專(zhuān)利名稱(chēng)：：光學(xué)活性α-羥基羧酸的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及光學(xué)活性cx-羥基羧酸或光學(xué)活性a-羥基羧酸酯的制造方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及使用微生物由a-羥基羧酸酯的外消旋混合物有效制造光學(xué)活性(x-羥基羧酸或光學(xué)活性(x-羥基羧酸酯的方法。
背景技術(shù)：
：ot-羥基羧酸或其衍生物作為各種醫(yī)藥和農(nóng)藥的制造用中間體是有用的，特別是由于在a位具有不對(duì)稱(chēng)中心的光學(xué)活性a-羥基羧酸或其酯衍生物可以用來(lái)制造各種生理活性化合物，因而對(duì)有效制造光學(xué)純度高的光學(xué)活性(x-羥基羧酸或其酯衍生物的方法進(jìn)行了深入研究。例如已知有可利用光學(xué)活性a-羥基羧酸酯來(lái)有效地制造氯吡格雷(cl叩idgrd:(S)-2(2-氯苯基)-2-(4，5,6,7-四氫噻吩并[3,2-。]-5-吡啶基)乙酸甲酉旨)的方法(曰本特開(kāi)2001-519353號(hào)公報(bào))，氯吡格雷在作為血小板凝聚抑制劑和抗血栓劑的有用性方面被賦予了較大的期望。該方法包括對(duì)(R)-2-氯苯乙醇酸甲酯的(x-經(jīng)基進(jìn)行磺酰化，并使其與4,5,6,7-四氫噻吩并[3，2-c]-5-吡啶反應(yīng)的步驟。作為光學(xué)活性a-羥基羧酸或其酯的制造方法，已知有使用光學(xué)活性蘇型l-(對(duì)硝基苯基)-2-氨基-l，3-丙二醇或光學(xué)活性賴(lài)氨酸經(jīng)非對(duì)映異構(gòu)體鹽來(lái)光學(xué)分離2-氯苯乙醇酸外消旋混合物從而制造光學(xué)活性2-氯苯乙醇酸的方法(日本特開(kāi)2004-530717號(hào)公報(bào))。但是，該方法存在必須使用價(jià)格高的試劑作為用于光學(xué)分離的分離劑的缺點(diǎn)。此外，還提出了使用羥基腈裂解酶，由2-氯苯甲醛和氰化劑(cyanidedoner,氰化氫等)來(lái)制造光學(xué)活性氰醇(2-氯苯乙醇腈)的方法，在該方法中，通過(guò)水解由該光學(xué)活性氰醇得到光學(xué)活性2-氯苯乙醇酸(日本特開(kāi)2004-57005號(hào)公報(bào))。還提出了對(duì)由2-氯苯甲醛和氰化劑(氰化氫等)得到的氰醇(2-氯苯乙醇腈)進(jìn)行不對(duì)稱(chēng)水解來(lái)得到光學(xué)活性2-氯苯乙醇酸的方法(日本特開(kāi)平4-99496號(hào)公報(bào))。但是，這些方法使用的氰化劑(氰化氫等)具有在處理上伴有危險(xiǎn)性的缺點(diǎn)。還提出了使用對(duì)苯乙醛酸衍生物具有對(duì)a位羰基進(jìn)行立體選擇性還原的能力的微生物，得到光學(xué)活性的苯乙醇酸衍生物的方法(日本特開(kāi)2003-199595號(hào)公報(bào)和日本特開(kāi)2004-49028號(hào)公報(bào))。但是，用作原料的ot酮酸(苯乙醛酸衍生物)的價(jià)格高，還需要輔酶的再生系統(tǒng)，所以該方法存在制造成本高的缺點(diǎn)。另外，還提出了一種方法，其中，對(duì)苯乙醇酸衍生物進(jìn)行立體選擇性氧化，使具有生成a羰基化物能力的微生物作用于苯乙醇酸衍生物的外消旋混合物，取出未反應(yīng)物，得到光學(xué)純度高的苯乙醇酸衍生物(日本特開(kāi)平6-165695號(hào)公報(bào))。但是，該方法存在a羰基化物和a羥基物的分離復(fù)雜，有時(shí)分離本身就困難的缺點(diǎn)。此外，作為涉及以(x-芳基-(x-羥基酸酯的酶的水解為特征的光學(xué)活性體的制法的技術(shù)，已知有日本特開(kāi)平2-53497號(hào)公報(bào)和日本特開(kāi)平2-156892號(hào)公報(bào)記載的方法，但這些專(zhuān)利公報(bào)所具體公開(kāi)的實(shí)施例僅限于使用苯乙醇酸的方法，存在有用性低的問(wèn)題。另外，CanadianJournalofChemistry,68(2)，p.314，1990中公開(kāi)了對(duì)具冇各種取代基的a-芳基-a--好基酸酯進(jìn)行酶水解的方法，但所使用的酶限于碳酸脫水酶，生成物的光學(xué)純度僅為4050。/。ee左右，選擇性低，所以該方法存在有用性低的問(wèn)題。專(zhuān)利文獻(xiàn)l:日本特開(kāi)2001-519353號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2:日本特開(kāi)2004-530717號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)3:日本特開(kāi)2004-57005號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)4:日本特開(kāi)平4-99496號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)5:日本特開(kāi)2003-199595號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)6:日本特開(kāi)2004-49028號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)7:日本特開(kāi)平6-165695號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)8:日本特開(kāi)平2-53497號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)9:日本特開(kāi)平2-156892號(hào)公報(bào)非專(zhuān)利文獻(xiàn)1:CanadianJournalofChemistry,68(2),p.314,1990
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的課題在于提供光學(xué)活性a-羥基羧酸或光學(xué)活性a-羥基羧酸酯的有效制造方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明的課題在于提供使用微生物由cx-羥基羧酸酯的外消旋混合物有效地制造光學(xué)活性a-羥基羧酸或光學(xué)活性a-羥基羧酸酯的方法。本發(fā)明人為了解決上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，若使用屬于特定屬的微生物或其提取物等對(duì)(x-羥基羧酸酯的外消旋混合物進(jìn)行水解，則酯的水解是立體選擇性地進(jìn)行的，并且發(fā)現(xiàn)利用該水解反應(yīng)能夠非常有效地制造光學(xué)活性(x-羥基羧酸或光學(xué)活性羥基羧酸酯。本發(fā)明是基于上述認(rèn)識(shí)完成的。艮口，本發(fā)明提供下述的通式(I)所示的化合物的制造方法，(式(I)中，A表示5元或6元的環(huán)狀化合物的殘基，該環(huán)狀化合物選自芳香族化合物、部分飽和環(huán)狀化合物或飽和環(huán)狀化合物，成環(huán)原子可以具有1個(gè)以上的雜原子，環(huán)上可以具有取代基(該取代基是選自由鹵原子、可以具有取代基的碳原子數(shù)為14的烷基、可以具有取代基的碳原子數(shù)為14的烷氧基以及可以被保護(hù)基所保護(hù)的羥基、可以被保護(hù)基所保護(hù)的氨基、硝基組成的組中的1或2個(gè)以上的取代基，在存在有2個(gè)以上的取代基的情況下，這些取代基相同或不同，并且在存在有2個(gè)以上的取代基的情況下，這些取代基可以鍵合形成環(huán))，X表示氫原子或碳原子數(shù)為14的烷基，f表示具有S型或R型中的任意立體構(gòu)型的碳原子)，其中，所述方法包括利用選自由屬于下述屬的微生物組成的組中的微生物的菌體或者培養(yǎng)物、其處理物或其提取物對(duì)下述通式(n)所示的化合物進(jìn)行處理的步驟，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage113</formula>(II)(通式(n)中，A和X與上述的定義相同，R表示碳原子數(shù)為l4的烷基(該垸基可以被芳基所取代)，但是，從**所表示的碳原子方面出發(fā)，通式(II)所示的化合物為非光學(xué)純)，所述屬包括賴(lài)氏細(xì)菌(Ldfsonia)屬、柱孢(Cylindrocarpon)屬、輪枝孢(Verticillium)屬、分枝桿菌(Mycobacterium)屬、紅球菌(Rhodococcus)屬、外瓶霉(Exophiala)屬、紅酵母(Rhodotorula)屬、芽孢桿菌(Bacillus)屬、短波單胞菌(Brevundimonas)屬、假單胞菌(Pseudomonas)屬、根瘤菌(Rhizobium)屬、曲霉(Aspergillus)屬、白j畺菌(Beauveria)屬、青霉菌(Penicillium)屬、i若卡氏菌(Nocardia)屬、-戈登氏—菌—(Gordonia)屬、卩彖豐支包(Rhinocladiella)屬、豐支氯-霉(Ramichloridium)屬以及產(chǎn)卟啉桿菌(Porphyrobacter)屬。根據(jù)上述發(fā)明的優(yōu)選方式，提供其中A是氯苯基、R是碳原子數(shù)為14的垸基或芐基、X是氫原子的上述方法。另外，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方式，提供包括對(duì)通式(II)所示的化合物中"所表示的碳原子是R構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解來(lái)得到通式(1)所示的化合物中*所表示的碳原子是R構(gòu)型的化合物的步驟的上述方法。