專利名稱：：用于診斷食管癌及食管癌轉移的組合物及方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及用于診斷(即檢測、確定或預測)食管癌及食管癌轉移的組合物、利用該組合物檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法、及使用了該組合物的食管癌及食管癌轉移診斷用試劑盒。
背景技術：
：食管是連接咽和胃的管腔狀器官，大部分存在于胸腔，一部分存在于頸部和腹腔。在胸腔上部，食管位于氣管和脊推之間，在胸腔下部，食管被心臟、大動脈和肺包圍。食管具有將從口攝入的食物輸送到胃的作用。2001年日本人的癌死亡率為10萬人中有238.8人。死亡原因中食管癌所占的比例逐年增加，2001年男性的食管癌死亡例占到所有癌癥死亡例的5.0%、女性占到1.4%。食管癌的發(fā)病年齡的高峰在6070歲，男性發(fā)病較多。另外，吸煙、飲酒、嗜好熱食品等環(huán)境因素與發(fā)病密切相關。并且，一般認為由于在食管壁內部或周圍，血管和淋巴管豐富，所以發(fā)生的癌癥多出現(xiàn)轉移。食管癌的治療根據(jù)進展程度(日本食管疾病研究會編臨床病理食管癌治療規(guī)范1999年)或轉移、及全身狀況而決定。食管癌的標準治療方法記載于日本食管疾病研究會編"食管癌治療方針"(2002年)。目前最普通的治療方法是手術療法，即切除含有癌細胞的食管和包括淋巴結的周圍組織(淋巴結清掃(lymphnodedissection))，并利用胃等其他器官重建食管。但是，手術療法、特別是大范圍的淋巴結清掃給患者帶來很大的負擔，還必須考慮手術后的生活質量評分(QOL)降低的問題。對于粘膜內的早期癌癥，有時可以在內窺鏡下實施粘膜剝除術。另外，從#^'臺療法、對癥療法兩方面考慮，有時可以進ffi丈射線照射。還可以與手術療法或放射線療法組合，進行化學療法。目前，一般認為在化學療法中，并用5-氟尿嘧啶和順鉑的治療方法是最有效的。食管癌通常是在患者感覺吞咽時有不適感、吞咽困難、胸骨后部疼痛及胸部不適感等自覺癥狀進行就診時被發(fā)現(xiàn)。但是，上述癥狀的出現(xiàn)是由癌在食管內生長導致的，患者因自我檢測而就診時發(fā)現(xiàn)的癌已經(jīng)擴散或轉移到食管壁外，通常預后不良。所以，手術時一般清掃食管周圍的淋巴結，此時如果能預見癌是否發(fā)生轉移，則可以在術前準確決定清掃范圍或限定清掃范圍，從而有助于術后患者的QOL。食管癌可以通過食管造影檢查、內窺鏡檢查及活組織檢查進行確定。在進行內窺鏡檢查時或手術時采集活組織檢查標本，制作病理標本，并且通過病理組織學分類加以診斷。此時，需要開發(fā)一種快速簡便的診斷方法，該方法能根據(jù)內窺鏡檢查得到的細胞的性質預測癌是否向食管外轉移。至今為止，已有人提出使用食管癌組織中特異性含有的標記物的分子生物學診斷方法。該方法能快速地得到客觀的結果，有助于快速診斷。目前，作為食管癌臨床檢查用標記物，除了使用作為血清中的蛋白質標記物的SCC、CYFRA21_1、CEA等之外，還報道了專利文獻l、2中記載的蛋白質等。但是，上述標記物缺少靈敏度、特異性，即使是靈敏度最高的CYFRA21-1,其靈敏度也只是33.9%(非專利文獻l)43.9%(非專利文獻2)左右。所以，尚不能達到通過對上述血清中的標記物及其組合進行檢測來確定食管癌細胞是否存在的階段，使用上述標記物也不能診斷食管癌的轉移。另一方面，作為使用了用于特異性判斷從受試者采集的活檢試樣中是否含有食管癌細胞的基因的標記物，公開了染色體異常(例如參見專利文南大3，4)或基因的后生序歹ll(epigeneticsequences)(例^口專利文獻5)，除此之外，還報道了多個利用DNA芯片全面解析基因表達的結果(例如，參見非專利文獻38)。另外，作為以單獨的基因表達作為指標的標記物，才艮道了專利文獻6、非專利文獻9、IO中記載的SPRR3基因(Smallproline—richprotein3)、非專利文獻ll中i己載的fgf3基因、專利文獻6、非專利文獻12中記載的CSTB基因(cystatinB、liverthiolproteinaseinhibitor)、專利文獻7中記載的UCP2基因(mitochondrialuncouplingprotein2)、專利文獻6中記載的UPK1A基因(uroplakin1A)、非專利文獻13中記載的HSPAIB基因(HeatShock70kDaProtein1)等。專利文獻l專利文獻2專利文獻3專利文獻4專利文獻5專利文獻6專利文獻7特開2003-259872號7>寺艮特表2000—511536號乂>沖艮特開2001-17200號公報特開2002-272497號公報特表2004-505612號公報國際公開第2003/042661號說明書國際公開第2003/076594號說明書非專利文i獻l:Nakamura,T.等,1998，DiseasesoftheEsophagus,第ll巻，p.35-39非專利文獻2:Kawaguchi，H.等，2000,Cancer,第89巻，p.1413-1417非專利文獻3:Luo，A.等，2004年，Oncogene,第23巻，p.1291-1299非專利文獻4:Zhi，H.等,2003年，InternationalJournalofCancer,第106巻，p.327-333非專利文獻5:Lu,J.等，2001年，InternationalJournalofCancer，第91巻，p.288-294非專利文獻6:Kazemi-Noureini,S.等,2004年，WorldJournalofGastroenterology,第10巻，p.l716-1721非專利文獻7:Xu,S.H.等，2003年，WorldJournalofGastroenterology,第9巻，p.417-422非專利文獻8:Su,H.等，2003年，CancerResearch,第63巻，p.3872非專利文獻9:Chen，B.S.等，2000年，Carcinogenesis,第21巻，p,2147-2150非專利文獻10:Abraham,J.M.等，1996年，CellGrowth&Differentiation,第7巻，p.855-860非專利文獻ll:Kitagawa，Y.等，199l年，CancerResearch,第51巻，p.1504-1508非專利文獻12:Shiraishi,T.等，1998年，InternationalJournalofCancer,第79巻，p.175-178非專利文獻13:Kawanishi，K.等,1999年，Cancer,第85巻，p.1649-1657
發(fā)明內容但是，由于上述現(xiàn)有的指標缺少特異性及/或靈敏性，或尚未確立從生物試樣中有效地檢出的方法，所以通常不應用于臨床，另外，認為目前還不能使用診斷標記物檢測作為決定患者預后的重要因素的食管癌是否轉移。所以迫切希望開發(fā)出特異性及靈敏性高的食管癌轉移的標i己物。本發(fā)明的目的在于提供在食管癌的診斷、食管癌轉移的診斷、及食管癌的治療中有用的疾病確定用組合物、試劑盒或DNA芯片。本發(fā)明的目的還在于提供使用上述組合物、試劑盒或DNA芯片檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法。作為尋找標記物的方法，可以舉出以下方法通過某種方法對食管癌細胞和非癌細胞中的基因表達或蛋白質表達、或細胞代謝產(chǎn)物等的量進行比較的方法；或對食管癌患者和非癌患者的體液中含有的基因、蛋白質、代謝產(chǎn)物等的量進行測定的方法；通過某種方法對食管癌細胞中的、來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌細胞、和來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌細胞中的基因表達或蛋白質表達、或細胞代謝產(chǎn)物等的量進行比較的方法；對轉移性食管癌患者和非轉移性食管癌患者體液中含有的基因、蛋白質、代謝產(chǎn)物等的量進行測定的方法等。近年來，使用DNA陣列進行的基因表達量解析，被特別廣泛地用作尋找上述標記物的方法。DNA陣列中固定有使用了對應于數(shù)百至數(shù)萬種基因的堿基序列的探針。通過將受試試樣添加到DNA陣列中，試樣中的基因與探針結合，利用某種方法測定結合量，由此可以知道受試試樣中的基因量。對應于固定在DNA陣列上的探針的基因可以自由選擇，另外，使用來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌細胞和來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌細胞作為受試試樣，通過比較試樣中的基因表達量，能判定可以作為食管轉移癌標記物的基因組。為了解決上述課題，本發(fā)明人等取得了以下發(fā)現(xiàn)利用DNA陣列解析食管癌組織及非癌組織的基因表達，發(fā)現(xiàn)了可用于食管癌的檢測標記物的基因，并且發(fā)現(xiàn)食管癌組織與非癌組織相比，該基因表達量顯著變化；在食管癌患者的血漿中存在被特異性地檢測出的蛋白質標記物，而在健康人的血漿中不存在上述蛋白質標記物；以及利用DNA陣列解析來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織和來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織的基因表達，發(fā)現(xiàn)了可用作食管癌轉移的檢測標記物的基因，來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌細胞與來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌細胞相比，該基因的表達量顯著變化。本發(fā)明人等基于上述發(fā)現(xiàn)完成了本發(fā)明。l.發(fā)明概要本發(fā)明具有以下特征。(1)一種用于體外檢測、確定或預測受試者食管癌的存在或轉移的組合物，其中含有選自下述I組、n組及/或III組中的l種或2種以上探針，I組'.由以下(a)(e)組成的多核苷酸，(a)由序列號146表示的堿基序列組成的多核普酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(b)含有序列號146表示的i咸基序列的多核苷酸，(c)由與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核普酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(d)含有與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列的多核普酸，及(e)在嚴格條件下與上述(a)~(d)中任一種多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，II組由以下(f)(j)組成的多核苷酸，(f)由序列號142155、157161表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(g)含有序列號142155、157161表示的堿基序列的多核苷酸，(h)由與序列號142155、157161表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(i)含有與序列號142155、157161表示的堿基序列互補的堿基序列的多核普酸，及(j)在嚴格條件下與上述(f)~(i)中的任一種多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，III群由以下(k)(m)組成的抗體、其片段或化學修飾衍生(k)與由序列號146表示的堿基序列編碼的多肽、或具有序列號95一40表示的氨基酸序列的多肽、它們的變異體、或它們的片段中的至少l個特異性結合的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物，(1)與由序列號142155、157161表示的堿基序列編碼的多肽、或具有序列號182195、197201表示的氨基酸序列的多肽、它們的變異體、或它們的片段中的至少l個特異性結合的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物，及(m)與具有序列號202232表示的氨基酸序列的多肽、其變異體、或其片段中的至少1個特異性結合的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物。(2)(l)所述的組合物，其中，利用所述I組及III組(k)的各探針能檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移。(3)(l)所述的組合物，其中，利用所述II組及III組(l)、(m)的各探針能檢測、確定或預測食管癌的存在。(4)(l)所述的組合物，其中，所述多核苷酸是DNA或RNA。(5)(l)所述的組合物，其中，所述I組及II組中的片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(6)(i)所述的組合物，其中，所述i組及n組中的片段是序列號146、142155、157161中任一個表示的堿基序列中，分別含有序列號4893、162175、177181中任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的堿基序列的多核苷酸。(7)u)所述的組合物，其中，所述i組及n組中的片段是含有序列號4893、162175、177181中任一個表示的堿基序列、或與上述堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。(8)(l)所述的組合物，在該組合物中，除所述I組的探針以外，還含有由序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、(9)(8)所述的組合物，其中，所述片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(10)(8)所述的組合物，其中，所述片段是序列號47表示的堿基序列中含有序列號94表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核普酸序列互補的堿基序列的多核苷酸。(11)(8)所述的組合物，其中，所述片段是含有序列號9斗表示的堿基序列、或與該堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。(12)權利要求i所述的組合物，在該組合物中，除所述n組的#果針以外，還含有由序列號156表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段作為探針。(13)(12)所述的組合物，其中，所述片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(14)(12)所述的組合物，其中，所述片段是序列號156表示的堿基序列中，含有序列號176表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的堿基序列的多核苦酸。(15)(12)所述的組合物，其中，所述片段是含有序列號176表示的堿基序列、或與其互補的堿基序列的多核苷酸。(16)(l)所述的組合物，在該組合物中，除所述III組(m)的探針以外，還含有與序列號233表示的多肽、其變異體或其片段中的至少1個特異性結合的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物。(17)(l)所述的組合物，其中，所述多肽或變異體的片段含有由至少7個氨基酸組成的表位。(18)(l)所述的組合物，其中，所述抗體是多克隆抗體、單克隆抗體、合成抗體、重組抗體、多特異性抗體或單鏈抗體。(19)(l)所述的組合物，所述組合物單獨或組合含有選自所述i組及/或n組、或m組中的2種以上探針。(20)—種用于體外檢測、確定或預測受試者食管癌的存在或轉移的試劑盒，其中含有選自權利要求i定義的i組、n組及/或in組中的1種或2種以上探針。(21)(20)所述的試劑盒，其中，還含有序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段作為探針。(22)(20)所述的試劑盒，其中，還含有由序列號156表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段作為探針。(23)(20)所述的試劑盒，其中，所述多核苷酸是序列號146、47中任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(24)(20)所述的試劑盒，其中，所述多核苷酸是序列號142155、156、157161中任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(25)(20)所述的試劑盒，其中，所述I組及II組中的片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(26)(20)所述的試劑盒，其中，所述I組中的片段是在含有序列號146、47中任一個表示的堿基序列的60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號4893、94中任一個表示的i咸基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸序列互補的堿基序列的多核苷酸。(27)(20)所述的試劑盒，其中，所述n組中的片段是在含有序列號142155、156、157161中任一個表示的石咸基序列的60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號162175、176、H7181中任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸序列互補的堿基序列的多核苷酸。(28)(20)所述的試劑盒，其中，所述I組或II組中的片段是含有序列號4893、94、162175、176、177~181中任一個表示的堿基序列、或與上述堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。(29)(20)所述的試劑盒，其中，所述I組或II組中的片段是由序列號4893、94、162175、176、177181中任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸。(30)(20)所述的試劑盒，其中含有2種以上至全部的含有序列號4893、94表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。(31)(20)所述的試劑盒，其中含有2種以上至全部的含有序列號162175、176、177181表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。(32)(20)所述的試劑盒，其中，所述探針單獨或組合包裝在不同容器中。(33)—種用于體外檢測、確定或預測受試者食管癌的存在或轉移的DNA芯片，其中含有選自權利要求l定義的I組及/或II組中的1種或2種以上探針。(34)(33)所述的DNA芯片，其中還含有由序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體及/或其片段。(35)(33)所述的DNA芯片，其中還含有由序列號l託表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體及/或其片段。(36)(33)所述的DNA芯片，其中含有2種以上全部的含有序列號4893、94表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。(37)(33)所述的DNA芯片，其中含有2種以上全部的含有序列號162175、176、177181表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。(38)—種體外檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法，該方法包括使用選自權利要求i定義的i組、n組及/或m組中的探針體外測定來自受試者的生物試樣中的i種或多種食管癌相關靶核酸的存在或存在量或表達量。(39)(38)所述的方法，其中，使用DNA芯片進行所述測定。(40)(38)所述的方法，其中，以相對于對照試樣的變化為指標檢測、確定或預測所述食管癌的存在或轉移。(41)(38)所述的方法，其中，通過免疫學方法進行所述測定。(42)(41)所述的方法，其中，所述通過免疫學方法進行的測定是使用所述III組的抗體、其片段或其化學修飾衍生物進行測定。(43)(42)所述的方法，其中，所述抗體、其片段、或其化學修飾書1"生物^皮標記。(44)(38)所述的方法，其中，所述生物試樣是來自食管的組織或細胞、血液、血漿、血清、或尿。(45)—種體外檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法，該方法包括使用(1)(19)中任一項所述的組合物、(20)(32)中任一項所述的試劑盒、或(33)(37)中任一項所述的DNA芯片體外測定來自受試者的生物試樣中的l種或多種食管癌相關靶核酸的存在或存在量或表達量。(46)—種檢測、確定或預測食管癌的轉移的方法，該方法包括以下步驟第1步驟，使用選自(1)定義的I組中的探針、或含有該探針的(1)(19)中任一項所述的組合物、(20)~(32)中任一項所述的試劑盒、或(33)(37)中任一項所述的DNA芯片，體外測定多個生物試樣中的食管癌相關靶核酸的表達量，所述生物試樣是已知含有伴隨轉移(即轉移性)的食管癌或不伴隨轉移(即非轉移性)的食管癌細胞的組織；第2步驟，以該第l步驟中得到的該靶核酸的表達量的測定值作為訓練樣本制作辨別式(支持向量機(SupportVectorMachine));第3步驟，與第1步驟相同地體外測定來自受試者食管的生物試樣中的該靶核酸的表達量；第4步驟，將第3步驟中得到的該靶核酸的表達量的測定值代入該第2步驟中得到的辨別式，基于由該辨別式得到的結果，判斷生物試樣中不含有伴隨轉移的癌細胞及/或含有不伴隨轉移的癌細胞。(47)—種檢測食管癌的方法，該方法包括以下步驟第l步驟，使用選自(1)中定義的n組的探針、或含有該探針的(1)(19)中任一項所述的組合物、(20)(32)中任一項所述的試劑盒、或(33)(37)中任一項所述的DNA芯片，體外測定多個生物試樣中的靶核酸的表達量，所述生物試樣是已知含有食管癌細胞的組織或正常組織；第2步驟，以該第l步驟得到的該靶核酸的表達量的測定值作為訓練樣本制作辨別式(支持向量機)；第3步驟，與第l步驟相同地體外測定來自受試者的食管的生物試樣中的該靶核酸的表達量；第4步驟，將第3步驟中得到的該靶乙酸的表達量的測定值代入該第2步驟中得到的辨別式中，基于由該辨別式得到的結果，判斷生物試樣中含有癌細胞或不含有癌細胞。(48)選自(i)定義的i組、n組及/或m組中的探針、或含有該探針的(1)(19)中任一項所述的組合物、(20)(32)中任一項所述的試劑盒、或者(33)~(37)中任一項所述的DNA芯片用于體外檢測、確定或預測來自受試者的生物試樣中的食管癌的存在或轉移的使用方法。2.定義本說明書中使用的術語具有以下定義。在本說明書中，"探針"是指能與作為食管癌相關標記物的特定基因類或編碼該基因類的多肽類結合的核酸、抗體或二者的相當物，用于^H則、確定或預測食管癌的存在或轉移。在本說明書中只要沒有特別說明，核酸、多核苷酸、氨基酸、肽、多肽、蛋白質等術語的意思及其簡寫符號所表達的含義是本領域中的慣用意思及含義。在本說明書中，"多核苷酸"是指包括RNA及DNA在內的核酸。需要說明的是，上述DNA包括cDNA、基因組DNA及合成DNA。上述RNA包括總RNA、mRNA、rRNA、及合成RNA中的任一種。另夕卜，本說明書中多核苷酸可以與核酸互換使用。在本說明書中，"cDNA，，包括與基因表達生成的RNA互補的序列的全長DNA鏈、及由其部分序列組成的DNA片段。cDNA可以通過以RNA為模板，利用使用聚T引物的RT-PCR(逆轉錄酶-聚合酶鏈反應)進行合成。在本說明書中，"基因，，不僅包括雙鏈DNA，還包括構成雙鏈DNA的正鏈(或有意義鏈)或互補鏈(或反義鏈)等各單鏈DNA。另夕卜，對其長度無特別限定。所以，在本說明書中，在沒有特別說明的情況下，"基因"是指包括人類基因組DNA在內的雙鏈DNA、包括cDNA在內的單鏈DNA(正鏈)、具有與該正鏈互補的序列的單鏈DNA(互補鏈)、及上述DNA的片段中的任一種。另外，該"基因"不僅包括以特定的堿基序列(或序列號)表示的"基因"，還包括編碼與由上述基因編碼的蛋白質的生物學功能相同的蛋白質的"基因"，所述蛋白質例如可以舉出同源物(即homolog)、剪接變體等變異體、及衍生物。作為編碼同源物、變異體或衍生物的"基因"，具體可以舉出具有在后述的嚴格條件下與上述序列號147、142161等表示的任一特定堿基序列的互補序列雜交的堿基序列的"基因"。例如，作為來自人的蛋白質的同源物(即homolog)或編碼該同源物的基因，可以舉出與該蛋白質或編碼該蛋白質的人基因對應的其它生物種的蛋白質或基因，上述蛋白質或基因同源物可以通過homoloGene(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/homoloGene/)鑒定。具體而言，可以將特定的人類氨基酸或堿基序列代入BLAST程序(BLASTprogram)(Karlin，S.等,ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,1993年，第90巻，p.5873-5877，http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/),得到一致(得分最高、E值為0且同一性顯示為100%)序列的登錄號(accessionnumber)。作為BLAST程序，已知有BLASTN(基因)、BLASTX(蛋白質)等。例如，進行基因檢索時，將從上述BLAST檢索得到的登錄號輸入UniGene(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/UniGene/),4尋5'JUniGeneClusterID(以Hs.表示的編號)，將得到的UniGeneClusterID輸入homoloGene。從作為結果得到的表示其它生物種基因與人類基因的基因同源物的相關性的列表中選擇其它生物種的基因作為與由特定堿基序列表示的人類基因對應的基因同源物。在該方法中，可以使用FASTA程序(http:〃www.ddbj.nig.ac.jp/search/fasta-e.html)代替BLAST程序。需要說明的是，對"基因，，的功能區(qū)域沒有限定，例如可以包括表達控制區(qū)域、編碼區(qū)域、外顯子或內含子。在本說明書中，"轉錄產(chǎn)物"是指以基因的DNA序列為模板合成的信使RNA(mRNA)。RNA聚合酶與位于基因上游的被稱為啟動子的部位結合，使核糖核苷酸與3，末端結合，使其與DNA的堿基序列互補，合成信使RNA。該信使RNA中不僅含有基因自身，還含有包括表達控制區(qū)域、編碼區(qū)域、外顯子或內含子在內的從轉錄起點至聚A序列末端的全長序列。在本說明書中，"翻譯產(chǎn)物"表示無論轉錄合成的信使RNA接受/不接受剪接等修飾，都基于其信息而合成的蛋白質。在信使RNA的翻譯過程中，首先，核糖體與信使RNA結合，然后，根據(jù)信使RNA的堿基序列結合氨基酸，從而合成蛋白質。在本說明書中，"引物"包括能特異性識別、擴增基因表達產(chǎn)生的RNA或來自該RNA的多核苷酸的連續(xù)的多核普酸及/或與其互補的多核苷酸。此處，互補的多核苷酸(互補鏈、反鏈)是指基于A:T(U)、G:C的堿基配對，與由序列號定義的堿基序列組成的多核苷酸的全長序列、或其部分序列(此處，為了便于說明，將上述序列稱為正鏈)具有堿基互補關系的多核苷酸。其中，所述互補鏈不只限于形成與作為對象的正鏈的堿基序列完全互補的序列，也可以是具有能與作為對象的正鏈在嚴格條件下雜交的程度的互補關系的序列。在本說明書中，"嚴格條件"是指相對于探針對其它序列的雜交，探針以可檢測性更大的程度(例如，比背景至少大2倍)與其靶序列雜交的條件。嚴格條件具有序列依賴性，因進行雜交的環(huán)境的不同而不同。通過控制雜交及/或清洗條件為嚴格條件，可以鑒定與探針ioo%互補的靶序列。在本說明書中，"變異體"為核酸時，是指起因于多型性、突變、轉錄時的選擇剪接等的天然變異體、或以遺傳密碼的簡并為基礎的變異體、或在序列號147、142161等表示的堿基序列或其部分序列中缺失、置換、添加或插入l個以上、優(yōu)選l個或幾個堿基的變異體、或與該堿基序列或其部分序列具有約80%以上、約85%以上、約90%以上、約95%以上、約97%以上、約98%以上、約99%以上的同源性百分序列的多核苦酸或寡核苷酸雜交的核酸，另一方面，變異體為蛋白質或肽時，是指在序列號95141、182201、202233等表示的氨基酸序列或其部分序列中缺失、置換、添加或插入l個以上、優(yōu)選l個或幾個氨基酸的變異體、或與該氨基酸序列或其部分序列具有約80%以上、約85%以上、約90%以上、約95%以上、約97%以上、約98%以上、約99%以上的同源性百分比的變異體。在本說明書中，"數(shù)個"是指約IO、9、8、7、6、5、4、3或2個的整數(shù)。在本說明書中，"同源性百分比"可以使用由上述BLAST或FASTA得到的蛋白質或基因檢索系統(tǒng)，導入或不導入空位(gap)而進行確定(Karlin，S.等,1993年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.，第90巻，p.5873-5877;Altschul，S.F.等，1990年，JournalofMolecularBiology,第215巻，p.403-410;Pearson,W.R.等，1988年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第85巻,p.2444-244S)。在本說明書中，"衍生物"為核酸時，是指通過熒光團等進行標記的衍生物、含有修飾核苷酸(例如，含有卣素、曱基等烷基、曱氧基等烷氧基、硫代、羧甲基等基團的核苷酸，及進行了堿基的再構建、雙鍵的飽和、脫氨基化、硫分子對氧分子的取代等的核苷酸等)的衍生物等，另一方面，"衍生物"為蛋白質時，是指通過酶、熒光團、放射性同位素等標記產(chǎn)生的標記化衍生物、或乙酰化、?；⑼榛?、磷酸化、硫酸化、糖基化衍生物等化學修飾衍生物。在本說明書中，"診斷用組合物"或"疾病確定用組合物"等術語，是指為了診斷、檢測、確定或預測是否罹患食管癌或食管癌是否轉移(或轉移的可能性)、發(fā)病程度或是否改善或改善程度，或為了篩選對食管癌的預防、改善或治療有用的候補物質，而直接或間接使用的組合物。其中，包括能特異性識別或結合下述基因的核酸、寡核苷酸及多核苷酸，所述基因與食管癌的罹患或轉移相關、在生物體內特別是在食管組織內的表達發(fā)生變化或變動，還包括能檢測作為該基因翻譯產(chǎn)物的蛋白質的抗體等。上述核酸、寡核苷酸及多核苷酸基于上述性質，可以有效地用作探針或引物，所述探針用于檢測在生物體內、組織或細胞內等表達的上述基因，所述引物用于擴增在生物體內表達的上述基因。在本說明書中，成為檢測診斷對象的"生物組織"是指伴隨食管癌的發(fā)生，本發(fā)明的基因表達發(fā)生變化的組織。具體是指食管組織、其周圍的淋巴結、及懷疑發(fā)生轉移的其它器官等。在本說明書中，成為檢測診斷對象的"生物試樣"是指從生物體中采集的含有或懷疑含有伴隨食管癌的發(fā)生而出現(xiàn)的靶多肽的試樣。