專(zhuān)利名稱(chēng)：用于皮膚和毛發(fā)的番茄紅素異構(gòu)體的穩(wěn)定和生物可利用的組合物的制作方法
專(zhuān)利說(shuō)明用于皮膚和毛發(fā)的番茄紅素異構(gòu)體的穩(wěn)定和生物可利用的組合物 本發(fā)明涉及包括至少一種含番茄紅素材料的初級(jí)組合物(primarycomposition)，其中所述的含番茄紅素材料富含具有提高的穩(wěn)定性和生物利用率的番茄紅素化合物Z-異構(gòu)體，并涉及形成所述組合物的方法。本發(fā)明還涉及在食品、在食物增補(bǔ)劑(food supplement)、在化妝制品或在藥物制品中含有所述初級(jí)組合物的口服組合物。

背景技術(shù)：
類(lèi)胡蘿卜素的吸收是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，其涉及從食物微觀結(jié)構(gòu)基質(zhì)釋放、溶解至混合的膠束中、腸攝取、摻入乳糜微粒、分布至組織、肝臟攝取并再分泌至VLDL，其中VLDL逐步轉(zhuǎn)化成LDL。
來(lái)自食物源的番茄紅素吸收得到廣泛記載。來(lái)自食物如番茄和番茄汁的番茄紅素生物利用率是相當(dāng)?shù)偷?。迄今，番茄醬(tomato paste)是生物可利用的番茄紅素的最知名食物源。番茄含有處于全E構(gòu)型的約大于90％的番茄紅素。
含有大量番茄紅素的番茄提取物以含油樹(shù)脂(oleoresin)的形式可商業(yè)地獲得，不過(guò)在人類(lèi)中這些來(lái)源的番茄紅素的生物利用率相當(dāng)有限。在濃縮的番茄提取物中，番茄紅素主要以結(jié)晶形狀存在，已經(jīng)提出此為降低番茄紅素生物利用率的主要因素之一。
迄今，大部分的市售番茄紅素源表現(xiàn)出與初始番茄極相似的異構(gòu)體分布圖(isomeric profile)或僅顯示Z-異構(gòu)體的略微增加，無(wú)論所述番茄紅素源是衍生物(如沙司)或提取物。已知眾多加工法例如熱加工法促進(jìn)異構(gòu)化。Shi等在食品加工工程雜志(Journal of Food Process Engineering)2003，25，485-498中證實(shí)Z異構(gòu)體的增加可以通過(guò)加熱番茄沙司(tomatosauces)而實(shí)現(xiàn)。然而，某些番茄紅素異構(gòu)體不是穩(wěn)定的并且易于反回異構(gòu)化(retro-isomerisation)。根據(jù)文獻(xiàn)，5-Z是優(yōu)勢(shì)番茄紅素異構(gòu)體中最穩(wěn)定的，隨后是全-E、9-Z和13-Z。因此，基于異構(gòu)化番茄紅素的產(chǎn)物的穩(wěn)定性取決于其番茄紅素異構(gòu)體分布圖并且因此可以通過(guò)影響這種分布圖的技術(shù)工藝法加以調(diào)整。
已知番茄紅素的熱異構(gòu)化作用改善其自食物基質(zhì)的生物利用率。然而，仍沒(méi)有研究各種番茄紅素異構(gòu)體的生物利用率。就穩(wěn)定性而言，可以推斷基于番茄紅素的產(chǎn)物的生物利用率取決于其番茄紅素異構(gòu)體分布圖并且因此可以通過(guò)技術(shù)措施加以調(diào)整。
已經(jīng)存在提出技術(shù)措施及配方以改善番茄紅素生物利用率的專(zhuān)利。例如，WO 2005/075575提供了有效提高番茄紅素的生物利用率的富含Z-異構(gòu)體的初級(jí)組合物。
EP 1 103 579披露了用于通過(guò)回流乙醇提取番茄紅素的方法該方法短時(shí)間地實(shí)施(30分鐘)，從而沒(méi)有明顯的異構(gòu)化出現(xiàn)。實(shí)際上，想要天然的全-Z番茄紅素作為終產(chǎn)物。
WO 96/13178披露了用于制備穩(wěn)定的番茄紅素濃縮物的方法然而，沒(méi)有觀察異構(gòu)化對(duì)穩(wěn)定性的影響，而相反，所披露方法通過(guò)使用低于50℃的溫度持續(xù)幾分鐘，例如10分鐘，而嘗試避免異構(gòu)化。
EP 1 201 762涉及含有番茄紅素的產(chǎn)物，其中番茄紅素處于其天然的全反形式。由于任何熱加工法(溶解和濃縮)以最短的可能時(shí)間實(shí)施(小于1小時(shí))，故沒(méi)有發(fā)生明顯的異構(gòu)化。
KR 2005 006592披露了制備具有提高的抗氧化活性的番茄紅素-鋅絡(luò)合物。在溶劑不存在下應(yīng)用加熱以破壞植物材料的細(xì)胞壁。未長(zhǎng)時(shí)間加熱(prolonged heating)并且無(wú)異構(gòu)化發(fā)生。
WO 03/079816披露了用于制備具有高含量番茄紅素的番茄提取物的方法，其中提取法在室溫實(shí)施。
US 5,837,311和WO 97/48287披露了用于制備含油樹(shù)脂的方法，其中所述含油樹(shù)脂具有高含量的番茄紅素和令人滿意的穩(wěn)定性。后一特征通過(guò)含油樹(shù)脂自身中存在的磷脂及甘油酯獲得。沒(méi)有提到番茄紅素的異構(gòu)體組成及其對(duì)穩(wěn)定性的影響。實(shí)施熱提取法以使番茄紅素的產(chǎn)率最大化，但是該方法持續(xù)時(shí)間不超過(guò)1.2小時(shí)。僅在任何溶劑不存在下實(shí)施對(duì)番茄的加熱預(yù)處理以提高果肉-漿液分離。
WO 2005/075575解決了提高番茄油樹(shù)脂(tomato oleoresins)中順-異構(gòu)體含量的問(wèn)題異構(gòu)化尤其通過(guò)短時(shí)間熱處理獲得。然而，獲得的產(chǎn)物含有大量不穩(wěn)定的13-順異構(gòu)體。
EP 0 937 412披露用于制備精細(xì)分開(kāi)的粉狀類(lèi)胡蘿卜素制備物的方法，所述方法包括在溶劑存在下持續(xù)極短時(shí)間(5秒)的加熱步驟。
US 5,858,700涉及用于分離和純化番茄紅素晶體的方法，該方法的特征是水解雜質(zhì)如甘油酯和磷酸酯。水解在高溫實(shí)施，但持續(xù)短于2小時(shí)，之前任選地是使用回流溶劑的提取步驟，不過(guò)總是持續(xù)短暫時(shí)間以防止番茄紅素降解。
US 6,235,315披露穩(wěn)定的粉狀番茄紅素制劑，其特征在于番茄紅素具有某種程度的結(jié)晶度和最低可能的異構(gòu)化程度。
WO 03/090554披露具有高含量番茄紅素和預(yù)定黏度與含糖量的濃縮的番茄衍生物。所述方法是物理方法并且沒(méi)有使用溶劑。在圓番茄上實(shí)施加熱1-6分鐘以使果肉更容易分離。
