專利名稱：一種無桔霉素高色價功能性紅曲粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種無桔霉素高色價功能性紅曲粉的制備方法，涉及紅曲產(chǎn)品的制備，尤其是無桔霉素紅曲產(chǎn)品的制備。
背景技術(shù)：
近年來，含功能性成分莫納可林K(Monacolin K)的功能性紅曲，也稱降脂紅曲受到關(guān)注，國內(nèi)外己能批量生產(chǎn)。1995年法國人Blanc發(fā)現(xiàn)紅曲霉能產(chǎn)生真菌毒素桔霉素(Citrinin)后，紅曲產(chǎn)品的食用安全性受到挑戰(zhàn)。在不少國家，紅曲產(chǎn)品在食品及藥品中的應(yīng)用還未經(jīng)安全性評估及得到法定認(rèn)可。隨著中國加入WTO，紅曲產(chǎn)品要走向世界，獲得權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)可是至關(guān)重要的?，F(xiàn)行紅曲產(chǎn)品的國家標(biāo)準(zhǔn)中，沒有桔霉素限量指標(biāo)。我們發(fā)現(xiàn)紅曲霉菌種普遍具有產(chǎn)生桔霉素的潛在能力；我們還對國內(nèi)外部分紅曲產(chǎn)品中的桔霉素含量進(jìn)行過檢測，檢測結(jié)果表明，我國紅曲產(chǎn)品中桔霉素含量偏高。紅曲桔霉素事關(guān)食品安全，根據(jù)世界一些發(fā)達(dá)國家對食品和藥品中桔霉素含量嚴(yán)加控制的事實(shí)，紅曲桔霉素的現(xiàn)狀，對食品安全提出了新的挑戰(zhàn)，并有可能影響我國紅曲產(chǎn)品的出口。
我們同時對紅曲霉的兩個重要代謝產(chǎn)物莫納可林K及桔霉素，在不同發(fā)酵條件下的生產(chǎn)能力進(jìn)行研究。據(jù)了解，國內(nèi)外在此研究方向還沒有相關(guān)文獻(xiàn)的報道。
從生產(chǎn)無桔霉素紅曲產(chǎn)品這個角度來說，有兩個層次的工作，其一是確定所使用的紅曲霉菌是否具有產(chǎn)生桔霉素的能力(菌種遺傳特性所決定)；篩選不產(chǎn)桔霉素的紅曲霉菌種是關(guān)鍵；其二是，若菌種本身具有產(chǎn)生桔霉素的潛力，是否可以通過發(fā)酵條件(培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件)的優(yōu)化控制桔霉素的產(chǎn)生，包括對紅曲產(chǎn)品桔霉素含量的檢測。
降脂紅曲產(chǎn)品中的一個重要指標(biāo)是莫納可林K的含量。由于莫納可林K在發(fā)酵產(chǎn)品中有開環(huán)和閉環(huán)(或酸式和內(nèi)酯式)兩種結(jié)構(gòu)同時存在，而開環(huán)式莫納可林K的生理功能比閉環(huán)莫納可林K要強(qiáng)(閉環(huán)結(jié)構(gòu)的在體內(nèi)要轉(zhuǎn)變成開環(huán)結(jié)構(gòu))，我們對發(fā)酵的降脂紅曲產(chǎn)品中這兩者的比例也進(jìn)行了調(diào)查。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種無桔霉素高色價功能性紅曲粉的制備方法。該紅曲粉不同于普通紅曲粉，其不含桔霉素(Citrinin)；含天然紅曲色素(Monascuspigments)，色價200-600U/g(按紅曲米國家標(biāo)準(zhǔn)1985年版方法)；含功能性成分莫納可林K(Monacolin K，或Lovastatin，Mevinolin)4-12g/kg。莫納可林K中開環(huán)結(jié)構(gòu)(也稱為酸式結(jié)構(gòu))比例占70-90％。
技術(shù)方案采用紅曲霉菌(Monascus sp.)9901菌或紅曲霉菌(Monascus sp.)9906菌。該菌株為江南大學(xué)生物工程學(xué)院生物制藥研究室保藏和提供。經(jīng)過優(yōu)化條件下液態(tài)種子培養(yǎng)，得到液態(tài)種子，再用谷物原料和水，采用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，最后采用滅菌干燥磨粉而制得無桔霉素高色價功能性紅曲粉；或液態(tài)種子，接入液態(tài)培養(yǎng)基，采用液體發(fā)酵技術(shù)，最后采用均質(zhì)處理，噴霧干燥而制得無桔霉素高色價功能性紅曲粉。