在本說明書中，"特異性結合"是指抗體或其片段只與本發(fā)明的靶多肽、其變異體或其片段形成抗原-抗體復合體，而與其它肽性或多肽性物質實質上不形成復合體。此處，"實質上"是指雖然程度小，但能引起非特異性復合體的形成。在本說明書中，"表位，，是指在本發(fā)明的靶多肽、其變異體或其片段中，具有抗原性或免疫原性的部分氨基酸區(qū)域(抗原決定基)。表位通常由至少5個氨基酸、優(yōu)選至少7個氨基酸、更優(yōu)選至少10個氨基酸組成。本說明書中使用的"AXL基因"或"AXL"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號l)表示的AXL受體酪氨酸激酶(AXLreceptorTyrosineKinase)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號l中記載的AXL基因(GenBank登錄號NM—021913)或其它生物種同源物等。AXL基因可以根據(jù)O，Bryan，J.P.等，1991年，MolecularCellarBiology,第ll巻，p.5016-5031中記載的方法得到。本說明書中使用的"C6orf54基因"或"C6orf54"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號2)表示的染色體6開》丈閱讀才匡54基因(Chromosome6openreadingframe54gene)(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號2中記載的C6orf54基因(GenBank登錄號NM—014354)或其它生物種同源物等。C6orf54基因可以通過Minaguchi,T.等，1999年，DNAResearch.第6巻，p.131-136中記載的方法得到。序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號3)表示的含鋅指結構和BTB域1l基因(zincfingerandBTBDomainContaining11gene)(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號3中記載的ZBTB11基因(GenBank登錄號NM—014415)或其它生物種同源物等。ZBTBll基因在1996年被Tang,C.M.等克隆。本說明書中使用的"TNFRSF14基因"或"TNFRSF14"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號4)表示的月中瘤壞死因子受體超家族，成員14基因(tumornecrosisFactorreceptorsuperfamily，memberl4gene)(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號4中記載的TNFRSF14基因(GenBank登錄號NM—003820)或其它生物種同源物等。TNFRSF14基因可以通過Montgomery,R丄等，1996年，Cell,第87巻，p.427-436中記載的方法得到。本說明書中使用的"NSUN5基因"或"NSUN5"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號5)表示的NOLl/NOP2/Sun相關區(qū)域家族，成員5基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號5中記載的NSUN5基因(GenBank登錄號NM—018044)或其它生物種的同源物等。NSUN5基因可以通過Doll，A.等，2001年，CytogeneticsandCellgenetics,第95巻，p.20—27中記載的方法得到。本說明書中使用的"SPEN基因"或"SPEN"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號6)表示的spen同源物，轉錄調節(jié)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號6中記載的SPEN基因(GenBank登錄號NM—015001)或其它生物種同源物等。SPEN基因可以通過Newberry，E.P.等，1999年，Biochemistry,第38巻，p.10678-10690中記載的方法得到。本說明書中使用的"LTBP3基因"或"LTBP3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號7)表示的潛在轉4匕生長因子|3結合蛋白(latenttransforminggrowthFactorBetabindingProtein)3基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號7中記載的LTBP3基因(GenBank登錄號NM—021070)或其它生物種同源物等。SPEN基因可以通過Yin,W.等，1995年，JournalofBiologicalChemistry,第270巻，p.10147-10160中記載的方法得到。本說明書中使用的"SYNGR1基因"或"SYNGR1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號8)表示的突觸循環(huán)蛋白(synaptogyrin)l基因(DNA)、其同源物、變異體及^"生物等的基因(DNA)。具體包括序列號8中記載的SYNGR1基因(GenBank登錄號NM—004711)或其它生物種同源物等。SYNGR1基因可以通過Kedra，D.等，1998年,HumanGenetics,第103巻，p.131-141中記載的方法得到。本說明書中使用的"ARL3基因"或"ARL3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號9)表示的ADP核糖基化因子樣3(ADP_ribosylationFactor-like3)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號9中記載的ARL3基因(GenBank登錄號NM—004311)或其它生物種同源物等。SYNGRl基因可以通過Cavenagh,M.M.等，1994年，JournalofBiologicalChemistry,第269巻，p.18937-18942中記載的方法得到。本說明書中使用的"SLC13A1基因"或"SLC13A1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號10)表示的溶質載體蛋白家族(solutecarrierfamily)13(鈉/石克酸鹽同向轉運體，sodium/sulfatesymporters),成員l基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號10中記載的SLC13A1基因(GenBank登錄號NM—022444)或其它生物種同源物等。SLC13A1基因可以通過Lee，A.等，2000年，Genomics,第70巻，p.354_363中記載的方法得到。本說明書中使用的"RALGDS基因"或"RALGDS"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號ll)表示的ral鳥。票呤核苷酸解離刺激因子(mlguaninenucleotidedissociationstimulator)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號11中記載的RALGDS基因(GenBank登錄號NM—006266或其它生物種同源物等。RALGDS基因可以通過Albright,C.F.等,1993年，EMBOJournal,第12巻，p.339-347中記載的方法得到。本說明書中使用的"ADD3基因"或"ADD3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號12)表示的內收蛋白3(Y)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號12中記載的ADD3基因(GenBank登錄號NM—019903)或其它生物種同源物等。RADD3基因可以通過Katagiri，T.等，1996年,CytogeneticsandCellgenetics,第74巻，p.90—95中記載的方法得到。本說明書中使用的"MAP3K12基因"或"MAP3K12"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號13)表示的促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen—activatedProteinkinasekinasekinase)12基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號13中記載的MAP3K12基因(GenBank登錄號NM一006301)或其它生物種同源物等。MAP3K12基因可以通過Reddy，U.R.等，1994年,BiochemicalBiophysicalResearchCommunications,第202巻，p.613—620中^己載的方法4尋到。本說明書中使用的"AVPI1基因"或"AVPI1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號14)表示的精氨酸力口壓素i秀導的(argininevasopressin—induced)l基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號14中記載的AVPI1基因(GenBank登錄號NM—021732)或其它生物種同源物等。AVPIl基因可以通過Nicod，M.等，2002年，EMBOJournal,第21巻，p.5109-5117中記載的方法得到。本說明書中使用的"GIMAP6基因"或"GIMAP6"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號15)表示的GTPase，IMAP家族成員6基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號15中記載的GIMAP6基因(GenBank登錄號NM—024711)或其它生物種同源物等。GIMAP6基因可以通過Stamm，O.等，2002年，Gene,第282巻，p159-167中記載的方法得到。本說明書中使用的"FLJ11259基因"或"FLJl1259"的術語,在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號16)表示的FLJ11259基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號16中記載的FLJ11259基因(GenBank登錄號NM—018370)或其它生物種同源物等。FLJ11259基因可以通過Ota,T.等，2002年，NatureGenetics,第36巻，p.40—45中記載的方法得到。本說明書中使用的"C3AR1基因"或"C3AR1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號17)表示的補體成分3R受體(complementComponent3Rreceptor)l基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號17中記載的C3AR1基因(GenBank登錄號NM—004054)或其它生物種同源物等。C3AR1基因可以通過Ames，R.S.等，1996年，JournalofBiologicalChemistry,第271巻，p.20231-20234中記載的方法得到。本說明書中使用的"PCGF2基因"或"PCGF2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號18)表示的Polycomb組環(huán)指結構(polycombgroupringfmger)2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號18中記載的PCGF2基因(GenBank登錄號NM—007144)或其它生物種同源物等。PCGF2基因可以通過Tagawa,M.等，1990年，JournalofBiologicalChemistry,第265巻，p.20021-20026中記載的方法得到。本說明書中使用的"PDE6D基因"或"PDE6D"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號19)表示的桿體cGMP特異性磷酸二酯酶6Ddelta基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號19中記載的PDE6D基因(GenBank登錄號NMJ)02601)或其它生物種同源物等。PDE6D基因可以通過Florio，S.K.等，1996年，JournalofBiologicalChemistry,第271巻，p.24036-24047中記載的方法得到。本說明書中使用的"PLCG2基因"或"PLCG2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號20)表示的磷脂酶C-Y2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號20中記載的PLCG2基因(GenBank登錄號NM—002661)或其它生物種同源物等。PLCG2基因可以通過Kang,J.S.等，1996年，F(xiàn)EBBSLetters,第399巻，p.14-20中記載的方法得到。本說明書中使用的"GPR148基因"或"GPR148"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號21)表示的g蛋白偶聯(lián)受體(gProtein-coupledreceptor)148基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號21中記載的GPR148基因(GenBank登錄號NM—207364)或其它生物種同源物等。GPR148基因可以通過Vassilatis，D.K.等，2003年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica"第100巻，p.4903-4908中記載的方法得到。本說明書中使用的"ARF6基因"或"ARF6，，的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號22)表示的ADP-核糖基化因子6基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號22中記載的ARF6基因(GenBank登錄號NM—001663)或其它生物種同源物等。ARF6基因可以通過Cavenagh，M.M.等，1996年，JournalofBiologicalChemistry,第271巻，p.21767-21774中記載的方法得到。本說明書中使用的"NISCH基因"或"NISCH"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號23)表示的nischarin基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號23中記載的NISCH基因(GenBank登錄號NM007184)或其它生物種同源物等。NISCH基因可以通過Ivanov，T.R.等，1998年,JournaloftheAutonomicNervousSystem,第72巻,p.98-110中記載的方法得到。本說明書中使用的"GLYAT基因"或"GLYAT"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號24)表示的甘氨酸-N-乙?；D移酶基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號24中記載的GLYAT基因(GenBank登錄號NM—005838)或其它生物種同源物等。GLYAT基因可以通過Schachter，D.等，1976年,JournalofBiologicalChemistry,第251巻，p.3352-3358中記載的方法得到。本說明書中使用的"IGHM基因"或"IGHM"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號25)表示的免疫球蛋白重4連恒定區(qū)(Immunoglobulinheavyconstant)mu基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號25中記載的IGHM基因(GenBank登錄號NG—001019)或其它生物種同源物等。IGHM基因可以通過Ravetch,J.V.等，1981年，Cell,第27巻,P.583-591中記載的方法得到。本說明書中使用的"FBX038基因"或"FBX038"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號26)表示的F框蛋白(F-boxProtein)38基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號26中記載的FBX038基因(GenBank登錄號NM—205836)或其它生物種同源物等。FBX038基因可以通過Smaldone，S.等，2004年，MolecularandcellularBiology,第24巻，p.1058-1069中記載的方法得到。本說明書中使用的"SLC12A1基因"或"SLC12A1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號27)表示的溶質載體蛋白家族12(鈉/鐘/氯化物轉運體，sodium/potassium/chloridetransporters)，成員l基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號27中記載的SLC12A1基因(GenBank登錄號NM—000338)或其它生物種同源物等。SLC12A1基因可以通過Simon，D.B.等，1996年，NatureGenetics,第13巻，p.l83-188中記載的方法得到。本說明書中使用的"PGDS基因"或"PGDS"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號28)表示的造血型前列A泉素D2合成酶(prostaglandinD2synthase,hematopoietic)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號28中記載的PGDS基因(GenBank登錄號NM-014485)或其它生物種同源物等。PGDS基因可以通過Kanaoka，Y.等，1997年，Cell,第90巻,p.1085—1095中記載的方法得到。本說明書中使用的"CD48基因"或"CD48"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號29)表示的CD48抗原基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號29中記載的CD48基因(GenBank登錄號NM-001778)或其它生物種同源物等。CD48基因可以通過Staunton,D.E.等，1987年，EMBOJournal,第6巻，p.3695-3701中記載的方法得到。本說明書中使用的"IMPA2基因"或"IMPA2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號30)表示的肌醇一1(或4)—石粦酉臾單酉旨酵(inositol(myo)—1(or4)—monophosphatase)2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號30中記載的IMPA2基因(GenBank登錄號NM—014214)或其它生物種同源物等。IMPA2基因可以通過Yoshikawa，T.等，1997年，Molecularpsychiatry,第2巻，p.393-397中記載的方法得到。本說明書中使用的"HSPA6基因"或"HSPA6"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號31)表示的熱休克蛋白70(heatshock70kDaProtein)6(HSP70B，)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號31中記載的HSPA6基因(GenBank登錄號NM—002155)或其它生物種同源物等。HSPA6基因可以通過Voellmy，R.等,1985年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica"第82巻,p.4949-4953中記載的方法得到。本說明書中使用的"EIF3S9基因"或"EIF3S9"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號32)表示的真核翁H奪起始因子(EukaryoticTranslationinitiationFactor)3,亞基9eta,116kDa基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號32中記載的EIF3S9基因(GenBank登錄號NM—003751)或其它生物種同源物等。EIF3S9基因可以通過Methot，N.等，1997年，JournalofBiologicalChemistry,第272巻，p.lll0-1116中記載的方法得到。本說明書中使用的"ZNF659基因"或"ZNF659"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號33)表示的鋅指蛋白(zincfmgerProtein)659基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號33中記載的ZNF659基因(GenBank登錄號NM—024697)或其它生物種同源物等。ZNF659基因在2000年被Sugano，S.等克隆。本說明書中使用的"RAB6C基因"或"RAB6C"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號34)表示的RAS癌基因家族RAB6C基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號34中記載的RAB6C基因(GenBank登錄號NM—032144)或其它生物種同源物等。RAB6C基因可以通過Fitzgerald,M丄.等，1999年，BiochemicalJournal,第342巻，p.353-360中記載的方法得到。本說明書中使用的"NOLl基因"或"NOLl"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號35)表示的核仁蛋白l，120kDa基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號35中記載的NDL1基因(GenBank登錄號NM—006170)或其它生物種同源物等。NOLl基因可以通過Freeman,J.W.等，1988年，CancerResearch,第48巻，p.1244-1251中記載的方法得到。本說明書中使用的"DAB2基因"或"DAB2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號36)表示的有絲分裂原反應石粦蛋白dab同源物2(disabledhomolog2，mitogen-responsivePhosphoprotein)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號36中記載的DAB2基因(GenBank登錄號NM—001343)或其它生物種同源物等。DAB2基因可以通過Mok，S.C.等，1994年，Gynecologiconcology，第52巻，p.247-252中記載的方法得到。本說明書中使用的"EBI3基因"或"EBI3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號37)表示的EB病毒誘導基因(Epstein-BarrvirusinducedGene)3基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號37中記載的EBI3基因(GenBank登錄號NM—005755)或其它生物種同源物等。EBI3基因可以通過Devergne,O.等，1996年，Journalofvirology,第70巻，p.1143-1153中記載的方法得到。本說明書中使用的"PRSS3基因"或"PRSS3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號38)表示的絲氨酸蛋白酶3(內消旋胰蛋白酶(mesotrypsin))基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號38中記載的PRSS3基因(GenBank登錄號NM—002771)或其它生物種同源物等。PRSS3基因可以通過Robinson，M.A.等，1993年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,第90巻，p.2433-2437中記載的方法得到。本說明書中使用的"GLB1基因"或"GLB1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號39)表示的半乳糖苷酶，p1基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號39中記載的GLB1基因(GenBank登錄號NM—000404或其它生物種同源物等。GLBl基因可以通過Shows,T.B.等，1979年,SomaticCellGenetics,第5巻，p.147-158中記載的方法得到。本說明書中使用的"SAMSN1基因"或"SAMSN1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號40)表示的SAM區(qū)，SH3區(qū)和核定位信號(SAMDomain,SH3Domainand薩learlocalisationsignals)l基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號40中記載的SAMSN1基因(GenBank登錄號NM—022136)或其它生物種同源物等。SAMSN1基因可以通過Claudio，J.O.等，2001年，Oncogene,第20巻，p.5373-5377中記載的方法得到。本說明書中使用的"AQP3基因"或"AQP3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號41)表示的水通道蛋白3基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號41中記載的AQP3基因(GenBank登錄號NM—004925)或其它生物種同源物等。AQP3基因可以通過Ishibashi，K.等，1994年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,第91巻，p.6269-6273中記載的方法得到。本說明書中使用的"CAPZA2基因"或"CAPZA2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號42)表示的加帽蛋白(月幾動蛋白纖絲)Z線(cappingProtein(actinfilament)muscleZ-line)a2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號42中記載的CAPZA2基因(GenBank登錄號NM—006136)或其它生物種同源物等。CAPZA2基因可以通過Barron-Casdla,E.A.等，1995年，JournalofBiologicalChemistry,第270巻，p.21472-21479中記載的方法得到。本說明書中使用的"B4GALT2基因"或"B4GALT2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號43)表示的UDP-Gal:卩GlcNAc(31，4-半乳糖基轉移酶，多肽2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號43中記載的B4GALT2基因(GenBank登錄號NM—003780)或其它生物種同源物等。B4GALT2基因可以通過Almeida，R.等，1997年，JournalofBiologicalChemistry,第272巻，p.31979-31991中記載的方法得到。本說明書中使用的"ARHGEF3基因，，或"ARHGEF3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號44)表示的Rho鳥口票p令斗亥苷酉吏交#灸因子(RhoguaninenucleotideexchangeFactor)(GEF)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號44中記載的ARHGEF3基因(GenBank登錄號NM一019555)或其它生物種同源物等。ARHGEF3基因可以通過丁hiesen，S.等，2000年，Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications,第273巻，p.364—369中i己載的方法4尋到。本說明書中使用的"POGK基因"或"POGK"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號45)表示的含有KRAB區(qū)i或的pogo4爭座因子(pogotransposableelementwithKRABDomain)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號45中記載的POGK基因(GenBank登錄號AB040946)或其它生物種同源物等。POGK基因可以通過Greenhalf，W.等，1999年，Yeast，第15巻，p.1307-1321中記載的方法得到。本說明書中使用的"PRAF1基因"或"PRAF1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號46)表示的聚合酶(RNA)I相關因子l基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號46中記載的PRAF1基因(GenBank登錄號NM—022490)或其它生物種同源物等。POGK基因可以通過Hanada,K.等，1996年，EMBOJournal,第15巻，p.2217-2226中記載的方法得到。