Mayer-Miebach等“胡蘿卜的熱加工法相對(duì)于抗氧化潛力的番茄紅素穩(wěn)定性和異構(gòu)化(Thermal processing of carrotslycopene stability andisomerisation with regard to antioxidant potential)”國(guó)際食品研究(FoodResearch International)，Elsevier Applied Science，Barking，GB，第38卷，第8-9號(hào)，2005年10月，第1103-1108頁(yè)，研究了凍干胡蘿卜中番茄紅素異構(gòu)化與溫度的關(guān)系。作者的結(jié)論是僅全-反異構(gòu)體對(duì)長(zhǎng)時(shí)間加熱是穩(wěn)定的，從而導(dǎo)致順-異構(gòu)體減少。
因此，事實(shí)上，現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有提供番茄紅素的異構(gòu)化方法，其中所述的異構(gòu)化方法包括在有機(jī)溶劑中長(zhǎng)時(shí)間加熱，從而允許獲得具有高的生物利用率及穩(wěn)定的異構(gòu)體組成的產(chǎn)物。
發(fā)明概述 已發(fā)現(xiàn)各種Z-番茄紅素異構(gòu)體的穩(wěn)定性是彼此不同的；尤其，13-Z番茄紅素的穩(wěn)定性比5-Z或9-Z或全-E異構(gòu)體的穩(wěn)定性低得多。因此，本發(fā)明的初級(jí)組合物必須盡可能低地具有13-Z異構(gòu)體水平以表現(xiàn)最佳的穩(wěn)定性。也已經(jīng)證實(shí)番茄紅素的一些Z異構(gòu)體(例如5-Z和9-Z)增強(qiáng)了含有番茄紅素的組合物的生物利用率。因此，初級(jí)組合物必須主要含有5-Z異構(gòu)體或9-Z與5-Z異構(gòu)體的組合以提供改善的生物利用率和生物效力。
因此，本發(fā)明的第一目的是提供這樣的初級(jí)組合物，其具有富含番茄紅素Z異構(gòu)體的特定混合物的至少一種含番茄紅素材料，所述的含番茄紅素材料含有比13-Z異構(gòu)體的重量百分?jǐn)?shù)大的選自5-Z、9-Z和其組合的異構(gòu)體的重量百分?jǐn)?shù)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在食品、在食物增補(bǔ)劑、在化妝制品或在藥物制品中含有所述初級(jí)組合物的口服組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供所述初級(jí)組合物作為用于口服施用的食品中的添加劑，其中所述食品如營(yíng)養(yǎng)組合物、食物增補(bǔ)劑、寵物食品、化妝制品或藥物制品。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制造所述初級(jí)組合物或含有該初級(jí)組合物的食物增補(bǔ)劑、化妝制品或藥物制品的方法。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供如上所述的初級(jí)組合物的用途，用于制備意在改善皮膚健康、尤其用于皮膚的光保護(hù)或用于保護(hù)皮膚組織抵抗老化的口服組合物、化妝品組合物或藥物組合物。
在一個(gè)備選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供所述初級(jí)組合物的用途，用于制備預(yù)防或治療心血管疾病或癌癥的口服組合物、化妝品組合物或藥物組合物。
本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)是提供含有顯示較高穩(wěn)定性、生物利用率和生物效力的番茄紅素z異構(gòu)體的組合物。
其它特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)在本文中描述，并且將從以下詳細(xì)描述和附圖
顯而易見(jiàn)。
附圖簡(jiǎn)述 圖.在消費(fèi)含有25mg總番茄紅素的標(biāo)準(zhǔn)餐后，TRL的血漿番茄紅素/甘油三酯的曲線下面積(AUC)，其中所述的總番茄紅素來(lái)自番茄醬(全-E番茄紅素)或富含5-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂(5-Z含油樹(shù)脂)或富含13-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂(13-Z含油樹(shù)脂)或富含9-Z和13-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂(9-Z與13-Z含油樹(shù)脂)。
發(fā)明詳述 本發(fā)明總體上涉及提供健康益處的組合物。更具體地，本發(fā)明涉及可以用來(lái)改善皮膚和毛發(fā)的有益營(yíng)養(yǎng)組合物和有關(guān)所述組合物的方法。
本發(fā)明現(xiàn)在使消費(fèi)者能夠從天然產(chǎn)物中獲得改良的組合物。所述初級(jí)組合物提供處在特別高的生物可利用形式和/或生物有效形式的番茄紅素。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供具有如此異構(gòu)體比例的番茄提取物或其衍生物，其中所述的異構(gòu)體比例與目前可獲得的產(chǎn)品中天然存在的異構(gòu)體的比例不同。具體地，本發(fā)明涉及這樣的提取物或衍生物，其E異構(gòu)體含量不高于番茄紅素總含量的60％、優(yōu)選E異構(gòu)體含量不高于番茄紅素總含量的40％(HPLC法)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供含有Z異構(gòu)體的特定組合的初級(jí)組合物。優(yōu)選地，在本發(fā)明初級(jí)組合物中的Z/E異構(gòu)體比例應(yīng)當(dāng)高于1。
此外，該組合優(yōu)選地富含5-Z和9-Z并且匱乏13-Z。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，5-Z和9-Z的量大于番茄紅素總含量的30％、優(yōu)選大于40％、最優(yōu)選大于50％。另外，13-Z的量小于番茄紅素總含量的10％、優(yōu)選小于番茄紅素總含量的5％、最優(yōu)選小于3％。例如通過(guò)增加特定的5-Z和9-Z異構(gòu)體和/或減少13-Z異構(gòu)體，可以獲得生物可利用性更大及生物有效性更高的穩(wěn)定形式的初級(jí)組合物。另外，本發(fā)明的提取物或衍生物在常見(jiàn)貯藏條件下是穩(wěn)定的并且不發(fā)生反回異構(gòu)化。在普通保護(hù)條件下(避光和避氧)，番茄紅素總含量和E異構(gòu)體含量保持恒定。E異構(gòu)體含量不升高，即便提取物保持在室溫下也是如此。