另外，根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的其它方式，提供包括對(duì)通式(n)所示的化合物中"所表示的碳原子是S構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解來(lái)得到通式(I)所示的化合物'f^所表小的碳原子是S構(gòu)型的化合物的步驟的上述方法。從另一個(gè)角度出發(fā)，本發(fā)明提供下述通式(III)所示的化合物的制造方法，其中，所述方法包括利用選自由屬于下述屬的微生物組成的組中的微生物的菌體或者培養(yǎng)物、其處理物或其提取物對(duì)上述通式(II)所示的化合物進(jìn)行處理從而對(duì)通式(n)(式(n)中，a、r、x以及"與上述定義相同)所示的化合物中**所表示的碳原子是S構(gòu)型或R構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解并分離反應(yīng)液中殘留的光學(xué)純的未反應(yīng)酯化合物的步驟，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>(式(III)中，A、R、X以及+與上述定義相同)，所述屬包括賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬、紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、喙枝孢屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬。根據(jù)上述發(fā)明的優(yōu)選方式，提供其中A是氯苯基、R是碳原子數(shù)為14的烷基或芐基、X是氫原子的上述方法。具體實(shí)施方式通式(I)所示的化合物中，A表示5元或6元的環(huán)狀化合物的殘基。所謂殘基是指將鍵合在環(huán)狀化合物的成環(huán)原子上的氫除去一個(gè)所得到的l價(jià)基團(tuán)。該環(huán)狀化合物可以是芳香族化合物、部分飽和環(huán)狀化合物、或者飽和環(huán)狀化合物中的任一個(gè)，成環(huán)原子可以具有1個(gè)以上的雜原子。對(duì)雜原子的種類(lèi)沒(méi)有特別的限制，例如可以使用氮原子、氧原子或者硫原子等，在存在有2個(gè)以上的成環(huán)雜原子的情況下，這些雜原子相同或不同。作為環(huán)狀化合物，更具體地說(shuō)，可以舉出苯；5元或6元的芳香族雜環(huán)化合物(例如呋喃、噻吩、吡啶、嘧啶等)；5元或6元的脂肪族環(huán)狀化合物(例如環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)己烯等)或者5元或6元的雜環(huán)化合物(例如吡咯垸、哌啶、哌嗪、嗎啉、二氫呋喃、四氫呋喃等)等。這些之中，環(huán)狀化合物優(yōu)選為苯。環(huán)狀化合物可以具有取代基，該取代基是選自由鹵原子、可以具有取代基的碳原子數(shù)為14的烷基、卩了以具有取代基的碳原子數(shù)為14的烷氧基以及可以被保護(hù)基所保護(hù)的羥基、可以被保護(hù)基所保護(hù)的氨基、硝基組成的組中的1或2個(gè)以上的取代基。環(huán)狀化合物具有取代基的情況下，對(duì)取代基的個(gè)數(shù)和取代位置沒(méi)有特別限定。具有2個(gè)以上的取代基的情況下，這些取代基相同或不同。上述烷基或烷氧基具有取代基的情況下，對(duì)取代基的種類(lèi)、個(gè)數(shù)以及取代位置沒(méi)有特別限定，具有2個(gè)以上的取代基的情況下，這些取代基可以相同或不同。作為上述烷基或烷氧基的取代基，可以舉出例如羥基、鹵原子或者氨基等，但不限于這些。環(huán)狀化合物具有2個(gè)以上的取代基的情況下，這些取代基可以相互鍵合而構(gòu)成環(huán)。這種情況下，環(huán)結(jié)構(gòu)可以為芳香族、部分飽和或者完全飽和的任一情況。例如，可以舉出2個(gè)烷基鍵合形成碳環(huán)的情況、l個(gè)垸氧基與羥基鍵合形成二氧化亞烷基的環(huán)結(jié)構(gòu)的情況等，但不限于這些。作為保護(hù)基，可以舉出例如ProtectiveGroupsinOrganicChemistry(J.F.W.McOmieetal.,PlenumPress;ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,Edition(TheodoraW.Green，PeterG.M.Wuts，JohnWily&Sons,Inc.(ISBNO-471-16019-9),April1999)中記載的保護(hù)基，具體地說(shuō)，可以舉出甲基、乙基、異丙基、叔丁基、甲氧基甲基、芐氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、甲硫基甲基、苯硫基甲基、四氫吡喃基、對(duì)溴苯甲酰FP基、烯丙基、環(huán)己基等醚型保護(hù)基；芐基、2，6-二甲基芐基、4-甲氧基芐基、2,6-二氯芐基、9-蒽甲基、二苯基甲基、苯乙基、三苯基甲基等芐基型保護(hù)基；三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、二甲基乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基等甲硅烷基型保護(hù)基；乙酰基、氯乙?；⑷阴；⑿挛祯；弱；捅Ｗo(hù)基；苯甲酰基、對(duì)甲基苯甲酰基、對(duì)氯苯甲?；?、鄰氯苯甲?；?duì)硝基苯甲?；确减；捅Ｗo(hù)基；甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、芐氧基羰基、對(duì)甲基芐氧基羰基等碳酸酯型保護(hù)基；二甲基膦基、二乙基膦基等次膦酸酯型保護(hù)基；甲烷磺?；?、乙垸磺?；?、氯甲烷磺?；?、氯乙烷磺?；⑷燃综酋；?、三氟甲烷基磺?；⒈交酋；?、對(duì)甲苯磺?；⑧徬趸交酋；?、間硝基苯磺?；?duì)硝基苯磺?；⑧徛缺交酋；?、間氯苯磺酰基、對(duì)氯苯磺?；然酋；捅Ｗo(hù)基等。通式(i)、(n)以及(ni)所示的化合物中，X表示碳原T數(shù)為14的烷基。該烷基可以是直鏈狀，也可以是支鏈狀。通式(II)所示的化合物中，R表示碳原子數(shù)為14的烷基。該垸基可以被1個(gè)或2個(gè)以上的芳基所取代，作為芳基，優(yōu)選苯基等。作為該烷基被苯基等芳基所取代的情況的例子，可以舉出芐基、二苯甲基、苯乙基等。本發(fā)明的方法是上述通式(i)所示的化合物的制造方法，其特征在于，所述方法包括將上述通式(ii)所示的化合物用屬于下述屬的微生物的菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物進(jìn)行處理的步驟。通式(i)中，*表示具有S型或R型中的任意立體構(gòu)型的碳原子，從該不對(duì)稱(chēng)碳原子方面出發(fā)，通式(i)所示的化合物實(shí)質(zhì)上為光學(xué)純的化合物。通式(i)所示的化合物具有其他的不對(duì)稱(chēng)碳原子的情況下，對(duì)其立體構(gòu)型沒(méi)有特別限定。另外，通式(n)所示的化合物中，**表示從該碳原子出發(fā)，通式(n)所示的化合物實(shí)質(zhì)上為非光學(xué)純。例如，可以使用該碳原子為s型和該碳原子為r型的任意比例的混合物或外消旋體等。本發(fā)明的方法中所使用的微生物是屬于下述屬的微生物賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬、紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、喙枝孢屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬。作為本發(fā)明的方法所用的微生物，更具體地說(shuō)，可以舉出水生雷弗森菌(Ldfsoniaaquatica)、柱孢菌(Cylindrocarponsp.)、細(xì)桿輪枝孢菌(Verticilli匿leptobactmm)、耳止堀分枝桿菌(Mycobacteriumsmegmatis)、草分枝桿菌(Mycobacteriumphlei)、牛匕牛分枝桿菌(Mycobacteriumvaccae)、馬紅球菌(Rhodococcusequi)、香豌豆帶化紅球菌(Rhodococcusfascians)、拉提斯拉韋紅球菌(Rhodococcuswmtislaviensis)、頓氏夕卜并瓦霄(Exophialajeanselmei)、皮炎外瓶霉(Exophialadermatitidis)、橙紅酵母(Rhodotomlaaumntiaca)、蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)、梭形芽孢桿菌(Bacillusfusiformis)、缺陷短波單胞菌(Brevundimonasdiminuta)、綠膿假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、方夂射型根瘤菌(Rhizobiumradiobacter)、赭曲霉(Aspergillusochraceus)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、小朿IJ青霉菌(Penicilliumspinulosum)、星形諾卡氏菌(Nocardiaasteroides)、小球諾卡氏菌(Nocardiagloberula)、分支戈登氏菌(Gordoniabronchialis)、痰液戈登氏菌(Gordoniasputi)、紅核戈登氏菌(Gordoniarubripertincta)、紅球菌(Rhodococcussp.)