本說明書中使用的"HPGD基因"或"HPGD"的術語，在沒有^皮序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號47)表示的羥基前歹寸A泉素脫氫酶(hydroxyprostaglandindehydrogenase)15—(NAD)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號47中記載的HPGD基因(GenBank登錄號NM—000860)或其它生物種同源物等。HPGD基因可以通過Pichaud,F.等，1997年，HumanGenetics,第99巻，p.279-281中記載的方法得到。HPGD基因在食管癌抹化細胞的轉移性亞抹中，表達增加，上述內容被記載在Kawamata,H.等，2003年，CancerScience,第94巻，p.699-706。本說明書中使用的"GALNS基因"或"GALNS"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號142)表示的6-硫酸N-乙酰半乳糖胺硫酸酯酶基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號142中記載的GALNS基因(GenBank登錄號NM—000512)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"fgfi基因"或"fgf，的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號143)表示的成纖維細胞生長因子3基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號143中記載的fgf3基因(GenBank登錄號NM—005247)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"CMK2B基因"或"CMK2B"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號144)表示的鈣/鈣調蛋白-依賴性蛋白激酶(CAMkinase)II(3基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號144中記載的CMK2B基因(GenBank登錄號NM—001220)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"CAMKIINalpha基因"或"CAMKIINalpha"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號145)表示的4丐/4丐調蛋白-依賴性蛋白激酶II基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號145中記載的CAMKIIalpha基因(GenBank登錄號NM—018584)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"PSARL基因"或"PSARL"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號146)表示的早衰素相關菱開j體樣蛋白(Presenilin-associatedrhomboid-likeprotein)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號146中記載的PSARL基因(GenBank登錄號NM-018622)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"XRCC3基因"或"XRCC3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號147)表示的中國倉鼠細胞3中的X射線修復互補缺陷修復(X-rayrepaircomplementingdefectiverepairinChinesehamstercell3)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號147中記載的XRCC3基因(GenBank登錄號NM-005432)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"CAPG基因"或"CAPG"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號148)表示的(肌動蛋白纖絲))疑〉容月交蛋白沖羊加帽蛋白(cappingprotein(actinfilament)gelsolin-like)(CAPG)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號148中記載的CAPG基因(GenBank登錄號NM—001747)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"GRHPR基因"或"GRHPR"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號149)表示的乙醛酸還原酶一^至基丙酉同酉臾還y(^酵(glyoxylatereductase/hydroxypyruvatereductase)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號149中記載的GRHPR基因(GenBank登錄號NM—012203)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"TROAP基因"或"TROAP"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號150)表示的滋養(yǎng)蛋白相關蛋白質(trophininassociatedprotein(滋養(yǎng)蛋白輔助蛋白，tastin))基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號150中記載的TROAP基因(GenBank登錄號NM一005480)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"RRM2基因"或"RRM2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號151)表示的核糖核苷酸還原酶M2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號151中記載的RRM2基因(GenBank登錄號NM-001034)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"SATB2基因"或"SATB2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號152)表示的SATB家族成員2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號152中記載的SATB2基因(GenBank登錄號NM—015265)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"C14orf162基因"或"C14orf162"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號153)表示的染色體14開》文閱讀才匡162(chromoseme14openreadingframe162)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號153中記載的C14orf162基因(GenBank登錄號NM—020181)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"SEPT6基因"或"SEPT6"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號154)表示的septin6基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號154中記載的SEPT6基因(GenBank登錄號NM—145799)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"M6PR基因"或"M6PR"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號155)表示的甘露#唐6—石舞酉臾酉旨小受體(smallmannose6—phosphatereceptor)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號155中記載的M6PR基因(GenBank登錄號NM—002355)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"SPRR3基因"或"SPRR3"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號156)表示的富月甫氨酸小蛋白(smallproline—richprotein)3基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號156中記載的SPRR3基因(GenBank登錄號NM-005416)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"EML1基因"或"EML1"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號157)表示的棘皮動物樣吏管結合蛋白相關蛋白1(Echinodermmicrotubule—associatedprotein-like1)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號157中記載的EML1基因(GenBank登錄號NM—004434)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"YPEL5基因"或"YPEL5"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號158)表示的開心蛋白5(yippee-like5)(果蠅)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號158中記載的YPEL5基因(GenBank登錄號NM—016061)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"EIF4EBP2基因"或"EIF4EBP2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號159)表示的真核翁H,起始因子4E-結合蛋白2(Eukaryotictranslationinitiationfactor4E-bindingprotein2)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號159中記載的EIF4EBP2基因(GenBank登錄號NM—004096)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"SLC2A14基因"或"SLC2A14"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號160)表示的溶質載體蛋白家族2(易化擴散的葡萄糖轉運體)，成員14(Solutecarrierfamily2(facilitatedglucosetransporter)，memberl4)基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號160中記載的SLC2A14基因(GenBank登錄號BC060766)或其它生物種同源物等。本說明書中使用的"SLIT2基因"或"SLIT2"的術語，在沒有被序列號定義的情況下，包括編碼特定堿基序列(序列號161)表示的果蠅同源物SLIT的2基因(DNA)、其同源物、變異體及衍生物等的基因(DNA)。具體包括序列號161中記載的SLIT2基因(GenBank登錄號NM—004787)或其它生物種同源物等。本發(fā)明提供對診斷、檢測、確定或預測食管癌或食管癌轉移、及食管癌的治療有用的疾病確定用組合物、以及使用了該組合物的診斷、檢測、確定或預測食管癌及食管癌轉移的方法，由此具有以下獨特作用效果，即提供具有特異性且預測率高、迅速、簡單的檢測、確定或預測食管癌和食管癌轉移的方法。另外，本發(fā)明的食管癌標記物還包括在食管癌患者的血液等生物試樣中發(fā)現(xiàn)的物質，該物質在健康人中基本或完全沒有被發(fā)現(xiàn)，所以，還具有下述效果，即，通過單獨以上述標記物的存在或存在量作為指標，例如在血液中的存在或存在量，即可容易地4全測食管癌。[圖l]表示組合使用與表2中記載的基因對應的序列號4894的多核苷酸時，存在發(fā)生轉移(即轉移性)的食管癌細胞的檢測率?？v軸表示能夠檢測到檢樣中存在發(fā)生轉移的食管癌組織的概率，橫軸表示檢測發(fā)生轉移的食管癌所需要的基因總數(shù)，該基因數(shù)按照表中記載的序列號依次增加。[圖2]表示非癌組織部表達基因的表達量-表達強度相關圖(M-A圖，白色菱形標記食管癌檢測用基因，黑色圓形標記對照基因)?？v軸M、即Minus表示各基因在對照與檢樣中的測定值的對數(shù)值之差，橫軸A、即Add表示各基因在對照與檢樣中的測定值的對數(shù)值之和。[圖3]表示食管癌組織部表達基因的表達量-表達強度相關圖(M-A圖，白色菱形標記食管癌檢測用基因，黑色圓形標記對照基因)。縱軸M、即Minus表示各基因在對照與檢樣中的測定值的對數(shù)值之差，橫軸A、即Add表示各基因在對照與檢樣中的測定值的對數(shù)值之和。[圖4]表示組合使用與表3中記載的基因對應的序列號162181的多核苷酸時，存在食管癌細胞的檢測率?？v軸表示能檢測到檢樣中存在食管癌組織的概率，橫軸表示檢測食管癌所需的基因總數(shù)，該基因數(shù)按照表3中記載的序列號依次增加。[圖5]表示利用RT-PCR法測定的食管癌組織中CAMKIIalpha及YPEL5基因的表達量降低。GAPDH:穩(wěn)定表達基因甘油醛-3-磷酸酯脫氫酵(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)、-RT:不添加Taq聚合酶進行的反應。具體實施方式以下進一步具體地說明本發(fā)明。l.食管癌相關標記物l.l食管癌相關靶核酸(1)作為在使用本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片檢測、確定或預測食管癌的存在及轉移時使用的食管癌轉移相關標記物的靶核酸例如包括含有序列號147表示的堿基序列的人類基因(即AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FU11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IG腿、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、NOLl、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD)、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。此處，基因、同源物、轉錄產(chǎn)物、cDNA、變異體及衍生物的含義與上述定義相同。優(yōu)選的靶核酸為含有序列號147表示的堿基序列的人類基因、其轉錄產(chǎn)物或cDNA,較優(yōu)選該轉錄產(chǎn)物或cDNA。在本發(fā)明中，成為食管癌轉移的靶的上述基因在來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織中的表達水平，與其在來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織中的表達水平相比，均發(fā)生顯著變化(即增加或降低)。第1耙核酸是AXL基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變少可以作為食管癌的標志(marker)的報道。第2耙核酸是C6orf54基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于C6orf54基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第3靶核酸是ZBTB11基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第4耙核酸是TNFRSF14基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于TNFRSF14基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第5靶核酸是NSUN5基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其達減少可以作為食管癌的標志的寺艮道。第6靶核酸是SPEN基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其達減少可以作為食管癌的標志的報道。第7靶核酸是LTBP3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于LTBP3基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第8靶核酸是SYNGR1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或的表達減少可以作為食管癌的標志的才艮道。第9靶核酸是ARL3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于ARL3基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第10耙核酸是SLC13A1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于RRM2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第11革巴核酸是RALGDS基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于RALGDS基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第12靶核酸是ADD3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于ADD3基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第13靶核酸是MAP3K12基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第14耙核酸是AVPI1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其達減少可以作為食管癌的標志的沖艮道。第15耙核酸是GIMAP6基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第16靶核酸是FLJ11259基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第17耙核酸是C3AR1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于C3AR1基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第18耙核酸是PCGF2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第19耙核酸是PDE6D基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于PDE6D基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第20耙核酸是PLCG2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于PLCG2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第21耙核酸是GPR148基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第22靶核酸是ARF6基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其達減少可以作為食管癌的標志的才艮道。第23耙核酸是NISCH基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第24靶核酸是GLYAT基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第25靶核酸是IGHM基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于IGHM基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第26耙核酸是FBOX38基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第27耙核酸是SLC12A1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第28靶核酸是PGDS基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其達減少可以作為食管癌的標志的報道。第29耙核酸是CD48基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于CD48基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第30靶核酸是IMPA2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第31靶核酸是HSPA6基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第32輩巴核酸是EIF3S9基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第33靶核酸是ZNF659基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于ZNF659基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第34耙核酸是RAB6C基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第35靶核酸是N0L1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于N0L1基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的寺艮道。第36靶核酸是DAB2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于DAB2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第37靶核酸是EBI3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于EBI3基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第38靶核酸是PRSS3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其達減少可以作為食管癌的標志的報道。第39耙核酸是GLB1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于GLB1基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第40靶核酸是SAMSN1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于SAMSN1基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第41把核酸是APQ3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其達減少可以作為食管癌的標志的4艮道。第42耙核酸是CAPZA2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第43靶核酸是B4GALT2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于B4GALT2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第44靶核酸是ARHGEF3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第45靶核酸是POGK基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于POGK2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第46靶核酸是PRAF1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。迄今為止還沒有關于PRAF1基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第47耙核酸是HPGD基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。HPGD基因在食管癌抹化細胞的轉移性亞抹中表達增加，上述內容被記載于Kawamata，H.等，2003年，CancerScience,第94巻，p.699-706。1.2食管癌相關靶核酸(2)作為在使用本發(fā)明組合物、試劑盒或DNA芯片檢測、確定或預測食管癌或食管癌細胞的存在時使用的食管癌相關標記物的靶核酸的其他例子，例如包括含有序列號142161表示的堿基序列的人類基因(即分別為GALNS,fgf3，CAMK2B，CaMKIINalpha，PSARL,XRCC3,CAPG，GRHPR,TROAP，RRM2,SATB2，C14orfl62,SEPT6，M6PR，SPRR3,EML1，YPEL5，EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2)、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。此處，基因、同源物、轉錄產(chǎn)物、cDNA、變異體及衍生物的含義與上述定義相同。優(yōu)選的靶核酸是含有序列號142161表示的堿基序列的人類基因、其轉錄產(chǎn)物或cDNA，較優(yōu)選該轉錄產(chǎn)物或cDNA。本發(fā)明中，作為食管癌的靶的上述基因，在食管癌組織中的表達水平與其在非癌組織中的表達水平相比，均顯著降低。第1靶核酸是GALNS基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。GALNS基因是6-疏酸N-乙酰半乳糖胺硫酸酯酶的基因(Tomatsu,s.等，1991年,BiochemicalBiophysicalResearchCommunication,第181巻，p.677-683)。已知該基因的翻譯產(chǎn)物在溶酶體內參與葡糖胺聚糖、硫酸角質素、6-硫酸軟骨素等的代謝，該基因的缺損、缺失、變異可引起遺傳性粘多糖病、即莫爾基奧綜合征(MorquioAsyndrome)(Fukuda,S.等，1992年,JournalofClinicalInvestigation,第90巻，p.1049-1053等)。莫爾基奧綜合征的主要癥狀是角膜混濁、大動脈瓣關閉不全、硫酸角質素從尿中排泄或骨病變。但是，迄今為止還沒有關于GALNS基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第2靶核酸是fgf3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。fgf3基因是屬于成纖維細胞生長因子家族的基因(Brookes，S.等，1989年，Oncogene,第4巻，p.429-436)。除暗示該基因的翻i奪產(chǎn)物有助于耳的形成之外，還發(fā)現(xiàn)作為原癌基因，在包括人食管癌細胞在內的多種人及小鼠的癌組織中擴增(Kitagawa,Y.等，1991年，CancerResearch,第51巻，p.1504-1508)。但是，迄今為止還沒有關于fgf3基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第3靶核酸是CAMK2B基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。CAMK2B基因是釣/4丐調蛋白依賴性蛋白激酶II(3的基因(Tombes,r.M,等，1997年，BiochimicaetBiophysicaActa,第1355巻，p.281—292)。暗示該基因的翻譯產(chǎn)物可將各種基質的絲氨酸.蘇氨酸殘基磷酸化，有助于細胞周期的調節(jié)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的形成。暗示在肺小細胞癌細胞中，CAMK2B的活化促進細胞周期(Williams,C丄.等，1996年，BiochemicalPhamacology,第51巻，p.707-715)，但是，迄今為止還沒有關于cMAK2B基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的4艮道。第4耙核酸是CaMKIINalpha基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。CAMKIINalpha基因是釣/4丐調蛋白-依賴性蛋白激酶II的基因(Strausberg，R丄.等，2002年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻，p.16899-16903)。已知CAMKIINalpha基因與CaM-激酶II抑制劑a(大鼠LOC287005)具有高同源性，LOC287005是對腦特異性的4丐/鈣調蛋白-依賴性蛋白激酶II的抑制蛋白質(Chang.B.H.等，2001年,Neuroscience，第102巻,p.767-777)。但是，迄今為止還沒有關于CaMKIINalpha基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第5耙核酸是PSARL基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。