專利名稱：制備受精卵組分的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及使用如冷凍干燥方法和萃取方法等技術制備受精卵組分 的方法。
背景技術：
物質(zhì)制備技術如萃取和冷凍干燥技術是多種工業(yè)中用于分離特定物 質(zhì)或組分或它們的子集，以及為儲存、運輸或直接使用而制備它們的常用 技術。人們希望提高和加強這些技術以優(yōu)化如產(chǎn)量、純度和儲存適宜性等 的參數(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的第 一方面，提供了 一種用于制備至少 一個受精卵的內(nèi)含
物的粉狀樣品的方法。所述方法包括如下步驟(i)將至少一個受精卵的 內(nèi)含物與殼基本分離；(i i)任選地過濾所述內(nèi)含物以產(chǎn)生固體或者固體和 半固體的保留物，(iii)冷凍所述內(nèi)含物或保留物，(iv)冷凍干燥所述內(nèi)含 物或保留物，(v)任選地，集合一種或多種冷凍干燥的內(nèi)含物或保留物， 和(vi)粉碎所述內(nèi)含物或保留物以形成粉末。任選地，可在所述粉末中加 入防腐劑。
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了 一種用于從根據(jù)本發(fā)明的實施方案制 備的漿體中生產(chǎn)粉狀水萃取物的方法。所述方法包括如下步驟(i)將所 述漿體與一種水溶液混合一段時間，(ii)澄清該混合物以產(chǎn)生基本不含固
體物質(zhì)的水溶液，(iii)將所述水溶液與所述固體物質(zhì)分離，(iv)冷凍所 述水溶液，和(v)冷凍干燥所述水溶液以產(chǎn)生粉末。任選地，可在所述粉 末中加入防腐劑。
根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供了 一種用于從根據(jù)本發(fā)明的實施方案制 備的漿體中生產(chǎn)濃縮的溶劑萃取物的方法。所述方法包括如下步驟(i)將所述漿體與一種疏水溶劑混合一段時間，(i i)澄清該混合物以產(chǎn)生基本
不含固體物質(zhì)的溶液，(iii)將所述溶液與所述固體物質(zhì)分離，(iv)將所 述疏水溶劑部分與任何水溶劑部分分離，和(v)濃縮所述疏水溶劑部分。
根據(jù)本發(fā)明的第四方面，提供了 一種用于制備至少一個胚胎的粉狀樣 品的方法。所述方法包括如下步驟(i)將至少一個胚胎從至少一個受精 卵中基本分離；(ii)任選地清洗所述至少一個胚胎，(iii)冷凍所述至少 一個胚胎，(iv)冷凍干燥所述至少一個冷凍胚胎，和(v)粉碎所述至少一 個冷凍干燥的胚胎以形成粉末。任選地，可在所述粉末中加入防腐劑。任 選地，可使用所述胚胎以及部分或全部白蛋清(white albumen)部分， 在這種情況下，清洗步驟可被改進或去除。
根據(jù)本發(fā)明的第五方面，提供了一種用于從至少一個胚胎的漿體中或 至少一個胚胎及部分或全部白蛋清部分的漿體中生產(chǎn)粉狀水萃取物的方 法。所述方法包括如下步驟(i)將所述漿體與一種水溶液混合一段時間， (ii)澄清該混合物以產(chǎn)生基本不含固體物質(zhì)的水溶液，(iii)將所述水溶 液與所述固體物質(zhì)分離，(iv)冷凍所述水溶液，和(v)冷凍干燥所述水溶 液以產(chǎn)生粉末。任選地，可在所述粉末中加入防腐劑。