這種分布圖(即低量的番茄紅素13-Z異構(gòu)體)可以例如通過(guò)利用在固體基質(zhì)如粘土上催化番茄紅素異構(gòu)化或通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間加熱而獲得。
在一個(gè)實(shí)施方案中，含番茄紅素的材料可以例如為提取物、濃縮物或含油樹(shù)脂的形式。在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)“含油樹(shù)脂”應(yīng)當(dāng)理解為意指含番茄紅素材料的脂類(lèi)提取物，所述的脂類(lèi)提取物可能包括其它類(lèi)胡蘿卜素、甘油三酯、磷脂、生育酚、生育三烯酚、植物甾醇和其它較不重要的化合物。已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)降低13-Z異構(gòu)體含量使異構(gòu)化的番茄油樹(shù)脂中番茄紅素的反回異構(gòu)作用最小化。
在一個(gè)實(shí)施方案中，含番茄紅素的材料可以是提取物、濃縮物或含油樹(shù)脂，其從植物或植物材料、微生物、酵母或動(dòng)物源產(chǎn)物中獲得、提取、富集或純化。如下所述，該材料還受到處理以增加番茄紅素的Z異構(gòu)體含量。
若番茄紅素源是植物來(lái)源，則該植物來(lái)源可以是蔬菜、葉、花、果實(shí)和植物的其它部分。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，番茄紅素源是番茄(即完整番茄、番茄提取物、番茄果肉、番茄果泥、番茄皮，帶有或不帶種子)。例如通過(guò)如此方式可獲得合適的植物或蔬菜濃縮物，即通過(guò)干燥或凍干新鮮收割的植物或蔬菜或相應(yīng)的根、果實(shí)或其種子并隨后任選地磨碎或軋碎干燥的材料。獲得上文所提及的植物或蔬菜的提取物的合適方法是本領(lǐng)域已知的?？梢岳缤ㄟ^(guò)用水或用一種或多種食品級(jí)溶劑或用水與一種或多種食品級(jí)溶劑的混合物提取新鮮收割或加工的植物或蔬菜或相應(yīng)的根、果實(shí)或其種子而獲得植物或蔬菜提取物。優(yōu)選地，本發(fā)明的提取物和濃縮物可以是脂質(zhì)的或水質(zhì)的。因?yàn)轭?lèi)胡蘿卜素是脂溶性的，故用水提取將除去不想要的水溶性成分，例如，糖、氨基酸、可溶性蛋白和/或有機(jī)酸。
若含番茄紅素的材料從微生物獲得，可以使用產(chǎn)生番茄紅素的任何微生物，尤其是益生微生物，例如乳酸細(xì)菌。另外，動(dòng)物源的產(chǎn)物可以來(lái)自例如鮭魚(yú)(salmon)、蝦(shrimp)、磷蝦(krill)或肝提取物或乳部分(milk fraction)。在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)“乳部分”應(yīng)當(dāng)理解成意指乳的任何部分。
在一個(gè)備選實(shí)施方案中，含番茄紅素的材料可以是含油樹(shù)脂。用于從以上提及的植物或蔬菜獲得含油樹(shù)脂的合適方法是本領(lǐng)域熟知的。例如，含油樹(shù)脂可以使用食品業(yè)、化妝品或藥物容許的溶劑通過(guò)脂質(zhì)提取法(lipidic extraction)獲得。通過(guò)常規(guī)方法制備的含油樹(shù)脂具有約0.05％至50％重量的番茄紅素含量。番茄紅素的全-E異構(gòu)體含量通常高于Z-異構(gòu)體含量，例如，番茄紅素的Z/E異構(gòu)體在所選番茄油樹(shù)脂中的比例是約7:93。
含油樹(shù)脂是用于獲得本發(fā)明初級(jí)組合物的優(yōu)選初始材料，因?yàn)樗鼈兒幸彩顾鼋M合物穩(wěn)定的其它類(lèi)胡蘿卜素或抗氧化劑如維生素E?？梢愿纳坪蜆?shù)脂中番茄紅素化合物的生物活性和穩(wěn)定性，尤其在異構(gòu)化過(guò)程期間并且也可以提高初級(jí)組合物中Z番茄紅素的產(chǎn)率。
含番茄紅素的材料優(yōu)選地包括胡蘿卜素和葉黃素例如玉米黃素、蝦青素、β-隱黃素、辣椒紅素、角黃素、葉黃素和其衍生物例如酯。番茄紅素化合物已經(jīng)受到處理以增加初級(jí)組合物中的Z異構(gòu)體部分。
為了獲得這種異構(gòu)體分布圖，提取物、濃縮物或含油樹(shù)脂形式的含番茄紅素材料通過(guò)使用中性、酸性或堿性固體催化劑(例如粘土、沸石、分子篩、離子交換劑)進(jìn)行異構(gòu)化以產(chǎn)生具有高Z/E比例的混合物。旨在富集番茄紅素Z-異構(gòu)體的固體催化劑的使用不污染和危害食物，因?yàn)樵摯呋瘎┛梢苑奖愕赝ㄟ^(guò)簡(jiǎn)單的過(guò)濾或離心法除去。另外，固體催化劑與其它常用手段(例如熱、光和輻射引發(fā)劑)的組合可以進(jìn)一步增強(qiáng)幾何異構(gòu)化。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的提取物或衍生物可以從番茄、番茄部分(如果皮)、衍生物(如沙司和濃縮物)或提取物開(kāi)始進(jìn)行制備。異構(gòu)化通過(guò)在溶劑中長(zhǎng)時(shí)間加熱而實(shí)施。鑒于可以從“發(fā)明背景”部分所討論的現(xiàn)有技術(shù)獲得相反的教導(dǎo)這一角度來(lái)看，這種研究結(jié)果是令人驚訝的。
尤其，當(dāng)使用番茄或其衍生物作為原材料時(shí)，它們可以用能夠提取番茄紅素的溶劑處理。隨后加熱所得的提取物，除去溶劑，因此回收異構(gòu)化的提取物。
在另一方面，當(dāng)使用提取物或衍生物作為原材料時(shí)，將其溶解在溶劑中，將混合物加熱合適的時(shí)間，隨后除去溶劑，因此回收異構(gòu)化的提取物?？梢杂糜诋悩?gòu)化步驟的溶劑是烴、氯化烴、酯、酮、醇；尤其是C3-C10脂族烴、C1-C3氯化溶劑、C3-C6酯、C3-C8酮和C1-C8醇；更尤其地是己烷、四氯化碳、乙酸乙酯、丙酮和丁醇.在50-150℃、優(yōu)選在溫度60-130℃實(shí)施在溶劑中的異構(gòu)化。異構(gòu)化時(shí)間是4至240小時(shí)、優(yōu)選是10至180小時(shí)。