PSARL基因是早衰素相關菱形體樣蛋白的基因(Pellegrini,L.等2001年,JournalofAlzheimer'sDisease,第3巻，p.181—190)。已知作為釀酒酵母(S.cerevisiae)的PSARL同源物的Rbdl的翻譯產(chǎn)物存在于線粒體內膜，該翻譯產(chǎn)物的缺損引起呼吸不全(MacQuibban,G.等，2003年，Nature,第423巻，p.537-541)。但是，迄今為止還沒有關于PSARL基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第6靶核酸是XRCC3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。XRCC3基因是中國倉鼠細胞3的X射線修復互補缺陷修復的基因(Tebbes,R.S.等,1995年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第92巻，p.6354-6358)。XRCC3基因的翻譯產(chǎn)物參與基因障礙的修復，并有以下報道XRCC3基因的變異在乳癌(Kuschel,B.等，2002年,Humanmoleculargenetics,第ll巻，p.1399-1407)及黑色素瘤(Winsey，L.等,2000年，CancerResearch,第60巻，p.5612-5616)中顯著升高。但是，迄今為止還沒有關于XRCC3基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第7耙核酸是CAPG基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。CAPG基因是屬于凝溶膠蛋白/膽汁三烯家族(gelsolin/bilinfamily)的肌動蛋白加帽蛋白質的基因(Dabiri,G.A.等，1992年，JournalofBiologicalChemistry,第267巻，p.16545-16552)。該基因的翻譯產(chǎn)物與肌動蛋白纖維的箭頭端結合，使肌動蛋白纖維切斷能力喪失。最初，該翻譯產(chǎn)物在巨噬細胞中被發(fā)現(xiàn)，暗示有可能與巨噬細胞的功能有關，但是，迄今為止還沒有關于CAPG基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第8耙核酸是GRHPR基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。GRHPR基因是乙醛酸還原酶-羥基丙酮酸還原酶的基因(Rumsby,G.等，1999年，BiochimicaetBiophysicaActa，第1446巻,p.383-388)。該基因的翻譯產(chǎn)物將乙醛酸代謝為羥乙酸鹽，并將羥基丙酮酸可逆性分解為D-甘油酸鹽。暗示該基因是原發(fā)性2型高草酸尿癥的致病基因(Cramer,S.D.等，1999年，HumanMolecularGenetics,第8巻，p.2063-2069)。但是，迄今為止還沒有關于GRHPR基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第9靶核酸是TROAP基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。TROAP基因是滋養(yǎng)蛋白相關蛋白質(TASTIN)的基因(Fukuda，M.N.等，1995年，GenesandDevelopment,第9巻，p.l199-1210)。暗示該基因的翻譯產(chǎn)物與滋養(yǎng)蛋白一同作用，在胚胎植入子宮內膜細胞時，有助于細胞粘附(Fukuda,M.等，如上所述)。但是，迄今為止還沒有關于TROAP基因或其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的纟艮道。第10耙核酸是RRM2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。RRM2基因是核糖核苷酸-二磷酸酯還原酶M2嗜連(ribonucleotide-diphosphatereductaseM2chain)的基因(Yang_Feng，T丄.等,1987年，Genomics,第l巻，p.77-86)。該基因的翻譯產(chǎn)物是由核糖核苷酸生成脫氧核糖核苷酸的酶的亞單位，是DNA合成的限速酶。已公開該翻譯產(chǎn)物在浸潤性乳癌等中表達亢進(jensen,R.A.等，1994年，ProceedingsofthenationalAcademyofSciences，USA,第91巻,p.9527-9261等)，還已知該基因的翻譯產(chǎn)物作為羥基脲的抗癌作用的靶分子(Yen,Y.等，1994年，CancerResearch,第54巻，p.3686-3691)。另外，已知隨癌細胞株對抗癌劑吉西他濱(gemcitabine)產(chǎn)生耐性，該基因的翻譯產(chǎn)物的表達量增加(Goan，Y.G.等，1999年，CancerResearch,第59巻，p.4204-4207等)。但是，迄今為止還沒有關于RRM2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第11靶核酸是SATB2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。SATB2基因是DNA序列結合蛋白質的基因(Kikuno.R.等，1999年，DNAResearch,第6巻，p.197-205)。已知該基因的翻譯產(chǎn)物與pre-B細月包的免疫^求蛋白基因的核基質結合區(qū)(nuclearmatrixattachmentregions)結合并調節(jié)其表達(Dobreva,G,2003年，Genes&Development,第17巻，p.3048-3061)，但是，迄今為止還沒有關于SATB2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第12靶核酸是C14orfl62基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。C14orfl62基因是染色體14開放閱讀框162的基因(Mao，Y.等，2000年GenbankDirectsubmission)。C14orfl62基因的功能是未知的,迄今為止還沒有關于C14orfl62基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第13靶核酸是SEPT6基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。SEPT6基因是屬于septin家族的基因(Ono，R.等，2002年，CancerResearch,第62巻，p.333-337)。該基因的翻譯產(chǎn)物具有ATP-GTP結合部位和暗示核內移行的序列。另外，已知存在多種變異體。已知在急性骨髓性白血病患者中，Septin6基因通過染色體轉移與MLL基因融合(Ono,R.等，如上所述)。但是，迄今為止還沒有關于SEPTIN6基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第14靶核酸是M6PR基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。M6PR基因是甘露糖6-磷酸酉旨小受體(smallma廳se6-phosphatereceptor)的基因(Pohlmann,R.等，1987年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第84巻，p.5575_5579)。已知該基因的翻譯產(chǎn)物作為IGF-II的受體發(fā)揮作用，通過抑制其在絨毛癌細胞中的表達能夠抑制細胞增殖能力(O，Goman,D.B.等，1999年，CancerResearch,59巻，p.5692-5694)。但是，迄今為止還沒有關于M6PR基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第15靶核酸是SPRR3基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。如上所述，已知SPRR3基因是食管癌的標記物(國際公開第2003/042661說明書、Chen,B.S.等，2000年，Carcinogenesis,第21巻，p.2147-2150;Abraham,J.M.等，1996年，CellGrowth&Differentiation,第16靶核酸是EML1基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。EML1基因是棘皮動物微管結合蛋白相關蛋白1的基因(Eudy，J.D.等，1997年，Genomics,第43巻，P.104-106)。EML1基因的序列中存在推測為鈣結合特征結構和組氨酸磷酸酶活性區(qū)域的序列，但是，迄癌的標志的報道。第17耙核酸是YPEL5基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。YPEL5基因是開心蛋白5(果蠅)的基因(Roxstrom-Lindquist,K.等,2001年,Insectmolecularbiology,第10巻,p.77-86)。YPEL5的翻譯產(chǎn)物屬于鋅-結合蛋白質家族，迄今為止還沒有關于YPEL5基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第18耙核酸是EIF4EBP2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。EIF4EBP2基因是真核翻譯起始因子4E-結合蛋白2的基因(Pause,A.等，1994年，Nature,第371巻，p.762-767)。EIF4EBP2的翻譯產(chǎn)物是基因表達的起始控制蛋白質，在幾種癌中發(fā)現(xiàn)基因變異(Tsukiyama-Kohara,K.等，1996年，Genomics,第38巻，p.353-363)，迄今為止的標志的報道。第19靶核酸是SLC2A14基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。SLC2A14基因是溶質載體蛋白家族2(易化擴散的葡萄糖轉運體)，成員14的基因(Strausberg,R丄.等，2002年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻，p.16899-16903)。SLC2A14的翻譯產(chǎn)物是在睪丸中特異表達的葡萄糖轉運體(Wu,X.等，如上所述)，迄今為止還沒有關于SLC2A14基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。第20靶核酸是SLIT2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。SLIT2基因是果蠅SLIT同源物2的基因(Itoh，A.等，1998年，MolecularBrainResearch,第62巻，p.175—186)。已知該基因的翻i奪產(chǎn)物是分泌蛋白質，抑制神經(jīng)纖維的延長和白細胞游走(Wu，W.等，1999年，Nature,第400巻，p.331-336)。但是，迄今為止還沒有關于SLIT2基因及其轉錄產(chǎn)物的表達減少可以作為食管癌的標志的報道。1.3食管癌相關靶多肽(1)作為在使用本發(fā)明的組合物或試劑盒檢測、確定或預測食管癌的存在及轉移時使用的食管癌轉移相關標記物的靶多肽，例如包括含有序列號147表示的堿基序列的上述人類基因，即分別由AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IGHM、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、NOLl、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因編碼的多肽，例如含有序列號95141表示的氨基酸序列的人多肽、其同源物、或其變異體或衍生物。此處，多肽、同源物、變異體及衍生物的含義與上述定義相同。優(yōu)選的靶多肽是含有序列號95141表示的氨基酸序列的人多肽。本發(fā)明中的成為食管癌轉移的靶的上述多肽與對應的基因及其轉錄產(chǎn)物的表達量相同地都具有以下特征在來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織中的表達水平與其在來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織中的表達水平相比，發(fā)生顯著變化(即增加或下降)，或該多肽在手術時發(fā)生淋巴結轉移的受試者的血液中的表達水平與其在手術時未發(fā)生淋巴結轉移的受試者的血液中的表達水平相比，發(fā)生顯著變化(即增加或下降)。1.4食管癌的靶多肽(2)作為在使用本發(fā)明的組合物或試劑盒檢測、確定或預測食管癌或食管癌細胞的存在時使用的食管癌相關標記物的靶多肽包括由上述GALNS，fgf3,CAMK2B,CaMK麗alpha，PSARL,XRCC3，CAPG，GRHPR，TROAP，RRM2，SATB2，C14orfl62，SEPT6，M6PR，SPRR3，EML1，YPEL5，EIF4EBP2，SLC2A14及SLIT2基因編碼的多肽，例如，含有序列號182201表示的氨基酸序列的人多肽、其同源物、或其變異體或衍生物。此處，多肽、同源物、變異體及衍生物的含義與上述定義相同。優(yōu)選的靶肽是含有序列號182201表示的氨基酸序列的人多肽。在本發(fā)明中，成為食管癌的靶的上述多肽與對應的基因及其轉錄產(chǎn)物的表達量相同地都具有以下特征在食管癌組織中的表達量與其在非癌組織中的表達量相比，顯著降低，或該多肽在罹患食管癌的受試者的血液中的表達水平與其在健康受試者的血液中的表達水平相比，顯著降低。1.5食管癌相關靶多肽(3)使用本發(fā)明的組合物或試劑盒體外檢測食管癌時使用的其他食管癌標記物是具有序列號202233表示的氨基酸序列的多肽、其變異體或其片段。本發(fā)明的序列號202233的多肽、其基因名及蛋白質編號(GenBank登錄名及登錄號)、及其特性一同示于下面的表l。上述多肽例如在食管癌患者的血漿中被特異性地檢測到，而在健康者的血漿中不被檢測到或未達到能檢測的水平。<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>在本發(fā)明中，用于檢測食管癌的上述靶多肽均具有以下特征該多肽在食管癌患者的血液等生物試樣中的水平與健康人相比，患有食管癌的受試者中的多肽水平顯著或特別高。2.食管癌診斷用探針根據(jù)本發(fā)明，用于檢測、確定或預測食管癌的存在及/或轉移的探針、或用于預測受試者術后預后的探針選自下述i組、n組及/或in組I組由以下(a)(e)組成的多核苦酸，(a)由序列號146表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(b)含有序列號146表示的堿基序列的多核苷酸，(c)由與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(d)含有與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列的多核普酸，及(e)在嚴格條件下與上述(a)(d)中任一個多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。II組由(f)(j)組成的多核苷酸，(f)由序列號142155、157161表示的-威基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(g)含有序列號142155、157161表示的堿基序列的多核苷酸，(h)由與序列號142155、157161表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核普酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(i)含有與序列號142155、157161表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸、及(j)在嚴格條件下與上述(f)(i)中任一個多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，m組由(k)(m)組成的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物，(k)與由序列號146表示的堿基序列編碼的多肽、或具有序列號95140表示的氨基酸序列的多肽、其變異體、或其片段中的至少l個特異性結合的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物，(1)與由序列號142155、157161表示的堿基序列編碼的多肽、或具有序列號182195、197201表示的氨基酸序列的多肽、其變異體、或其片段中的至少1個特異性結合的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物、及(m)與序列號202232表示的多肽，其變異體、或其片段中的至少1個特異性結合的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物。上述探針均能與上述1.1至1.5中記載的食管癌相關標記物中的任一種結合，能夠用于檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移。例如，利用上述I組及III組(k)的各探針能夠檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移。另外，利用上述II組及III組(1)、(m)的各探針能夠才全測、確定或預測食管癌的存在。在本發(fā)明中，核酸探針含有DNA或RNA,抗體探針含有多克隆抗體、單克隆抗體、其抗體片段、合成抗體、重組抗體、多特異性抗體、單鏈抗體等。本發(fā)明人等首次發(fā)現(xiàn)上述I組至III組所示的探針能用于檢測、確定或預測食管癌的存在及/或轉移。3.食管癌診斷用組合物3.1核酸組合物(1)本發(fā)明中，用于檢測、確定或預測食管癌的存在及/或轉移的核酸組合物含有上述2中的I組中記載的1種或2種以上探針，能夠定性及/或定量地測定作為食管癌轉移相關的靶核酸的以下物質的存在、表達量或存在量，所述物質為來自人的AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IGHM、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、N0L1、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物。上述靶核酸在來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織中的表達水平與來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織中的表達水平相比，發(fā)生顯著變化(即增加或降低)。因此，本發(fā)明的組合物能夠有效地用于測定來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織和來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織中耙核酸的表達水平，并對其進行比較。本發(fā)明中能使用的組合物包括選自下述多核苷酸組的l種或多種多核苷酸的組合，所述多核苷酸組為患有食管癌的患者的生物組織中含有序列號147表示的堿基序列的多核苷酸組及其互補多核苷酸組；由在嚴格條件下與DNA分別雜交的多核苷酸組及其互補多核苷酸組，所述DNA由與上述堿基序列互補的堿基序列組成；及上述多核苷酸組的堿基序列中含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸組。具體而言，本發(fā)明的組合物可以含有以下1種或多種多核苷酸或其片段。(1)由序列號146、47表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(2)含有序列號146、47表示的堿基序列的多核苷酸組。(3)由序列號146表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(4)含有序列號146表示的堿基序列的多核苷酸組。(5)由與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(6)含有與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列的多核普酸組。(7)在嚴格條件下，與DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，上述DNA由與序列號146表示的各堿基序列互才卜的石咸l4歹Q纟且A。(8)在嚴格條件下與由序列號146表示的各堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(9)由序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(10)含有序列號47表示的堿基序列的多核苷酸。(11)由與序列號47表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(12)含有與序列號47表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸組。U3)在嚴格條件下，與DNA雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，上述DNA由與序列號47表示的堿基序列互補的堿基序列組成。(14)在嚴格條件下，與由序列號47表示的堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。上述(1)(14)的多核香酸的片段可以含有各多核苷酸的堿基序列中的例如下述范圍的連續(xù)堿基數(shù)，但并不限定于此，所述范圍包括15序列的全部堿基數(shù)、155000個堿基、154500個堿基、15~4000個堿基、153500個堿基、153000個堿基、152500個堿基、152000個堿基、151500個堿基、151000個堿基、15900個堿基、15800個堿基、15700個堿基、15600個堿基、15500個堿基、15400個堿基、15300個堿基、15250個堿基、15~200個堿基、15150個堿基、15~140個堿基、15130個堿基、15120個堿基、15110個堿基、15100個堿基、1590個堿基、1580個堿基、1570個堿基、1560個堿基、1550個堿基、1540個堿基、1530個堿基或1525個堿基；25序列的全部堿基數(shù)、251OOO個堿基、25900個堿基、25~800個堿基、25700個堿基、25600個堿基、25500個堿基、25400個堿基、25300個堿基、25250個堿基、25200個堿基、25150個堿基、25140個堿基、25130個堿基、25120個堿基、25110個堿基、25100個堿基、2590個堿基、2580個堿基、2570個堿基、2560個堿基、2550個堿基或2540個堿基；50序列的全部堿基數(shù)、501000個堿基、50900個堿基、50~800個堿基、50700個堿基、50600個堿基、50500個堿基、50400個堿基、50300個堿基、50250個堿基、50200個堿基、50150個堿基、50140個堿基、50130個堿基、50120個堿基、50110個堿基、50100個堿基、5090個石咸基、5080個堿基、5070個堿基或5060個堿基；60序列的全部堿基數(shù)、601000個堿基、60900個堿基、60800個堿基、60700個堿基、60600個堿基、60500個堿基、60400個堿基、60300個堿基、60250個堿基、60200個堿基、60150個堿基、60140個堿基、60130個堿基、60120個堿基、60110個堿基、60100個堿基、6090個堿基、6080個堿基或6070個堿基等。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，含有序列號147表示的堿基序列的多核苦酸的片段，優(yōu)選分別含有序列號4894表示的堿基序列或其互補序列、或其連續(xù)15個堿基以上的部分序列。本發(fā)明的組合物中例如含有以下多核苷酸。(1)序列號146表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(2)序列號146表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(3)序列號47表示的堿基序列或其互補序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(4)序列號47表示的堿基序列或其互補序列中，含有60個以上連續(xù)i咸基的多核苷酸。(5)序列號146表示的堿基序列中，分別含有序列號4893表示的堿基序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(6)與序列號146表示的堿基序列互補的序列中，分別含有與序列號4893表示的堿基序列互補的序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(7)序列號47表示的堿基序列中，含有序列號94表示的堿基序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(8)與序列號47表示的堿基序列互補的序列中，含有與序列號94表示的堿基序列互補的序列、且含有60個以上連續(xù)石咸基的多核苷酸。本發(fā)明中使用的上述多核苷酸類或其片段類均可以為DNA或RNA。作為本發(fā)明的組合物的多核苷酸可以4吏用DNA重組技術、PCR法、使用DNA/RNA自動合成儀的方法等常^L技術進行制作。DNA重組技術及PCR法可以使用例如Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWilley&Sons,US(1993);Sambrook等，MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,US(1989)等中記載的技術。來自人的AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IG畫、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、NOLl、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因是公知的，如上所述，其獲得方法也是已知的。所以，可以通過克隆上述基因制作作為本發(fā)明的組合物的多核苦酸。構成本發(fā)明的組合物的多核苷酸可以使用DNA自動合成裝置化學合成得到。通常可以使用亞磷酰胺法進行合成，利用該方法可以自動合成至約100個堿基的單鏈DNA。DNA自動合成裝置可以從例如Polygen公司、ABI^^司、AppliedBioSystems7^司等購買。本發(fā)明的多核苷酸也可以通過cDNA克隆法制作?？梢詮谋磉_作為本發(fā)明中的靶的上述基因的食管組織等生物組織中提取總RNA，將該總RNA用寡聚dT纖維素柱處理得到聚A(+)RNA,通過RT-PCR法由該聚A(+)RNA制作cDNA庫，通過雜交篩選、表達篩選、抗體篩選等進行篩選，從該cDNA庫得到目標cDNA克隆?？梢愿鶕?jù)需要，利用PCR法擴增cDNA克隆?？梢曰谛蛄刑?47表示的堿基序列，從15100個連續(xù)堿基序列中選擇并合成探針或引物。例如在Sambrook，J.&Russel，D,著，MolecularCloning,ALABORATORYMANUAL、ColdSpringHarborLaboratoryPress、2001年1月15日出片反，第1巻7.427.45,第2巻8.98.17中記載了cDNA克隆技術，可以用于多核苷酸的制作。3.2核酸組合物(2)本發(fā)明中用于檢測、確定或預測食管癌或食管癌細胞的存在的核針，可以定性及/或定量地測定作為食管癌相關靶核酸的來自人的GALNS,fgf3，CAMK2B,CaMKIINalpha,PSARL,XRCC3,CAPG,GRHPR，TROAP，RRM2,SATB2,C14orfl62，SEPT6,M6PR,SPRR3,EML1,YPEL5,EIF4EBP2，SLC2A14及SLIT2基因、其同源物、其轉錄產(chǎn)物或cDNA、或其變異體或衍生物的存在、表達量或存在量。上述靶核酸在食管癌組織中的表達水平與非癌組織相比，顯著降低。因此，本發(fā)明的組合物可以有效地用于測定非癌組織和食管癌組織中耙核酸的表達水平，并對其進行比壽交。本發(fā)明中可以使用的組合物是選自下述多核苷酸組的一種或幾種多核香酸的組合，所述多核苷酸組為含有患有食管癌的患者的生物組織中的序列號142161表示的堿基序列的多核苷酸組及其互補多核普酸組；在嚴格條件下與DNA分別雜交的多核苷酸組及其互補多核苷酸組，上述DNA由與該堿基序列互補的堿基序列組成；以及上述多核苦酸組的堿基序列中含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸組。具體而言，本發(fā)明的組合物可以含有以下1種或多種多核苷酸或其片段。(1)由序列號142161表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(2)含有序列號142161表示的堿基序列的多核苷酸組。(3)序列號142155表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(4)含有序列號142~155表示的堿基序列的多核苷酸組。(5)由與序列號142155表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(6)含有與序列號142155表示的堿基序列互補的堿基序列的多核普酸組。(7)在嚴格條件下與DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，上述DNA由與序列號142155表示的各堿基序列互補的-威基序列組成。(8)在嚴格條件下與由序列號142155表示的各堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(9)由序列號157161表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(10)含有序列號157161表示的堿基序列的多核苷酸組。(11)由與序列號157161表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(12)含有與序列號157161表示的堿基序列互補的堿基序列的多核香酸組。(13)在嚴格條件下與DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，上述DNA由與序列號157161表示的各堿基序列互補的;咸基序列組成。