根據(jù)本發(fā)明的第六方面，提供了 一種用于從至少 一個胚胎的漿體中生 產(chǎn)濃縮的溶劑萃取物的方法。所述方法包括如下步驟(i)將所述漿體與 一種疏水溶劑混合一段時間，(ii)澄清該混合物以產(chǎn)生基本不含固體物質(zhì) 的溶液，(iii)將所述溶液與所述固體物質(zhì)分離，(iv)將所述疏水溶劑部 分與任何水溶劑部分分離，和(v)濃縮所述疏水溶劑部分。
根據(jù)本發(fā)明的第七方面，提供了一種用于生產(chǎn)至少一個受精卵的全部 或部分內(nèi)含物的漿體的方法。所述方法包括如下步驟(i)將至少一個受 精卵的內(nèi)含物與殼基本分離；(ii)任選地過濾所述內(nèi)含物以產(chǎn)生保留 物，(iii)將所述內(nèi)含物或保留物集中在一個容器中，(iv)混合一一任選在 加入溶劑的情況下——所述內(nèi)含物或保留物以產(chǎn)生漿體，(v)任選地冷凍 所述漿體以保存用于進一步處理。任選地，可在過濾過程中集中多個受精 卵的內(nèi)含物，此時步驟(iii)是任選的。


本領域的技術人員會理解下述附圖只是出于圖示說明的目的。所述附 圖不欲以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
圖1是根據(jù)本發(fā)明的實施方案從一個卵中取出的一個胚胎的照片。
圖2是才艮據(jù)本發(fā)明的實施方案的一個冷凍干燥的胚胎的照片。 圖3是才艮據(jù)本發(fā)明的實施方案的一個冷凍干燥的胚胎的照片。 圖4是根據(jù)本發(fā)明的實施方案的被粉碎的冷凍干燥胚胎的照片。 圖5是根據(jù)本發(fā)明的實施方案的若干胚胎的漿體的照片。
具體實施例方式
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了 一種制備至少一個胚胎的粉狀樣品或
從一個受精卵的部分或全部內(nèi)含物制備粉狀樣品的方法。將至少一個受精 卵從該卯受精之日起孵化約3-約15天，更優(yōu)選地約3-約5天，或更優(yōu)選 地約6-約12天，再更優(yōu)選地約7-約9天。 一般說來，所述受精卵被孵化 一段時間，這段時間可使血管發(fā)生開始和/或使胚胎發(fā)育成熟至肉眼可見 的胚胎。所述卯可來自多個來源，如鳥類、爬行動物類或產(chǎn)卵哺乳動物。 一般說來，可從中將胚胎或胚胎相連的血管取出的任何卵都適用。所述卵 優(yōu)選地為鳥類的卵，可得自任何繁殖產(chǎn)卵的鳥類，如雞、鵝、鴨等。雞卵 是優(yōu)選的，原因包括其可進行大量生產(chǎn)的可行性和能力。孵育可在任何環(huán) 境中進行，只要使卵在一個可使胚胎成熟的溫度下保持較長一段時間即 可。適合的孵育溫度范圍是約20-約601C，更優(yōu)選的范圍是約25-約55 匸，更優(yōu)選的范圍是約35-約451C。卵被孵育一段時間后，它們?nèi)芜x地被 通過任何合適的方式處理以減少外部微生物群或殺菌，所述方式如用如 乙醇(如約50-約95%的乙醇溶液)等的溶劑清洗卵殼，然后使溶劑蒸發(fā) 或干燥;或者將所述卵在紫外線(UV)光源下旋轉一段合適的時間。優(yōu)選地， 在進一步處理卵之前將所有溶劑蒸發(fā)。然后打破卵以獲得里面的內(nèi)含物。 可在無菌條件下手動或使用合適的機械設備將卵打破。此過程和/或所有 或大部分上下文所述的過程可在冷卻的空氣如約5"C的空氣中進行。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，所述卵的內(nèi)含物被收集在一個容器如無污容 器中，所述容器優(yōu)選為滅菌的和/或冷卻的。取自所述容器或取自卵的內(nèi) 含物可任選地進行過濾，例如通過置于濾網(wǎng)上進行過濾。