、玫瑰色紅球菌(Rhodococcusrhodochrous)、紅串紅球菌(Rhodococcuserythropolis)、愛(ài)麗絲喙枝孢(Rhinocladiellaellisii)、暗綠喙枝孢(Rhinocladiellaatrovirens)、劍形枝氯霉(Ramichloridiumanceps)以及血素產(chǎn)卩卜啉桿菌(Porphyrobactersanguineus)等，但并不限于這些。作為上述方法的優(yōu)選方式之一，可以舉出包括對(duì)上述通式(II)所示的化合物中**所表示的碳原子是R構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解并分離提純上述通式(1)所示的化合物中*所表示的碳原子是R構(gòu)型的化合物的步驟的方法。該方式中，作為微生物，可以使用例如屬于下述屬的微生物賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬以及喙枝孢屬。作為屬于這些屬的微生物，更具體地說(shuō)，可以舉出下述的微生物，但不限于這些。水生雷弗森菌、柱孢菌、細(xì)桿輪枝孢菌、恥垢分枝桿菌、草分枝桿菌、牝牛分枝桿菌、馬紅球菌、香豌豆帶化紅球菌、拉提斯拉韋紅球菌、甄氏外瓶霉、皮炎外瓶霉、愛(ài)麗絲喙枝孢以及暗綠喙枝孢。此外，作為上述方法的其他優(yōu)選方式，可以舉出包括對(duì)上述通式(n)所示的化合物中**所表示的碳原子是s構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解來(lái)得到上述通式(I)所示的化合物中a所表示的碳原子是S構(gòu)型的化合物的歩驟的方法。該方式中，作為微生物，可以使用例屬于如—F述屬的微生物紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、紅球菌屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬。作為屬于這些屬的微生物，更具體地說(shuō)，可以舉出下述的微生物，但不限于這些。橙紅酵母、蠟樣芽孢桿菌、梭形芽孢桿菌、缺陷短波單胞菌、綠膿假單胞菌、放射型根瘤菌、赭曲霉、米曲霉、球孢白僵菌、小刺青霉菌、星形諾卡氏菌、小球諾卡氏菌、分支戈登氏菌、痰液戈登氏菌、紅核戈登氏菌、紅球菌、玫瑰色紅球菌、紅串紅球菌、劍形枝氯霉以及血素產(chǎn)卟啉桿菌。從另一個(gè)角度出發(fā)所提供的本發(fā)明的方法是上述通式(ni)所示的化合物的制造方法，其特征在于，所述方法包括將上述通式(n)所示的化合物用屬于下述屬的微生物的菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物進(jìn)行處理，對(duì)通式(II)所示的化合物中"所表示的碳原子是S構(gòu)型或R構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解，分離反應(yīng)液中殘留的光學(xué)純的未反應(yīng)酯化合物的步驟。該方法中，可以使用屬于下述屬的微生物賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬、紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、喙枝孢屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬。作為該方法的優(yōu)選方式之一，其包括對(duì)通式(II)所示的化合物中"所表不的碳原子是R構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解的步驟。該優(yōu)選方式中，可以使用屬于下述屬的微生物賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬以及喙枝孢屬。作為屬于這些屬的微生物，更具體地說(shuō)，可以舉出下述的微生物，但不限于這些。水生雷弗森菌、柱孢菌、細(xì)桿輪枝孢菌、恥垢分枝桿菌、草分枝桿菌、牝牛分枝桿菌、馬紅球菌、香豌豆帶化紅球菌、拉提斯拉韋紅球菌、甄氏外瓶霉、皮炎外瓶霉、愛(ài)麗絲喙枝孢以及暗綠喙枝孢。此外，該方法的優(yōu)選方式中，包括對(duì)通式(11)所示的化合物中**所表示的碳原子是S構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解的步驟。該優(yōu)選方式中，可以使用屬于下述屬的微生物紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、紅球菌屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬。作為屬于這些屬的微生物，更具體地說(shuō)，可以舉出下述的微生物，但不限于這些。橙紅酵母、蠟樣芽孢桿菌、梭形芽孢桿菌、缺陷短波單胞菌、綠膿假單胞菌、放射型根瘤菌、赭曲霉、米曲霉、球孢白僵菌、小剌青霉菌、星形諾-氏菌、小球諾卡氏菌、分支戈登氏菌、痰液戈登氏菌、紅核戈登氏菌、紅球菌、玫瑰色紅球菌、紅串紅球菌、劍形枝氯霉以及血素產(chǎn)卟啉桿菌。不過(guò)，上述的微生物是為了舉例而給出的，對(duì)于屬于同一屬的2種微生物株，有時(shí)在上述水解反應(yīng)中表現(xiàn)出相反的立體選擇性。根據(jù)本說(shuō)明書(shū)的實(shí)施例具體所示的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地辨認(rèn)出作為水解的產(chǎn)物的通式(i)所示的化合物是否具有所期望的立體構(gòu)型或者是否具有與所期望的立體構(gòu)型相反的立體構(gòu)型，能夠容易地判定所使用的微生物株是具有哪種立體選擇性的微生物。使用具有后者的立體選擇性的微生物的情況下，如上述說(shuō)明的那樣，可以從反應(yīng)液中分離、提純未反應(yīng)的原料化合物，進(jìn)行水解反應(yīng)，來(lái)得到具有所期望的立體構(gòu)型的通式(i)化合物。另外，通過(guò)使用具有這樣的選擇性的微生物，可以由通式(in)所示的酯化合物中僅對(duì)具有與所期望的立體構(gòu)型相反的立體構(gòu)型的酯進(jìn)行立體選擇性水解，從反應(yīng)液中分離、提純未反應(yīng)的原料化合物，通過(guò)進(jìn)一步進(jìn)行水解反應(yīng)，來(lái)得到具有所期望的立體構(gòu)型的通式(in)的酯化合'具有與所期望的立體構(gòu)型相反的立體構(gòu)型的通式(i)化合物經(jīng)酯化而得到的化合物、或者具有與所期望的立體構(gòu)型相反的立體構(gòu)型的通式(m)化合物可以通過(guò)通常的方法轉(zhuǎn)換成非光學(xué)純的通式(ni)化合物。例如，在溶液中，通過(guò)在強(qiáng)堿性物質(zhì)的存在下進(jìn)行加熱，可以使其外消旋化。通過(guò)將如此得到的非光學(xué)純的通式(ni)化合物用于與上述相同的微生物反應(yīng)，可以無(wú)需廢棄具有與所期望的立體構(gòu)型相反的立體構(gòu)型的化合物而將其再次利用。本發(fā)明的方法所使用的上述的微生物可以是野生株、變異株、或利用細(xì)胞融合等細(xì)胞工程的方法或者dna克隆、基因操作等基因工程的方法誘導(dǎo)產(chǎn)生的重組株等。這些微生物可以由各種微生物保藏機(jī)構(gòu)得到。例如，可以由東京大學(xué)應(yīng)用微生物研究所(iam)、獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)(nbrc)(原名稱(chēng)財(cái)團(tuán)法人發(fā)酵研究所(ifo))、獨(dú)立行政法人理化學(xué)研究所(jcm)等獲得。本發(fā)明的方法中，可以使用上述的微生物的菌體。作為菌體，可以舉出由培養(yǎng)液收取上述微生物而得到的菌體、或者由培養(yǎng)液集菌后進(jìn)行清洗而得到的菌體、經(jīng)干燥或丙酮粉體處理而得到的菌體等，這些中任意的菌體均可優(yōu)選使用。另外，還可以利用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)菌體固定化后進(jìn)行使用。固定化可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法(例如交聯(lián)法、物理吸附法、包埋法等)來(lái)進(jìn)行。作為固定化載體，只要是通常使用的載體，則均可以使用，例如可以舉出纖維素、瓊脂糖、葡聚糖、K-角叉菜膠、藻酸、明膠、醋酸纖維素等多糖類(lèi)；例如谷蛋白等天然高分子；例如活性炭、玻璃、白土、高嶺土、氧化鋁、硅膠、膨潤(rùn)土、羥基磷灰石、磷酸鈣等無(wú)機(jī)物；例如聚丙烯酰胺、聚醋酸乙烯酯、聚丙二醇、聚氨酯等合成吸附劑等。菌體還可以以封入微囊中的形式使用。當(dāng)然，菌體的使用方式并不限于上述方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可從本領(lǐng)域可利用的方法中適當(dāng)選擇使用。本發(fā)明的方法中，還可以使用上述的微生物的培養(yǎng)物。作為培養(yǎng)物，可以舉出利用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基對(duì)上述微生物進(jìn)行培養(yǎng)而得到的培養(yǎng)物。另外，本發(fā)明的方法中，可以使用上述的微生物的處理物或提取物。作為處理物，可以使用菌體或培養(yǎng)物自身消化的消化物(根據(jù)需要使菌體或培養(yǎng)物懸浮于緩沖液中)、菌體或培養(yǎng)物經(jīng)研缽、珠磨機(jī)(DYNO-MILL)、法式壓濾壺、超聲波、勻化器等物理的方法破碎得到的破碎物、或者菌體或培養(yǎng)物經(jīng)組合溶菌酶等酶的方法進(jìn)行破碎而得到的破碎物等。