(14)在嚴格條件下與由序列號157161表示的各石咸基序列組成的DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(15)由序列號156表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(16)含有序列號156表示的堿基序列的多核苷酸。(17)由與序列號156表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(18)含有與序列號156表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苦酸。(19)在嚴格條件下與DNA雜交的多核苦酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，上述DNA由與序列號156表示的堿基序列互補的堿基序列組成。(20)在嚴格條件下與由序列號156表示的堿基序列組成的DNA雜交的多核苦酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。上述(1)(14)的多核苷酸片段可以含有各多核苷酸的堿基序列中的例如下述范圍的連續(xù)堿基數(shù)，但并不限定于此，所述范圍為15序列的全部堿基數(shù)、155000個堿基、154500個堿基、154000個堿基、153500個堿基、153000個堿基、152500個堿基、152000個堿基、151500個堿基、151000個堿基、15900個堿基、15800個堿基、15700個堿基、15600個堿基、15500個堿基、15400個堿基、15300個堿基、15250個堿基、15200個堿基、15150個堿基、15140個堿基、15130個堿基、15120個堿基、15110個堿基、15100個堿基、1590個堿基、1580個堿基、1570個堿基、1560個堿基、1550個堿基、1540個堿基、1530個堿基或1525個堿基；25序列的全部堿基數(shù)、251000個堿基、25900個堿基、25800個堿基、25700個堿基、25600個堿基、25500個堿基、25400個堿基、25300個堿基、25250個堿基、25200個堿基、25150個堿基、25140個堿基、25130個^咸基、25120個-威基、25110個石威基、25100個;咸基、2590個石威基、2580個堿基、25~70個堿基、2560個堿基、2550個堿基或25~40個堿基；50序列的全部堿基數(shù)、501000個堿基、50900個堿基、50800個堿基、50700個堿基、50600個堿基、50500個堿基、50~400個堿基、50300個堿基、50250個堿基、50200個堿基、50150個堿基、50140個堿基、50130個堿基、50120個堿基、50110個堿基、50100個;咸基、5090個堿基、5080個石咸基、5070個;咸基或50~60個堿基；60序列的全部堿基數(shù)、601000個堿基、60900個堿基、60,個堿基、60700個堿基、60600個堿基、60500個堿基、60400個堿基、60300個堿基、60250個堿基、60200個堿基、60~150個堿基、60140個堿基、60130個堿基、60120個堿基、60110個堿基、60100個堿基、6090個堿基、6080個堿基或6070個堿基等。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，優(yōu)選含有序列號142161表示的堿基序列的多核苷酸的片段分別含有序列號162181表示的堿基序列或其互補序列、或其連續(xù)15個;威基以上的部分序列。本發(fā)明的組合物例如包括以下多核苷酸。(1)序列號142155表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的多核*酸。(2)序列號142155表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(3)序列號157161表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(4)序列號157161表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(5)序列號142155表示的堿基序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號162175表示的堿基序列的多核苷酸。(6)與序列號142155表示的堿基序列互補的序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苦酸中分別含有與序列號162~175表示的堿基序列互補的序列的多核苷酸。(7)序列號157161表示的堿基序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號177181表示的堿基序列的多核苷酸。(8)與序列號157161表示的堿基序列互補的序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核普酸中分別與序列號177181表示的堿基序列互補的序列的多核苷酸。(9)序列號156表示的堿基序列或其互補序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(10)序列號156表示的堿基序列或其互補序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(11)序列號156表示的堿基序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中含有序列號176表示的堿基序列的多核苷酸。(12)與序列號156表示的堿基序列互補的序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中含有與序列號176表示的堿基序列互補的序列的多核香酸。本發(fā)明中使用的上述多核苷酸類或其片段類均可以為DNA,也可以為RNA。作為本發(fā)明的組合物的多核苷酸可以使用DNA重組技術、PCR法、利用DNA/RNA自動合成儀的方法等常規(guī)技術進行制作。DNA重組技術及PCR法，例如可以使用Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWilley&Sons，US(1993);Sambrook等,MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,US(1989)等中記載的技術。GALNS,fgf3，CAMK2B，CaMKIINalpha，PSARL，XRCC3，CAPG，GRHPR,TROAP，RRM2，SATB2，C14orfl62，SEPT6，M6PR,SPRR3，EML1，YPEL5,EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2基因是公知的，其獲得方法也是已知的。因此，可以通過克隆上述基因制作作為本發(fā)明的組合物的多核苷酸。GALNS基因，例如可以通過Tomatsu，S.等，1991年，BiochemicalBiophysicalResearchCommunication,第181巻,p.677-683中記載的方法得到。fgf3基因，例如可以通過Brookes,S.等，1989年，Oncogene,第4巻,p.429—436中記載的方法得到。CMK2B基因，例如可以通過Tombes，R.M.等，1997年，BiochimicaetBiophysicaActa,第1355巻，p.281—292中i己載的方法4尋到。CAMKIINalpha基因，例如可以通過Strausberg,R丄.等，2002年,ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻,p.16899-16903中記載的方法得到。PSARL基因，例如可以通過Pellegrini，L.等，2001年，JournalofAlzheimer'sDisease,第3巻，p.181-190中記載的方法得到。XRCC3基因，例如可以通過Tebbes，R.S.等，1995年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第92巻，p.6354-6358中記載的方法得到。CAPG基因，例如可以通過Dabiri,G.A.等，1992年，JournalofBiologicalChemistry,第267巻，p.16545-16552中記載的方法得到。GRHPR基因，例如可以通過Rumsby,G.等，1999年，BiochimicaetBiophysicaActa,第1446巻，p.383—388中記載的方法得到。TROAP基因，例如可以通過Fukuda,M.N.等，1995年，GenesandDevelopment,第9巻，p.1199-1210中記載的方法得到。RRM2基因，例如可以通過Yang-Feng,T丄.等，1987年，Genomics,第l巻，p.77-86中記載的方法得到。SATB2基因，例如可以通過Kikuno.R.等，1999年，DNAResearch,第6巻，p.197—205中記載的方法得到。C14orfl62,例如Mao，Y.等在2000年報道了C14orfl62的克隆。SEPT6基因，例如可以通過Ono，R.等，2002年，CancerResearch,第62巻，p.333-337中記載的方法得到。M6PR基因，例如可以通過Pohlmann，R.等，1987年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第84巻，p.5575-5579中記載的方法得到。SPRR3基因，例如可以通過Gibbs，S.等，1993年，Genomics,第16巻，p.630-637中記載的方法得到。EML1基因，例如可以通過Eudy,J.D.等，1997年，Genomics,第43巻，P.104-106中記載的方法得到。YPEL5基因，例如可以通過Roxstrom-Lindquist,K.等，2001年,Insectmolecularbiology,第10巻，p.77—86中記載的方法得到。EIF4EBP2基因,例如可以通過Pause,A.等,1994年，Nature,第371巻，p.762-767中記載的方法得到。SLC2A14基因例如可以通過Strausberg，R丄.等，2002年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻,p.16899-16903中記載的方法得到。SLIT2基因例如可以通過Itoh,A.等，1998年，MolecularBrainResearch,第62巻，p.175-186中記載的方法得到。構成本發(fā)明的組合物的多核苷酸可以使用DNA自動合成裝置化學合成得到。通常使用亞磷酰胺法進行合成，利用該方法能自動合成至約100個堿基的單鏈DNA。DNA自動合成裝置例如可以從Polygen公司、ABI公司、AppliedBioSystems公司等購買。本發(fā)明的多核苷酸也可以通過cDNA克隆法制作?？梢?人表達作為本發(fā)明中的靶的上述基因的食管組織等生物組織中提取總RNA,將該總RNA用寡聚dT纖維素柱處理得到聚A(+)RNA,通過RT-PCR法由該聚A(+)RNA制作cDNA庫，通過雜交篩選、表達篩選、抗體篩選等進行篩選，從該cDNA庫得到目標cDNA克隆?？梢愿鶕?jù)需要，利用PCR法擴增cDNA克隆?？梢曰谛蛄刑?42161表示的堿基序列，從15100個連續(xù)堿基序列中選擇并合成探針或引物。例如在Sambrook，J.&Russel，D.著，MolecularCloning,ALABORATORYMANUAL、ColdSpringHarborLaboratoryPress、2001年1月15日出片反，第1巻7.427.45,第2巻8.98.17中記載了cDNA克隆技術，可以用于多核苷酸的制作。3.3抗體組合物本發(fā)明的組合物作為食管癌診斷用探針，可以含有上述2中的m組中記載的抗體、其片段或化學修飾衍生物。該組合物對于體外檢測、確定或預測患有食管癌的受試者中的食管癌的存在及/或轉移是有用的。此處，轉移的預測可以推導出受試者術后的預后良好、不良的預測結果。(A)本發(fā)明的抗體組合物的第l例是含有對下述多肽、其變異體或其片段的l種或多種抗體、該抗體的片段、或其化學修飾衍生物的組合物，所述多肽具有上述m組(k)中記載的序列號95140表示的氨基酸序列。本發(fā)明的組合物中可以進一步含有對下述多肽、其變異體或其片段的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物，所述多肽具有序列號141表示的氨基酸序列。通過并用上述抗體，可以提高預后預測的準確度。即，根據(jù)本發(fā)明，可以提供用于檢測、確定或預測食管癌的存在及/或轉移的組合物，為了檢測作為食管癌轉移標記物的由上述AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IGHM、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、N0L1、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因編碼的多肽、其同源物、或其變異體或衍生物，該組合物含有l(wèi)種或幾種對上述多肽、其變異體或其片段的抗體。(B)本發(fā)明的抗體組合物的第2例是含有對下述多肽、其變異體或其片段的l種或幾種抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物，所述多肽具有上述III組(1)中記載的序列號182195、197201表示的氨基酸序列。本發(fā)明的組合物可以進一步含有對下述多肽、其變異體或其片段的抗體、該抗體的片段或化學修飾衍生物，所述多肽具有序列號196表示的氨基酸序列。即，根據(jù)本發(fā)明，可以提供用于檢測、確定或預測食管癌的存在的組合物，為了檢測作為食管癌標記物的由上述GALNS，fgf3，CAMK2B，CaMKIINalpha,PSARL，XRCC3，CAPG,GRHPR，TROAP,RRM2，SATB2，C14orfl62，SEPT6，M6PR,SPRR3,EMU,YPEL5,EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2基因編碼的多肽、其同源物、或其變異體或衍生物，該組合物中含有l(wèi)種或幾種對上述多肽、其變異體或其片段的抗體。(C)本發(fā)明的抗體組合物的第3例是用于體外檢測、確定或預測患有食管癌的受試者中的食管癌的存在的組合物，其中含有對下述多肽、其變異體或其片段的l個或幾個抗體、該抗體的片段、或其化學修飾衍生物，所述多肽具有上述m組(m)中記載的序列號202232表示的氨基酸序列。本發(fā)明的組合物中可以進一步含有與具有序列號233表示的氨基酸序列的多肽、其變異體或其片段中的至少1個特異性結合的抗體、該抗體的片段或其化學修飾衍生物。上述多肽由上述表l中記載的基因編碼。上述多肽可以利用DNA重組技術得到。例如，將如上所述得到的cDNA克隆整合到表達載體中，通過培養(yǎng)由該載體轉化或轉染的原核或真核宿主細胞，可以從該細胞或培養(yǎng)上清得到上述多肽。載體及表達系統(tǒng)可以從Novagen公司、寶酒造、第一化學藥品、Qiagen公司、Stratagene公司、Promega公司、RocheDiagnositics公司、Invitrogen公司、GeneticsInstitute公司、AmershamBioscience公司等購買。作為宿主細胞，可以使用細菌等原核細胞(例如大腸桿菌、枯草菌)、酵母(例如釀酒酵母)、昆蟲細胞(例如Sf細胞)、哺乳動物細胞(例如COS、CHO、BHK)等。載體中除含有編碼該多肽的DNA以外，還可以含有調節(jié)成分，例如啟動子、增強子、多聚腺苷酸化信號、核糖體結合部位、復制起始點、終止子、選擇標記等。為了容易進行多肽的精制，可以將多肽制成在多肽的C末端或N末端結合了標記肽的融合多肽。作為代表性的標記肽，可以舉出610個殘基的組氨酸重復序列、FLAG、myc肽、GFP多肽等，但標記肽并不限定于此。DNA重組技術記載于Sambrook，J.&Russel,D.(參見上述記載)。在不結合標記肽的狀態(tài)下制備本發(fā)明的多肽時，作為其精制方法，例如可以舉出利用離子交換色譜法的方法。除此之外，還可以使用組合凝膠過濾或疏水性色鐠、等電點色讒等的方法。另一方面，在該蛋白上結合組氨酸重復序列、FLAG、myc、GFP等標記肽時，可以舉出適合通常使用的各種標記肽的親和色譜法?？梢詷嫿苋菀追蛛x.精制的表達載體。特別是構建能以多肽和標記肽的融合多肽的狀態(tài)進行表達的表達載體，利用基因工程技術制備該多肽時，也可容易地進行分離精制。本發(fā)明的上述多肽的變異體如上述所定義，是在序列號95141、182201、202233表示的氨基酸序列或其部分序列中,缺失、置換、添加或插入l個以上、優(yōu)選l或幾個氨基酸的變異體、或與該氨基酸序列或其部分序列具有約80%以上、約85%以上、優(yōu)選約90%以上、較優(yōu)選約95%以上、約97%以上、約98%以上、約99%以上的同源性百分比的變異體。上述變異體例如包括不同于人的哺乳動物種的同源物、以人的多型性變異或剪接變異為基礎的變異體等天然變異體。本發(fā)明的上述多肽或變異體的片段由該多肽的氨基酸序列的至少5個、至少7個、至少10個、至少15個、優(yōu)選至少20個、至少25個、較優(yōu)選至少30個、至少40個、至少50個連續(xù)氨基酸殘基構成，并具有l(wèi)個或幾個表位。上述片段可以免疫特異性地與本發(fā)明的抗體或其片段結合。推測上述多肽可能在存在于生物體內的蛋白酶或肽酶等酶的作用下被切斷而形成片段，以片段形式存在。識別如上所述得到的多肽的抗體可以通過抗體的抗原結合部位特異性結合該多肽。具體而言可以將具有序列號95141、182201、202233的氨基酸序列的多肽或其片段、其變異體多肽或融合多肽等，分別用作用于產(chǎn)生免疫反應性抗體的免疫原。更具體而言，多肽、片段、變異體、融合多肽等含有促使抗體形成的抗原決定基或表位，上述抗原決定基或表位可以是直鏈，也可以是較高級結構(斷開)。需要說明的是，該抗原決定基或表位可以通過本領域已知的所有表位解析法、例如噬菌體表面展示技術(Phagedisplay)法、逆免疫(reverseimmunogenetics)法等進行確定。利用本發(fā)明的多肽能誘導所有種類的抗體。如果分離該多肽的全部或一部分或表位，那么使用常規(guī)技術即可制備多克隆抗體及單克隆抗體中的任一種。方法例如包括Kennet等(主編)，MonoclonalAntibodies,Hybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses,PienumPress,NewYork,1980中列舉的方法。多克隆抗體可以通過用本發(fā)明的多肽免疫禽類(例如雞等)、哺乳動物(例如家兔、山羊、馬、綿羊、小鼠等)等動物進行制作。可以適當組合硫酸銨分餾、離子交換色傳、親和色語等方法，從被免疫的動物的血液中精制目標抗體。單克隆抗體可以通過包括利用常規(guī)技術在小鼠中生產(chǎn)雜交瘤細胞抹的方法得到，所述雜交瘤細胞抹能產(chǎn)生對各多肽特異的單克隆抗體。用于生產(chǎn)上述雜交瘤細胞抹的l種方法如下所述用本發(fā)明的酶多肽免疫動物，從被免疫的動物中采集脾臟細胞，使該脾臟細胞與骨髓瘤細胞株融合，由此制備雜交瘤細胞，然后鑒定能夠生產(chǎn)與該酶結合的單克隆抗體的雜交瘤細胞。單克隆抗體可以通過常規(guī)技術回收。作為本發(fā)明的抗體，只要是能與本發(fā)明的靶多肽或其片段特異性結合的抗體即可，沒有特別限定，可以使用單克隆抗體，也可以使用多克隆抗體，優(yōu)選使用單克隆抗體。其他抗體包括重組抗體、合成酶、多特異性抗體(例如，二重特異性抗體)、單鏈抗體、抗體片段等。上述抗體的例子為Fab、F(ab，)2、scFv、Fv、dsFv等。本發(fā)明抗體的球蛋白類型及分類只要具有上述特征的抗體即可，沒有特別限定，可以是IgG、IgM、IgA、IgE、IgD、IgG"IgG2、IgG3、IgG4、IgA!、IgA2等中的任一種。<單克隆抗體的制作〉(1)免疫及抗體產(chǎn)生細胞的采集對哺乳動物例如大鼠、小鼠(例如近交系小鼠Balb/c)、家兔等給與由靶多肽組成的免疫原。免疫原的1次給藥量可以根據(jù)免疫動物種類、給藥途徑等適當確定，每1只動物給藥約50200嗎。主要通過在皮下、腹腔內注入免疫原進行免疫。另外，免疫的間隔沒有特別限定，初次免疫后，間隔數(shù)日至數(shù)周，優(yōu)選間隔14周，進行210次、優(yōu)選34次追加免疫。初次免疫后，利用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme—LinkedImmunoSorbentAssay))法等反復測定免疫動沖勿血清中的抗體值，抗體值達到平臺時，向靜脈內或腹腔內注射免疫原，進行最終免疫。從最終免疫日起25日后，優(yōu)選3日后，采集抗體產(chǎn)生細胞。作為抗體產(chǎn)生細胞，可以舉出脾臟細胞、淋巴結細胞、末梢血細胞等，優(yōu)選脾臟細胞或局部淋巴結細胞。(2)纟田月包融合制作能夠生產(chǎn)對各靶多肽特異的單克隆抗體的雜交瘤細胞抹。該雜交瘤可以通過常規(guī)技術進行生產(chǎn)并鑒定。用于生產(chǎn)該雜交瘤細胞抹的方法之一是用本發(fā)明的蛋白質免疫動物，從被免疫的動物中采集脾臟細胞，使該脾臟細胞與骨髓瘤細胞抹融合，由此生成雜交瘤細胞，鑒定能夠生產(chǎn)與該酶結合的單克隆抗體的雜交瘤細胞抹。作為能與抗體產(chǎn)生細胞融合的骨髓瘤細胞株，可以使用小鼠等動物的通常能購買到的細胞林。作為使用的細胞抹，優(yōu)選具有下述性質的細胞抹，即具有藥劑選擇性，并具有在未融合狀態(tài)下在HAT選擇培養(yǎng)基(含有次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶)中不能存活，只有在與抗體產(chǎn)生細胞融合的狀態(tài)下能存活的性質。細胞林優(yōu)選來自與免疫動物同種系的動物的細胞。作為骨髓瘤細胞抹的具體例，可以舉出來自BALB/c小鼠的次黃噤呤'鳥。票呤.磷酸核糖基'轉換酶(HGPRT)缺損細胞抹P3X63-Ag.8抹(ATCCTIB9)等。接下來使上述骨髓瘤細胞抹與抗體產(chǎn)生細胞進行細胞融合。細胞融合如下進行在不含有血清的DMEM、RPMI-1640培養(yǎng)基等動物細胞培養(yǎng)用培養(yǎng)基中，以約1:1~20:1的比例混合抗體產(chǎn)生細胞和骨髓瘤細胞抹，在細胞融合促進劑的存在下進行融合反應。作為細胞融合促進劑，可以使用濃度約為1080%、平均分子量為15004000道爾頓的聚乙二醇等。另外，因情況的不同，為了提高融合效率，可以并用二曱基亞砜等輔助劑。還可以使用利用電刺激(例如電穿孔)的市售的細胞融合裝置使抗體產(chǎn)生細胞和骨髓瘤細胞抹融合。(3)雜交瘤的篩選及克隆從細胞融合處理后的細胞中篩選目標雜交瘤。作為篩選方法，使用例如含有胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基等適當稀釋細胞懸濁液后，以約200萬個細胞/孔接種到微孔板上，向各孔中加入選擇培養(yǎng)基，并在以后適當更換選擇培養(yǎng)基，進行培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為2040。C、優(yōu)選為約37。C。骨髓瘤細胞是HGPRT缺損抹或胸香激酶缺損抹時，通過使用含有次黃噤呤氨基蝶呤胸腺嘧啶核苷的選擇培養(yǎng)基(HAT培養(yǎng)基)，能夠僅選擇性培養(yǎng)、增殖具有抗體產(chǎn)生能力的細胞與骨髓瘤細胞抹的雜交瘤。結果在用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)開始后，生長約14天左右的細胞可以作為雜交瘤被得到。接下來，在進行了增殖的雜交瘤的培養(yǎng)上清液中對是否存在目標抗體進行篩選。雜交瘤的篩選可以按照常規(guī)方法進行，沒有特別限定。例如，采集作為雜交瘤培養(yǎng)的包含在孔中的培養(yǎng)上清的一部分，通過酶免疫測定法(EIA:EnzymeImmunoAssay、及ELISA)、放射免疫測定法(RIA:RadioImmunoAssay)等進行篩選。融合細胞的克隆通過極限稀釋法等進行，從而最終確立產(chǎn)生單克隆抗體的細胞即雜交瘤。本發(fā)明的雜交瘤如后所述，在RPMI-1640、DMEM等基本培養(yǎng)基中的培養(yǎng)穩(wěn)定，并能生產(chǎn)、分泌與靶多肽特異性反應的單克隆抗體。(4)抗體的回收單克隆抗體可以利用常規(guī)技術進行回收。即，作為從確立的雜交瘤中采集單克隆抗體的方法，可以采用通常的細胞培養(yǎng)法或腹水形成法等。采用細胞培養(yǎng)法時，在通常的培養(yǎng)條件(例如，37°C、5%C02濃度)下，在含有10。/。胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基等動物細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)雜交瘤210日，從該培養(yǎng)上清中獲得抗體。采用腹水形成法的情況下，向與提供骨髓瘤細胞的哺乳動物同種系的動物的腹腔內給與約IOOO萬個雜交瘤，使雜交瘤大量增殖。并在12周后采集腹水或血清。對于上述抗體的采集方法，在需要精制抗體的情況下，可以通過適當選擇硫酸銨鹽析法、離子交換色譜法、親和色鐠法、凝膠色譜法等公知的方法，或組合使用上述方法，得到精制的單克隆抗體。<多克隆抗體的制作>制作多克隆抗體時，與上述相同，免疫家兔等動物，從最終免疫日起660天后，利用酶免疫測定法(EIA及ELISA)、放射免疫測定法(RIA)等測定抗體值，在顯示最大抗體值的當天采血，得到抗血清。然后，利用ELISA法等測定抗血清中的多克隆抗體的反應性?！椿瘜W修飾衍生物〉舉出利用酶、熒光團、放射性同位素等標記得到的標記化衍生物，或乙?；?、?；⑼榛?、磷酸化、硫酸化、糖基化衍生物等化學修飾書T生物。作為標記物質，在酶免疫測定法中，可以4吏用過氧化物酶(POD)、堿性磷酸酶、(3-半乳糖苷酶、脲酶、過氧化氫酶、葡萄糖氧化酶、乳酸脫氫酶、淀粉酶或生物素-抗生物素蛋白復合體等酶，熒光免疫測定法中，可以使用異硫氰酸熒光素、四曱基羅丹明異硫氰酸鹽、取代異硫氰酸羅丹明、二氯三嗪異硫氰酸鹽、Alexa或AlexaFluoro等熒光性物質或熒光團，放射免疫測定法中，可以使用氖、硤(1311,1251，1231，1211)、磷(32P)、硫(35S)、金屬類(例如68Ga，67Ga,68Ge，MMn，"Mo，"Tc，^Xe等)等放射性同位素。發(fā)光免疫測定法可以使用NADH-、FMNH2-、焚光素酶類、魯米諾-過氧化氫-POD類、吖啶酯類或二氧雜環(huán)丁烷化合物類等發(fā)光性分子、發(fā)光物質、生物發(fā)光物質。另外，根據(jù)需要，還可以利用抗生物素蛋白-生物素類或鏈霉抗生物素蛋白-生物素類，此種情況下，可以在本發(fā)明的抗體或其片段上結合例如生物素。對于標記物質和抗體的結合法，在酶免疫測定法中，可以使用戊二醛法、馬來酰亞胺法、吡啶基二硫化物或高碘酸法等公知的方法，放射免疫測定法中，可以使用氯胺T法、Bolton-Hunter法等公知的方法。4.食管癌診斷用試劑盒4,1核酸試劑盒本發(fā)明還提供用于體外檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的試劑盒，其中含有上述2中的i組及n組中記載的多核苷酸、上述3.1及3.2中記載的多核苷酸、其變異體及/或其片段中的l種或幾種。本發(fā)明的試劑盒中可以含有以下記載的I組及II組的核酸探針。上述各探針可以單獨或組合收納在適當?shù)娜萜髦小?lt;I組的核酸:^笨針〉根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的試劑盒中含有的I組的核酸探針可以用于檢測、確定或預測食管癌的存在及/或轉移。本發(fā)明的試劑盒可以含有下述多核苷酸中的至少一種，所述多核苷酸為含有序列號146表示的堿基序列的多核苷酸、含有其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核普酸的片段。本發(fā)明的試劑盒可以進一步含有下述多核苷酸中的至少一種，所述多核苷酸為含有序列號47表示的堿基序列的多核普酸、含有其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的片段。本發(fā)明的試劑盒中可以含有的多核苷酸片段例如是選自下述(1)(5)中的1種以上DNA:(1)序列號146、47表示的堿基序列或其互補序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的DNA。(2)序歹'j號l46、47表示的堿基序列或其互補序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的DNA。(3)序列號146、47表示的堿基序列或其互補序列中，分別含有序列號4893、94表示的i烕基序列或其互補序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的DNA。(4)由序列號4893、94表示的堿基序列組成的DNA。(5)含有與序列號4893、94表示的堿基序列互補的堿基序列的DNA。在優(yōu)選的實施方案中，上述多核苷酸是含有由序列號146中任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。在其他優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的試劑盒除含有上述多核苷酸以外，還可以進一步含有由序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。在優(yōu)選的實施方案中，上述片段可以是含有15個以上、優(yōu)選60個以上連續(xù)石咸基的多核苷酸。在其他優(yōu)選的實施方案中，上述片段是序列號146、47中任一個表示的堿基序列中，分別含有序列號4893、94中任一個表示的堿基序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的堿基序列的多核苷酸。在其他優(yōu)選的實施方案中，上述片段是含有序列號4893、94中任一個表示的石成基序列的多核苷酸。在其他優(yōu)選的實施方案中，上述片段是含有與序列號4893、94中任一個表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。在其他優(yōu)選的實施方案中，上述片段是由序列號4893、94中任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸。上述組合的具體例包括含有序列號1及2的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號13的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號14的堿基序列或其互補序列的多核香酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號15的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號16的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號17的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號18的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核普酸、及/或其片段，含有序列號19的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核普酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號110的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或其片段，序列號111的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苦酸雜交的多核苦酸、及/或其片段，含有序列號112的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號113的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苦酸、及/或其片段，含有序列號114的堿基序列或其互補序列的多核苦酸、在嚴格條件下與上述多核苦酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號115的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號116的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核普酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號117的堿基序列或其互補序列的多核苷酸及/或其片段，含有序列號118的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號119的堿基序列或其互補序列的多核苦酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號120的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核普酸雜交的多核普酸、及/或其片段，含有序列號121的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號122的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核普酸、及/或其片段，含有序列號123的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號124的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號125的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號126的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號127的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號128的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號129的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號130的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核普酸、及/或其片段，含有序列號131的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號132的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號133的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號134的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號135的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號136的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號137的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號138的堿基序列或其互補序列的多核苦酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號139的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核普酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號140的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號141的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號143的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號144的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號145的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號146的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號147的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段。根據(jù)其他較優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的試劑盒可以含有下述多核苷酸中的2種以上全部，所述多核苷酸為含有序列號4893、94表示的石咸基序列或其互補序列的多核苷酸。<II組的核酸探針〉根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的試劑盒中含有的II組的核酸探針可以用于檢測、確定或預測食管癌的存在。本發(fā)明的試劑盒可以含有下述多核苷酸中的至少一種，所述多核苦酸為含有序列號142155、157161表示的堿基序列的多核苷酸、含有其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核香酸的片段。本發(fā)明的試劑盒可以進一步含有下述多核苷酸中的至少一種，所述多核苷酸為含有序列號156表示的堿基序列的多核苷酸、含有其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的片段。本發(fā)明的試劑盒中可以含有的多核苷酸片段例如是選自下述(1)(5)中的1種以上DNA:(1)序列號142161表示的石咸基序列或其互補序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的DNA。(2)序列號142161表示的堿基序列或其互補序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的DNA。(3)序列號142161表示的堿基序列或其互補序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核普酸中分別含有序列號162181表示的堿基序列或其互補序列的DNA。(4)由序列號162181表示的堿基序列組成的DNA。(5)含有與序列號162181表示的堿基序列互補的堿基序列的DNA。在優(yōu)選的實施方案中，上述多核苷酸是由序列號142155、157161中任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核普酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段。在其他優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的試劑盒除含有上述多核苦酸以外，還可以進一步含有由序列號156表示的石威基序列組成的多核苦酸、由其互補序列組成的多核苦酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段。在優(yōu)選的實施方案中，上述片段可以是含有15個以上、優(yōu)選60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。在其他的優(yōu)選實施方案中，上述片段是在序列號142161中任一個表示的堿基序列中，于含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號162181中任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的堿基序列的多核苷酸。在其他的優(yōu)選實施方案中，上述片段是含有序列號162181中任一個表示的堿基序列的多核苷酸。在其他的優(yōu)選實施方案中，上述片段是含有與序列號162181中任一個表示的堿基序列互補的堿基序列的多核普酸。在其他的優(yōu)選實施方案中，上述片段是由序列號162181中任一個表示的堿基序列組成的多核普酸。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的試劑盒含有選自下述多核苷酸中的l種或幾種多核苷酸，即含有序列號142155表示的堿基序列的多核苷酸、含有其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段。上述多核香酸沒有限定，例如可以是在序列號142155中任一個表示的堿基序列中，于含有60個以上連續(xù)堿基的多核香酸中分別含有序列號162175中任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的堿基序列的多核苷酸。根據(jù)優(yōu)選的其他實施方案，本發(fā)明的試劑盒含有選自下述多核苷酸中的l種或幾種多核苷酸，即含有序列號157161表示的堿基序列的多核苷酸、含有其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)i咸基的片段。上述多核苷酸沒有限定，例如是在序列號157161中任一個表示的堿基序列中，于含有60個以上連續(xù)堿基的多核普酸中分別含有序列號177181中任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核香酸的序列互補的堿基序列的多核普酸。本發(fā)明的試劑盒可以含有上述多核普酸中的2種以上多核普酸的任意組合。上述組合的具體例為，含有序列號142及143的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苦酸、及/或其片段，含有序列號142~144的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142145的堿基序列或其互補序列的多核苦酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142146的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142147的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142148的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142149的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142150的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苦酸雜交的多核香酸、及/或其片段，含有序列號142151的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、或其片段、序列號142152的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142153的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142154的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142155的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142156的堿基序列或其互補序列的多核普酸及/或其片段，含有序列號142157的堿基序列或其互補序列的多核芬酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142158的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142159的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142160的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列號142161的堿基序列或其互補序列的多核苷酸、在嚴格條件下與上述多核苷酸雜交的多核香酸、及/或其片段。酸。其他組合的具體例是含有序列號162165、167、171、173、174及176的堿基序列或其互補序列的(或、由其組成的)多核苷酸及/或其片段。其他組合的具體例是含有序列號162166、168172及175的石威基序列或其互補序列的(或、由其組成的)多核苷酸及/或其片段。在本發(fā)明中，上述i組、n組的多核苷酸片段的大小是各多核苷酸堿基序列中下述范圍的連續(xù)堿基數(shù)，例如15序列的全部堿基數(shù)、155000個堿基、154500個堿基、154000個i威基、153500個堿基、153000個堿基、152500個堿基、152000個石威基、151500個堿基、151000個堿基、15900個堿基、15800個堿基、15700個堿基、15600個堿基、15500個堿基、15400個堿基、15300個堿基、15250個堿基、15200個堿基、15150個堿基、15140個堿基、15130個堿基、15120個堿基、15110個堿基、15100個堿基、1590個堿基、1580個堿基、1570個堿基、1560個堿基、1550個堿基、1540個堿基、1530個堿基或1525個堿基；25序列的全部堿基數(shù)、251000個堿基、25900個堿基、25800個堿基、25700個堿基、25600個堿基、25500個堿基、25400個堿基、25300個堿基、25250個堿基、25~200個堿基、25150個堿基、25140個堿基、25130個堿基、25120個堿基、25110個堿基、25~100個堿基、25~90個堿基、2580個堿基、2570個堿基、2560個堿基、2550個堿基或2540個堿基；50序列的全部堿基數(shù)、501000個堿基、50900個堿基、50~800個堿基、50700個堿基、50600個堿基、50500個堿基、5(K400個堿基、50~300個堿基、50250個堿基、50200個堿基、50150個堿基、50140個堿基、50130個堿基、50120個堿基、50110個堿基、50100個堿基、5090個堿基、5080個堿基、5070個堿基或5060個堿基；60序列的全部堿基數(shù)、601000個堿基、60900個堿基、60800個堿基、60700個堿基、60600個堿基、60500個堿基、60400個堿基、60300個堿基、60250個堿基、60200個石威基、60150個石威基、60140個石咸基、60130個石威基、60120個堿基、60110個堿基、60100個堿基、6090個堿基、6080個堿基或6070個堿基等。構成本發(fā)明的試劑盒的上述組合只是列舉，其他各種可能的組合都包括在本發(fā)明中。本發(fā)明的試劑盒除了上述說明的本發(fā)明的多核苷酸、其變異體或其片段之外，還可以含有已知能夠檢測食管癌的或將來發(fā)現(xiàn)的多核苷酸。4.2抗體試劑盒本發(fā)明還提供用于體外檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的試劑盒，其中含有上述2中m組中記載的抗體、其片段或其化學修飾衍生物、上述3.3中記載的抗體、其片段或其化學修飾衍生物中的l種或幾種。本發(fā)明的試劑盒中可以含有如下所述的來自m組(k)、(1)及(m)中的抗體、其片段或其化學修飾衍生物探針。上述各探針可以單獨或組合收納在適當?shù)娜萜髦?。探針的組合例如下所示。第l例探針為了檢測作為食管癌轉移標記物的上述AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPI1、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PIXG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IG固、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、N0L1、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因編碼的多肽、其同源物、或其變異體或衍生物而含有l(wèi)種或幾種對上述多肽、其變異體或其片段的抗體。該探針能用于檢測、確定或預測食管癌的存在及/或轉移。特別是轉移的預測可以推導出食管癌患者的術后預后的預測結果。具體而言，試劑盒中含有的探針是與具有序列號95140表示的氨基酸序列的多肽、其變異體、或其片段中的至少l個特異性結合的l種或幾種抗體、該抗體的片段、或其化學修飾衍生物。該試劑盒中可以進一步含有對具有序列號141表示的氨基酸序列的多肽的抗體、該抗體的片段或其化學修飾衍生物。通過并用，能提高轉移的預測或術后預后的預測準確度。第2例探針為了檢測作為食管癌標記物的上述GALNS,fgf3,CAMK2B,CaMKIINalpha,PSARL,XRCC3,CAPG,GRHPR，TROAP,RRM2,SATB2，C14orfl62,SEPT6,M6PR,SPRR3,EMU,YPEL5,EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2基因編碼的多肽、其同源物、或其變異該探針可以用于檢測、確定或預測食管癌的存在。具體而言，試劑盒中含有的探針是與具有序列號182195、197201表示的氨基酸序列的多肽、其變異體、或其片段中的至少l個特異性結合的l種或幾種抗體、該抗體的片段或其化學修飾衍生物。在該試劑盒中可以進一步含有對具有序列號196表示的氨基酸序列的多肽的抗體、該抗體的片段或其化學修飾衍生物。第3例探針是與具有序列號202232表示的氨基酸序列的多肽、其變異體、或其片段中的至少一個特異性結合的l種或幾種抗體、其片段或其化學修飾衍生物。該試劑盒中可以進一步含有對具有序列號233表示的氨基酸序列的多肽的抗體、其片段或它們的化學修飾衍生物。本發(fā)明的試劑盒中含有的抗體可以單獨存在，也可以以混合物的狀態(tài)存在，或與固相載體結合存在，也可以以游離狀態(tài)存在。另外，本發(fā)明的試劑盒可以含有標記二抗、載體、清洗緩沖液、試樣稀釋液、酶基質、反應停止液、精制的作為標準物質的標記物(靶)多肽、使用說明書等。5.DNA芯片本發(fā)明還提供用于體外檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的DNA芯片，所述DNA芯片單獨或組合、優(yōu)選組合使用與上述3及/或4中記載的本發(fā)明的組合物及/或試劑盒中含有的物質相同的多核苷酸、變異體或片段。作為DNA芯片的基板，只要是能夠將DNA固相化的基板即可，沒有特別限定，可以舉出載玻片、硅制芯片、聚合物制芯片及尼龍膜等。另外，可以對上述基板進行聚L賴氨酸涂布或導入氨基、羧基等官能團等的表面處理。另外，固相化法只要是通常使用的方法即可，沒有特別限定，可以舉出以下方法使用被稱為點樣器(spotter)或陣列點樣儀(arrayer)的高密度分液器點樣DNA的方法、或使用通過壓電元件等從噴嘴噴射微量的液滴的裝置(噴墨)將DNA噴射到基板上的方法、或在基板上依次進行核普酸合成的方法。使用高密度分液器時，例如如下進行固相化在具有多個孔的平板的各孔中裝入不同的基因溶液，用針取出該溶液，然后依次點到基板上。使用噴墨法時，如下進行固相化從噴嘴噴射基因，將基因高速地排列在基板上。在基板上合成DNA時，如下進行固相化用能在光的作用下離去的官能團保護與基板結合的堿基，通過使用掩模只對特定部位的堿基曝光，使官能團離去。然后，反復進行向反應液中加入堿基、使其與基板上的堿基偶聯(lián)的步驟。被固相化的多核苷酸是上述說明的本發(fā)明的多核苷酸。例如，上述多核苦酸可以含有以下l種或幾種多核苷酸或其片段。(1)由序列號146、47表示的石威基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(2)含有序列號146、47表示的石咸基序列的多核苷酸組。(3)由序列號146表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(4)含有序列號146表示的堿基序列的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(5)由與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(6)含有與序列號146表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸組。(7)在嚴格條件下與DNA雜交的多核苦酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，所述DNA由與序列號146表示的各堿基序列互補的i咸基序列組成。(8)在嚴格條件下與由序列號146表示的各堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(9)由序列號47表示的堿基序列組成的多核普酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(10)含有序列號47表示的堿基序列的多核苷酸、其變異體、或其含有15以上連續(xù)堿基的片段。(11)由與序列號47表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(12)含有與序列號47表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸組。(13)在嚴格條件下與DNA雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，上述DNA由與序列號47表示的堿基序列互補的堿基序列組成。(14)在嚴格條件下與由序列號47表示的堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(15)序列號146表示的堿基序列或其互補序列的各序列中含有15個以上連續(xù)堿基的多核普酸。(16)序列號146表示的堿基序列或其互補序列的各序列中含有60個以上連續(xù)堿基的多核苦酸。(17)序列號47表示的堿基序列或其互補序列中，含有15個以上連續(xù)石咸基的多核苷酸。(18)序列號47表示的堿基序列或其互補序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(19)序列號146表示的堿基序列中，分別含有序列號4893表示的堿基序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(20)與序列號146表示的堿基序列互補的序列中，分別含有與序列號4893表示的堿基序列互補的序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(21)序列號47表示的堿基序列中，分別含有序列號94表示的堿基序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(22)與序列號47表示的堿基序列互補的序列中，分別含有與序列號94表示的堿基序列互補的序列、且含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的DNA芯片可以含有2種以上全部的含有序列號4894表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。在其他例子中，能夠與DNA芯片結合的多核普酸可以含有以下的l種或幾種多核苷酸或其片段。(1)由序列號142161表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(2)含有序列號142161表示的石咸基序列的多核苷酸組。(3)由序列號142155表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(4)含有序列號142155表示的堿基序列的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(5)由與序列號142155表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(6)含有與序列號142155表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸組。(7)在嚴格條件下與DNA雜交的多核香酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，所述DNA由與序列號142155表示的各堿基序列互補的;威基序列組成。(8)在嚴格條件下與由序列號142155表示的各堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(9)由序列號157161表示的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(10)含有序列號157161表示的堿基序列的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(11)由與序列號157161表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸組、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(12)含有與序列號157161表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸組。(13)在嚴格條件下與DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，所述DNA由與序列號157161表示的各堿基序列互補的堿基序列組成。(14)在嚴格條件下與由序列號157161表示的各堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸組、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(15)序列號142155表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的多核苦酸。(16)序列號142155表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(17)序列號157161表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(18)序列號157161表示的堿基序列或其互補序列的各序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。(19)序列號142155表示的堿基序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號162175表示的堿基序列的多核苷酸。(20)與序列號142155表示的堿基序列互補的序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有與序列號162175表示的堿基序列互補的序列的多核苷酸。(21)序列號157161表示的堿基序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號177181表示的i咸基序列的多核苷酸,(22)與序列號157161表示的堿基序列互補的序列中，含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有與序列號177181表示的堿基序列互補的序列的多核苷酸。(23)由序列號156表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(24)含有序列號156表示的堿基序列的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(25)由與序列號156表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。普酸。(27)在嚴格條件下與DNA雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，所述DNA由與序列號156表示的堿基序列互補的堿基序列組成。(28)在嚴格條件下與由序列號156表示的堿基序列組成的DNA雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。(29)序列號156表示的堿基序列或其互補序列中含有15個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。連續(xù)堿基的多核苷酸。(31)序列號156表示的堿基序列中，于含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中含有序列號176表示的堿基序列的多核苷酸。(32)與序列號156表示的堿基序列互補的序列中，于含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中含有與序列號176表示的堿基序列互補的序列的多核普酸。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的DNA芯片可以含有2種以上全部的含有序列號162181表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。本發(fā)明中，被固相化的多核苷酸可以是基因組DNA、cDNA、RNA(例如mRNA、cRNA、aRNA)、合成DNA、合成RNA中的任一種，可以為單鏈或雙鏈。作為能夠檢測、測定靶基因、RNA或cDNA的表達水平的DNA芯片的例子，可以舉出Affymetrix7>司的GeneChipHumanGenomeUl33Plus2.0Array、Agilent/^"司的Wholehumangenomeoligomicroarray、TakaraBi(K^司的IntelliGene(R)HSHumanExpressionCHIP、具有凹凸結構的聚甲基丙烯酸曱酯制DNA芯片基板(日本特開2004-264289)等。DNA微陣列的制作例如可以使用在固相表面固定預先制備的探針的方法。在固相表面固定預先制備的多核苷酸探針的方法如下合成導入了官能團的多核苷酸，在經(jīng)過表面處理的固相載體表面上點樣寡核苷酸或多核苷酸，使其共價鍵合(例如、丄B丄amture等、Nucleic.Acids.Research、1994年，第22巻，p.2121—2125、Z.Guo等、Nucleic.Acids.Research、1994年，第22巻，p.5456-5465)。多核普酸通常通過間隔臂(spacer)或交3f關劑(crosslinker)與經(jīng)過表面處理的固相載體共價鍵合。還已知使聚丙烯酰胺凝膠的微d、片排列在玻璃表面上，使合成多核苷酸與其共價鍵合的方法(G.Yershov等、ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.、1996年，第94巻，p.4913)。還已知下述方法在二氧化硅微陣列上制作微小電極的陣列，在電極上設置含有鏈霉抗生物素蛋白的瓊脂糖的滲透層，形成反應部位，通過使該部位帶正電，固定生物素化多核苷酸，通過控制部位的電荷，能高速且嚴格地進行雜交(R.G.Sosnowski等、ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.、1997年,第94巻，p.l119-1123)。6.4全測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法