初級(jí)組合物中的Z/E異構(gòu)體比例可以增加至至少20:80、優(yōu)選地20:80至95:5，更優(yōu)選地30:70至90:10。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，(5Z+9Z)/E比例高于1，并且部分地除去13Z。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了粉末、液體或凝膠形式的包含番茄紅素化合物的初級(jí)組合物，該初級(jí)組合物比單獨(dú)的番茄紅素化合物具有更好的生物利用率和/或生物效力。另外，當(dāng)選擇粉末形式時(shí)，該初級(jí)組合物可以為高度水分散性組合物形式。在這種情況下，粉末是在室溫可分散于水中的。該初級(jí)組合物也提供這樣的類(lèi)胡蘿卜素，其在脂類(lèi)和有機(jī)溶劑中處于特別高的可溶性形式、較不易于結(jié)晶并具有更低的聚集傾向。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，初級(jí)組合物可以單獨(dú)地或與其它活性化合物組合地使用，其中所述活性化合物例如是維生素C、維生素E(生育酚和生育三烯酚)、類(lèi)胡蘿卜素(胡蘿卜素、葉黃素、玉米黃素、β-隱黃素等)、泛醌(例如CoQ10)、兒茶素(例如表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin gallate))、含有多酚和/或二萜(例如咖啡豆醇(kawheol)和咖啡醇)的咖啡提取物、菊苣(chicory)提取物、銀杏(Ginkgobiloba)提取物、富含原花色素的葡萄或葡萄籽提取物、香辛料提取物(例如迷迭香)、含有具備抗氧化活性的異黃酮和相關(guān)植物雌激素和其它類(lèi)黃酮源的大豆提取物、脂肪酸(例如n-3脂肪酸)、植物甾醇、益生纖維、益生微生物、牛磺酸、白藜蘆醇、氨基酸、硒和谷胱甘肽前體或蛋白質(zhì)，例如乳清蛋白。
初級(jí)組合物可以額外地包含一種或多種的乳化劑、穩(wěn)定劑和其它添加劑。在食品領(lǐng)域中相容的乳化劑例如是磷脂、卵磷脂、失水山梨醇聚氧乙烯醚單硬脂酸酯或三硬脂酸酯、單月桂酸酯、單棕櫚酸酯、單油酸酯或三油酸酯；甘油單酯或二酯?？梢蕴砑尤魏晤?lèi)型在食品行業(yè)、在化妝品或在藥物中已知的穩(wěn)定劑?？梢蕴砑釉谑称沸袠I(yè)、在化妝品或在藥物中已知的香料、著色劑和任何其它合適的添加劑?？梢愿鶕?jù)初級(jí)組合物的最終用途添加這些乳化劑、穩(wěn)定劑和添加劑。
在一個(gè)備選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在食品、在食物增補(bǔ)劑、在寵物食品、在化妝制品或在藥物制品中包含上文所述初級(jí)組合物的口服組合物。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于人類(lèi)消費(fèi)的食物組合物可以由所述初級(jí)組合物增補(bǔ)。這種食物組合物可以例如是營(yíng)養(yǎng)完全的配方食品(nutritionalcomplete formula)、奶產(chǎn)品、冷凍或貸架穩(wěn)定的飲料、礦泉水、液體飲料、湯、膳食補(bǔ)充劑(dietary supplement)、代用餐(meal replacement)、營(yíng)養(yǎng)棒(nutritional bar)、糖果、乳產(chǎn)品或發(fā)酵乳產(chǎn)品、酸乳、乳粉(milkbased powder)、腸營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品(enteral nutrition product)、嬰兒配方食品、嬰兒營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品、谷物產(chǎn)品或基于發(fā)酵谷物的產(chǎn)品、冰淇凌、巧克力、咖啡、烹調(diào)用的產(chǎn)品如蛋黃醬、番茄漿(tomato puree)或沙拉醬或者寵物食品。
為了用在食物組合物中，可以將該初級(jí)組合物添加至以上提及的食品或飲料中，從而獲得約0.001至50mg的在初級(jí)組合物中所含番茄紅素的日攝入量。優(yōu)選地考慮每日約5至20mg的日攝入量。
口服施用的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑可以于膠囊、明膠膠囊、軟膠囊、片、糖衣片、丸、糊或錠、樹(shù)膠或可飲用溶液或乳液、糖漿或凝膠中，具有約0.001％-100％初級(jí)組合物的劑量，它們可以用水直接服用或通過(guò)其它方式服用。這種補(bǔ)充劑也可以包含甜味劑、穩(wěn)定劑、添加劑、香料或著色劑。用于化妝目的的補(bǔ)充劑可以額外地包含對(duì)皮膚有活性的化合物。應(yīng)當(dāng)理解該補(bǔ)充劑可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法產(chǎn)生。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以施用含有所述初級(jí)組合物的藥物組合物用于預(yù)防性治療和/或治療性治療，其量足以治愈或至少部分地阻止疾病和其并發(fā)病的癥狀。在本說(shuō)明書(shū)中，足以實(shí)現(xiàn)該目的的量定義為“治療有效量”。對(duì)此有效的量將取決于疾病的嚴(yán)重程度和患者的體重及總體狀況。
在預(yù)防性應(yīng)用中，本發(fā)明的初級(jí)組合物可以施用至易感特定疾病或存在患特定疾病風(fēng)險(xiǎn)的患者。這種量定義為“預(yù)防有效量”。在該用途中，精確的量也取決于患者健康狀況和體重。
在一個(gè)備選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的初級(jí)組合物可以隨可藥用的載體一起施用，載體的性質(zhì)隨施用模式如腸胃外、靜脈內(nèi)、口服或局部(包括眼用)途徑的不同而不同?？梢允褂枚喾N賦形劑產(chǎn)生想要的制劑，其中所述的賦形劑包括例如藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉纖維素、碳酸鎂。藥物組合物可以是片劑、膠囊劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、干燥口服補(bǔ)充劑、濕式口服補(bǔ)充劑。
優(yōu)選地，對(duì)于人類(lèi)而言，本發(fā)明的藥物組合物可以包含用于每日施用的如上所述量的初級(jí)組合物，從而番茄紅素的量是約0.01mg-100mg。當(dāng)每日向?qū)櫸锸┯脮r(shí)，番茄紅素的量可以是約0.01mg-100mg。