另外，作為提取物，除了利用水或者適當(dāng)?shù)木彌_液由菌體或者培養(yǎng)物或這些的處理物進(jìn)行提取而得到的提取液之外，還可以舉出下述物質(zhì)利用硫酸銨進(jìn)行鹽析而從該提取液中得到的沉淀物、利用醇等由該提取物中得到的沉淀物、以及采用下述方法對(duì)該提取液或該沉淀物進(jìn)行提純而得到的物質(zhì)，例如可以舉出含有酶的提取物等，所述方法為利用交聯(lián)葡聚糖等的凝膠過(guò)濾；使用帶有丁基、辛基、苯基等疏水性基團(tuán)的載體等的疏水層析法；使用帶有二乙基氨基乙基或羧基甲基的載體等的離子交換層析法；色素凝膠層析法、電泳、透析、超濾、親和層析法、高速液相色譜法等。本說(shuō)明書(shū)中所用的"提取物"這一術(shù)語(yǔ)有必要被最廣義地解釋為包括酶溶液、分離和/或提純的酶等的含義。作為酶，具體地說(shuō)，可以采用脂肪酶、(x-淀粉酶、酰基轉(zhuǎn)移酶等。作為這些酶，可以使用來(lái)自上述微生物的提純酶(例如市售的酶)。對(duì)于上述微生物的培養(yǎng)中的各種條件沒(méi)有特別限制，可以適當(dāng)選擇適合微生物的培養(yǎng)的通常的培養(yǎng)條件。對(duì)于培養(yǎng)基的種類(lèi)也沒(méi)有特別限定，可以適當(dāng)選擇分別適合細(xì)菌、真菌或者酵母的培養(yǎng)基。作為培養(yǎng)基，通常可以使用含有碳源、氮源及其他營(yíng)養(yǎng)素的液體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的碳源只要為上述微生物可利用的碳源即可，對(duì)其種類(lèi)沒(méi)有特別限定，可以使用任意的碳源。更具體地說(shuō)，作為碳源，可以舉出具有同化作用的碳源，例如可以使用葡萄糖、果糖、蔗糖、糊精、淀粉、山梨糖醇等糖類(lèi);甲醇、乙醇、甘油等醇類(lèi)；富馬酸、檸檬酸、醋酸、丙酸等有機(jī)酸類(lèi)及其鹽類(lèi)；烷烴等烴類(lèi)；糖蜜；或者這些的混合物等。作為氮源，只要是上述微生物可利用的氮源即可，對(duì)其種類(lèi)沒(méi)有特別限定，可以使用任意的氮源。具體地說(shuō)，可以舉出具有同化作用的氮源，例如可以使用氯化銨、硫酸銨、硝酸銨、磷酸銨等無(wú)機(jī)酸的銨鹽；富馬酸銨、檸檬酸銨等有機(jī)酸的銨鹽；硝酸鈉、硝酸鉀等硝酸鹽；肉汁、酵母浸膏、麥芽浸膏、蛋白胨、玉米漿、大豆蛋白水解物等無(wú)機(jī)或有機(jī)含氮化合物；或者這些的混合物等。另外，培養(yǎng)基中可以適當(dāng)添加磷酸鉀、硫酸鐵、硫酸鋅、硫酸錳等無(wú)機(jī)物；微量金屬鹽、維生素類(lèi)等通常用于培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)源。根據(jù)需要，還可以在培養(yǎng)基中添加誘發(fā)微生物活性的物質(zhì)、有效保持培養(yǎng)基的pH的緩沖物質(zhì)、消泡劑、硅、ADEKANOL(為一類(lèi)增稠劑)、普盧蘭尼克(pluronic)等。微生物的培養(yǎng)可以在適合各個(gè)微生物的生長(zhǎng)的條件下進(jìn)行，對(duì)于-這種條件，本領(lǐng)域技術(shù)人員可適當(dāng)選擇。例如，可以在培養(yǎng)基的pH為310、優(yōu)選49，溫度05(TC、優(yōu)選204(TC的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。微生物的培養(yǎng)可以對(duì)應(yīng)各個(gè)微生物的性質(zhì)在好氧或厭氧的條件下進(jìn)行。培養(yǎng)時(shí)間為1300小時(shí)，優(yōu)選為10150小時(shí)，可根據(jù)各個(gè)微生物來(lái)適當(dāng)確定。本發(fā)明的方法中，對(duì)將通式(II)所示的化合物用上述微生物的菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物進(jìn)行處理的條件沒(méi)有特別限定，只要上述的化合物與菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物充分接觸結(jié)果使得酯部位進(jìn)行水解反應(yīng)即可，可以選擇任意的條件。例如，只需在通式(n)所示的化合物的溶液中混合經(jīng)緩沖液或水等清洗的菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物即可。上述的步驟可以在水性的均一系中進(jìn)行，或者在實(shí)質(zhì)不溶于水或難溶于水的有機(jī)溶劑和水的二相系中進(jìn)行，通常優(yōu)選在水性的均一系中進(jìn)行。作為形成水性的均一系的溶劑，可以?xún)H以水作溶劑，也可以使用與水混和的適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑例如乙醇、甲醇、二氧六環(huán)、二甲亞砜等和水的混合物D可以將通式(II)所示的化合物溶解到上述的有機(jī)溶劑中，將所得到的溶液添加到含有上述微生物的菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物的水溶液或水中懸浮液中后進(jìn)行使用。此外，作為該微生物和提取物，可以是根據(jù)需要對(duì)菌體或培養(yǎng)物進(jìn)行了熱處理的熱處理物、或者對(duì)該熱處理物進(jìn)一步實(shí)施了1種或2種以上的適當(dāng)處理的處理物等。熱處理可通過(guò)本領(lǐng)域可利用的任意方法進(jìn)行，熱處理?xiàng)l件可結(jié)合目的來(lái)通過(guò)實(shí)驗(yàn)等適當(dāng)決定。作為熱處理的溫度，可以舉出例如約37。C以上的溫度，優(yōu)選約4070。C，更優(yōu)選約4560。C。熱處理的時(shí)間可根據(jù)處理溫度適當(dāng)選擇，例如約5分鐘約24小時(shí)，優(yōu)選約30分鐘10小時(shí)，更優(yōu)選約1小時(shí)5小時(shí)。代表性的熱處理包括在例如約45"C、約50'C、或者約55。C左右的溫度處理約24小時(shí)的步驟，更優(yōu)選包括在約4555。C處理約3小時(shí)左右的步驟。通過(guò)使用經(jīng)熱處理的菌體或培養(yǎng)物，有時(shí)能夠得到包括選擇性、轉(zhuǎn)化率等在內(nèi)的良好結(jié)果。處理?xiàng)l件只要是能進(jìn)行酯的不對(duì)稱(chēng)水解反應(yīng)的條件，則沒(méi)有特別限定。對(duì)于作為干燥菌體的菌體的用量、或者使用提取物等的情況下的使用添加量沒(méi)有特別的限制，例如為通式(II)所示化合物的百分之一1000倍、優(yōu)選十分之一100倍左右。另外，作為基質(zhì)的通式(II)所示的化合物的濃度為反應(yīng)體系總重量的0.0120重量％，優(yōu)選0.110重量％。另外，反應(yīng)液的pH為49，優(yōu)選58，反應(yīng)溫度為1050°C，優(yōu)選2040°C。還可以使用緩沖液來(lái)穩(wěn)定pH。作為緩沖液，可以使用磷酸緩沖液、Tris緩沖液、醋酸緩沖液等。另外，為了調(diào)整pH，也可以使用酸、堿進(jìn)行調(diào)整。另外，反應(yīng)時(shí)間為1小時(shí)200小時(shí)，優(yōu)選5小時(shí)150小時(shí)，可根據(jù)各個(gè)微生物適當(dāng)選擇。根據(jù)需要，也可以將基質(zhì)和/或微生物的菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物一次性添加、逐次添加或連續(xù)添加至反應(yīng)體系內(nèi)。還可以連續(xù)取出作為生成物的水解物同時(shí)提高反應(yīng)速度。由反應(yīng)得到的通式(i)所示的光學(xué)活性a-羥基羧酸或通式(in)所示的光學(xué)活性(X-羥基羧酸酯可通過(guò)常用的分離提純方法進(jìn)行分離提純。例如，根據(jù)需要從反應(yīng)液分離菌體后，可以利用膜分離、有機(jī)溶劑(例如甲苯、三氯甲烷等)提取、柱色譜、減壓濃縮、蒸餾、晶析、重結(jié)晶等通常的提純方法對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行提純，來(lái)得到通式(I)所示的光學(xué)活性(x-羥基羧酸或通式(m)所示的光學(xué)活性(x-羥基羧酸酯。另外，例如，反應(yīng)結(jié)束后，可以利用乙酸丁酯、乙酸乙酯、甲苯、三氯甲烷等有機(jī)溶劑從反應(yīng)液提取生成物，蒸餾除去溶劑，來(lái)得到粗生成物，根據(jù)需要，可通過(guò)硅膠層析法、重結(jié)晶(正己烷、乙酸乙酯等)、減壓蒸餾等對(duì)該粗生成物進(jìn)行提純。此外，通過(guò)進(jìn)行不對(duì)稱(chēng)水解反應(yīng)，反應(yīng)液中除了存在通式(I)所示的光學(xué)活性(x-羥基羧酸之外，還存在沒(méi)有被水解的殘存在反應(yīng)液中的光學(xué)純的未反應(yīng)酯化合物(光學(xué)活性(x-羥基羧酸酯)。在對(duì)該光學(xué)活性ot-羥基羧酸酯進(jìn)行分離提純后，對(duì)酯基進(jìn)行水解，由此可以制造出通式(I)所示的光學(xué)活性(x-羥基羧酸。作為水解中使用的酸或堿，只要是在常規(guī)反應(yīng)中作為酸或堿使用的物質(zhì)，則沒(méi)有特別限制，可以舉出例如鹽酸、硫酸等無(wú)機(jī)酸類(lèi)；氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、氫化鈉、氫化鋰或者氨水等堿，可以?xún)?yōu)選使用氫氧化鈉或氫氧化鉀等。