技術領域：
：本發(fā)明提供體外檢觀'J、確定或預測食管癌的存在及/或轉移的方法，該方法包括使用選自上述定義的i組、n組及/或in組中的i種或幾種探針、或本發(fā)明的組合物、試劑盒、DNA芯片或其組合，測定來自受試者的生物試樣中的l種或幾種食管癌相關靶核酸的存在或存在量或表達量。上述I組的多核苷酸、以及III組(k)的抗體、其片段或其化學修飾衍生物可以用于檢測、確定或預測食管癌的存在及/或轉移。上述n組的多核苷酸、及in組(i)、(m)的抗體、其片段或其化學修飾衍生物可以用于檢測、確定或預測食管癌的存在。在本發(fā)明的方法中，食管癌的存在或轉移的檢測、確定或預測可以以相對對照試才羊的變化為指標進4亍確定。例如，體外判斷來自受試者的生物試樣中是否含有食管癌細胞或轉移性食管癌細胞時，如果相對于正?；蚍前┦彻芙M織或來自術后未發(fā)生轉移的患者的食管癌組織，生物試樣中的細胞的靶核酸的表達量發(fā)生變化(即，增加或降低)，則可以判斷生物試樣中存在食管癌細胞或轉移性食管癌細胞。本發(fā)明還提供選自上述定義的i組、n組及/或m組中的i種或幾種探針、或本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片在體外檢測、確定或預測來自受試者的生物試樣中的食管癌的存在或轉移中的使用方法。在本發(fā)明的食管癌的存在或轉移的檢測、確定、預測或(基因)診斷中，本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片中含有的由多核苷酸、其變異體或其片段組成的食管癌診斷用探針可以作為引物或檢測探針(探測頭)使用。用作引物時，可以舉出堿基長度通常為1550個堿基、優(yōu)選為1530個堿基、較優(yōu)選為1825個堿基的探針。用作檢測探針時，例如可以舉出堿基長度為15個堿基全部序列的堿基數(shù)、優(yōu)選為251000個堿基、較優(yōu)選為25100個堿基的探針，但并不限定于此。本發(fā)明的組合物或試劑盒中含有的多核苷酸、其變異體或其片段在RNA印跡法(NorthernBlot)、DNA印跡法(Southernblot)、RT-PCR法、原位雜交法、DNA雜交法等特異性地檢測特定基因的公知方法中，可以根據(jù)標準方法用作引物或探針。作為測定對象試樣，根據(jù)所用的檢測方法的種類，可以通過活組織檢測等采集受試者的食管組織或被懷疑存在食管癌細胞的生物組織的一部分或全部，或者從手術取出的生物組織中回收。還可以使用按照常規(guī)方法由其制備的總RNA,還可以使用基于該RNA制備的含有cDNA、聚A(+)RNA的各種多核苷酸?；蛘?，可以使用DNA芯片(包括DNA宏陣列(macroarray))檢測或定量生物組織中的本發(fā)明的基因、RNA、cDNA等核酸的表達量。此種情況下，本發(fā)明的組合物或試劑盒可以用作DNA陣列的探針(例如，在Affymetrix乂/^司的HumanGenomeU133Plus2.0Array中，使用長度為25個堿基的多核苷酸探針)。使上述DNA陣列與以從生物組織采集的RNA為基礎制備的標記DNA或RNA雜交，以該標記DNA或RNA的標記為指標，檢測通過該雜交形成的上述探針和標記DNA或RNA的復合體，由此能評價生物組織中的食管癌相關基因或食管癌轉移相關基因是否表達或表達水平(表達量)。本發(fā)明方法中優(yōu)選使用DNA芯片，該DNA芯片能對一個生物試樣同時評價多個基因是否表達或表達水平。本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片對于食管癌的存在或轉移的診斷、即檢測、確定或預測(例如，是否患病或患病程度的診斷)是有用的。使用該組合物、試劑盒或DNA芯片診斷食管癌的存在或轉移，具體可以如下進行將受試者的存在食管癌細胞的生物組織與來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織及/或來自手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的食管癌組織進行比較，或與來自手術時未發(fā)生淋巴結轉移的患者及/或手術時發(fā)生淋巴結轉移的患者的生物組織進行比較，判斷用該診斷用組合物檢測的基因的表達水平的不同(或、差異)。此時，基因表達水平的不同不僅僅表示有無表達，還包括以下情形存在食管癌細胞的生物組織和正常組織兩者、或存在轉移性食管癌細胞的生物組織和存在非轉移性食管癌細胞的生物組織兩者都表達時，比較兩者間的表達量，其差值有統(tǒng)計學意義(p值〈0.05)。例如，由于SPRR3基因的表達在食管癌中誘導/減少，所以，在受試者的食管癌組織中表達/減少，將該表達量與正常組織的表達量相比較進行;險測時，如果差異顯著，則懷疑受試者患有食管癌。另外，例如，由于HPGD基因的表達在轉移性食管癌患者中誘導/減少，所以，當HPGD基因在受試者的食管癌組織中表達/減少，將該表達量與存在非轉移性食管癌細胞的生物組織的表達量相比較進行檢測時，如果差異顯著，則懷疑受試者的食管癌發(fā)生轉移。利用本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片檢測食管癌(纟田月包)或轉移性食管癌(細胞)的方法如下通過活組織檢測等采集或從手術取出的生物組織中回收受試者的生物組織的一部分或全部，使用選自本發(fā)明的多核苷酸探針組中的1種或幾種多核苷酸、其變異體或其片段檢測上述生物組織中含有的基因，測定該基因的表達量，由此診斷是否患有食管癌或患病程度、或食管癌是否轉移或轉移程度。本發(fā)明的食管癌或食管癌轉移的檢測方法還可以在例如對食管癌患者給與用于改善該疾病的治療藥時，一全測、確定或預測該疾病是否改善或改善程度。本發(fā)明方法例如可以包括以下(a)、(b)及(c)步驟(a)使來自受試者的生物試樣與本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片的多核香酸接觸的步驟，(b)使用上述多核苷酸作為探針測定生物試樣中的靶核酸的表達水平的步驟、(c)基于(b)的結果，判斷該生物試樣中是否存在食管癌(細胞)或轉移性食管癌(纟田月包)的步驟。作為本發(fā)明方法中使用的生物試樣，可以舉出由受試者的生物組織例如食管組織及其周圍組織、懷疑發(fā)生食管癌轉移的組織等制備的試樣。具體而言，含有由該組織制備的RNA的試樣、或含有由該組織制備的多核苷酸的試樣可以如下制備，即，通過活組織檢測等采集或從通過手術取出的生物組織中回收受試者的生物組織的一部分或全部，然后按照常規(guī)方法進行制備。此處的受試者是指哺乳動物，例如人、猴子、小鼠、大鼠等，并無限定，優(yōu)選為人。本發(fā)明的方法，可以根據(jù)用作測定對象的生物試樣的種類變更步驟。例如，使用RNA作為測定對象物時，食管癌(細胞)或轉移性食管癌(纟田月包)的檢測可以包括例如下述步驟(a)、(b)及(c):(a)使由受試者的生物試樣制備的RNA或由該RNA轉錄的互補多核苷酸(cDNA)與本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片的多核苷酸結合的步驟，(b)使用上述多核苷酸作為探針，測定與該多核苷酸結合的來自生物試樣的RNA或由該RNA轉錄的互補多核苷酸的步驟，(c)基于上述(b)的測定結果，判斷是否存在食管癌(纟田胞)或轉移性食管癌(纟田胞)的步驟。為了利用本發(fā)明檢測、確定或診斷食管癌(細胞)或轉移性食管癌(細胞)，例如可以使用各種雜交法。所述雜交法，例如可以使用RNA印跡法、DNA印跡法、RT-PCR法、DNA芯片解析法、原位雜交法、DNA雜交法等。使用RNA印跡法時，通過使用本發(fā)明的組合物作為探針，可以才全測、測定RNA中的各基因是否表達或其表達水平。具體可以舉出以下方法用放射性同位素(32P、33P、"S等)或熒光物質等標記本發(fā)明的診斷用組合物(互補鏈)，使其與利用常規(guī)方法轉移到尼龍膜等上的來自受試者的生物組織的RNA雜交，然后用放射線;險測器(可以舉出BAS-1800IIFujiPhotoFilm抹式會社等)或焚光檢測器(例如STORM860,AmershamBioscience公司等)檢測、測定形成的診斷用組合物(DNA)和RNA的雙鏈中的來自診斷用組合物的標記物(放射性同位素或熒光物質)的信號。使用定量RT-PCR法時，通過使用本發(fā)明的上述診斷用組合物作為引物，可以檢測、測定RNA中的基因是否表達或其表達水平。具體可以舉出以下方法按照常規(guī)方法由來自受試者的生物組織的RNA制備cDNA,為了能以該cDNA為模板擴增各靶基因區(qū)域，使由本發(fā)明的組合物制備的l對引物(由與上述cDNA結合的正鏈和反鏈組成)與cDNA雜交，按照常規(guī)方法進行PCR法，檢測得到的雙鏈DNA。作為雙鏈DNA的檢測方法，可以采用以下方法使用預先用放射性同位素或熒光物質標記的引物進行上述PCR的方法；用瓊脂糖凝膠電泳PCR產(chǎn)物，用溴乙錠等染色雙鏈DNA進行檢測的方法；將產(chǎn)生的雙鏈DNA按照常規(guī)方法轉移到尼龍膜等上，作為探針與標記的診斷用組合物雜交，進行檢測的方法。使用DNA陣列解析時，使用將本發(fā)明的上述診斷用組合物作為DNA探針(單鏈或雙鏈)貼合到基板上制成的DNA芯片。將基因組在基板上固相化得到的物質通常稱為DNA芯片及DNA陣列，DNA陣列包括DNA宏陣列和DNA微陣列，本說明書中稱為DNA芯片時，即為含有該DNA陣列的物質。雜交條件沒有限定，例如，包括在30。C50。C下，在34xSSC、0.10.5。/。SDS中雜交124小時，較優(yōu)選在40。C45。C下，在3.4xSSC、0.3。/。SDS中雜交124小時，然后進行清洗。作為清洗條件，例如可以舉出利用含有2xSSC和0.1y。SDS的溶液、及l(fā)xSSC溶液、0.2xSSC溶液在室溫下連續(xù)清洗等的條件。此處，lxSSC是含有150mM氯化鈉及15mM檸檬酸鈉的水溶液(pH7.2)?；パa鏈優(yōu)選為即使在上述條件下進行清洗仍能保持與作為對象的正鏈雜交的狀態(tài)的鏈。作為上述互補鏈，具體可以舉出由與作為對象的正鏈的堿基序列具有完全互補關系的堿基序列組成的鏈、以及由與該鏈具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%同源性的堿基序列組成的鏈。作為以來自本發(fā)明的組合物或試劑盒的多核苷酸片段為引物進行PCR時的嚴格的雜交條件的例子，例如可以舉出使用組成為1OmMTris-HCL(pH8.3)、50mMKCL、12mMMgCl2等的PCR緩沖液，在由該引物序列計算的Tm+510。C下處理15秒l分鐘左右等。作為上述Tm的計算方法，可以舉出Tm-2x(腺。票呤殘基數(shù)+胸腺嘧。定殘基數(shù))+4x(鳥。票呤殘基數(shù)+胞嘧啶殘基數(shù))等。上述雜交的"嚴格條件"的其它例子，記載于例如Sambrook,J.&Russel,D.著，MolecularCloning,ALABORATORYMANUAL、ColdSpringHarborLaboratoryPress、2001年1月15日出版，第1巻7.427.45，第2巻8.98.17等中，可以在本發(fā)明中使用。本發(fā)明還提供判斷生物試樣不含及/或含有食管癌細胞或轉移性食管癌細胞的方法，該方法使用上述i組、n組及/或m組中的i種或幾種探針、或本發(fā)明的組合物、試劑盒、DNA芯片或他們的組合，測定來自受試者的生物試樣中的靶核酸或基因的表達量，以支持向量機(SVM,supportvectormachine)作為辨另'J式進行判斷，所述支持向量機(SVM)以食管癌組織和正常組織、或轉移性食管癌組織和非轉移性食管癌組織的基因表達量作為訓練樣本。即，本發(fā)明還提供檢測、確定或預測食管癌的轉移的方法，該方法包括以下步驟第l步驟，使用選自上述定義的I組中的探針、或含有該探針的本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片，體外測定多個生物試樣中的食管癌相關靶核酸的表達量，所述生物試樣是已知含有伴有轉移的食管癌細胞或不伴有轉移的食管癌細胞的組織；第2步驟，以該第1步驟得到的該靶核酸的表達量的測定值為訓練樣本，制作辨別式(支持向量機)；第3步驟，與第l步驟相同地體外測定來自受試者的食管的生物試樣中的該靶核酸的表達量；第4步驟，將第3步驟中得到的該靶核酸的表達量的測定值代入該第2步驟中得到的辨別式，基于由該辨別式得到的結果，判斷生物試樣中不含有伴有轉移的癌細胞及/或含有不伴有轉移的癌細胞。本發(fā)明還提供檢測食管癌的方法，該方法包括以下步驟第l步驟，使用選自上述定義的n組中的探針、或含有該探針的本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片，體外測定多個生物試樣中的靶核酸的表達量，所述生物試樣是已知含有食管癌細胞的組織或正常組織；第2步驟，以該第1步驟得到的該耙核酸的表達量的測定值作為訓練樣本，制作辨別式(支持向量機)；第3步驟，與第l步驟相同地體外測定來自受試者的食管的生物試樣中的該靶核酸的表達量；第4步驟，將第3步驟中得到的該靶乙酸的表達量的測定值代入該第2步驟中得到的辨別式，基于由該辨別式得到的結果，判斷生物試樣中含有癌細胞或不含有癌細胞。或者，本發(fā)明的方法可以包含例如下述步驟(a)、(b)及(c):(a)步驟使用本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片測定已知是含有食管癌細胞的組織或正常組織的生物試樣、或已知是來自伴有轉移的患者的含有食管癌細胞的組織或來自無轉移的患者的食管癌細胞組織的生物試樣中的輩巴基因的表達量；(b)步驟將(a)中測定的表達量的測定值代入下述等式1等式5的式中，制作稱為SVM的辨別式；(c)步驟使用本發(fā)明的組合物、試劑盒或DNA芯片測定來自受試者的生物試樣中的該靶基因的表達量，并將其代入(b)中制作的辨別式，基于得到的結果，判斷該生物試樣中是否含有食管癌細胞或轉移性食管癌細胞。SVM是為了解決二級分類問題而制作的，是1995年由AT&T的V.Vapnik(TheNatureofStatisticalLeaningTheory、Springer、1995年出版)基于統(tǒng)計學習理論的框架提出的學習機。SVM是一種線性辨識器，但通過組合后述的核函數(shù)(Kernel),能夠解決非線性問題。針對不同級別的訓練樣本，在辨識上述訓練樣本的多個超平面中，將該超平面與訓練樣本的最小距離變得最大的超平面作為辨識面，由此能最準確地辨識新給與的試樣屬于哪一個級別。SVM只能解決線性問題，但作為用于解決本質上為非線性問題的方法，已知將特征向量非線性地轉換成高維，在該高維空間內進行線性辨識的方法。使用該方法，與在原空間使用非線性模型等效。但進行向高維轉換的繪圖需要龐大的計算量，歸納能力也降低。SVM中，辨識函數(shù)僅依賴輸入圖案的內積，如果能計算內積，則能構建最優(yōu)辨識函數(shù)。非線性地繪制的空間中的二個要素的內積僅由各自原來的空間的輸入表示的式子稱為核函數(shù)，一邊在高維空間中繪制，一邊避免在實際繪制的空間中的特征的計算，僅由核函數(shù)的計算構建最優(yōu)辨識函數(shù)，即辨別式(例如，麻生英樹等著、統(tǒng)計科學的前沿6"圖案識別與學習的統(tǒng)計學新概念和方法"、巖波書店、東京、日本(2004年))。本發(fā)明的方法中可以使用的辨別式的計算例如下所示。為了確定SVM,可以以生物試樣中的靶基因的表達量作為訓練樣本，按照以下步驟確定辨識函數(shù)的常數(shù)，所述生物試樣是已知含有食管癌細胞的組織或正常組織。訓練樣本Xj屬于被分類為(+1、-1)的含有食管癌細胞的組織組或正常組織組中的任一組?？梢杂贸矫婢€性分離上述訓練樣本時，辨識函^:例如為下式。[等式l](此《'，w表示加權系數(shù)、b表示非線性常數(shù)(biasconstant)、x表示樣本變數(shù)。)但是，該函數(shù)存在限制條件[等式2]_>',(vi.'7+6)》1-《,《20,/=1，...，"(此處，T表示內積、y表示樣本的類別、；表示松弛變量。)所以，通過〗吏用拍4各朗日(Lagurange)未定乘子法，可以回歸到使用了拉格朗日乘子a的下述最優(yōu)化問題。[等式3][等式4](此處，C表示通過實驗確定的限制條件參數(shù)。)此處，如果解決了該問題，則能夠最終得到下式，[等式5]從而能毫無疑義地得到辨識函數(shù)。通過將新的生物試樣(不知道是否含有食管癌細胞的組織的表達基因量)的x代入該函數(shù)，能夠分類f(X)(即+l或-l)，從而判斷生物試樣屬于哪一類(即含有食管癌細胞的組織組或正常組織、或來自發(fā)生轉移的患者的含有食管癌細胞的組織組或來自沒有發(fā)生轉移的患者的食管癌組織)。如上所示，為了制作用于進行未知試樣分類的SVM判定式，必需有二組訓練樣本。在本發(fā)明的情況下，該訓練樣本例如是以下二組，即，與"從發(fā)生轉移的食管癌患者的食管癌組織獲得的表達基因(基因&，X2，...Xn)"的各患者對應的組、以及與"從沒有發(fā)生轉移的食管癌患者的食管癌組織獲得的表達基因(基因XpX2,..Xi,...Xn)，，的各患者對應的組。對上述各組分別測定的表達基因數(shù)(n)因實驗設計的不同而各種各樣，但對于各基因，無論在哪一個實驗中，在二組間都可以觀察到存在明顯差別的情況和差別比較小或無差別的情況。為了提高SVM辨別式的精度，要求作為訓練樣本的二組樣本之間存在顯著差異，所以，必須從基因組中僅提取在二組間表達量存在差別的基因加以利用。作為提取表達量在二組間存在差別的基因的方法，可以利用作為檢測平均值的差的參數(shù)解析的t-檢驗、作為非參數(shù)解析的Mann-Whitney的U檢驗等。在本發(fā)明的方法中，例如，使用上述記載的基于序列號146、47的l種或幾種上述多核苷酸、及/或上述記載的基于146、47的1種或幾種多核苷酸的任意組合，且上述47種靶基因的表達量在來自發(fā)生轉移的患者的食管癌組織和來自沒有發(fā)生轉移的患者的食管癌組織之間都顯著不同，以在來自發(fā)生轉移的患者的食管癌組織中表達增加/減少為指標，通過測定上述47種基因的表達量，能以70%以上、80%以上、優(yōu)選84%以上、較優(yōu)選85%以上、進一步優(yōu)選86%以上的概率區(qū)分食管癌的轉移(圖l)。另夕卜，例如，使用上述記載的基于序列號142156及162176的一種或幾種上述多核苷酸、及/或上述記載的基于序列號157161及177181的一種或幾種多核苷酸的任意組合，且上述20種靶基因的表達量在食管癌組織和非癌組織之間都存在顯著差異，以在食管癌組織中表達減少為指標，測定上述20種基因的表達量，由此能夠以89%以上、90%以上、優(yōu)選92%以上、|交優(yōu)選93%以上、進一步優(yōu)選94%以上的概率區(qū)分食管癌組織(圖4)。本發(fā)明還提供檢測、確定或預測食管癌的轉移的方法，該方法使用對下述多肽的一種或幾種抗體或該抗體的片段，體外測定該多肽在來自發(fā)生轉移的患者的食管癌組織和來自沒有發(fā)生轉移的患者的食管癌組織中的表達量、或該多肽在血液中的水平(或存在量)，所述多肽是由上述47種基因(例如相當于序列號147)或其片段(例如，相當于序列號4894)編碼的多肽、例如由序列號95141表示的氨基酸序列組成的多肽。本發(fā)明還提供檢測、確定或預測食管癌的方法，該方法使用對下述多肽的一種或幾種抗體或該抗體的片^史，體外測定該多肽在食管癌組織和非癌組織中的表達量、或該多肽在血液中的水平(或存在量)，所述多肽是由上述20種基因(例如，相當于序列號142161)或其片段(例如，相當于序列號162181)編碼的多肽、例如由序列號182201表示的氨基酸序列組成的多肽。具體而言，上述測定可以通過免疫學方法進4亍。作為免疫學測定方法，例如可以舉出酶免疫測定法(ELISA、EIA)、熒光免疫測定法、》文射免疫測定法(RIA)、發(fā)光免疫測定法、免疫比濁法、乳膠凝集反應、乳膠比濁法、紅細胞凝集反應、粒子凝集反應或蛋白質印跡法。上述方法通過使用了標記的免疫測定法進行時，可以在將本發(fā)明的抗體、或試樣中的成分固相化后，進行其免疫學反應。作為固相載體，可以使用由聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚乙烯基甲苯、聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、尼龍、聚曱基丙烯酸酯、乳膠、明膠、瓊脂糖、纖維素、瓊脂糖凝膠、玻璃、金屬、陶瓷或磁性體等材料組成的微珠、微量培養(yǎng)板、試管、棒(stick)或試驗片等形狀的不溶性載體?？梢酝ㄟ^物理吸附法、化學結合法或并用兩種方法等公知的方法，使固相載體和本發(fā)明的抗體或試樣成分結合，進行固相化。本發(fā)明中，為了容易地檢測本發(fā)明的抗體與試樣中的靶多肽的反應，通過標記本發(fā)明的抗體直4如險測該反應，或通過4吏用標記二抗間接檢測該反應。本發(fā)明的檢測方法，從靈敏度方面考慮，優(yōu)選使用后者的間接檢測(例如，夾心法等)。作為標記物質，使用酶免疫測定法時，可以^使用過氧化物酶(POD)、堿性磷酸酶、P-半乳糖苷酶、脲酶、過氧化氫酶、葡萄糖氧化酶、乳酸脫氫酶、淀粉酶或生物素-抗生物素蛋白復合體等酶；使用熒光免疫測定法時，可以使用異硫氰酸熒光素、四曱基羅丹明異硫氰酸鹽、取代異硫氰酸羅丹明、二氯三嗪異硫氰酸鹽、Alexa或AlexaFluoro等熒光性物質或焚光團；使用放射免疫測定法時，可以使用氚、碘(1311,1251,1231，1211)、磷(32P)、硫(35S)、金屬類(例如"Ga，67Ga，68Ge，54Mn,99Mo,"Tc,'"Xe等)等放射性同位素。另外，使用發(fā)光免疫測定法時，可以使用NADH-、FMNH2-、熒光素酶類、魯米諾-過氧化氫-POD類、吖啶酯類或二氧雜環(huán)丁烷化合物類等發(fā)光性分子、發(fā)光物質、生物發(fā)光物質。另外，根據(jù)需要，也可以使用抗生物素蛋白-生物素類或鏈霉抗生物素蛋白-生物素類，此種情況下，例如生物素也可與本發(fā)明的抗體或其片段結合。作為標記物質和抗體的結合方法，在使用酶免疫測定法時，可以使用戊二醛法、馬來酰亞胺法、吡啶基二硫化物法或高碘酸法等公知方法；在4吏用力文射免疫測定法時，可以^吏用氯胺T法、Bolton-Hunter法等/>知方法。測定4喿作方法可以通過^>知的方法(CurrentprotocolsinProteinSciences、1995年,JohnWiley&SonsInc.、CurrentprotocolsinImmunology、2001年，JohnWiley&SonsInc.)進4亍。侈寸^口，直才妾才示i己本發(fā)明的抗體時，將試樣中的成分固相化，使其與標記的本發(fā)明的抗體接觸，形成標記多肽和本發(fā)明的抗體的復合體。然后將未結合的標記抗體洗滌分離，可以由結合標記抗體量或未結合標記抗體量測定試樣中的靶多肽的量。另外，使用例如標記二抗時，使本發(fā)明的抗體與試樣反應(一次反應)，再與標i己二抗反應(二次反應)。一次反應和二次反應可以以相反的順序進行，也可以同時進行，還可以錯開時間進行。通過一次反應及二次反應，形成固相化的靶多肽-本發(fā)明的抗體-標記二抗的復合體、或固相化的本發(fā)明的抗體-靶多肽-標記二抗的復合體。然后洗滌分離未結合的標記二抗，可以通過結合標記二抗量或未結合標記二抗量測定試樣中的靶多肽的量。具體而言，使用酶免疫測定法時，在標記酶的最適條件下使其與基質反應，通過光學方法等測定反應生成物的量。使用焚光免疫測定法時，測定由熒光物質標記產(chǎn)生的熒光強度，使用放射免疫測定法時，測定由放射性物質標記產(chǎn)生的放射能量。使用發(fā)光免疫測定法時，測定由發(fā)光反應體系產(chǎn)生的發(fā)光量。本發(fā)明的方法中，通過采用光學方法測定或者肉眼觀測其透射光或散射光的測定方法來測定免疫比濁法、乳膠凝聚反應、乳膠比濁法、紅細胞凝集反應或粒子凝集反應等中免疫復合體凝集物的生成，此時，作為溶劑可以使用磷酸緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液或Good，s緩沖液等，還可以在反應體系中含有聚乙二醇等反應促進劑或非特異性反應抑制劑。上述抗體或片段例如包括多克隆抗體、單克隆抗體、合成抗體、重組抗體、多特異性抗體(包括二重特異性抗體)、單鏈抗體、Fab片段、F(ab，)2片段等。多克隆抗體可以通過與結合有精制多肽的親和'性柱結合的所謂吸附法，作為特異性抗體進行制備。測定方法可以包括以下步驟使被慣用的酶或熒光團標記的抗體或片段與組織切片或均質化的組織接觸的步驟、定性或定量測定抗原-抗體復合體的步驟?？梢酝ㄟ^以下方法進行檢測例如，利用免疫電子顯微鏡測定靶多肽的存在和水平的方法、利用ELISA或熒光抗體法等慣用方法測定靶多肽的水平的方法等，與來自沒有發(fā)生轉移的患者的食管癌組織相比，來自發(fā)生轉移的患者的食管癌組織中的靶多肽的表達量增加或降低(或減少)時，或發(fā)生轉移的食管癌患者與沒有發(fā)生轉移的食管癌患者相比，該多肽在血液中的水平顯著增加或降低時，判斷食管癌發(fā)生轉移。換言之，與來自沒有發(fā)生轉移的患者的值相比，上述多肽的表達量或水平顯著增加或降低時，可以判斷食管癌發(fā)生轉移?；蛘?，根據(jù)上述方法，與非癌組織相比，食管癌組織中的靶多肽的表達量減少時，或患有食管癌的受試者與健康的受試者相比，該多肽在血液中的水平顯著降低時，可以判斷發(fā)生食管癌。換言之，上述多肽的表達量或水平與正常值比較，顯著降低時，可以確定發(fā)生食管癌。此處，顯著是指有統(tǒng)計學意義。利用以下實施例進一步詳細說明本發(fā)明。但本發(fā)明的范圍并不限定于列舉的實施例。實施例<實施例l〉1.實驗者的臨床病理學觀察從取得知情同意的進行食管癌摘除手術或食管活檢的119名食管癌患者獲得食管的摘除組織。對摘除的組織片進行肉眼及/或病理組織學觀察，判斷食管癌組織，區(qū)分食管癌病變部和正常組織部后，立即凍結，保存在液氮中。另外，采集周圍所含的淋巴結，病理學診斷食管癌細胞是否轉移。2.總RNA的提取和cDNA的制備作為試樣，使用食管癌患者的食管組織中的食管癌病變部組織。使用Trizol試劑(Invitrogen公司)，按照該公司推薦的操作手冊，由各組織制備總RNA。并用寡聚(dT)引物及隨機九聚物，使用CyScribeFirst-StrandcDNALabelingKit(GEHealthcare公司)，按照制造商推薦的操作手冊，對由上述方法得到的總RNAl[ig進行逆轉錄反應。在來自食管癌組織的總RNA中添加Cy3-dUTP(GEHealthcare公司)，在參考總RNA(Stratagene公司)中添力口Cy5—dUTP(GEHealthcare公司)，按照制造商推薦的操作手冊，在逆轉錄反應時進行cDNA的標記。被標記的cDNA用QIAquickPCRpurificationKit(QIAGEN公司)精制后用于雜交。3.寡DNA微陣列的制作作為寡DNA微陣列，使用根據(jù)Affymetrix公司GeneChip(HumanGenomeU133A)及本說明書中記載的方法制作的DNA芯片。DNA芯片的制作方法如下所示。為了確定最初載帶的寡DNA的種類，使用Affymetrix公司GeneChip，進行基因的插入。GeneChip的操作基于CompleteGeneChipInstrumentSystem等該公司規(guī)定的順序進行。使用CompleteGeneChipTM的解析結果是提取得到有可能因食管癌導致表達變動的基因及可以作為實驗對照的基因，共計8961種。對于提取的8961種基因，為了不引起序列的重復，分別選擇序列特異性高的部位的序列60-70個殘基進行合成。在MATSUNAMIDNA微陣列用涂層玻璃的耐DMSO的TypeI氨基修飾寡DNA固定涂層(松浪硝子工業(yè)抹式會社)上，使用點樣儀(spotter)(GMS417arrayer,Affymetrix公司)，在50-60。/q濕度環(huán)境中點樣合成寡DNA,所述合成寡DNA溶解在稀釋至4倍的溶液I(TakaraBio公司)中，濃度為30!iM，含有序列號21-40的寡DNA、并由8961種的60或70mer組成。4.雜交在反意寡聚混合物(cocktail)(QIAGEN)中溶解l嗎標記的cDNA,將得到的溶液排列到載有被覆Gap的玻璃(松浪硝子工業(yè))的DNA芯片上，在42。C下雜交16小時。雜交結束后，依次用2xSSC/0.1%SDS、lxSSC、0.2xSSC清洗DNA芯片。5.基因表達量的測定使用Agilent微陣列掃描儀(Agilent公司)掃描利用上述方法進行雜交的DNA芯片，獲得圖像，將熒光強度轉變?yōu)閿?shù)值。參考SpeedT.著"Statisticalanalysisofgeneexpressionmicroarraydata，，Chapman&Hall/CRC、及CaustonH.C.等著"Abeginner'sguideMicroarraygeneexpressiondataanalysis"Blackwellpublishing進4亍統(tǒng)計學處理。即,將從雜交后的圖像解析得到的數(shù)據(jù)分別取對數(shù)值，進行整體最佳化(globalnomalization)，并根據(jù)LOWESS(局部加權回歸散點修勻法(locallyweightedscatterplotsmoother))進行平滑化,通過MAD縮放處理，進行歸一化校正(normalizationcorrection)。結果能夠找到在發(fā)生轉移的食管癌病變部的表達量比沒有發(fā)生轉移的食管癌病變部多/少的基因?？梢钥紤]將該基因用作食管癌轉移檢測用基因。6.預測得分系統(tǒng)以從50例患者得到的檢樣作為訓練樣本，制作使用載帶在基因組框架圖(GenomicProfiler)(三井信息開發(fā))上的SVM的辨別式。利用該辨別式，對進行了歸一化的所有119例的數(shù)據(jù)進行數(shù)據(jù)預測。需要說明的是，核函數(shù)使用線性核函數(shù)(linearkernel)。