紅曲霉培養(yǎng)及發(fā)酵菌種為本實(shí)驗(yàn)室保藏和提供的紅曲霉9901菌種或紅曲霉9906菌種。
紅曲霉是否產(chǎn)生桔霉素的鑒定培養(yǎng)基(YES培養(yǎng)基和MSG培養(yǎng)基)YES培養(yǎng)基(M1，g/L)酵母浸膏，20；蔗糖，60；30℃靜止培養(yǎng)2周。
MSG培養(yǎng)基(M2，g/L)葡萄糖，50；谷氨酸鈉，6；K2HPO4·3H2O，5；KH2PO4，5；MnSO4·H2O，0.03；FeSO4·7H2O，0.01；MgSO4·7H2O，0.5；CaCl2，0.1；ZnSO4·7H2O，0.05。30℃搖瓶培養(yǎng)1周。
上述兩株紅曲霉菌種，經(jīng)過YES培養(yǎng)基和MSG培養(yǎng)基培養(yǎng)，其培養(yǎng)液的65％的乙醇萃取物，用高效液相色譜法的熒光檢測器法或用酶聯(lián)免疫法測不到桔霉素，作為該兩株紅曲霉菌種確實(shí)不含桔霉素的證據(jù)。同時，對本技術(shù)所制得的紅曲粉的萃取物(甲苯/乙酸乙酯/甲酸，體積比7/3/1)，用高效液相色譜法的熒光檢測器法或用酶聯(lián)免疫法測不到桔霉素，作為所制備的紅曲產(chǎn)品確實(shí)不含桔霉素的證據(jù)。
液態(tài)種子培養(yǎng)基(M3)每1000mL中，葡萄糖60g，蛋白胨25g，NaNO32g，MgSO4·7H2O 1g，KH2PO41g，pH5.0。裝液量100mL/500mL三角瓶。30℃培養(yǎng)2-3天。得一級種子培養(yǎng)液。
液態(tài)種子培養(yǎng)方法搖瓶培養(yǎng)得一級種子，一級種子可用于二級搖瓶種子和種子罐培養(yǎng)。
紅曲米的固態(tài)發(fā)酵原料為谷物原料(包括大米，小米和小麥等)。三角瓶或塑料瓶培養(yǎng)時裝料量100-200g/1000mL瓶。加等量的水。pH自然，先常壓蒸煮10min，再121℃滅菌20min，冷卻后，接入液態(tài)種子10-50％(體積質(zhì)量比，以原料質(zhì)量為基準(zhǔn)，V/W)，三角瓶或塑料瓶培養(yǎng)或固體發(fā)酵罐發(fā)酵。發(fā)酵溫度25-32℃。發(fā)酵時間2-3周。發(fā)酵環(huán)境濕度控制在60-90％。得到的紅曲米經(jīng)100℃滅菌30min，50℃烘干24小時，磨粉，得到紅曲米粉產(chǎn)品，含功能性成分莫納可林K(MonacolinK，或Lovastatin，Mevinolin)4-12g/kg。莫納可林K中開環(huán)結(jié)構(gòu)(也稱為酸式結(jié)構(gòu))比例占.70-90％。產(chǎn)品中含紅曲色素200-600U/g，不含桔霉素。
用固體發(fā)酵罐生產(chǎn)，其菌種，液態(tài)種子及接種量和固體發(fā)酵原料及有關(guān)制備條件與三角瓶進(jìn)行的固態(tài)發(fā)酵的條件相同。
紅曲液態(tài)發(fā)酵搖瓶液態(tài)發(fā)酵，培養(yǎng)基(M4)小米粉10-50g/L，甘油50-100g/L，大豆水解液25g干物質(zhì)/L，NaNO32g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，ZnSO4·7H2O 2g/L，玉米漿10mL/L，pH4.5。121℃滅菌30min，滅菌后，接入液態(tài)種子10-50％(V/V)，搖瓶培養(yǎng)條件行程10cm、70次/分鐘往復(fù)振蕩培養(yǎng)。25-32℃搖瓶發(fā)酵2-3周。溫度控制策略為最初30-32℃，逐步降低發(fā)酵溫度，2天后28℃，第4天后穩(wěn)定在25-27℃。
發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液攪碎后，用噴霧干燥或真空冷凍干燥制成紅曲粉，即為無桔霉素功能性紅曲粉產(chǎn)品。
發(fā)酵罐液態(tài)發(fā)酵初始培養(yǎng)基(M5)小米粉10-50g/L，甘油50-100g/L，大豆水解液干物質(zhì)5g/L，NaNO32g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，ZnSO4·7H2O 2g/L，玉米漿10mL/L，pH4.5，總體積10L。121℃滅菌30min，滅菌后，接入液體種子10-50％(V/V)；25-32℃攪拌通風(fēng)發(fā)酵2-3周，流加用大豆水解液1L，含固形物200g。大豆水解液的流加方式42h～192h期間以1.0g/h的速度流加，共加入大豆水解液干物質(zhì)150g(即15g/L)，192～288h期間以0.52g/h的速度流加，加入大豆水解液干物質(zhì)50g(即5g/L)。15L全自動發(fā)酵罐；攪拌轉(zhuǎn)速初始150r/min，菌球形成后逐步增加轉(zhuǎn)速，4天后增加到300r/min。通風(fēng)量初始為1L/(L·min)，逐步提高到1.6-1.8L/(L·min)。溫度控制策略為最初30-32℃，逐步降低發(fā)酵溫度，2天后28℃，第4天后穩(wěn)定在25-27℃。