利用堿進(jìn)行水解時(shí)，優(yōu)選選擇適當(dāng)?shù)臈l件，以使通式(I)所示的化合物不產(chǎn)生立體反轉(zhuǎn)。作為用于水解的反應(yīng)溶劑，只要該溶劑不妨礙反應(yīng)的進(jìn)行，并且能充分溶解原料，則沒(méi)有特別限制，可以舉出例如醇類(lèi)(甲醇、乙醇等)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAc)、二乙醚、四氫呋喃、二氧六環(huán)、水、丙酮或者這些的混合物等，優(yōu)選使用醇類(lèi)、水或者這些的混合物。反應(yīng)溫度通常為-2015(TC，優(yōu)選為1030°C。反應(yīng)時(shí)間根據(jù)所使用的原料、溶劑、反應(yīng)溫度等的不同而不同，但通常為5分鐘36小時(shí)，優(yōu)選為10分鐘16小時(shí)?；|(zhì)可以利用常規(guī)方法由低成本供給的非光學(xué)純的ot-羥基羧酸和醇進(jìn)行制造。實(shí)施例下文通過(guò)實(shí)施例更具體地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的限制。實(shí)施例1利用5mL含有P/。葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。在該菌體中添加適量的水、50pL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg(20Q/。乙醇溶液50nL)外消旋體2-氯苯乙醇酸甲酯，混合后，取1mL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,Inertsil0DS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.92mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-2-氯苯乙醇酸。將上述微生物換成表1所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示結(jié)果。[表1]<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。在其中添加適量的水、50pL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg(20。/c乙醇溶液50^iL)外消旋體2-氯苯乙醇酸甲酯，混合后，取1mL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.71mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-2-氯苯乙醇酸。將上述微生物換成表2所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示的結(jié)果。[表2]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實(shí)施例3利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25t:對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。在其中添加適量的水、50(iL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg(20。/。乙醇溶液50)iL)外消旋體2-氯苯乙醇酸甲酉旨，混合后，取1mL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)72小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,Inertsil0DS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到殘留了5.04mg/mL未反應(yīng)的2-氯苯乙醇酸甲酯。為了確認(rèn)殘存物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(CHIRALCELOJDAICEL社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度250mm，洗脫液正己烷/IPA-9/1，流速L0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-2-氯苯乙醇酸甲酯。將上述微生物換成表3所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示的結(jié)果。[表3J<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25T:對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。在其中添加適量的水、50i^L1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg(20%乙醇溶液50pL)外消旋體2-氯苯乙醇酸甲酯，混合后，取1mL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)72小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到殘留了4.27mg/mL未反應(yīng)的2-氯苯乙醇酸甲酯。為了確認(rèn)殘存物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(CHIRALCELOJDAICEL社制造，直徑4,6mm，長(zhǎng)度250mm，洗脫液正己烷/IPA-9/1，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確汄到生成物為(S)-2-氯苯乙醇酸甲酯。將上述微生物換成表4所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示的結(jié)果。[表4]<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實(shí)施例5-1利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25i:對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。在該菌體中添加適量的水、50|iL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體4-氯苯乙醇酸甲酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75。/。0.05M磷酸鈉緩沖液，pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了2.25mg/mL的4-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-4-氯苯乙醇酸。[表5]OHOH一rr^Ar。HCIJ0CI"0菌名菌編號(hào)生成量絕對(duì)構(gòu)型光學(xué)純度屬種機(jī)構(gòu)No.(mg/mL)(%e.e.)外瓶霉皮炎外瓶霉NBRC81932.25R64.6實(shí)施例5-2利用5mL含有l(wèi)。/。葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50jiL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體4-三氟甲基苯乙醇酸甲酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在30。C振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液.-25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了2.62mg/mL的4-三氟甲基苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm,長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuSO4、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-4-三氟甲基-氯苯乙醇酸。[表6]OHOH菌名菌編號(hào)生成量(mg/mL)絕對(duì)構(gòu)型光學(xué)純度(%e.e,)屬種機(jī)構(gòu)No.外瓶霉皮炎外瓶霉NBRC81932.62R53.2實(shí)施例5-3利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25"C對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50)iL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體4-甲氧基苯乙醇酸甲酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了2.01mg/mL的4-甲氧基苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuSO4、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-4-甲氧基-苯乙醇酸。將上述菌株換成表7所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示的結(jié)果。