裝有0.65噸羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的1噸發(fā)酵罐中，37'C進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng)，其中攪拌轉(zhuǎn)速為220r/min，通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積m、分鐘計(jì)為l:1.1，罐內(nèi)壓力O.1±0.02MPa，發(fā)酵48小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；(4)發(fā)酵產(chǎn)物分離提純待步驟(3)所述發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至1.2土0.1，然后加入732銨型樹(shù)脂，吸附24小時(shí)；用純水將吸附后的樹(shù)脂洗至無(wú)銨離子，再將樹(shù)脂放入陽(yáng)離子交換柱中，用氨水解析，即得純度為95%以上的L-苯丙氨酸濃溶液；經(jīng)檢測(cè)，其中含L-苯丙氨酸質(zhì)量為0.95千克。上述羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.1份、氯化鎂0.1份、氯化鈣0.06份、磷酸二氫鉀0.02份、磷酸氫二鉀0.02份、硫酸錳0.05份、酵母粉0.02份、廢棄羽毛2份混合，加純凈水80份溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌后備用；上述羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基配方為氯化鈉O.1%,氯化鎂0.1%，氯化鈣0.005%,磷酸二氫鉀0.02°/。，磷酸氫二鉀0.02%，酵母粉0.01%,廢棄雞毛2%，加余量的凈化水溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌。所述雞毛是以常規(guī)方式粉碎為粒徑約2mm的雞毛粉。實(shí)施例3:(1)菌種選擇選用枯草芽孢桿菌s"力"7is)YYW-1CGMCCNO.2396;(2)種子培養(yǎng)將步驟(1)所述菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接12環(huán)于40mL液體羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基中，37'C震蕩培養(yǎng)36小時(shí)，得種子液；(3)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)以10%的體積比的接種量，將種子液接種于裝有35噸羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的50噸發(fā)酵罐中，37t:進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng)，其中攪拌轉(zhuǎn)速為180iVmin，通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積m3分鐘計(jì)為1:1.2，罐內(nèi)壓力0.1±0.02MPa，發(fā)酵72小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；(4)發(fā)酵產(chǎn)物分離提純待步驟(3)所述發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至1.2土0.1，然后加入732銨型樹(shù)脂，吸附24小時(shí)；用純水將吸附后的樹(shù)脂洗至無(wú)銨離子，再將樹(shù)脂放入陽(yáng)離子交換柱中，用氨水解析，即得純度為95%以上的L-苯丙氨酸濃溶液；經(jīng)檢測(cè)，其中含L-苯丙氨酸質(zhì)量為50千克。上述羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.1份、氯化鎂0.1份、氯化鈣0.06份、磷酸二氫鉀0.02份、磷酸氫二鉀0.02份、硫酸錳0.05份、酵母粉0.02份、廢棄羽毛2份混合，加純凈水85份溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌后備用；上述羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基配方為氯化鈉O.1%，氯化鎂O.1%，氯化鈣0.004%,磷酸二氫鉀0.02%,磷酸氫二鉀0.01%，酵母粉0.01%,廢棄雞毛3%，加余量的純凈水溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌。所述雞毛是以常規(guī)方式粉碎為粒徑約2mm的雞毛粉。實(shí)施例4:(1)菌種選擇選用枯草芽孢桿菌(feci""s幼/^.h'5)YYW-1CGMCCNO.2396;(2)種子培養(yǎng)將步驟(1)所述菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接12環(huán)于40mL液體羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基中，37'C震蕩培養(yǎng)32小時(shí)，得種子液；(3)發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)以10%的體積比的接種量，將種子液接種于裝有1.3噸羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的2噸發(fā)酵罐中，37'C進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng)，其中攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積m3分鐘計(jì)為1:1.1，罐內(nèi)壓力0.1±0.02MPa，發(fā)酵60小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；(4)發(fā)酵產(chǎn)物分離提純待步驟(3)所述發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至1.2土0.1，然后加入732銨型樹(shù)脂，吸附24小時(shí)；用純水將吸附后的樹(shù)脂洗至無(wú)銨離子，再將樹(shù)脂放入陽(yáng)離子交換柱中，用氨水解析，即得純度為95%以上的L-苯丙氨酸濃溶液；經(jīng)檢測(cè)，其中含L-苯丙氨酸質(zhì)量為1.8千克。