濾網(wǎng)孔為約0. 5-約4 mm，更優(yōu)選地為約l mm。所述濾網(wǎng)優(yōu)選地為無菌的。任選地，所述 卵的內(nèi)含物和/或部分或全部的破裂卵殼可被直接置于所述濾網(wǎng)上。所述 卵的內(nèi)含物和/或部分或全部的破裂卵殼可在所述濾網(wǎng)上過濾一段時間， 直至基本不再有液滴通過所述濾網(wǎng)。破裂的殼可在過濾過程之前、之中或 之后從卵的內(nèi)含物中除去。過濾后，固體或固體和半固體保留物可包含胚 胎、大部分或全部卵黃、血管結締組織、大部分或全部卵清、大部分或全 部卵帶和清嚢(clear sac )(如果其未被打破)。半固體保留物可包括固 體物質(zhì)及粘性物質(zhì)，例如膠狀物質(zhì)如卵清。所述保留物或半固體保留物任 選地可用合適的溶劑如緩沖溶液、無菌去離子水或任何合適的鹽水溶液清 洗至少一次。例如，可使用無菌磷酸鹽緩沖溶液(PBS)。
可根據(jù)本文所述方法從一個卵中收集所述保留物然后對其進行冷凍 干燥。
根據(jù)本發(fā)明的另 一方面，可將白蛋清部分，胎與卵的其他內(nèi)含物基 本分離。白蛋清部分可通過任何合適的方法如傾出或抽吸白蛋清部分與其 他內(nèi)含物基本分離。胚胎可手工或通過技術人員確定的其他合適方法與白 蛋清部分基本分離。圖1顯示了一個從卵中取出然后用緩沖液清洗的胚胎 的實例。本領域技術人員會認識到胚胎可同時與白蛋清部分和其他內(nèi)含物 基本分離。例如，可使用鑷子或其他合適的工具手工將胚胎從白蛋清部分 和其他內(nèi)含物中取出。在某些情況下，胚胎可從卵黃嚢上手工剝離，卵黃 嚢是形成其他內(nèi)含物的 一部分。
胚胎與卵的白蛋清部分和其他內(nèi)含物基本分離后，任選地用合適的溶 劑如緩沖溶液、無菌去離子水或任何合適的鹽水溶液將所述胚胎清洗至少 一次。例如，可使用無菌磷酸鹽緩沖溶液(PBS)。
應理解，如果對卵的內(nèi)含物進行過過濾處理，那么對于以下的方法而 言，言及卯的內(nèi)含物時實際上是言及保留物。還應理解，可根據(jù)上述和下 述的任何方法打破完整受精卵、除去殼以及冷凍和冷凍干燥整個去殼的 卵。另外，可根據(jù)上述和下述的任何方法打破多個完整的受精卵、除去殼、 將整個去殼的卵集中并混合成漿體，然后冷凍和冷凍干燥。
卵的內(nèi)含物或胚胎被置于至少一個可冷凍的容器中。所述容器可為例 如試管、培養(yǎng)皿、燒杯、不銹鋼托盤或塑料容器。優(yōu)選地，所述內(nèi)含物或 胚胎在從殼中取出后很快被冷凍，如約2小時內(nèi)，更優(yōu)選地在約1小時內(nèi)，再更優(yōu)選地在約0. 5小時內(nèi)或盡可能快。才艮據(jù)所述內(nèi)含物或胚胎即將冷凍
的時間，冷凍溫度范圍可為約-5ox:到約iox:,更優(yōu)選地為約-40ic到約5
t:，再更優(yōu)選地為約-35lC到約-25iC。優(yōu)選地，將所述內(nèi)含物或胚胎冷凍 至少約6小時，更優(yōu)選地至少約12小時，再更優(yōu)選地至少約24小時。冷 凍的內(nèi)含物或胚胎可在一段時間后進行冷凍干燥或凍干。所述內(nèi)含物或胚 胎可在冷凍干燥/凍干步驟之前被完全冷凍。圖2和3示出了凍干后的胚 胎實例。進行冷凍干燥的優(yōu)選的極限溫度范圍為約-80"C到約-約10*C,
更優(yōu)選地為約-65x:到約-i5x:,再更優(yōu)選地為約-40ic到約-2(rc,壓力為
