專利名稱：卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基，其主要成分是蛋白胨、氯化鈉、 磷酸氫二鈉、硫酸鎂葡萄糖、瓊脂、50%卵黃生理鹽水乳化液、蒸餾水按比例混合經(jīng)加溫、溶 解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基。主要用于檢查細菌卵 磷脂酶的活性。生物實驗的核心問題是掌握生物的特性生態(tài)作用。評價實驗方法的準確性 和特異性，檢查細菌卵磷脂酶的活性，必須嚴格掌握作用時間，獲得微生物準確的特性，才 能快速檢測診斷，這就要求方法簡單，使用方便，結果可靠。卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基可用于快 速檢測診斷熒光假單胞菌。已有培養(yǎng)基劑品種很多，不具有切實可靠的方法；培養(yǎng)基本身或 與細菌反應的產(chǎn)物對實驗微生物有殺滅或抑制其生長的作用；對培養(yǎng)成分有破壞作用，亦 影響其物理性狀。隨著消毒研究的進展，國內外對培養(yǎng)基的研究也在不斷的發(fā)展中。生物 實驗工作者一直希望能有一種能克服上述培養(yǎng)基不足的卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基。本反應可受 pH值、蛋白胨種類等影響，鈣鹽對反應可有抑制作用，在培養(yǎng)基中加入l^葡萄糖可獲良好 結果。可用牛心肌浸液加入等量10%卵黃鹽水懸液制成液體培養(yǎng)基，接種待試菌培養(yǎng)1 5天，呈現(xiàn)顯著混濁為陽性。
技術背景本發(fā)明的目的在于提供一種能一種能克服上述培養(yǎng)基不足的卵磷脂 酶試驗培養(yǎng)基。本反應可受pH值、蛋白胨種類等影響，鈣鹽對反應可有抑制作用，在培養(yǎng)基 中加入1%葡萄糖可獲良好結果?？捎门Ｐ募〗杭尤氲攘?0%卵黃鹽水懸液制成液體培 養(yǎng)基，接種待試菌培養(yǎng)1 5天，呈現(xiàn)顯著混濁為陽性。與其它類中和劑相比具備下列特點 卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基可用于快速檢測診斷熒光假單胞菌。;本反應可受pH值、蛋白胨種類等 影響，鈣鹽對反應可有抑制作用，在培養(yǎng)基中加入1%葡萄糖可獲良好結果。可用牛心肌浸 液加入等量10 %卵黃鹽水懸液制成液體培養(yǎng)基，接種待試菌培養(yǎng)1 5天，呈現(xiàn)顯著混濁為 陽性。 發(fā)明內容本發(fā)明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、 混合、冷卻、高溫滅菌、分裝、等工藝而成一種卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基。 本發(fā)明選擇的配方如下(組分及其重量百分比％)蛋白胨18-20 ;氯化鈉 0. 8-1. 0 ;磷酸氫二鈉2. 0-2. 5 ;硫酸鎂0. 05-0. 07 ;葡萄糖0. 8_1. 0 ;瓊脂10-12 ;50%卵黃 生理水乳化液加至100 ;(蒸餾水稀釋至1000mL)。 卵磷脂酶屬磷脂水解酶類，產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的卵磷脂酶，A型菌主要的致死毒 素，在鈣、鎂離子存在的條件下，迅速水解卵磷脂，生成甘油二酸酯和磷酸膽堿，主要用于檢 查細菌卵磷脂酶活性。在培養(yǎng)物周圍產(chǎn)生混濁環(huán)是甘油酯，卵黃被分解產(chǎn)生的游離脂肪和 卵黃磷蛋白反應而產(chǎn)生沉淀。將待試菌18 24h培養(yǎng)物接種于平板或斜面培養(yǎng)基上，36°C 培養(yǎng)18 24h觀察結果。在菌落周圍產(chǎn)生乳白色渾濁環(huán)為陽性反應。質控陽性菌株熒光 假單胞菌。陰性菌株銅綠假單胞菌。本反應可受PH值、蛋白胨種類等影響，鈣鹽對反應可 有抑制作用，在培養(yǎng)基中加入1%葡萄糖可獲良好結果?？捎门Ｐ募〗杭尤氲攘?0%卵 黃鹽水懸液制成液體培養(yǎng)基，接種待試菌培養(yǎng)1 5天，呈現(xiàn)顯著混濁為陽性。