[表7]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>實(shí)施例5-4利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50(iL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體2-氯苯乙醇酸乙酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在30。C振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75。/。0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了2.03mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-2-氯苯乙醇酸。[表8]<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例5-5利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25'C對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50(iL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體2-氯苯乙醇酸異丙酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.53mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-2-氯苯乙醇酸。將上述菌株換成表9所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示的結(jié)果。[表9]<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例5-6利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)皮炎外瓶霉NBRC8193振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50jliL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體2-氯苯乙醇酸芐酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在30。C振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75。/。0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速L0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.42mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-2-氯苯乙醇酸。將上述菌株換成表10所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表IO所示的結(jié)果。[表IO]ClOHACIOHUoWo菌名菌編號(hào)生成量(mg/mL)絕對(duì)構(gòu)型光學(xué)純度(%e.e.)屬種機(jī)構(gòu)No.外瓶霉皮炎外瓶霉NBRC81931.42R83.8柱孢柱孢菌NBRC318550.53R54.1實(shí)施例5-7利用含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于251:對(duì)甄氏外瓶霉NBRC6857振蕩培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后，離心分離0.28mL培養(yǎng)液，得到菌體。向其中加入適量的水、100|iL0.5M-MES緩沖液(pH6.5)、5mg外消旋體苯基乳酸甲酯，混合后，取0.5mL反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75。/。0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了0.11mg/mL的苯基乳酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，MCI社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液卯％0.2mMCuS04、10%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-苯基乳酸。光學(xué)純度為100%ee。[化4]H3C,》OH(R)苯基乳酸實(shí)施例5-8利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)甄氏外瓶霉NBRC6857振蕩培養(yǎng)3天。離心分離0.28mL培養(yǎng)液，得到菌體。向其中加入適量的水、1(X)iiLlM-MES緩沖液(pH6.5)、5mg外消旋體4-氟苯乙醇酸甲酯，混合后，取0.5mL反應(yīng)液，在30°C振蕩反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，離心分離反應(yīng)液，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了0.19mg/mL的4-氟苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，MCI社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液90%2mMCuSO4、10%乙腈，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-4-氟苯乙醇酸。光學(xué)純度為77%ee。[化5](R)4-氟苯乙醇酸實(shí)施例5-9利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)甄氏外瓶霉NBRC6857振蕩培養(yǎng)3天。通過(guò)對(duì)0.28mL培養(yǎng)液進(jìn)行離心分離得到菌體。向其中加入適量的水、lOO(iL0.5M-MES緩沖液(pH6.5)、5mg3-氯苯乙醇酸甲酯，混合后，取0.5mL反應(yīng)液，在30°C振蕩反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，離心分離反應(yīng)液，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(Inertsil0DS-3,直徑4.6mm,長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了0.094mg/mL的3-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，MCI社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液90%0.2mMCuS04、10%乙腈，流速l.OmL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(R)-3-氯苯乙醇酸。光學(xué)純度為67.7%ee。h"hhohoo(R)3-氯苯乙醇酸實(shí)施例6-1利用5mL含有m葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50(xL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體4-氯苯乙醇酸甲酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75。/。0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.46mg/mL的4-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-4-氯苯乙醇酸。[表ll]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>實(shí)施例6-2利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25r對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50nL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體4-三氟甲基苯乙醇酸甲酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.21mg/mL的4-三氟甲基苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuSO4、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-4-三氟甲基苯乙醇酸。表12OH<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>實(shí)施例6-3利用5mL含有l(wèi)。/。葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25'C對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50(iL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體4-甲氧基苯乙醇酸甲酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在30。