將理解的是基于自身知識(shí)，技術(shù)人員將選擇適宜的成分和植物制劑形式以在考慮施用途徑下將活性化合物靶向到目的組織，例如皮膚、結(jié)腸、胃、腎臟或肝臟，其中所述的施用途徑可以是注射、局部應(yīng)用、鼻內(nèi)施用、通過(guò)植入的或經(jīng)皮持續(xù)釋放系統(tǒng)而施用等。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含上文所述初級(jí)組合物的化妝品組合物。該化妝品組合物可以配制在例如洗液、香波、霜膏、防曬劑、日曬后霜(after-sun cream)、抗老化霜和/或油膏中。優(yōu)選地，初級(jí)組合物的含量可以是化妝品組合物的10-10％-10％重量。更優(yōu)選地，化妝品組合物包含10-8％-5％重量的番茄紅素?？梢跃植渴┯玫幕瘖y品組合物可以額外地包含可用在化妝品中的脂肪或油，例如在華盛頓CTFA工作組《化妝品成分手冊(cè)》(Cosmetic Ingredients Handbook，Washington)中提到的那些脂肪或油。
本發(fā)明的化妝品組合物也可以包括任何其它合適的化妝活性成分。所述組合物額外地包含結(jié)構(gòu)劑(structuring agent)和乳化劑。其它賦形劑、著色劑、芳香劑或遮光劑也可以添加到化妝品組合物中。將理解本發(fā)明的化妝產(chǎn)品會(huì)含有技術(shù)人員已知的不同成分的混合物，從而確保目的物質(zhì)快速進(jìn)入皮膚并且防止其在貯藏期間降解。
也應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的概念可以同樣適用于在目前所用藥物中起輔助作用的輔佐療法。因?yàn)楸景l(fā)明的初級(jí)化合物可以與食物材料一起容易地施用，故可以使用含有大量所述初級(jí)組合物的專(zhuān)用臨床食品。應(yīng)當(dāng)明白當(dāng)閱讀本說(shuō)明書(shū)連同附帶的權(quán)利要求時(shí)，技術(shù)人員將針對(duì)本文中提到的備選實(shí)施方案構(gòu)思多種不同的替代方案。
本發(fā)明還涉及初級(jí)組合物或者上文所述的口服組合物或化妝品組合物用于制備產(chǎn)品的用途，其中所述的產(chǎn)品意圖保護(hù)皮膚組織抗衰老、尤其用于抑制膠原酶并增強(qiáng)膠原合成而抑制對(duì)皮膚和/或粘膜的損傷。實(shí)際上，如上所述初級(jí)組合物的使用例如可以增強(qiáng)番茄紅素化合物在體內(nèi)的生物利用率和延緩皮膚衰老。該初級(jí)組合物也可以用于預(yù)防或治療敏感性、干性或反應(yīng)性皮膚，或用于改善皮膚密度或結(jié)實(shí)度、用于改善皮膚光保護(hù)、用于預(yù)防或治療心血管疾病或病癥和癌癥。它們還具有對(duì)伴侶動(dòng)物毛發(fā)和被毛的特別的益處，如改善毛發(fā)或被毛密度、纖維直徑、顏色、油性(oilness)、光澤度并有助于預(yù)防毛發(fā)或被毛丟失。
本發(fā)明初級(jí)組合物對(duì)人或?qū)櫸锲つw的積極效果可以通過(guò)使用常規(guī)方法例如最小紅斑量法(minimal erythemal dose(MED))、比色法、經(jīng)表皮失水率法、DNA修復(fù)法、白細(xì)胞介素和蛋白聚糖產(chǎn)生測(cè)量法、或膠原酶活性法、屏障功能法(barrier function)或細(xì)胞更新法或超聲回聲深度記錄器(ultrasonic echograph)進(jìn)行測(cè)量。
實(shí)施例 實(shí)施例1研究番茄紅素異構(gòu)體的穩(wěn)定性 在有機(jī)溶劑和在番茄提取物中評(píng)價(jià)番茄紅素異構(gòu)體的穩(wěn)定性 材料 富含番茄紅素的番茄油樹(shù)脂獲自Indena s.p.a.(意大利，米蘭)。其番茄紅素總含量等于9.1％，其中全-E和5-Z異構(gòu)體分別占93.5％和6.5％。通過(guò)加熱番茄油樹(shù)脂在乙酸乙酯中(1:10w/w)的混懸液1小時(shí)或48小時(shí)而制備兩種異構(gòu)化含油樹(shù)脂。在室溫冷卻后，將混懸液離心并且通過(guò)在減壓下蒸餾而除去所回收上清液中的乙酸乙酯。
二-叔丁基-羥基-甲苯(BHT)和N-乙基二異丙胺來(lái)自Fluka AG。全部溶劑均是HPLC級(jí)并且無(wú)需純化即可用。
分離純的番茄紅素異構(gòu)體 通過(guò)HPLC分離后收集含有相應(yīng)峰的級(jí)分(見(jiàn)下文實(shí)驗(yàn)條件)而從異構(gòu)化番茄油樹(shù)脂(進(jìn)行了1小時(shí)加熱)中分離到純的5-Z、9-Z、13-Z和全-E番茄紅素。在兩次連續(xù)HPLC運(yùn)行期間收集各峰并且合并相應(yīng)的級(jí)分。
番茄紅素分析 總番茄紅素的量通過(guò)反相HPLC在C18預(yù)裝柱(ODS Hypersil，5μm，20×4mm；Hewlett Packard，Geneva，Switzerland)和C18柱(Nova pak，3.9μm i.d.×300mm長(zhǎng)度，Millipore，Volketswil，Switzerland)。在室溫在無(wú)梯度條件下用由乙腈/四氫呋喃/甲醇/乙酸銨1％(533.5:193.6:53.7:28，wt/wt/wt/wt)組成的流動(dòng)相進(jìn)行分離。流動(dòng)相流速是1.5mL/分鐘。
通過(guò)正相HPLC根據(jù)Schierle等(Schierle，J.，Bretzel，W.，Bühler，I.，F(xiàn)accin，N.，Hess，D.，Steiner，K.，Schuep，W.(1997).Food.Chem.59459)描述的方法確定番茄紅素異構(gòu)體分布圖。將異構(gòu)化含油樹(shù)脂的樣品溶解在含有50ppm BHT的正己烷并且在Eppendorf Lab離心機(jī)中以最大速度離心。所得的上清液立即通過(guò)HPLC進(jìn)行分析。所用的HPLC系統(tǒng)是1100系列Hewlett-Packard型號(hào)，配備有紫外-可見(jiàn)光光電二極管陣列探測(cè)器。同時(shí)獲得在470nm、464nm、346nm和294nm處的數(shù)據(jù)。使用三個(gè)Nucleosil 300-5柱(4mm內(nèi)徑×250mm長(zhǎng)度，Macherey-Nagel)的組合分離樣品(10μL)。在室溫在無(wú)梯度條件下用由正己烷與0.15％ N-乙基二異丙胺組成的流動(dòng)相進(jìn)行分離。流速是0.8mL/分鐘。根據(jù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)鑒定番茄紅素Z-異構(gòu)。
基于HPLC峰的表面積，使用與全-E番茄紅素相同的消光系數(shù)計(jì)算番茄紅素異構(gòu)體的量。因此，在含有Z-異構(gòu)體的產(chǎn)物中的番茄紅素濃度被略微低估，因?yàn)橐阎猌-異構(gòu)體的消光系數(shù)低于全-E異構(gòu)體的消光系數(shù)。