本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是 (1)、除卵黃液外，其他成分混合加熱溶解，調pH7. 4， 115°C 15min高壓滅菌。冷至約50°C， (2)、加入無菌的卵黃液，混合均勻，傾注無菌平皿或分裝每管10mL制成斜面。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基可用于快速檢測診斷熒光假單胞菌。； 本反應可受pH值、蛋白胨種類等影響，鈣鹽對反應可有抑制作用，在培養(yǎng)基中加入l^葡萄 糖可獲良好結果。可用牛心肌浸液加入等量10%卵黃鹽水懸液制成液體培養(yǎng)基，接種待試 菌培養(yǎng)1 5天，呈現(xiàn)顯著混濁為陽性。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明
按照下表所列數(shù)據(jù)(重量百分比％ )及其所述步驟進行配置
配方一
蛋白胨18-20;氯化鈉0. 8-1. 0;磷酸氫二鈉2. 0-2. 5;硫酸鎂0. 05-0. 07;葡萄糖0. 8-1. 0; 瓊脂10-12; 50%卵黃生理水乳化液加至100;(蒸餾水稀釋至1000 mL)。
配方一
蛋A胨19-20;氯化鈉0. 9-1.0;磷酸氫二鈉2. 2-2. 5;硫酸鎂0. 06-0. 07;葡萄糖0. 9-1. 0;
瓊脂11-12; 5(F。卵黃生理水乳化液加至100;(蒸餾水稀釋至1000 mL)。
配方三
蛋白胨18-19;氯化鈉0. 8-0. 9;磷酸氫二鈉2. 0-2. 4;硫酸鎂0. 05-0. 06;葡萄糖0. 8-0. 9;
瓊脂10-11; 50%卵黃生理水乳化液加至100;(蒸餾水稀釋至1000 mL)。
蛋白胨18.5-19.5;氯化鈉0.8-0.9;磷酸氫二鈉2.1-2.4;硫酸鎂0.06-0.07;葡萄糖 0.9-1.0;瓊脂11-12; 50%卵黃生理水乳化液加至100;(蒸餾水稀釋至誦ItlL)。
權利要求
本發(fā)明涉及一種卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基，其主要成分是蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鈉、硫酸鎂葡萄糖、瓊脂、50％卵黃生理鹽水乳化液、蒸餾水按比例混合經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基；其特征在于具有如下配方(組分及其重量百分比％)蛋白胨18-20；氯化鈉0.8-1.0；磷酸氫二鈉2.0-2.5；硫酸鎂0.05-0.07；葡萄糖0.8-1.0；瓊脂10-12；50％卵黃生理水乳化液加至100；(蒸餾水稀釋至1000mL)。
2. —種權利要求1所述卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于具有如下的步驟(1) 、除卵黃液外，其他成分混合加熱溶解，調pH7. 4， 115°C 15min高壓滅菌。冷至50°C;(2) 、加入無菌的卵黃液，混合均勻，傾注無菌平皿或分裝每管10mL制成斜面。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基，其主要成分是蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鈉、硫酸鎂葡萄糖、瓊脂、50％卵黃生理鹽水乳化液、蒸餾水按比例混合經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基。主要用于檢查細菌卵磷脂酶的活性。生物實驗的核心問題是掌握生物的特性生態(tài)作用。評價實驗方法的準確性和特異性，檢查細菌卵磷脂酶的活性，必須嚴格掌握作用時間，獲得微生物準確的特性，才能快速檢測診斷，這就要求方法簡單，使用方便，結果可靠。卵磷脂酶試驗培養(yǎng)基可用于快速檢測診斷熒光假單胞菌。本反應可受pH值、蛋白胨種類等影響，鈣鹽對反應可有抑制作用，在培養(yǎng)基中加入1％葡萄糖可獲良好結果?？捎门Ｐ募〗杭尤氲攘?0％卵黃鹽水懸液制成液體培養(yǎng)基，接種待試菌培養(yǎng)1~5天，呈現(xiàn)顯著混濁為陽性。
文檔編號C12Q1/04GK101698881SQ20071011573
公開日2010年4月28日 申請日期2007年12月18日 優(yōu)先權日2007年12月18日
發(fā)明者曲奕 申請人:曲奕