發(fā)酵結(jié)束后，取出菌絲體及發(fā)酵液，攪碎后，用噴霧干燥制成紅曲粉。即為無桔霉素功能性紅曲粉產(chǎn)品。
發(fā)酵罐液態(tài)發(fā)酵也可用100-5000L發(fā)酵罐進(jìn)行生產(chǎn)。
紅曲霉9901菌和9906菌產(chǎn)不產(chǎn)桔霉素的證據(jù)要了解紅曲霉是否產(chǎn)桔霉素，常用的方法是采用酵母提取物及蔗糖培養(yǎng)基(YES培養(yǎng)基)或谷氨酸葡萄糖培養(yǎng)基(MSG培養(yǎng)基)，看其培養(yǎng)物中是否含桔霉素。在初步確認(rèn)菌種不產(chǎn)桔霉素的情況下，再檢測各種培養(yǎng)基條件及培養(yǎng)狀態(tài)下所得到的發(fā)酵產(chǎn)品中的桔霉素含量。只有這樣，才能確保紅曲產(chǎn)品中不含桔霉素。如果其中有一種培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)桔霉素，則說明該菌有能力產(chǎn)桔霉素。
我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紅曲霉9901菌和9906菌用YES培養(yǎng)基和MSG培養(yǎng)基培養(yǎng)(紅曲霉是否產(chǎn)桔霉素的鑒定培養(yǎng)基)，用HPLC法測其培養(yǎng)液，均未測出桔霉素。這初步說明這兩株紅曲霉菌種不再具有生物合成桔霉素的能力。
對紅曲霉9901和9906菌搖瓶發(fā)酵和發(fā)酵罐發(fā)酵液的紅曲米(粉)進(jìn)行桔霉素檢測。從色譜圖中可以看出，兩株紅曲霉在搖瓶和發(fā)酵罐的發(fā)酵液中都沒有檢測到桔霉素的產(chǎn)生，桔霉素的分析結(jié)果證明，用該菌株在我們設(shè)定的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件下生產(chǎn)得到的發(fā)酵液中沒有檢測到桔霉素的存在，采用三角瓶固態(tài)培養(yǎng)方式，發(fā)酵兩周至三周。連續(xù)多批次發(fā)酵。所得的紅曲米粉經(jīng)萃取，用HPLC檢測桔霉素含量。部分批次的結(jié)果見表1。所有的固態(tài)樣品中均未測出桔霉素(連續(xù)十四個批次)。
綜上所述，紅曲霉9901和紅曲霉9906菌株無論是在YES培養(yǎng)，MSG培養(yǎng)，還是在固態(tài)或液態(tài)(搖瓶或發(fā)酵罐)情況下，所得到的紅曲產(chǎn)品中，用HPLC法均未測出桔霉素。因此，可以肯定，此兩菌株在遺傳上，已失去桔霉素的生物合成能力。因此用這兩株菌所生產(chǎn)的紅曲粉中不含桔霉素，食用是安全的。作為功能性紅曲產(chǎn)品，這一結(jié)果是十分必要和有意義的。
紅曲霉液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品中莫納可林K的生產(chǎn)經(jīng)過大量的培養(yǎng)基配方實(shí)驗(yàn)，得出了莫納可林K產(chǎn)量最高的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基(如上所述)，普通碳源，如葡萄糖，淀粉對產(chǎn)莫納可林K不利，甘油是最好的碳源。
在搖瓶發(fā)酵過程中，莫納可林K的合成隨著發(fā)酵天數(shù)的增加而增加，在第4天到第14天之間產(chǎn)量迅速增加，生產(chǎn)能力平均為130.14mg/(L·d)；在后期產(chǎn)量的增長趨于平緩。第14天以后Monacolin K產(chǎn)量增加趨于平緩，維持在1600mg/L，第23天時的產(chǎn)量較第17天已略有下降。