C振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,Inertsil0DS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.08mg/mL的4-甲氧基苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuSO4、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-4-甲氧基苯乙醇酸。[表13]h3co"oh3c0'菌名菌編號(hào)生成量(mg/mL)絕對(duì)構(gòu)型光學(xué)純度(%e.e.)屬種機(jī)構(gòu)No.根瘤菌放射型根瘤菌NBRC132631.08S43.1實(shí)施例6-4利用5mL含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25。C對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50pL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體2-氯苯乙醇酸乙酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75。/。0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.96mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-2-氯苯乙醇酸。[表14]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>實(shí)施例6-5利用5mL含有"/。葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25i:對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50pL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體2-氯苯乙醇酸異丙酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在30。C振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.91mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，三菱化學(xué)社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuS04、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-2-氯苯乙醇酸。將上述菌株換成表15所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示的結(jié)果。[表15]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>實(shí)施例6-6利用5mL含有l(wèi)。/。葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25i:對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)6天。通過(guò)離心分離或過(guò)濾得到菌體。向其中加入適量的水、50pL1M-MES緩沖液(pH6.5)、10mg外消旋體2-氯苯乙醇酸芐酯，混合后，取lmL的反應(yīng)液，在3(TC振蕩反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行離心分離或過(guò)濾，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(GLSciences,InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75。/。0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了1.62mg/mL的2-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，MC1社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液85%0.2mMCuSO4、15%乙腈，流速2.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-2-氯苯乙醇酸。將上述菌株換成表16所示的微生物，與上述同樣地進(jìn)行反應(yīng)，得到表中所示的結(jié)果。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>實(shí)施例6-7利用含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25°〇對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后，由9.1mL培養(yǎng)液進(jìn)行離心分離得到菌體。向其中加入適量的水、lOO^L0.5M-MES緩沖液(pH6.5)、5mg苯基乳酸甲酯，混合后，取0.5mL反應(yīng)液，在30。C振蕩反應(yīng)30分鐘。對(duì)反應(yīng)結(jié)束液進(jìn)行離心分離，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5,流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了0.15mg/mL的苯基乳酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，MCI社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液90%2mMCuSO4、10%乙腈，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-苯基乳酸。光學(xué)純度為55%eeH3C、/OH實(shí)施例6-8禾擁含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于25°C對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后，由9.1mL培養(yǎng)液進(jìn)行離心分離得到菌體。向其中加入適量的水、100|iL0.5M-MES緩沖液(pH6.5)、5mg4-氟苯乙醇酸甲酯，混合后，取0.5mL反應(yīng)液，在30°C振蕩反應(yīng)30分鐘。對(duì)反應(yīng)結(jié)束液進(jìn)行離心分離，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了0.22mg/mL的4-氟苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，MCI社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液90%2mMCuSO4、10%乙腈，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-4-氟苯乙醇酸。光學(xué)純度為100%ee。(S)-氟苯乙醇酸實(shí)施例6-9利用含有1%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.3%酵母提取物的培養(yǎng)基于251:對(duì)放射型根瘤菌NBRC13263振蕩培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后，對(duì)9.1mL培養(yǎng)液進(jìn)行離心分離，得到菌體。向其中加入適量的水、100pL0.5M-MES緩沖液(pH6.5)、5mg3-氯苯乙醇酸甲酯，混合后，取0.5mL，在3(TC振(S)-苯基乳酸蕩反應(yīng)30分鐘。對(duì)反應(yīng)結(jié)束液進(jìn)行離心分離，對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析(InertsilODS-3，直徑4.6mm，長(zhǎng)度75mm，洗脫液25%乙腈、75%0.05M磷酸鈉緩沖液、pH2.5，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成了0.23mg/mL的3-氯苯乙醇酸。為了確認(rèn)生成物的光學(xué)純度，對(duì)試樣進(jìn)行HPLC分析(GELPACKEDCOLUMNCRS10W，MCI社制造，直徑4.6mm，長(zhǎng)度50mm，洗脫液90%2mMCuSO4、10%乙腈，流速1.0mL/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)UV254nm)。結(jié)果確認(rèn)到生成物為(S)-3-氯苯乙醇酸。光學(xué)純度為76.9%ee。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>(S)-3-氯苯乙醇酸產(chǎn)業(yè)上的可利用性根據(jù)本發(fā)明的方法，能夠簡(jiǎn)便且低成本地制造光學(xué)純度極高的光學(xué)活性ot-羥基羧酸或光學(xué)活性(x-羥基羧酸酯，因而本發(fā)明的方法在光學(xué)活性a-羥基羧酸或光學(xué)活性a-羥基羧酸酯的工業(yè)制造方面是有用的。使用由本發(fā)明的方法制造的光學(xué)活性a-羥基羧酸或其酯衍生物可以制造各種生理活性化合物。