約500毫托或技術人員可確定的其他合適壓力。優(yōu)選地，冷凍干燥過程維 持在極限溫度的時間為約1-約6小時，更優(yōu)選地為約2-約5小時，再更 優(yōu)選地為約3-約4小時。進行整個冷凍干燥過程的時間一般為約15-約 45小時，更典型地為約25-約35小時，再更典型地為約28-約32小時。 根據(jù)本發(fā)明的另 一方面，冷凍干燥的內(nèi)含物或冷凍干燥的胚胎在需要 時可被*或粉碎以形成基本均一的粉末。分別或成組進行冷凍干燥的內(nèi) 含物可在粉碎步驟之前或之后集合在一起，形成基本均一的粉末。粉碎可 例如使用合適的機器如咖啡豆研磨機或錘式粉碎機機械地完成，或使用合 適的工具如玻璃棒手工完成。圖4顯示了粉碎的冷凍干燥胚胎的實例。所 述粉末任選地在儲存和/或使用之前被滅菌。合適的滅菌過程不應對某些 冷凍干燥組分有不利影響。例如，在某些情況下，滅菌方法可包括對所述 粉末進行輻照。
用本文所公開的方法生產(chǎn)的粉末可在儲存之前與控制微生物生長的 防腐劑相混合。合適的防腐劑包括常見的食品防腐劑如O. 5% w/w的苯曱 酸鈉和O. 2% w/w的山梨酸鉀。其他合適的防腐劑可由技術人員選擇。
用本文所公開的方法生產(chǎn)的粉末可被儲存在合適的基本氣密的容器 中。合適的容器包括塑料袋、桶、塑料容器、瓶、它們的組合等。例如， 所述粉末可在受控無菌條件下包裝至帶有防損安全封的無菌聚乙烯/聚丙 烯瓶中。所述粉末可儲存在基本干燥的惰性氣體如氮氣中。所述粉末優(yōu)選 地存儲在室溫或更低溫度下，例如約IOTC到約25匸，更優(yōu)選地約15匸到
約-2ox:。對于長期儲存，所述粉末優(yōu)選地存儲在約-iox:或更低溫度下， 或者更優(yōu)選地，約-2ox:或更低溫度下。所述粉末可在基本干燥的空氣中 存儲一段時間。所述粉末也可被真空包裝。根據(jù)本發(fā)明的另 一實施方案，冷凍或未冷凍的內(nèi)含物或胚胎可收集在合適的容器如燒杯或塑料容器中，并在需要時與合適的溶劑混合或混和以形成漿體。分離的內(nèi)含物或胚胎可在此步驟的部分或全部過程中被冷卻。例如，所述容器可置于冰上以促進冷卻。所述溶劑應為合適的水性溶劑以潤濕混合的內(nèi)含物或胚胎，并能夠在標準實驗室冰箱中被冷凍。合適的溶劑包括水、緩沖水溶液等?？墒褂萌缡謩訑嚢杵骰蚱渌线m的工具對內(nèi)含
物或胚胎進行混和或勻漿。圖5顯示了容納胚胎漿體的容器的實例。所述漿體可部分或全部用于以下的萃取過程或進行冷凍用于進一步處理。
將所述漿體與水溶液混合一段時間以進行水相萃取過程。所述水溶液可包括水、緩沖水溶液或任何其他水性溶劑。如果所述水溶液包含水，那么所述水優(yōu)選地為蒸餾水，更優(yōu)選地，還在使用前已去除離子。例如，可對所述水進行反滲透(R. 0.)處理。所述漿體和水溶液可通過例如攪拌一段時間進行混合，所述時間的范圍為約5-約60分鐘，更優(yōu)選的范圍為約10-約45分鐘，再更優(yōu)選的范圍為約15-約40分鐘。理想地，所述水溶液與內(nèi)含物漿體充分接觸，從而使溶液中任何基本親水的分子都溶解在所述水溶液中。使用的水溶液的體積可與漿體體積基本相等，但也可使用漿體體積的1. 5倍、2倍、甚或3倍。任選地，可在混合步驟中輕微加熱所述混合物。混合后，可通過合適的方法如離心或過濾基本除去混合物中的任何固體部分，從而使所述水溶液被基本澄清。澄清的水相部分隨后可根據(jù)本文所述方法被冷凍和冷凍干燥以產(chǎn)生粉末，對所述粉末任選地進行滅菌。