上述羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.1份、氯化鎂0.1份、氯化鈣0.05份、磷酸二氫鉀0.02份、磷酸氫二鉀0.02份、硫酸錳0.07份、酵母粉0.02份、廢棄羽毛2份混合，加純凈水90份溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌后備用；上述羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基配方為氯化鈉O.1%,氯化鎂O.1%，氯化鈣0.004%,磷酸二氫鉀0.02%,磷酸氫二鉀0.01%，酵母粉0.01%,廢棄羽毛3%，加余量的凈化水溶解，調(diào)節(jié)pH值至7，蒸汽滅菌。所述羽毛是雞毛、鴨毛等重量比的混合體，是以常規(guī)方式粉碎為粒徑約2mra的羽毛粉。權(quán)利要求1.一種利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，步驟順序如下(1)菌種選擇選用枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)YYW-1CGMCCNO.2396；(2)種子培養(yǎng)將步驟(1)所述菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于30～40mL液體羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基中，35～40℃震蕩培養(yǎng)24～36小時(shí)，得種子液；(3)發(fā)酵培養(yǎng)搖瓶發(fā)酵以3～7％的體積比的接種量，將種子液接種于裝有瓶體積40％～60％羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，35～40℃，以150～180轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速搖瓶發(fā)酵48-60小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；發(fā)酵罐發(fā)酵以3～10％的體積比的接種量，將種子液接種于裝有罐體積65％～70％羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，35～40℃進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng)，其中攪拌轉(zhuǎn)速為180～220r/min，通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積m3·分鐘計(jì)為1∶1.1～1.2，罐內(nèi)壓力0.1±0.02MPa，發(fā)酵48～72小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；(4)發(fā)酵產(chǎn)物分離提純待步驟(3)所述發(fā)酵結(jié)束后，向發(fā)酵液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至1.2±0.1，然后加入732銨型樹(shù)脂，吸附24～30小時(shí)；用純水將吸附后的樹(shù)脂洗至無(wú)銨離子，再將樹(shù)脂放入陽(yáng)離子交換柱中，用氨水解析，即得純度為95％以上的L-苯丙氨酸濃溶液；上述羽毛發(fā)酵種子培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.01-0.2份、氯化鎂0.005-0.2份、氯化鈣0.001-0.2份、磷酸二氫鉀0.01-0.2份、磷酸氫二鉀0.02-0.5份、硫酸錳0.01-0.5份、酵母粉0.01-0.5份、廢棄羽毛0.1-5.0份混合，加純凈水1-94份溶解，調(diào)節(jié)pH值至6-8，蒸汽滅菌后備用；上述羽毛發(fā)酵培養(yǎng)基及制備方法為按重量份氯化鈉0.01-0.2份、氯化鎂0.005-0.2份、氯化鈣0.001-0.2份、磷酸二氫鉀0.01-0.2份、磷酸氫二鉀0.01-0.5份、酵母粉0.01-0.3份、廢棄羽毛0.5-5.0份混合，加純凈水1-94份溶解，調(diào)節(jié)pH值至6-8，蒸汽滅菌后備用。2.如權(quán)利要求1所述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，其特征在于，步驟(1)所述菌種選用枯草芽孢桿菌(fe^77^犯力"7A)YYW-1，而且該菌已于2008年3月10日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.2396。3.如權(quán)利要求1所述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，其特征在于，步驟(2)、(3)所述培養(yǎng)溫度為37°C。4.如權(quán)利要求1所述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，其特征在于，步驟(2)所述培養(yǎng)時(shí)間為24小時(shí)。5.如權(quán)利要求1所述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，其特征在于，步驟(3)所述培養(yǎng)時(shí)間為48小時(shí)。6.如權(quán)利要求1所述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，其特征在于，步驟(4)所述吸附時(shí)間是24小時(shí)。7.如權(quán)利要求1所述利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，其特征在于，所述的廢棄羽毛是雞毛。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵羽毛生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法，是將廢棄羽毛，氯化鈉，氯化鎂，氯化鈣，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀、酵母粉按照比例混合，加凈化水溶解，熱處理滅菌；然后接入枯草芽孢桿菌YYW-1CGMCCNO.2396，35～40℃發(fā)酵48～72小時(shí)，發(fā)酵產(chǎn)物酸調(diào)后經(jīng)732銨型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附和洗脫而獲得L-苯丙氨酸濃溶液。本發(fā)明方法原料成本低廉，實(shí)現(xiàn)了廢棄物高值化利用，而且生產(chǎn)的L-苯丙氨酸光學(xué)純度高，質(zhì)量好，能夠滿足工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)的需要。文檔編號(hào)C12R1/125GK101240302SQ20081001439公開(kāi)日2008年8月13日申請(qǐng)日期2008年3月14日優(yōu)先權(quán)日2008年3月14日發(fā)明者尤升波,岳壽松,游銀偉,王翠萍,谷玉霞,黃亦鈞申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高新技術(shù)研究中心