在搖瓶發(fā)酵工藝條件研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了15L發(fā)酵罐(初始裝液量10L)液態(tài)深層發(fā)酵，周期為12天。大豆水解液為連續(xù)流加方式，40h～136h期間以1.56g/h的速度流加，共加入大豆水解液干物質(zhì)150g(即15g/L)，136～232h期間以0.52g/h的速度流加，加入大豆水解液干物質(zhì)50g(即5g/L)。在發(fā)酵過程中蒸發(fā)的水分及時補(bǔ)足。Monacolin K達(dá)到了535.5mg/L。
固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品中莫納可林K及桔霉素的檢測結(jié)果采用三角瓶固態(tài)培養(yǎng)方式，連續(xù)多批次發(fā)酵。所得的紅曲米粉經(jīng)萃取，用HPLC同時檢測開環(huán)和閉環(huán)莫納可林K的含量。部分批次的結(jié)果見表1。發(fā)酵兩周至三周。總莫納可林K的含量可達(dá)到5783-11183mg/kg(個別批次達(dá)到16000mg/kg，結(jié)果未顯示)。
表1功能紅曲粉莫納可林K(MK)及桔霉素用HPLC的檢測結(jié)果樣品批次2003-1-20 2003-1-21 2003-1-21 2003-1-22 2003-1-23 2003-1-23 2003-1-24檢測時間2003-2-14 2003-2-14 2003-2-27 2003-2-14 2003-2-14 2003-2-28 2003-3-1稀釋倍數(shù) 26.61 28.00 54.06 27.44 25.35 54.2854.02開環(huán)MK含量(mg/kg) 4952.48 7929.52 8815.94 7710.81 6129.83 4770.61 8039.14閉環(huán)含量(mg/kg) 1066.45 2425.32 2367.095 3206.28 1017.76 1012.37 1641.07MK總含量(mg/kg) 6018.93 10354.83 11183.02 10917.10 7147.58 5782.98 9680.21開環(huán)含量所占比例(％) 82.28 76.58 78.83 70.63 85.76 82.4983.05閉環(huán)含量(％) 17.72 23.42 21.17 29.37 14.24 l7.5116.95桔霉素HPLC法 未檢測出 未檢測出 未檢測出 未檢測出 未檢測出 未檢測出 未檢測出從表1可看出，紅曲米粉中開環(huán)的莫納可林K的比例較高，最低為70.63％，最高的為85.76％。我們對發(fā)酵液和發(fā)酵液凍干粉中兩種結(jié)構(gòu)的莫納可林K的比例也進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)，開環(huán)結(jié)構(gòu)的莫納可林K占大多數(shù)。一般在70-90％左右。
發(fā)酵液凍干粉及紅曲米粉中莫納可林K的確認(rèn)對發(fā)酵液凍干粉及紅曲粉中的兩種與開環(huán)及閉環(huán)標(biāo)準(zhǔn)樣出峰時間相同的物質(zhì)用液相色譜進(jìn)行紫外光譜分析，這兩者和開環(huán)(酸型)及閉環(huán)(內(nèi)酯型)Monacolin K的紫外光譜圖特征一致，都出現(xiàn)3個吸收峰(231.0nm、239.0nm和248.0nm)，其中239.0nm處為最大吸收峰。同時對紅曲樣品的LC-ESI/MS分析結(jié)果表明，液相色譜條件下分析的物質(zhì)確實(shí)為Monacolin K(圖譜略)。
有益效果本發(fā)明方法利用紅曲霉，谷物原料和水，采用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，生產(chǎn)綠色食品添加劑—無桔霉素高色價功能性紅曲米粉。
該產(chǎn)品含天然的紅曲色素，色價200-600U/g；同時含有具有降低高脂血癥的功能性成分莫納可林K(或稱為洛伐它汀)4-12g/kg。該產(chǎn)品不含毒性物質(zhì)桔霉素。產(chǎn)品中總莫納可林K中的開環(huán)結(jié)構(gòu)(也稱為酸式結(jié)構(gòu)，真正起生理作用的成分)比例占70-90％。產(chǎn)品可作為食品添加劑和健康食品配料。確保食用安全性。
該產(chǎn)品安全性能高于普通紅曲米粉，用于各種食品的著色劑，該產(chǎn)品具有功能性成分莫納可林K，含量較高，可作為保健食品的配料。
生產(chǎn)過程中，除了谷物原料，微生物菌種及水外，不添加任何其它化學(xué)物質(zhì)。生產(chǎn)全過程中無污染。