權(quán)利要求1、下述通式(I)所示的化合物的制造方法，式(I)中，A表示5元或6元的環(huán)狀化合物的殘基，該環(huán)狀化合物選自芳香族化合物、部分飽和環(huán)狀化合物或飽和環(huán)狀化合物，成環(huán)原子可以具有1個(gè)以上的雜原子，環(huán)上可以具有取代基，該取代基是選自由鹵原子、可以具有取代基的碳原子數(shù)為1～4的烷基、可以具有取代基的碳原子數(shù)為1～4的烷氧基以及可以被保護(hù)基所保護(hù)的羥基、可以被保護(hù)基所保護(hù)的氨基、硝基組成的組中的1個(gè)或2個(gè)以上的取代基，在存在有2個(gè)以上的取代基的情況下，所述2個(gè)以上的取代基相同或不同，并且在存在有2個(gè)以上的取代基的情況下，所述2個(gè)以上的取代基可以鍵合形成環(huán)；X表示氫原子或碳原子數(shù)為1～4的烷基；*表示具有S型或R型中的任意立體構(gòu)型的碳原子；其中，所述方法包括利用選自由屬于賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬、紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、喙枝孢屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬的微生物組成的組中的微生物的菌體或者培養(yǎng)物、其處理物或其提取物對(duì)下述通式(II)所示的化合物進(jìn)行處理的步驟，通式(II)中，A和X與上述的定義相同，R表示碳原子數(shù)為1～4的烷基，該烷基可以被芳基所取代；從**所示的碳原子方面出發(fā)，通式(II)所示的化合物為非光學(xué)純。2、如權(quán)利要求l所述的方法，其中，A是氯苯基，R是碳原子數(shù)為14的烷基或,基，X是氫原子。3、如權(quán)利要求l所述的方法，其中，A是鄰氯苯基，R是甲基，X是氫原子。4、如權(quán)利要求13任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述微生物為選自由水生雷弗森菌、柱孢菌、細(xì)桿輪枝孢菌、恥垢分枝桿菌、草分枝桿菌、牝牛分枝桿菌、馬紅球菌、香豌豆帶化紅球菌、拉提斯拉韋紅球菌、甄氏外瓶霉、皮炎外瓶霉、橙紅酵母、蠟樣芽孢桿菌、梭形芽孢桿菌、缺陷短波單胞菌、綠膿假單胞菌、放射型根瘤菌、赭曲霉、米曲霉、球孢白僵菌、小刺青霉菌、星形諾卡氏菌、小球諾卡氏菌、分支戈登氏菌、痰液戈登氏菌、紅核戈登氏菌、紅球菌、玫瑰色紅球菌、紅串紅球菌、愛(ài)麗絲喙枝孢、暗綠喙枝孢、劍形枝氯霉以及血素產(chǎn)卟啉桿菌組成的組中的微生物。5、如權(quán)利要求13任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法包括對(duì)通式(11)所示的化合物中**所表示的碳原子是11構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解來(lái)得到通式(1)所示的化合物中*所表示的碳原子是R構(gòu)型的化合物的步驟，所述微生物是選自由屬于賴(lài)氏細(xì)菌屬屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬以及喙枝孢屬的微生物組成的組中的微生物。6、如權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述微生物是選自由水生雷弗森菌、柱孢菌、細(xì)桿輪枝孢菌、恥垢分枝桿菌、草分枝桿菌、牝牛分枝桿菌、馬紅球菌、香豌豆帶化紅球菌、拉提斯拉韋紅球菌、甄氏外瓶霉、皮炎外瓶霉、愛(ài)麗絲喙枝孢以及暗綠喙枝孢組成的組中的微生物。7、如權(quán)利要求13任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法包括對(duì)通式(II)所示的化合物中"所表示的碳原子是S構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解來(lái)得到通式(I)所示的化合物中+所表示的碳原子是S構(gòu)型的化合物的步驟，所述微生物是選自由屬于紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、紅球菌屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬的微生物組成的組中的微生物。8、如權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述微生物是選自由橙紅酵母、蠟樣芽孢桿菌、梭形芽孢桿菌、缺陷短波單胞菌、綠膿假單胞菌、放射型根瘤菌、赭曲霉、米曲霉、球孢白僵菌、小刺青霉菌、星形諾卡氏菌、小球諾卡氏菌、分支戈登氏菌、痰液戈登氏菌、紅核戈登氏菌、紅球菌、玫瑰色紅球菌、紅串紅球菌、劍形枝氯霉以及血素產(chǎn)。卜啉桿菌組成的組中的微生物。9、下述通式(in)所示的化合物的制造方法，式(m)中，a、R、x以及+與上述定義相同，所述制造方法的特征在于，其包括利用選自由屬于賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬、紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、喙枝孢屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬的微生物組成的組中的微生物的菌體或者培養(yǎng)物、或其處理物或者其提取物對(duì)上述通式(n)所示的化合物進(jìn)行處理從而對(duì)通式(n)所示的化合物中**所表示的碳原子是s構(gòu)型或r構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解并分離反應(yīng)液中殘留的光學(xué)純的未反應(yīng)酯化合物的步驟。10、如權(quán)利要求9所述的方法，其中，A是氯苯基，R是碳原子數(shù)為14的烷基或芐基，X是氫原子。11、如權(quán)利要求9所述的方法，其中，A是鄰氯苯基，r是屮基，X是氫原子。12、如權(quán)利要求911任意一項(xiàng)所述的方法，其中，微生物是選A由水生雷弗森菌、柱孢菌、細(xì)桿輪枝孢菌、恥垢分枝桿菌、草分枝桿菌、牝牛分枝桿菌、馬紅球菌、香豌豆帶化紅球菌、拉提斯拉韋紅球菌、甄氏外瓶霉、皮炎外瓶霉、橙紅酵母、蠟樣芽孢桿菌、梭形芽孢桿菌、缺陷短波單胞菌、綠膿假單胞菌、放射型根瘤菌、赭曲霉、米曲霉、球孢白僵菌、小刺青霉菌、星形諾卡氏菌、小球諾卡氏菌、分支戈登氏菌、痰液戈登氏菌、紅核戈登氏菌、紅串紅球菌、紅球菌、玫瑰色紅球菌、紅串紅球菌、愛(ài)麗絲喙枝孢、暗綠喙枝孢、劍形枝氯霉以及血素產(chǎn)卟啉桿菌組成的組中的微生物。13、如權(quán)利要求911任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法包括對(duì)通式(II)所示的化合物中"所表示的碳原子是s構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解的步驟，所述微生物是選自由屬于紅酵母屬、芽孢桿菌屬、短波單胞菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、曲霉屬、白僵菌屬、青霉菌屬、諾卡氏菌屬、戈登氏菌屬、紅球菌屬、枝氯霉屬以及產(chǎn)卟啉桿菌屬的微生物組成的組中的微生物。14、如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述微生物是選自由橙紅酵母、蠟樣芽孢桿菌、梭形芽孢桿菌、缺陷短波單胞菌、綠膿假單胞菌、放射型根瘤菌、赭曲霉、米曲霉、球孢白僵菌、小刺青霉菌、星形諾卡氏菌、小球諾卡氏菌、分支戈登氏菌、痰液戈登氏菌、紅核戈登氏菌、紅球菌、玫瑰色紅球菌、紅串紅球菌、劍形枝氯霉以及血素產(chǎn)卟啉桿菌組成的組中的微生物。15、如權(quán)利要求911任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法包括對(duì)通式(II)所示的化合物中"所表示的碳原子是R構(gòu)型的化合物的酯基進(jìn)行水解的步驟，所述微生物是選自由屬于賴(lài)氏細(xì)菌屬、柱孢屬、輪枝孢屬、分枝桿菌屬、紅球菌屬、外瓶霉屬以及喙枝孢屬的微生物組成的組中的微生物。16、如權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述微生物是選自由水生雷弗森菌、柱孢菌、細(xì)桿輪枝孢菌、恥垢分枝桿菌、草分枝桿菌、牝牛分枝桿菌、馬紅球菌、香豌豆帶化紅球菌、拉提斯拉韋紅球菌、甄氏外瓶霉、皮炎外瓶霉、愛(ài)麗絲喙枝孢以及暗綠喙枝孢組成的組中的微生物。17、氯吡格雷或其制造方法，其是使用由權(quán)利要求13或權(quán)利要求911任意---項(xiàng)所述的方法得到的光學(xué)活性化合物來(lái)制造的。全文摘要本發(fā)明涉及光學(xué)活性α-羥基羧酸的制造方法，所述光學(xué)活性α-羥基羧酸為右述的通式(I)所示的化合物，式(I)中，A表示5元或6元的環(huán)狀化合物的殘基，*表示具有S型或R型中的任意立體構(gòu)型的碳原子，X表示氫原子或碳原子數(shù)為1～4的烷基，其中，所述方法包括將對(duì)應(yīng)的酯化合物(非光學(xué)純)用賴(lài)氏細(xì)菌屬(Leifsonia)、柱孢屬(Cylindrocarpon)、輪枝孢屬(Verticillium)等的微生物的菌體或者培養(yǎng)物、其處理物或其提取物進(jìn)行處理的步驟。文檔編號(hào)C12P41/00GK101253271SQ200680031900公開(kāi)日2008年8月27日申請(qǐng)日期2006年9月1日優(yōu)先權(quán)日2005年9月2日發(fā)明者北伸二,坂本惠司,森井亮博申請(qǐng)人:第一精密化學(xué)株式會(huì)社