根據(jù)本發(fā)明的另 一方面，通過任何上述方法產(chǎn)生的漿體可與基本疏水的溶劑相混合?；臼杷娜軇﹥?yōu)選地為冷卻的。合適的疏水溶劑包括例如醚、三氯曱烷、己烷、石油醚或乙腈。例如，可使用醚尤其是乙醚。如上所述，將所述漿體與上述疏水溶劑混合一段時間。相關領域的技術人員可認識到，使用基本疏水溶劑的過程的任何步驟都應在通風櫥或類似設備中進行，且所述溶劑應避開明火或熱源?；旌弦欢螘r間之后，所述混合物的固體部分可通過合適的方法如離心或過濾從溶劑部分中基本除去。所述溶劑部分將主要包含疏水溶劑部分，也可能包含水相部分。所述溶劑部分可被轉移到一個分液漏斗或基本相當?shù)难b置中以將水相部分與疏水溶劑部分分開。對于醚，頂層是疏水溶劑部分。醚部分可從頂部吸取，或在底部水層被移除后從分液漏斗中取出。或者，底部水相部分可被冷凍，從而使頂部醚層可被傾出。水相部分可用疏水溶劑多次萃取，如萃取約3次。使用的疏水溶劑與水相部分的體積可基本相等，或可為水相溶劑體積的1. 5倍、2倍、甚或3倍。萃取過程之后，匯集所有疏水萃取物并用合適的方法濃縮。濃縮的萃取物可在低于室溫的溫度如約51C下儲存在基本氣密的合適容器如密封的小瓶中。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，通過上述任何方法生產(chǎn)的漿體可在萃取過程前澄清。優(yōu)選的澄清步驟包括過濾法，使用過濾器如濾網(wǎng)或者濾紙或濾墊。其他澄清步驟可包括離心法?？稍谶M一 步澄清之前向過濾步驟產(chǎn)生的濾液中加入助濾劑如Superf low DE 。得到的部分濾液可在合適的容器中被冷凍以進行冷凍干燥。另外，得到的部分濾液可與上述疏水溶劑混合從而形成水層和疏水層。各層可如本文所述被分離、濃縮和儲存。
本領域技術人員根據(jù)細節(jié)描述會容易地明白本發(fā)明的其他目標和優(yōu)點，所述細節(jié)描述只筒單地通過對所考慮的實施本發(fā)明的最佳方式舉例說明來描述優(yōu)選的實施方案。如會被認識到的，本發(fā)明能夠以其他和不同的實施方案實施，且其若干細節(jié)可在多個明顯方面祐^奮改，如明顯的重排序步驟，但這些都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。因此，下面的描述和實施例被認為事實上是用于示例而非限制。
實施例
實施例1
選擇8-9日齡的受精雞卵。用70%的乙醇對整個雞卵消毒并置于通風櫥中以使70%的乙醇揮發(fā)。打破所述雞卵并使內(nèi)含物通過無菌1. 0 mm濾網(wǎng)滴下。丟棄卵殼和濾出液。保留物一一包括固體和液體一一都被收集并在冰上冷卻。所述保留物在51C下被勻漿。所述勻漿物(漿體)被注入無菌不銹鋼托盤中，冷凍用于進一步處理。
實施例2
根據(jù)以下方法從受精雞卵中收集8日齡的雞胚(i)收集24枚紅皮雞卵；
m)當被打破時，發(fā)現(xiàn)24枚雞卵中只有22枚受精，其中含有發(fā)育的
10胚胎(91. 6%的受精率);
(iii) 胚胎被取出并在無菌PBS中簡單清洗(兩次)，然后立即在-20X:下分別冷凍在50 mL (毫升)試管中；
(iv) 然后將IO個試管在冷凍干燥機中進行冷凍干燥(架溫=-40匸，冷凝器溫度》52"C );
(v) 在此操作過程(cycle)結束時，各個胚胎(仍在試管中)被無菌玻璃棒壓碎，并將得到的粉末(1.7 g (克))包裝用于輻射照射；
(vi) 最終的粉末儲存在2-8*C (短期)或-201C (長期)。
12枚剩余的胚胎被收集在一個小燒杯中并用手持攪拌器與少量的水攪拌混合。結果
干燥后，使用玻璃棒將所述粉末(1. 7g，批號為EM200601 )均一分散，并準備進行輻射照射。每枚胚胎產(chǎn)生O. 17 g粉末。
使用玻璃棒將干燥的漿體(1.6 g,批號為EM200602)均一分散，并準備進行輻射照射。每枚胚胎產(chǎn)生0.14 g粉末(濕度未知)。
實施例3