穩(wěn)定性試驗(yàn)的條件 在正己烷中和在番茄油樹(shù)脂中研究番茄紅素異構(gòu)體的穩(wěn)定性，其中所述的番茄油樹(shù)脂通過(guò)在乙酸乙酯中加熱4小時(shí)加以異構(gòu)化。為此目的，將純的番茄紅素異構(gòu)體在正己烷中于室溫避光貯存33日，并且異構(gòu)化的番茄油樹(shù)脂在室溫避光保存55日。在貯藏期間在各種時(shí)間間隔上測(cè)量總番茄紅素濃度和番茄紅素異構(gòu)體分布圖。
結(jié)果 番茄紅素異構(gòu)體在正己烷中的穩(wěn)定性 在表1中報(bào)道了純的番茄紅素異構(gòu)體在貯藏期間在正己烷中于室溫在避光下的穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果。全部異構(gòu)體，即包括的全-E異構(gòu)體在貯藏期間發(fā)生幾何異構(gòu)化。13-Z是穩(wěn)定性較低的異構(gòu)體而小于50％的5-Z、9-Z和全-E番茄紅素在貯藏33日后被轉(zhuǎn)化，多于80％的13-Z番茄紅素在該時(shí)段期間轉(zhuǎn)化成其它異構(gòu)體。另外，與其它Z-異構(gòu)體相比，13-Z番茄紅素的轉(zhuǎn)化途徑是不同的13-Z異構(gòu)體主要轉(zhuǎn)化成全-E異構(gòu)體，而5-Z和9-Z異構(gòu)體在貯藏期間于正己烷中主要轉(zhuǎn)化成其它Z-異構(gòu)體。
表1純的番茄紅素異構(gòu)體在正己烷中于貯藏期間在室溫的穩(wěn)定性。


番茄紅素異構(gòu)體在番茄油樹(shù)脂中的穩(wěn)定性 在表2中報(bào)道了在乙酸乙酯中加熱48小時(shí)的番茄油樹(shù)脂中番茄紅素異構(gòu)體的穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果。
表2番茄紅素異構(gòu)體在異構(gòu)化番茄油樹(shù)脂中在貯藏期間于室溫的穩(wěn)定性(n＝2)。
番茄紅素總含量在貯藏期間在室溫是穩(wěn)定的。然而，番茄紅素異構(gòu)體分布圖明顯改變，13-Z番茄紅素含量下降并且全-E番茄紅素增加。9-Z和5-Z番茄紅素的含量在貯藏時(shí)間期間維持穩(wěn)定。
結(jié)論 兩個(gè)穩(wěn)定性試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)13-Z番茄紅素的穩(wěn)定性比5-Z或9-Z或全-E異構(gòu)體的穩(wěn)定性低得多。因此，具有低水平13-Z番茄紅素的異構(gòu)化番茄油樹(shù)脂應(yīng)當(dāng)顯示番茄紅素異構(gòu)體分布圖的良好穩(wěn)定性。
實(shí)施例2具有提高的生物利用率的異構(gòu)化番茄油樹(shù)脂 目的 本研究的目的是研究多種Z-番茄紅素異構(gòu)體在人類(lèi)中的生物利用率。為闡明特定Z-番茄紅素異構(gòu)體在人類(lèi)中的生物利用率，已經(jīng)使番茄油樹(shù)脂富集不同的Z-番茄紅素異構(gòu)體，達(dá)到約60％的總番茄紅素含量，即一種番茄油樹(shù)脂富含5-Z番茄紅素，另一種番茄油樹(shù)脂富含13-Z番茄紅素并且最后一種番茄油樹(shù)脂富含9-Z番茄紅素與13-Z番茄紅素的混合物。
材料和方法 受試者 30名健康人登記參與本項(xiàng)研究。招收標(biāo)準(zhǔn)是受試者應(yīng)當(dāng)是非素食者和非吸煙者并且他們沒(méi)有代謝疾病如糖尿??；高血壓；腎臟、肝臟或脾臟疾?。换驖?。受試者具有正常血脂血，即他們具有小于5.0的血漿膽固醇對(duì)HDL膽固醇比例以及小于1.5mmol/L的血漿三?；视?TAG)濃度。因?yàn)檠芯科陂g抽取大量的血液，因此要求受試者具有大于13g/dL的血液血紅蛋白濃度。如果受試者在本研究開(kāi)始前3個(gè)月至本研究結(jié)束時(shí)使用改變膽固醇的藥物或接受低血脂治療或服用維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)充劑或者已經(jīng)做過(guò)重大胃腸道手術(shù)；劇烈運(yùn)動(dòng)如跑馬拉松和每日消費(fèi)多于2玻璃杯葡萄酒(3dL)、多于2杯啤酒(3dL)或多于1玻璃杯(小玻璃杯)烈性酒，則本研究排除該受試者。30名志愿者中的27位完成4個(gè)食后測(cè)試(post-prandial test)。三位志愿者出于以下原因在結(jié)束前放棄試驗(yàn)不可獲得性、與眼傷有關(guān)的醫(yī)學(xué)治療、與消費(fèi)油膩餐食有關(guān)的惡心。受試者年齡是24±1歲，體重是70±1kg并且身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index；BMI)是22.5±0.3kg/cm2。
方案經(jīng)馬賽倫理委員會(huì)(法國(guó)馬賽)批準(zhǔn)。受試者接受關(guān)于背景和研究設(shè)計(jì)的信息并且在參與之前提供書(shū)面的知情同意書(shū)。他們可在任何時(shí)間自由退出本研究。
研究設(shè)計(jì) 本研究是雙盲、隨機(jī)化、4時(shí)期、4處理交叉臨床試驗(yàn)，具有最小3周的清除期。在禁食過(guò)夜后，受試者抵達(dá)馬賽大學(xué)臨床藥理學(xué)和治療試驗(yàn)中心(Clinical Pharmacology and Therapeutic Trial Center of University ofMarseille)并且消費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)餐，所述的標(biāo)準(zhǔn)餐由摻入與(用200mL自來(lái)水烹煮的)70g粗小麥面粉(wheat semolina)混合的40g花生油的25mg番茄紅素組成。此外，他們消費(fèi)40g面包、60g煮雞蛋的蛋白、含有5g白糖的125g酸奶并飲用330mL水(Aquarel，Nestlé)。該標(biāo)準(zhǔn)餐提供842千卡(3520kJ)熱量，具有以下?tīng)I(yíng)養(yǎng)組成蛋白質(zhì)(11.7％)、糖類(lèi)(39.3％)和脂類(lèi)(49.0％)。在15分鐘內(nèi)吃完該飲食。在隨后六小時(shí)不允許吃其它食物，不過(guò)允許受試者在吸收后(post-absorption)的最后3小時(shí)期間飲用至多一瓶水(330ml)(Aquarel，Nestlé)。
番茄紅素補(bǔ)充劑 測(cè)試四種不同番茄產(chǎn)物，對(duì)其中每種提供25mg總番茄紅素。這些產(chǎn)物由以下物質(zhì)組成 ·含有大部分處于全-E構(gòu)型的番茄紅素的番茄醬(Thomy，Switzerland)。