本發(fā)明方法也可利用紅曲霉，用一般微生物培養(yǎng)基的成分，采用液態(tài)發(fā)酵技術(shù)，生產(chǎn)無桔霉素功能性紅曲粉。該產(chǎn)品除了色素含量較固態(tài)發(fā)酵的低外，其它性能和用途與固態(tài)發(fā)酵的紅曲米粉相同。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1采用紅曲霉菌種9901，按照說明書上述條件經(jīng)YES培養(yǎng)基(M1)和MSG培養(yǎng)基(M2)的培養(yǎng)，發(fā)酵液中不含桔霉素。
用種子培養(yǎng)基(M3)培養(yǎng)種子(搖瓶或種子罐)，得液態(tài)種子。
在三角瓶或塑料瓶(1000mL)中加入原料小米，100g，加等量的水，先常壓蒸煮，再滅菌后，接入50mL液體種子。25-32℃培養(yǎng)2-3周。所得紅曲米，經(jīng)100℃滅菌30min，50℃烘干，磨粉，所得樣品批次為2003-1-20。
實(shí)施例2采用紅曲霉菌種9906，按照說明書上述條件經(jīng)YES培養(yǎng)基(M1)和MSG培養(yǎng)基(M2)的培養(yǎng)，發(fā)酵液中不含桔霉素。
用種子培養(yǎng)基(M3)培養(yǎng)種子(搖瓶或種子罐)，得液態(tài)種子。
在三角瓶或塑料瓶(1000mL)中加入原料大米，100g，加等量的水，先常壓蒸煮，再滅菌后，接入50mL液體種子。25-32℃培養(yǎng)2-3周。所得紅曲米，經(jīng)100℃滅菌30min，50℃烘干，磨粉，所得樣品批次為2003-1-23。
實(shí)施例3采用紅曲霉菌種9901，按照說明書上述條件經(jīng)YES(M1)培養(yǎng)基和MSG(M2)培養(yǎng)基的培養(yǎng)，發(fā)酵液中不含桔霉素。
用種子培養(yǎng)基(M3)培養(yǎng)種子(搖瓶或種子罐)，得液態(tài)種子。在500mL三角瓶中，加入搖瓶培養(yǎng)基(M4)100mL，121℃滅菌30min，滅菌后，接入液態(tài)種子20mL。25-32℃搖瓶發(fā)酵2-3周。發(fā)酵液經(jīng)凍干或噴霧干燥得粉狀物。
實(shí)施例4采用紅曲霉菌種9901，按照說明書上述條件經(jīng)YES(M1)培養(yǎng)基和MSG(M2)培養(yǎng)基的培養(yǎng)，發(fā)酵液中不含桔霉素。
用種子培養(yǎng)基(M3)培養(yǎng)種子(搖瓶或種子罐)，得液態(tài)種子。在15L發(fā)酵罐中，加入發(fā)酵培養(yǎng)基(M5)10L，121℃滅菌30min，滅菌后，接入液態(tài)種子1L。25-32℃通風(fēng)攪拌發(fā)酵2-3周。發(fā)酵液經(jīng)凍干或噴霧干燥得粉狀物。
權(quán)利要求
1.一種無桔霉素高色價功能性紅曲粉的制備方法，其特征是采用紅曲霉菌(Monascus sp.)9901菌株或紅曲霉菌(Monascus sp.)9906菌株，該兩株菌株由江南大學(xué)提供，該兩株菌經(jīng)過YES培養(yǎng)基和MSG培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)液中不含桔霉素，用這兩株菌株在液態(tài)種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到液態(tài)種子，液態(tài)種子培養(yǎng)基每1000mL中，葡萄糖60g，蛋白胨25g，NaNO32g，MgSO4·7H2O 1g，KH2PO41g，pH5.0，裝液量100mL/500mL三角瓶，30℃培養(yǎng)2-3天，得一級種子培養(yǎng)液；將液態(tài)種子接入到用谷物原料和水，經(jīng)滅菌制備的固態(tài)培養(yǎng)基上，固態(tài)發(fā)酵技術(shù)而制得無桔霉素高色價功能性紅曲米粉；或?qū)⒁簯B(tài)種子接入到液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，液態(tài)發(fā)酵制得無桔霉素功能性紅曲粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是采用固態(tài)發(fā)酵；原料為谷物原料，1000mL瓶裝原料100-200g，加等量的水，先常壓蒸煮，滅菌后，接入液態(tài)種子，接入量為10-50％(V/W)，25-32℃發(fā)酵2-3周，所得紅曲米，經(jīng)滅菌、烘干、磨粉，