收集60枚受精雞卵(8日齡胚胎)。以下描述了水萃取物和醚萃取物的制備。
所有雞卵都用70% (v/v)乙醇噴霧對外表面進行滅菌，然后將雞卵置于層流通風櫥中使乙醇揮發(fā)。
打破雞卵，再小心地將胚胎和所附的清嚢及其清水樣內(nèi)含物與剩余的蛋黃和血管物質(zhì)分離。然后，將所有物質(zhì)即胚胎和清嚢收集在一個在冰上預冷的燒杯中。收集后，用手持攪拌器將所述物質(zhì)攪拌成漿體。
將得到的漿體(約200 mL)分成相等的兩份； 一份用于用水萃取，另 一份用于用醚萃取。
水萃取物
在lOOmL漿體中加入lOOmL反滲透水，再將所述物質(zhì)在室溫下攪拌30分鐘。將所述物質(zhì)通過離心使其澄清并收集水相上層(200 mL 1. 1%固體)。然后將7jc相上層冷凍，隨后進行冷凍干燥。干粉為1.0 g,標記為EM200603，并通過輻射照射滅菌。醚萃取物
將100mL預冷的醚加入100mL漿體中。在室溫下振搖該混合物，然后進行離心。在離心過程(15分鐘，5匸)結束時，上面的水/醚層^L轉移到分液漏斗中，上面的醚層通過虹吸作用收集，或在-20lC下冷凍一段時間使下面渾濁的水層被凍結后，得到上面未凍結的黃色澄清的醚層，將該醚層傾出。
再用等體積的醚如上所述萃取下面的水層，將該過程重復三次。然后醚萃取物在RotavapM中被濃縮并干燥至很小的體積(約1 mL )。所述樣品被置于5C，在運輸前不需要進一步的處理。所述樣品被標記為EM200604。
實施例4
由于早期需要10倍量的水萃取物(EM200603)和5倍體積的醚萃取物(EM200604 )，因此需要更大量的雞卵。收集420枚受精雞卵(8-9日齡胚胎)。以下描述了水萃取物和醚萃取物的制備。
所有雞卵都用70% (v/v)乙醇噴霧以盡可能地對外表面進行滅菌，然后將雞卵置于通風櫥中使乙醇揮發(fā)。
打破所述雞卵(發(fā)現(xiàn)420枚中有62枚未受精，受精率為85.2%),小
心地將胚胎和所附的清嚢及其清水樣內(nèi)含物與剩余的蛋黃和血管物質(zhì)分離，再將所有物質(zhì)即胚胎和清嚢收集在一個在冰上預冷的燒杯中。將收集的物質(zhì)(約2L)置于5X:直到收集后的某天被^f吏用。水萃取物
收集后，用手持攪拌器將所述物質(zhì)攪拌成漿體。使得到的漿體(約2L)通過一個金屬濾網(wǎng)(20號網(wǎng)孔)。用紙濾墊和DE 6000將濾液進一步澄清。丟棄留在濾墊上的濾餅。在濾液中加入SuperflowDETM，然后使物質(zhì)通過濾墊以使其進一步澄清。使用布氏漏斗以實驗室規(guī)模完成所有過濾。所得濾液的大部分(約1200-1300 mL)被分離并立即在托盤中冷凍用于冷凍干燥(1. 9%固體)。剩余的500 mL與等體積的預冷的乙醚在1 L的瓶中混合并置于51C下直至分為兩層。干粉被標記為EM200605并被輻射照射。
醚萃取物
將500 mL預冷的醚加入500 mL漿體中，在室溫下振搖該混合物，然后進行離心。在離心過程(15分鐘，51C)結束時，上面的水/醚層被轉
移到分液漏斗中，上面的醚層通過虹吸作用收集，或在-2or;下冷凍一段時間使下面渾濁的水層被凍結后，傾出上面的黃色澄清醚層。
再用300 mL醚如上所述萃取下面的水層，然后將萃取物收集在一個預冷的圓底燒瓶中。然后所述醚萃取物在RotavapM中被濃縮并干燥至4艮小的體積。所述樣品被保存在51C，在運輸前不需要進一步的處理。所述才羊品凈皮標i己為EM200606。
上述本發(fā)明的實施方案只是描述其原理，而不應祐j人為進行限制。相關領域的技術人員可對本文公開的本發(fā)明做出進一步的修改，并且所有這些修改都被認為處于由所附權利要求所限定的本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權利要求