·富含5-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂 ·富含13-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂 ·富含9-Z與13-Z番茄紅素的混合物的番茄油樹(shù)脂 表3提供這四種番茄產(chǎn)物的番茄紅素含量以及番茄紅素異構(gòu)體分布圖。
表3四種番茄產(chǎn)物中總番茄紅素及全-E和Z-番茄紅素異構(gòu)體的總量 ＊未鑒定的番茄紅素異構(gòu)體是從HPLC色譜圖中相應(yīng)的峰面積計(jì)算的未知番茄紅素異構(gòu)體的匯集物。
血樣的收集 將空腹血液(Fasting blood)通過(guò)靜脈穿刺術(shù)從肘前靜脈抽取至含有EDTA/K3鉀的真空管內(nèi)，其中所述的真空管立即置于冰水浴內(nèi)并用鋁箔覆蓋以避免暴露于光線?？崭寡獦釉谙M(fèi)標(biāo)準(zhǔn)餐前即20分鐘和5分鐘前以及在吸收后2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)、5小時(shí)、6小時(shí)進(jìn)行收集。含有血液的管避光保護(hù)，貯存在4℃并且隨后在2小時(shí)內(nèi)離心(10分鐘，4℃，2800轉(zhuǎn)/分鐘)以分離血漿。添加抑制劑混合物(10μL/mL)(Cardin等，人血漿低密度脂蛋白的載脂蛋白B-100被組織和血漿激肽釋放酶的降解(Degradation of apolipoprotein B-100 of human plasma low densitylipoproteins by tissue and plasma kallikreins)，Biol Chem 1984；2598522-8)。
血漿甘油三酯豐富的脂蛋白(TRL)的分離 在消費(fèi)油膩飲食后，食物親脂分子摻入乳糜微粒，后者分泌至血液中。脂蛋白基于其密度通過(guò)超速離心法分離。因?yàn)槿槊游⒘?0.95g/ml)與VLDL(1.006g/ml)的密度非常相似，不可能將它們相互分開(kāi)，將它們共同收集在稱(chēng)作甘油三酯豐富的脂蛋白(TRL)的級(jí)分中。然而，在食后狀態(tài)下，這種血漿TRL級(jí)分主要含有從腸分泌的乳糜微粒，這是對(duì)小腸生物利用率的優(yōu)異評(píng)估法。
帶少量VLDL的主要含有乳糜微粒的甘油三酯豐富的脂蛋白(TRL)立即如下通過(guò)超速離心法分離將6mL血漿用0.9％NaCl溶液覆蓋并且在L7超速離心機(jī)(Beckman)中于SW41TI轉(zhuǎn)頭(Beckman)內(nèi)，在10℃以32,000轉(zhuǎn)/分鐘超速離心28分鐘。離心后立即將TRL等分分裝并且在分析性測(cè)定前貯存在-80℃。番茄紅素分析在10日內(nèi)進(jìn)行，并且三酰基甘油分析在30日內(nèi)進(jìn)行。
分析性測(cè)定 通過(guò)酶方法和比色法，使用商業(yè)試劑盒(Kit Bio-Mérieux)測(cè)定甘油三酯。
總番茄紅素和番茄紅素異構(gòu)體分布圖分別通過(guò)反相和正相HPLC方法確定(M.Richelle，K.Bortlik，S.Liardet，C.Hager，P.Lambelet，L.A.Applegate，E.A.Offord，J.Nutr.(2002)132,404-408)。番茄紅素總含量計(jì)算為5-Z、9-Z、13-Z、x-Z和全-E-番茄紅素異構(gòu)體的總量。由于全部各種Z-番茄紅素的精確值仍未知，故使用全-E番茄紅素的消光系數(shù)定量番茄紅素異構(gòu)體。番茄紅素異構(gòu)體的分布圖通過(guò)以百分?jǐn)?shù)表述的各種番茄紅素異構(gòu)體對(duì)總番茄紅素的比例確定。
統(tǒng)計(jì)分析 番茄紅素生物利用率通過(guò)測(cè)量在TRL-時(shí)間曲線中的番茄紅素濃度下的面積(AUC)進(jìn)行評(píng)估。在0-6小時(shí)期間使用梯形法計(jì)算該面積(AUC(0-6小時(shí)))。數(shù)據(jù)顯示為均值±SEM?；€濃度是在兩份血漿樣品中所測(cè)量濃度度的平均數(shù)，其中所述的血漿樣品在消費(fèi)含有來(lái)自番茄基質(zhì)的25mg番茄紅素的標(biāo)準(zhǔn)餐前收集。對(duì)于每位受試者和每個(gè)番茄紅素處理，通過(guò)從每個(gè)吸收后時(shí)間點(diǎn)處所測(cè)量的濃度值減去基線濃度而進(jìn)行AUC(0-6小時(shí))的計(jì)算。若該值為負(fù)數(shù)，則認(rèn)為它是零。
對(duì)于每個(gè)處理，若AUC0-6小時(shí)的分布在存在或不存在對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換下是正態(tài)的(Skewness和Kurtosis檢驗(yàn))，則通過(guò)使用線性混合模型，以處理作為固定效應(yīng)并且以受試者作為隨機(jī)效應(yīng)進(jìn)行比較。
全部統(tǒng)計(jì)分析用SAS軟件(版本8.2；SAS Institute，Cary，NC)進(jìn)行。統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)中的舍棄水平是5％。
結(jié)果 番茄紅素生物利用率 因?yàn)樗姆N番茄處理物誘導(dǎo)甘油三酯分泌程度的變異，故番茄紅素生物利用率已經(jīng)使用甘油三酯吸收率(AUC(0-6h))進(jìn)行歸一化。
歸一化的番茄紅素生物利用率在四種番茄處理物之間顯著不同(圖)。
出人意料地，來(lái)自富含5-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂的番茄紅素比來(lái)自其它三種處理物(即番茄醬、富含13-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂以及富含13-Z和9-Z番茄紅素的混合物的番茄油樹(shù)脂)的番茄紅素具有約2倍的更好生物可利用性(p<0.0001)(圖)。
而來(lái)自番茄醬與來(lái)自13-Z及9-Z混合物的番茄油樹(shù)脂中的番茄紅素具有相似的生物可利用性。
與番茄醬相比，以13-Z番茄紅素存在的番茄油樹(shù)脂中的番茄紅素顯示輕微但是顯著較低的生物利用率(p<0.03)。