得到產(chǎn)品紅曲米粉；產(chǎn)品中，總莫納可林K含量達(dá)到4-12g/kg，其中開環(huán)莫納可林K的比例達(dá)到70-90％，產(chǎn)品中含紅曲色素，不含桔霉素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是可用固體發(fā)酵罐生產(chǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是液態(tài)發(fā)酵采用搖瓶液態(tài)發(fā)酵；培養(yǎng)基小米粉10-50g/L，甘油50-100g/L，大豆水解液25g干物質(zhì)/L，NaNO32g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，ZnSO4·7H2O 2g/L，玉米漿10mL/L，pH4.5，滅菌后，接入液態(tài)種子10-50％(V/V)，25-32℃搖瓶發(fā)酵2-3周，發(fā)酵結(jié)束后，菌絲體及發(fā)酵液用噴霧干燥或真空冷凍干燥制成紅曲粉，即為無桔霉素功能性紅曲粉產(chǎn)品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是液態(tài)發(fā)酵采用發(fā)酵罐液態(tài)發(fā)酵；初始培養(yǎng)基小米粉10-50g/L，甘油50-100g/L，大豆水解液干物質(zhì)5g/L，NaNO32g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，ZnSO4·7H2O2g/L，玉米漿10mL/L，pH4.5，在15L全自動發(fā)酵罐中裝10L培養(yǎng)基，滅菌后，接入液態(tài)種子10-50％(V/V)，25-32℃攪拌通風(fēng)發(fā)酵2-3周，發(fā)酵結(jié)束后，菌絲體及發(fā)酵液用噴霧干燥制成紅曲粉，即為無桔霉素功能性紅曲粉產(chǎn)品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是發(fā)酵罐液態(tài)發(fā)酵時，大豆水解液的流加方式流加用大豆水解液1L，含固形物200g，42h～192h期間以1.0g/h的速度流加，共加入大豆水解液干物質(zhì)150g，即150g/10L，192～288h期間以0.52g/h的速度流加，加入大豆水解液干物質(zhì)50g，即50g/10L；攪拌轉(zhuǎn)速初始150r/min，菌球形成后逐步增加轉(zhuǎn)速，4天后增加到300r/min；通風(fēng)量初始為1L/(L·min)，逐步提高到1.6-1.8L/(L·min)；溫度控制策略為最初30-32℃，逐步降低發(fā)酵溫度，2天后28℃，第4天后穩(wěn)定在25-27℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是發(fā)酵罐液態(tài)發(fā)酵時，可用100-5000L發(fā)酵罐進(jìn)行生產(chǎn)。
全文摘要
一種無桔霉素高色價功能性紅曲粉的制備方法，屬于紅曲產(chǎn)品制備技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用紅曲霉9901菌或9906菌株液態(tài)培養(yǎng)種子，用谷物原料加等量水制成固態(tài)培養(yǎng)基，接入10－50％液態(tài)種子后，在25－32℃溫度，60－90％的濕度的條件下，經(jīng)過2－3周時間固態(tài)發(fā)酵，再經(jīng)過滅菌，烘干和磨粉，制得無桔霉素高色價功能性紅曲米粉，也可采用液態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)無桔霉素高色價功能性紅曲粉，所得產(chǎn)品中色價200－600U/g，含功能性成分莫納可林K4－12g/kg，其中開環(huán)結(jié)構(gòu)的莫納可林K的比例70－90％，產(chǎn)品不含毒性物質(zhì)桔霉素。生產(chǎn)過程中不添加其它化學(xué)物質(zhì)，無污染。產(chǎn)品可用作食品添加劑和食品配料，確保食用安全。
文檔編號C12N1/14GK1448503SQ0311335
公開日2003年10月15日 申請日期2003年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月30日
發(fā)明者許贛榮 申請人:江南大學(xué)