1.一種制備至少一個受精卵的全部或部分內(nèi)含物的粉狀樣品的方法，所述方法包括如下步驟(i)將至少一個受精卵的內(nèi)含物與殼基本分離；(ii)任選地過濾所述內(nèi)含物以產(chǎn)生固體或固體和半固體的保留物，(iii)冷凍所述內(nèi)含物或保留物，(iv)冷凍干燥所述內(nèi)含物或保留物，(v)任選地，集合一種或多種冷凍干燥的內(nèi)含物或保留物，和(vi)粉碎所述內(nèi)含物或保留物以形成粉末。
2. 根據(jù)權利要求l的方法，還包括在所述粉末中加入防腐劑。
3. —種生產(chǎn)至少一個受精卵的全部或部分內(nèi)含物的漿體的方法，所述方 法包括如下步驟(i)將至少一個受精卵的內(nèi)含物與殼基本分離；(n) 任選地過濾所述內(nèi)含物以產(chǎn)生保留物，(iii)將所述內(nèi)含物或保留物 集中在一個容器中，(iv)混合一一任選在加入溶劑的情況下一一所述 內(nèi)含物或保留物以產(chǎn)生漿體，(v)任選地冷凍所述漿體以保存用于進 一步處理。
4. 一種用于從根據(jù)權利要求3制備的漿體中生產(chǎn)粉狀水萃取物的方法， 所述方法包括如下步驟(i)將所述漿體與一種水溶液混合一段時間， (ii)澄清該混合物以產(chǎn)生基本不含固體物質(zhì)的水溶液，(iii)將所述 水溶液與所述固體物質(zhì)分離，(iv)冷凍所述水溶液，和(v)冷凍干燥 所述水溶液以產(chǎn)生粉末。
5. 根據(jù)權利要求4的方法，還包括在所述粉末中加入防腐劑。
6. —種用于從根據(jù)權利要求3制備的漿體中生產(chǎn)濃縮的溶劑萃取物的方 法，所述方法包括如下步驟(i)將所述漿體與一種疏水溶劑混合一 段時間，(ii)澄清該混合物以產(chǎn)生基本不含固體物質(zhì)的溶液，(iii) 將所述溶液與所述固體物質(zhì)分離，(i v)將所述疏水溶劑部分與任何水 溶劑部分分離，和(v)濃縮所述疏水溶劑部分。
7. 根據(jù)權利要求6的方法，其中所述疏水溶劑是醚。
8. —種用于制備至少一個胚胎的粉狀樣品的方法，所述方法包括如下步 驟(i)將至少一個胚胎從至少一個受精卵中基本分離；(ii)任選地 清洗所述至少一個胚胎，(iii)冷凍所述至少一個胚胎，(iv)冷凍干 燥所述至少一個冷凍胚胎，和(v)粉碎所述至少一個冷凍干燥的胚胎 以形成粉末。
9. 根據(jù)權利要求8的方法，還包括在所述粉末中加入防腐劑。
10. —種用于從至少一個胚胎的漿體中或至少一個胚胎及部分或全部白蛋清部分的漿體中生產(chǎn)粉狀水萃取物的方法，所述方法包括如下步驟(i)將所述漿體與一種水溶液混合一段時間，(ii)澄清該混合物 以產(chǎn)生基本不含固體物質(zhì)的水溶液，(i ii)將所述水溶液與所述固體 物質(zhì)分離，(iv)冷凍所述水溶液，和(v)冷凍干燥所述水溶液以產(chǎn)生 粉末。
11. 根據(jù)權利要求10的方法，還包括在所述粉末中加入防腐劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用冷凍干燥方法和/或萃取方法制備受精卵組分的方法。
文檔編號A23J1/00GK101583368SQ200780045154
公開日2009年11月18日 申請日期2007年10月12日 優(yōu)先權日2006年10月12日
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