結(jié)論 這些結(jié)果表明番茄紅素分子的構(gòu)型顯著影響胃腸道中番茄紅素的運(yùn)輸并且因此顯著影響吸收的番茄紅素的量。來(lái)自富含5-Z番茄紅素的番茄提取物的番茄紅素生物利用率約兩倍于來(lái)自番茄醬的番茄紅素生物利用率。相反，存在于富含9-Z與13-Z番茄紅素的混合物的番茄提取物中的番茄紅素與番茄醬中存在的番茄紅素具有相似的生物可利用性，而富含13-Z番茄紅素的番茄油樹(shù)脂提供生物可利用性略低的番茄紅素。幾位作者已經(jīng)指出番茄產(chǎn)品中Z-番茄紅素的存在與番茄紅素生物利用率增加相關(guān)。這項(xiàng)研究首次證實(shí)番茄紅素生物利用率的增強(qiáng)特異地與番茄紅素構(gòu)型相關(guān)，即5-Z番茄紅素>9-Z番茄紅素>13-Z。
實(shí)施例3在乙酸乙酯中的提取和異構(gòu)化 將52kg含有100ppm番茄紅素的新鮮番茄切碎并均化。將水部分在減壓下蒸餾除去以獲得18kg番茄濃縮物。這種濃縮物用36L水飽和的乙酸乙酯提取；在提取期間，將混合物維持在室溫，避光并攪拌2小時(shí)。隨后提取物從番茄濃縮物中分離。以上所述方法對(duì)這種番茄濃縮物重復(fù)兩次，總共使用108L溶劑。將合并的提取物在分液漏斗中用27L水洗滌。隨后棄去水相而將有機(jī)相在減壓下濃縮以獲得具有10％w/v干殘余物的混懸液；這種干殘余物具有9.1％w/w的番茄紅素總含量和0.46％w/w的Z異構(gòu)體含量。將這種混合物在攪拌下回流(76℃)7日，隨后在減壓下濃縮至干燥。
獲得46.8g最終提取物，其具有9％w/w的番茄紅素總含量和5.59％w/w的Z異構(gòu)體含量；特別地，E異構(gòu)體含量是3.41％w/w并且13-Z異構(gòu)體含量是0.16％w/w。該提取物的HPLC分布圖在圖中報(bào)告。
實(shí)施例4在己烷中的提取和異構(gòu)化 將10kg含有140ppm番茄紅素的新鮮番茄切碎并均化。將水部分在減壓下蒸餾除去以獲得2.5kg番茄濃縮物。這種濃縮物用12.5L己烷提取；在提取期間，將混合物維持在室溫，避光并攪拌2小時(shí)。隨后提取物從番茄濃縮物中分離。以上所述方法對(duì)這種番茄濃縮物重復(fù)一次，總共使用25L溶劑。將提取物合并，并在減壓下濃縮以獲得具有10％w/v干殘余物的溶液；這種干殘余物具有9.1％w/w的番茄紅素總含量和0.46％w/w的Z異構(gòu)體含量。將這種混合物在攪拌下回流(69℃)6日，隨后在減壓下濃縮至干燥。獲得16.5g最終提取物，其具有9.1％w/w的番茄紅素總含量和5.62％w/w的Z異構(gòu)體含量；特別地，E異構(gòu)體含量是3.38％w/w并且13-Z異構(gòu)體含量是0.18％w/w。
實(shí)施例5在丁醇中異構(gòu)化 將10kg含有90ppm番茄紅素的新鮮番茄切碎并均化。將水部分在減壓下蒸餾除去以獲得3.4kg番茄濃縮物。這種濃縮物用7L水飽和的乙酸乙酯提取。在提取期間，將混合物維持在室溫，避光并攪拌2小時(shí)。隨后從番茄濃縮物中分離提取物。以上所述方法對(duì)這種番茄濃縮物重復(fù)兩次，總共使用21L溶劑。將合并的提取物在分液漏斗中用5.3L水洗滌。隨后拋棄水相而將有機(jī)相在減壓下濃縮至干燥。具有7.8％w/w的番茄紅素總含量和0.40％w/w的Z異構(gòu)體含量的干殘余物(9.8g)懸浮在98ml正丁醇中。將所述混合物保持在130℃于攪拌下持續(xù)4小時(shí)，隨后在減壓下濃縮至干燥。獲得9.8g最終提取物，其具有6.35％w/w的番茄紅素總含量和4.50％w/w的Z異構(gòu)體含量；尤其，E異構(gòu)體含量是1.85％w/w并且13-Z異構(gòu)體含量是0.47％w/w。
實(shí)施例6在固體催化劑上的異構(gòu)化 材料 富含番茄紅素的番茄油樹(shù)脂獲自Indena s.p.a.(意大利，米蘭)。其番茄紅素總含量等于9.1％，其中全-E和5-Z異構(gòu)體分別占93.5％和6.5％。
方法 將番茄油樹(shù)脂在乙酸乙酯(1:100w/w)中的混懸液過(guò)濾并且在恒定攪拌下在室溫與5％固體催化劑孵育2小時(shí)。將混合物在Eppendorf Lab離心機(jī)中以最大速度離心并且將一等份的上清液在N2下蒸發(fā)并且重懸于正己烷/BHT中。
番茄紅素分析 總番茄紅素的量和番茄紅素異構(gòu)體分布圖分別通過(guò)反相和正相HPLC方法在實(shí)施例1中所述的分析條件下確定。
結(jié)果 在表4中報(bào)道了在室溫使用固體催化劑使番茄油樹(shù)脂異構(gòu)化2小時(shí)的所述番茄油樹(shù)脂中測(cè)量的番茄紅素異構(gòu)體分布圖。
表4.使用固體催化劑異構(gòu)化的番茄油樹(shù)脂中的番茄紅素異構(gòu)體分布圖
＊未知的番茄紅素異構(gòu)體 番茄紅素在乙酸乙酯中于室溫在Tonsil Optimum或Amberlyst 15存在下在2小時(shí)反應(yīng)期間有效地進(jìn)行異構(gòu)化。借助兩種催化劑，將大部分的番茄紅素全-E異構(gòu)體轉(zhuǎn)化成Z-異構(gòu)體。在已鑒定的番茄紅素異構(gòu)體中，主要地形成5-Z，隨后分別是9-Z和13-Z；因此，13-Z異構(gòu)體的濃度在異構(gòu)化番茄油樹(shù)脂中低于10％。
權(quán)利要求
1.制備富含順-番茄紅素(Z異構(gòu)體)的穩(wěn)定組合物的方法，所述方法通過(guò)在溶劑中長(zhǎng)時(shí)間加熱含番茄紅素的材料而實(shí)施。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中含番茄紅素的材料由番茄、番茄部分、其衍生物、或在溶劑中的番茄提取物組成。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中溶劑是C3-C10脂族烴、C1-C3氯化溶劑、C3-C6酯、C3-C8酮或C1-C8醇。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其中溶劑選自己烷、四氯化碳、乙酸乙酯、丙酮、丁醇。
5.權(quán)利要求1所述的方法，其中加熱溫度是50至150℃。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中加熱時(shí)間是4至240小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過(guò)在溶劑中長(zhǎng)時(shí)間加熱番茄、番茄部分、其衍生物、或在溶劑中的番茄提取物而制備富含順-番茄紅素(Z-異構(gòu)體)的穩(wěn)定組合物的方法。
文檔編號(hào)A23L1/30GK101500436SQ200780029333
公開(kāi)日2009年8月5日 申請(qǐng)日期2007年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月8日
發(fā)明者A·焦里, F·弗蘭切斯基 申請(qǐng)人:因德納有限公司