基于在二組間(發(fā)生轉移的食管癌病變部和沒有發(fā)生轉移的食管癌病變部)的t檢驗的p值選擇基因。以所有檢樣為對象進行解析，通過比較發(fā)生轉移的食管癌病變部和沒有發(fā)生轉移的食管癌病變部，得到按照p值由小到大的順序排列的一覽表(發(fā)生轉移的食管癌病變部和沒有發(fā)生轉移的食管癌病變部中的基因轉錄產(chǎn)物的表達量比較和統(tǒng)計值)，對于該一覽表中的47種基因，從上面開始選擇(表2)。<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>針對選擇的47種基因制作用于辨識食管癌組織的SVM辨別機，通過研究使用序列號4894的多核苷酸作為探針測定的基因表達，制作發(fā)生轉移(即轉移性)的食管癌病變部和沒有發(fā)生轉移(即非轉移性)的食管癌病變部的辨別式，概率依賴于使用的基因數(shù)而發(fā)生變動，能以86%以上的概率判斷發(fā)生轉移的食管癌病變部和沒有發(fā)生轉移的食管癌病變部(圖l)。<實施例2〉實驗者的臨床病理學觀察從取得知情同意的進行食管癌摘除手術或食管活檢的119名食管癌患者獲得食管的摘除組織。對摘除的組織片進行肉眼及/或病理組織學觀察，判斷食管癌組織，區(qū)分食管癌病變部和正常組織部后，立即凍結，保存在液氮中。總RNA的提取和cDNA的制備作為試樣，使用食管癌患者的食管組織中的食管癌病變部組織以及同一食管組織中的非癌組織(正常組織)。使用Trizol試劑(Invitrogen公司)，按照該公司推薦的操作手冊，由各組織制備總RNA。并用寡聚(dT)引物及隨機九聚物，使用CyScribeFirst-StrandcDNALabelingKit(GEHealthcare公司)，按照制造商推薦的操作手冊，對由上述方法得到的總RNAl微克(嗎)進行逆轉錄反應。在來自正常組織或食管癌組織的總RNA中添加Cy3-dUTP(GEHealthcare公司)，在參考總RNA(Stratagene公司)中添加Cy5-dUTP(GEHealthcare公司)，按照制造商推薦的操作手冊，在逆轉錄反應時進行cDNA的標記?！擞浀腸DNA用QIAquickPCRpurificationKit(QIAGEN公司)精制后用于雜交。3.寡DNA微陣列的制作作為寡DNA微陣列，使用根據(jù)Affymetrix公司GeneChip(HumanGenomeU133A)及本說明書中記載的方法制作的DNA芯片。DNA芯片的制作方法如下所示。為了確定最初載帶的寡DNA的種類，使用Affymetrix公司GeneChipTM,進行基因的插入。GeneChip的操作基于CompleteGeneChipInstrumentSystem等該公司^L定的順序進行。使用CompleteGeneChipTM的解析結果是提取得到有可能因食管癌導致表達變動的基因及可以作為實驗對照的基因，共計8961種。對于提取的8961種基因，為了不引起序列的重復，分別選擇序列特異性高的部位的序列60-70個殘基進行合成。在MATSUNAMIDNA微陣列用涂層玻璃的耐DMSO的Typel氨基修飾寡DNA固定涂層(一公浪硝子工業(yè)4朱式會社)上，使用點樣儀(spotter)(GMS417arrayer,Affymetrix公司)，在50-60%濕度環(huán)境中點樣合成寡DNA，所述合成寡DNA溶解于稀釋至4倍的溶液I(TakaraBio公司)中，濃度為30jiM,含有序列號162-181的寡DNA、并由8961種的60或70mer組成。.雜交在反意寡聚混合物(QIAGEN)中溶解l嗎標記的cDNA,將得到的溶液排列到載有被覆Gap的玻璃(松浪硝子工業(yè))的DNA芯片上，在42。C下雜交16小時。雜交結束后，依次用2xSSC/0.1%SDS、lxSSC、0.2xSSC清洗DNA芯片。5.基因表達量的測定使用Agilent微陣列掃描儀(Agilent公司)掃描利用上述方法進行雜交的DNA芯片，獲得圖像，將熒光強度轉變?yōu)閿?shù)值。參考SpeedT.著"Statisticalanalysisofgeneexpressionmicroarraydata，，Chapman&Hall/CRC、及CaustonH.C.等著"Abeginner'sguideMicroarraygeneexpressiondataanalysis"Blackwellpublishing進行統(tǒng)計學處理。即,將從雜交后的圖像解析得到的數(shù)據(jù)分別取對數(shù)值，進行整體最佳化，并根據(jù)LOWESS(局部加權回歸散點修勻法)進行平滑化，通過MAD縮放處理，進行歸一化校正。結果能夠得到非癌組織部(圖2)、食管癌病變部(圖3)中所示的M-A圖。進而能找到在食管癌病變部的表達量比非癌組織部少的基因。可以考慮將該基因用作食管癌檢測用基因。6.預測得分系統(tǒng)以從50例患者得到的檢樣作為訓練樣本，制作使用載帶在基因組框架圖(三井信息開發(fā))上的SVM辨別式。利用該辨別式對進行了歸一化的所有119例的數(shù)據(jù)進行數(shù)據(jù)預測。需要說明的是，核函數(shù)使用線性核函數(shù)(linearkernel)?；谠诙M間(食管癌病變部和正常組織部)的t檢驗的p值選擇基因。以所有檢樣為對象進行解析，通過比較食管癌病變部和非癌組織部，得到按照p值由小到大的順序排列的一覽表(食管癌病變部和非癌組織部的基因轉錄產(chǎn)物的表達量比較和統(tǒng)計值)，對于該一覽表中的20種基因，從上面開始選擇(表3)。表3序列RefS叫號基因名食管癌組織部表達平均值非癌組織部表達平均值表達比p值142NM—000512GALNS0.09731.43140.06801.202E-28143NM一005247fg。0.59851.62050.36935.559E-26144NM—001220CAMK2B0.44581.50410.29643.325E-25〗45NM018584CaMKllNalpha0.50471.42500.35423.057E-23146NM—018622PSARL0.44631.32630.33653.410E-23147NM—005432XRCC30.2565].52770.16792.539E-22148NM—001747CAPG-0.05510.5347-0.10309.067E-22149NM—012203GRHPR0.20300.66960.30322.052E-21150NM005480TROAP0.11920.86310.13812.679E-20151NMJ301034RRM20.20141.36560.14755.005E-20152函—145799SATB2-0.02860.7859-0.03643.150E-20153固—020181C14orfl620.02080.66630.03128.849E-20154NM—015129SEPT60.95921.96450.48837.463E-17155NM一002355M6PR0.08271.21630.06805.031E-17156函005416SP圖0.99483.39830.29272.245E-21157函004434EML10.38420.98920.38843.975E-20158NM—016061YPEL50.58021.38570.41871.490E-19]59NM—004096EIF4EBP20.07220.68940.10472.750E-19160BC060766SLC2A140.22011.14130.19294.134E-19161NM—004787SLIT20.46121.03260.44662.331E-19針對選擇的20種基因(圖2及圖3中以白色菱形標記表示)制作用于辨識食管癌組織的SVM辨別機，通過研究使用序列號162181的多核苷酸作為探針測定的基因表達，制作食管癌組織和非癌組織的辨另'J式，概率依賴于使用的基因數(shù)而發(fā)生變動，能以89%以上的概率判斷食管癌病變部和非癌組織部(圖4)。使用從手術切片及活檢試樣得到的食管癌病變部、僅從手術切片得到的非癌組織部作為成為訓練樣本的檢樣，進行解析，針對食管癌病變部和非癌組織部的表達量差，按照p值由小到大的順序選擇基因，制作用于辨識非癌組織的SVM辨別^/L,此時，4吏用序列號162165、167、171、173、174及176的多核苷酸作為最佳組合的探針測定基因表達，通過研究該基因表達能以93%的概率識別非癌組織。使用僅從手術切片得到的食管癌病變部、從手術切片及活檢試樣得到的非癌組織部作為成為訓練樣本的檢樣，進行解析，針對食管癌病變部和非癌組織部的表達量差，按照p值由小到大的順序選擇基因，制作用于辨識食管癌組織的SVM辨別機，此時，通過研究使用序列號162166、168172、175的多核苷酸作為最佳組合的探針測定的基因表達，能以96%的概率識別食管癌組織?？梢酝瑫r針對1個受試組織的基因表達量套用上述2個識別非癌組織部的SVM和識別食管癌病變部的SVM,進行解析。結果，針對某一受試組織，當2個辨別式同時得到是非癌組織部的結果時，或2個辨別式同時得到是食管癌病變部的結果時，各診斷的準確度顯著高于根據(jù)現(xiàn)有的通過l個辨別式進行診斷的方法。<實施例3>1.利用RT-PCR進行的檢測使用食管癌患者的食管組織中的食管癌病變部的組織、及同一食管組織中的非癌組織(正常組織)作為試樣，使用Trizol試劑(Invitrogen公司)，根據(jù)該公司推薦的操作手冊，由各組織制備總RNA。使用SuperscriptIIIFIRST-STRANDSUPERMIX,由總RNA合成cDNA,使用TaKaRaTaqTM(TakaraBio公司、京都、日本)對相當于20ng總RNA的cDNA進行擴增反應。為了檢測屬于上述II組的CaMKIINalpha及YPEL5基因，在擴增反應中使用由對應于各基因序列(序列號145及158)的20個堿基組成的引物(TakaraBio抹式會社)。反應溶液的組成按照提供的操作手冊進行制備。反應條件如下首先，在95。C處理1分鐘后，進行23(GAPDH)26(CaMKIINalpha及YPEL5)輪95。C15秒、55。C30秒、72。C30秒的組合條件處理，最后，在72。C下處理7分鐘。用2%瓊脂糖凝膠電泳反應后的反應液，確認了各基因的表達(圖5)。由圖5可知，CaMKIINalpha及YPEL5在食管癌病變部組織中的表達比正常組織少。2.利用定量的RT-PCR法進行的才全測使用與1.利用RT-PCR進行的檢測相同地制作的cDNA作為試樣。定量的RT-PCR法基于由TakaraBio公司(京都、日本)的web頁"l是供的信息(http:〃www.takara—bio.co.jp/prt/guide.htm)進行。焚光檢測中使用SYBRpremixExTaq(TakaraBio公司)及ABIPRISM7000,反應液的組成基于SYBRpremixExTaq的操作手冊、反應條件基于ABIPRISM7000的l喿作手冊進行45輪的擴增反應。為了4僉測CaMKIINalpha(序列號145)及GAPDH基因，在擴增反應中使用由對應于各基因序列的20個堿基組成的引物(TakaraBio公司)。制作用于定量PCR的標準曲線時，對于CaMKIINalpha，使用由食管組織制備的PCR片段，對于作為穩(wěn)定表達基因的一種的GAPDH(此處，所謂穩(wěn)定表達基因，是指在幾乎所有人細胞.組織中表達量基本一定的基因，也被稱為管家基因。)使用由人參考RNA(humanreferenceRNA)(Stratagene公司)合成的cDNA,分別稀釋至任意濃度后加以使用。在各組織中，對相當于1Ong總RNA的cDNA中的CaMKIINalpha和GAPDH進行定量PCR法，計算CaMKIINalpha表達量相對于GAPDH表達量的比值。結果在食管癌患者的食管組織中的食管癌病變部組織的CaMKIINalpha/GAPDH表達比為0.41，正常組織的表達比為3.16，可見在食管癌病變部中，CaMKIINalpha表達量降低。3.結果利用RT-PCR確認食管癌組織中的CaMKIINalpha及YPEL5的mRNA的表達量時，與正常食管組織相比，有減少的傾向。利用定量的RT-PCR進行檢測時，與正常食管組織相比，CaMKIINalpha的mRNA在食管癌組織中減少約1/7.7。4.半定量RT-PCR使用LightCycler(Roche■Diagnostics)進行半定量RT-PCR。使用食管癌患者的食管組織中的食管癌病變部的組織、及同一食管組織中的非癌組織(正常組織)作為試樣，使用firststrandsynthesiskit(GEHealthcare公司)由從各組織提取的總RNA合成cDNA。作為與屬于上述II組的XRCC3及RRM2、作為內部參比的GAPDH對應的引物，使用primer3(httpc〃frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3—www.cgi),確定序歹'J(只寸于XRCC3，4吏用5'—ACTGTGCCCCACAAAACTTC—3'(序列號234)、5，一GACCCTCCTTCCTCTCAACC—3，(序列號235)、對于RRM2，使用5，-GGCTGGCTGTGACTTACCAT-3，(序列號236)、5，—AATCTGCGTTGAAGCAGTGA—3，(序列號237),7寸于GAPDH,使用5，一TGGTATCGTGGAAGGACTCATGC-3，(序列號238)、5,一ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGC—3，(序列號239))。將得到的2pLcDNA模板與引物各50pmo1、3mMMgCl22.4jiL、LightCyclerDNAMASTERSYBRGreenl，10xcone(Roche.Diagnostics抹式會社)2pL混合，使用LightCycler，進行PCR反應。作為反應條件，首先，在95。C下處理反應溶液后，進行45輪94。C1秒、退火溫度(XRCC358°C、RRM253.1°C)5秒、72°C18秒的組合條件處理，最后以0.2。C/秒的比例加熱至95。C后，得到溶解曲線。在所有的實驗中，通過稀釋試樣，制成GAPDH的表達量的定量曲線，對食管癌病變部組織和正常組織中的RRM2及XRCC3的表達量進行半定量。結果對于RRM2的表達量，正常組織食管癌病變部的比為1:0.06,對于XRCC3，比值減少至l:0.11。<實施例4〉1.健康人及食管癌患者血漿的蛋白質鑒定從11名5070歲的食管癌患者、及8名對應年齡的健康人分別得到添加EDTA的血漿成分。從健康人中隨機選4名，制作混合血漿，用于解析。對食管癌患者的血漿分別進行解析。用孔徑0.22fam的過濾器過濾血漿，除去雜質物質，進行調制，使蛋白質濃度為50mg/mL。進一步將該血漿注入到25mM碳酸氫銨溶液(pH8.0)中進行稀釋，使?jié)舛葹?2.5mg/mL，用中空絲過濾器(東麗)進行分子量截留。用ProteomeLab(注冊商標)PF2DSystem(BeckmanCoulter公司)反相色譜將截留后的血漿樣品(總量1.8mL、含有最多250(ig的蛋白質)分離成7個餾分，冷凍干燥后，再溶解于100nL25mM碳酸氫銨溶液(pH8.0)。將該樣品用蛋白質的五十分之一的量的胰蛋白酶在37。C下消化23小時，進行肽化。再利用離子交換柱(KYATechnologies)將各餾分的肽分成4個餾分。將上述各餾分進一步用反相柱(KYATechnologies)分餾，將洗脫的肽用在線連接的質譜Q-TOFUltima(Micromass公司)，通過surveyscanmode進行測定。通過用蛋白質鑒定軟件MASCOT(MatrixScience)解析上述測定數(shù)據(jù)，進行徹底的蛋白質鑒定。結果從健康人、食管癌患者獲得的所有血漿成分中均鑒定到MASCOT分數(shù)為40以上(筌定肽數(shù)為2個以上)的約3500種蛋白質。2.比較健康人與食管癌患者血漿的蛋白質表達針對上述l中鑒定的血漿蛋白質，在健康人和食管癌患者之間進行比較。找到了在健康人中未檢測出表達、在食管癌患者中檢測出表達的蛋白質。上述蛋白質是上述表1中所示的序列號202233表示的多肽，作為所謂的食管癌標記物，在食管癌的檢測中是有用的。在各患者中的表達頻率如表4所示。健康人以4人為1組，2組均未檢測到表達(用-表示)，在ll名食管癌患者中10名以上檢測到表達(用+表示)。<table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table>所以，通過使用上述多肽的至少l種、例如其特異性抗體，測定該多肽的存在或存在量，能檢測食管癌。產(chǎn)業(yè)上的可利用性根據(jù)本發(fā)明，能夠提供一種特異性、靈敏度優(yōu)良的食管癌診斷用組合物，該組合物能夠檢測、確定或預測至少I階段的食管癌、至少向淋巴結的食管癌轉移，所以本發(fā)明特別是在制藥及醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)是有用的。序列表的自由文本序列號234人工序列的說明引物序列號235人工序列的說明引物序列號236人工序列的說明引物序列號237人工序列的說明引物序列號238人工序列的說明引物序列號239人工序列的說明引物權利要求1.一種用于體外檢測、確定或預測受試者食管癌的存在或轉移的組合物，所述組合物含有選自下述I組、II組及/或III組中的1種或2種以上探針，I組由下述(a)～(e)組成的多核苷酸，(a)由序列號1～46表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(b)含有序列號1～46表示的堿基序列的多核苷酸，(c)由與序列號1～46表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(d)含有與序列號1～46表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸，及(e)在嚴格條件下，與所述(a)～(d)中的任一種多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段；II組由下述(f)～(j)組成的多核苷酸，(f)由序列號142～155、157～161表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(g)含有序列號142～155、157～161表示的堿基序列的多核苷酸，(h)由與序列號142～155、157～161表示的堿基序列互補的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段，(i)含有與序列號142～155、157～161表示的堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸，及(j)在嚴格條件下與所述(f)～(i)中的任一種多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段；III組由下述(k)～(m)組成的抗體、其片段或其化學修飾衍生物，(k)與由序列號1～46表示的堿基序列編碼的多肽、或具有序列號95～140表示的氨基酸序列的多肽、它們的變異體、或它們的片段中的至少1個特異性結合的抗體、其片段或其化學修飾衍生物，(l)與由序列號142～155、157～161表示的堿基序列編碼的多肽、或具有序列號182～195、197～201表示的氨基酸序列的多肽、它們的變異體、或它們的片段中的至少1個特異性結合的抗體、其片段或其化學修飾衍生物，及(m)與具有序列號202～232表示的氨基酸序列的多肽、它們的變異體、或它們的片段中的至少1個特異性結合的抗體、其片段或其化學修飾衍生物。2、如權利要求l所述的組合物，其中，利用所述I組及III組(k)的各探針可以檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移。3、如權利要求i所述的組合物，其中，利用所述n組及ni組(1)、(m)的各探針可以檢測、確定或預測食管癌的存在。4、如權利要求l所述的組合物，其中，所述多核苷酸是DNA或RNA。5、如權利要求l所述的組合物，其中，所述I組及II組中的片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。6、如權利要求l所述的組合物，其中，所述I組及II組中的片段是序列號146、142155、157161中的任一個表示的石成基序列中分別含有序列號4893、162175、177181中的任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸序列互補的堿基序列的多核苷酸。7、如權利要求l所述的組合物，所述I組及II組中的片段是含有序列號4893、162175、177181中的任一個表示的堿基序列、或與該堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。8、如權利要求l所述的組合物，所述組合物除含有所述I組的探針以外，還含有由序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與所述多核苷酸雜交的多核苷9、如權利要求8所述的組合物，其中，所述片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。10、如權利要求8所迷的組合物，其中，所述片段是序列號47表示的堿基序列中含有序列號94表示的堿基序列的多核普酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的堿基序列的多核苷酸。11、如權利要求8所述的組合物，其中，所述片段是含有序列號94表示的堿基序列、或與該堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。12、如權利要求l所述的組合物，所述組合物除含有所述II組的探針以外，還含有由序列號156表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與所述多核苷酸雜交的多核普酸、或所述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段作為探針。13、如權利要求12所述的組合物，其中，所述片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。14、如權利要求12所述的組合物，其中，所述片段是序列號156表示的堿基序列中含有序列號176表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核普酸的序列互補的堿基序列的多核苷酸。15、如權利要求12所述的組合物，其中，所述片段是含有序列號176表示的堿基序列、或與該堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。16、如權利要求l所述的組合物，所述組合物除含有所述m組(m)的探針以外，還含有與序列號233表示的多肽，其變異體或其片段中的至少1個特異性結合的抗體、其片段或其化學修飾衍生物。17、如權利要求l所述的組合物，其中，所述多肽或變異體的片段含有由至少7個氨基酸組成的表位。18、如權利要求l所述的組合物，其中，所述抗體是多克隆抗體、單克隆抗體、合成抗體、重組抗體、多特異性抗體或單鏈抗體。19、如權利要求l所述的組合物，其中單獨或組合含有選自所述i組及/或ii組、或m組中的2種以上探針。20、一種用于體外檢測、確定或預測受試者食管癌的存在或轉移的試劑盒，其中含有選自權利要求i定義的i組、n組及/或in組中的i種或2種以上探針。21、如權利要求20所述的試劑盒，其中還含有由序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苷酸、在嚴格條件下與所述多核苷酸雜交的多核苷酸、或所述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段作為探針。22、如權利要求20所述的試劑盒，其中還含有由序列號156表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核苦酸、在嚴格條件下與所述多核普酸雜交的多核苷酸、或所述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段作為探針。23、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述多核苷酸是由序列號146、47中的任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸、由其互補序列組成的多核脊酸、在嚴格條件下與所述多核苷酸雜交的多核苷酸、或其含有15個以上連續(xù)堿基的片段。24、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述多核苷酸是由序列號142155、156、157161中的任一個表示的堿基序列組成的多核普酸、由其互補序列組成的多核普酸、在嚴格條件下與所述多核苷酸雜交的多核苷酸、或所述多核苷酸的含有15個以上連續(xù)堿基的片段。25、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述I組及II組中的片段是含有60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸。26、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述I組中的片段是在含有序列號146、47中任一個表示的堿基序列的60個以上連續(xù)堿基的多核苷酸中分別含有序列號4893、94中的任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的堿基序列的多核苷酸。27、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述II組中的片段是在含有序列號142155、156、157161中任一個表示的堿基序列的60個以上連續(xù)石咸基的多核苷酸中分別含有序列號162175、176、177181中的任一個表示的堿基序列的多核苷酸、或含有與該多核苷酸的序列互補的石威基序列的多核苷酸。28、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述I組或II組中的片段是含有序列號4893、94、162175、176、177181中的任一個表示的堿基序列、或與該堿基序列互補的堿基序列的多核苷酸。29、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述I組或II組中的片段是由序列號4893、94、162175、176、177181中的任一個表示的堿基序列組成的多核苷酸。30、如權利要求20所述的試劑盒，其中含有2種以上全部的含有序列號4893、94表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。31、如權利要求20所述的試劑盒，其中含有2種以上全部的含有序列號162175、176、177181表示的堿基序列或其互補序列的多核普酸。32、如權利要求20所述的試劑盒，其中，所述探針被單獨或組合包裝在不同容器中。33、一種用于體外檢測、確定或預測受試者食管癌的存在或轉移的DNA芯片，其中含有選自權利要求l定義的I組及/或II組中的l種或2種以上探針。34、如權利要求33所述的DNA芯片，其中還含有由序列號47表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體及/或其片段。35、如權利要求33所述的DNA芯片，其中還含有由序列號156表示的堿基序列組成的多核苷酸、其變異體及/或其片段。36、如權利要求33所述的DNA芯片，其中含有2種以上全部的含有序列號4893、94表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。37、如權利要求33所述的DNA芯片，其中含有2種以上全部的含有序列號162175、176、177181表示的堿基序列或其互補序列的多核苷酸。38、一種體外檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法，該方法包括使用選自權利要求i定義的i組、n組及/或m組中的探針，體外測定來自受試者的生物試樣中的一種或幾種食管癌相關靶核酸的存在或存在量或表達量。39、如權利要求38所述的方法，其中，使用DNA芯片進行所述測定。40、如權利要求38所述的方法，其中，以相對于對照試樣的變化為指標，進行所述食管癌的存在或轉移的檢測、確定或預測。41、如權利要求38所述的方法，其中，利用免疫學方法進行所述測定。42、如權利要求41所述的方法，其中，利用所述免疫學方法的測定使用所述ni組的抗體、其片段、或其化學修飾衍生物進行。43、如權利要求42所述的方法，其中，所述抗體、其片段、或其化學修飾衍生物是被標記的。44、如權利要求38所述的方法，其中，所述生物試樣是來自食管的組織或細胞、血液、血漿、血清、或尿。45、一種體外檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法，該方法包括使用權利要求1所述的組合物、權利要求20所述的試劑盒、或權利要求33所述的DNA芯片，體外測定來自受試者的生物試樣中的l種或多種與食管癌相關的靶核酸的存在或存在量或表達量。46、一種檢測、確定或預測食管癌的轉移的方法，所述方法包括以下步驟即，第l步驟使用選自權利要求l定義的I組中的探針、或含有所述探針的權利要求l所述的組合物、權利要求20所述的試劑盒、或權利要求33所述的DNA芯片，體外測定多個生物試樣中的食管癌相關靶核酸的表達量，所述生物試樣是已知含有伴隨轉移的食管癌或不伴有轉移的食管癌細胞的組織；第2步驟以所述第1步驟得到的所述靶核酸的表達量的測定值作為訓練樣本，制作辨別式(支持向量機)；第3步驟與第l步驟相同地體外測定來自受試者食管的生物試樣中的所述耙核酸的表達量；第4步驟將第3步驟中得到的所述靶核酸的表達量的測定值代入所述第2步驟中得到的辨別式中，基于由所述辨別式得到的結果，判斷生物試樣中不含有伴有轉移的癌細胞及/或含有不伴有轉移的癌細胞。47、一種檢測食管癌的方法，所述方法包括以下步驟即，第i步驟使用選自權利要求i定義的n組中的探針、或含有所述探針的權利要求l所述的組合物、權利要求20所述的試劑盒、或權利要求33所述的DNA芯片，體外測定多個生物試樣中的靶核酸的表達量，所述生物試樣是已知含有食管癌細胞的組織或正常組織；第2步驟以所述第1步驟得到的所述靶核酸的表達量的測定值作為訓練樣本，制作辨別式(支持向量機)；第3步驟與第1步驟相同地體外測定來自受試者食管的生物試樣中的所述輩巴核酸的表達量；第4步驟將第3步驟中得到的所述耙乙酸的表達量的測定值代入所述第2步驟中得到的辨別式中，基于由所述辨別式得到的結果，判斷生物試樣中含有癌細胞或不含有癌細胞。48、選自權利要求l定義的I組、n組及/或in組中的探針、或含有所述探針的權利要求1所述的組合物、權利要求20所述的試劑盒、或權利要求33所述的DNA芯片在體外檢測、確定或預測來自受試者的生物試樣中的食管癌的存在或轉移中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及含有多核苷酸及抗體作為探針的組合物、試劑盒及DNA芯片及使用上述物質檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移的方法，所述探針用于檢測、確定或預測食管癌的存在或轉移。文檔編號C12N15/09GK101213296SQ200680023550公開日2008年7月2日申請日期2006年5月2日優(yōu)先權日2005年5月2日發(fā)明者信正均,友田史緒里,妙本陽,小園聰子,島田裕,田中祥德,秋山英雄,辻本豪三,野村修申請人:東麗株式會社;國立大學法人京都大學